ELECTROFORESIS EN
PROTEÍNAS
CECEYTEM 04
PURUÁNDIRO
Purificación de Cuantificación de
Extracción de proteínas: proteínas:
material
Centrifugación Espectrofotometría
intracelular
Cromatografia Electroforesis
TIPOS DE
ELECTROFORESIS
En gel de Agarosa En gel de Poliacrilamida
Para ADN Para Proteínas
Red molecular de densidad baja Red molecular con densidad alta
Forma poros amplios en el gel Forma poros pequeños en el gel
Separa ADN por su tamaño Separa proteínas por su tamaño y
punto isoeléctrico
FUNDAMENTOS DE LA ELECTROFORESIS
EN PROTEINAS
Una carga eléctrica específica puede separar una mezcla de proteínas de acuerdo
a sus diferencias de punto isoeléctrico.
La mezcla de proteínas pueden ser separada por las diferencias de tamaño al
aplicar una carga eléctrica fija.
Punto isoeléctrico (pI) en aminoácidos y
proteínas
El punto isoeléctrico es el valor de pH al cual la proteína es
insoluble y precipita, dado que ambos grupos terminales
(COOH y NH2) ionizan.
Como se aprecia en el gráfico, cuando el aminoácido
ejemplo se encuentra en un pH de 0,5 se ioniza el grupo
amino, es decir; el grupo amino adquiere una carga
positiva debido a la adquisición de un protón (H). A este
pH se le llama pK1.
En el mismo gráfico, cuando el aminoácido ejemplo
alcanza un pH de 1,5 se ioniza el grupo ácido, es decir;
el grupo ácido adquiere carga negativa al perder un
protón (H). A este pH se le llama pK2.
El punto isoeléctrico (pI) es entonces el promedio de pK1
y pK2 (pI=pK1+pK2/2=1) y es el pH en el cual ambos
grupos, el amino y el ácido se ionizan (Zwitterión).
Observa el video sobre electroforesis de
proteínas en gel de poliacrilamida.
Después de leer la información de este documento y de observar el video,
contesta el cuestionario de la siguiente página.
1. ¿Cuáles son los fundamentos de la electroforesis?
2. ¿Cuáles son los fundamentos de la electroforesis en proteínas?
3. Elabora un cuadro en el que compares las características principales de las
electroforesis en ADN y en Proteínas.
4. ¿Qué es el punto isoeléctrico?
5. ¿Cómo se calcula el punto isoeléctrico?
6. ¿Por qué se utiliza agarosa para la electroforesis con ADN y acrilamida en
proteínas?
7. ¿Cuál es el objetivo de usar un cargador molecular en la electroforesis?
8. ¿Para qué se usa el buffer separador en la prueba de electroforesis?
9. Explica cómo se forma el Zwitterión en un aminoácido.
10. Elabora un diagrama de flujo que explique cómo se realizan las electroforesis
en proteínas y en ADN.
11. Has una lista de materiales y reactivos usados en cada electroforesis y la
función de cada uno.
