BUAP Biotecnología Biología Celular
Electroforesis en geles de
poliacrilamida: Nativa,
SDS, e Isoelectroenfoque.
Marilyn Castro Bronca 202225084
Introducción
ELECTROFORESIS
La electroforesis es una técnica de laboratorio
que se usa para separar moléculas de ADN, ARN o
proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica.
Se usa una corriente eléctrica para mover las moléculas a
través de un gel o de otra matriz. Los poros del gel o la matriz
actúan como un tamiz, lo cual permite que las moléculas más
pequeñas se muevan más rápido que las moléculas más
grandes.
Para determinar el tamaño de las moléculas de una
muestra, se usan estándares de tamaños conocidos que se
separan en el mismo gel y luego se comparan con la muestra.
Discusión
Técnica Electrofóresis en SDS Electroforesis Nativa Isoelectroenfoque
Es la electroforesis en gel de Blue Native Page Clear Native Page
poliacrilamida con dodecil sulfato sódico
Utilizamos la carga eléctrica, en moléculas
(SDS).
que en pH bajo actúa como catión, con
una carga positiva, y a pH alto actúa como
A la reacción agregamos
anión. Y a un cierto pH la molécula actúa
betamercaptoetanol, el cual, puede
de forma periódica como zwitterion, con
romper los puentes disulfuro de las
cargas positivas y negativas dando una
proteínas y, naturalmente el SDS, ayuda
Se realiza la electroforesis carga netamente neutra. El pH exacto
a romper los enlaces proteicos,
Utiliza Azul de Coomasie para directa a un pH contante, donde una molécula conserva esta carga
provocando que la proteína se
darle una carga negativa a las haciendo que las proteínas se neutra se le llama punto isoeléctrico.
desnaturalice, generalmente al preparar
proteínas y péptidos sin tener separen en relación a su peso
estos geles construimos dos fases en el
que desnaturalizarlos. Se molecular, su carga eléctrica Cada aminoácido tiene su propio punto
Descripción mismo, el gel concentrador, que
pueden separar por su peso intrínseca y su forma. isoeléctrico por lo que dependiendo de los
empaqueta las proteínas, y el gel de
molecular. tipos y el orden de los aminoácidos cada
corrida que ayuda a separarlas con base
Naturalmente las moléculas proteína contendrá una carga intrínseca
a su peso molecular.
Su desventaja es que el azul más pequeñas y con carga más con su propio punto isoeléctrico.
de Coomasie puede llegar a contrastes, podrán migrar con
Se obtiene un fraccionamiento que
romper ciertos enlaces de mayor naturalidad que sus Se coloca en un gradiente de pH, y las
obedece a: la diferencia de peso, la
algunos complejos proteicos. casos contrarios. proteínas con carga mayoritariamente
longitud de la cadena (tamaño), y la
positiva irán al cátodo, y las
forma de la proteína.
mayoritariamente negativas al ánodo.
Estas migraran hasta llegar al pH donde
Tras la electroforesis, el gel debe ser
se encuentre su punto isoeléctrico.
teñido con Coomasie Blue permitiendo la
visualización de las proteínas separadas.
Imagenes
Electrofóresis en SDS Electroforesis en gel de acrilamida nativa Isoelectroenfoque
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Electroforesis
REFERENCIAS
Brandon Ortiz Casas. (2019, 27 mayo). Electroforesis de proteínas: conceptos básicos [Vídeo]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=aQ00nH0kPSk.
Electroforesis. (s. f.). Genome.gov. https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Electroforesis
Profe Javier T. (2019, 13 marzo). Tutorial Preparación gel de poliacrilamida y separación de proteínas séricas
(electroforesis) [Vídeo]. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=t8hBK93T2_Q
MARILYN CASTRO BRONCA
