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Automatización en hematología
1. AUTOMATIZACIÓN EN HEMATOLOGÍA
2. AUTOMATIZACION Mecanizar todo o la mayoría de los pasos manuales en un proceso o en todo el procedimiento “Es una solución que combina varios procesos en un solo
sistema eficiente que elimina el riesgo de error asociado a la operatividad humana. Las tareas intensivas en trabajo : etiquetado, manejo, preparación y almacenamiento de las
muestras, que se realizan utilizando numeroso personal, cada uno de los cuales pueden introducir errores u otros problemas, pueden ser fácilmente automatizables” 1 1
JAMES,David “Selecting appropiate automation for the lab” IDVT Sep. 2007
3. PROCESO Es un conjunto de actividades que utiliza recursos para transformar elementos de entrada en bienes o servicios capaces de satisfacer las expectativas de distintas
partes interesadas: clientes externos, clientes internos, accionistas, comunidad, etcétera.
4. PROCESO PRINCIPALES RECURSOS MANO DE OBRA: Protagonista de todo proceso, por lo tanto sus actividades y aptitudes influyen directamente en los resultados o salidas
del proceso. MÉTODOS: Políticas, procedimientos, normas e instrucciones que se emplean para ejecutar un determinado trabajo. MAQUINARIA O EQUIPO: Viene a ser el
elemento que complementa el esfuerzo del personal en la agregación de valor. Su adecuada calibración, correcto mantenimiento y oportuno reemplazo definirán apropiados
niveles de precisión y exactitud.
5. PROCESO PRINCIPALES RECURSOS MATERIALES O SUMINISTROS: Entradas que serán transformadas por un proceso (materiales, partes en proceso y la información).
MEDIO AMBIENTE: Condiciones en las cuales se desarrolla un trabajo: espacio, ventilación, seguridad, iluminación, etcétera. MEDIOS DE CONTROL: Instrumentos o recursos
utilizados para evaluar el cumplimiento de los requisitos establecidos.
6. ENFOQUE BASADO EN PROCESOS
7. DIVISIONES DEL PROCESO DE ANALISIS TOMA DE MUESTRA TRANSPORTE DE LA MUESTRA RECEPCION POR EL LABORATORIO MUESTRA PARA ANALISIS MUESTRA PARA
ALMACENAMIENTO ANALISIS CONTROL DE CALIDAD EMISION DE RESULTADOS EVALUACION DE LOS RESULTADOS MANTENIMIENTO Y/O REPARACION DEL ANALIZADOR ORDEN DE
ANALISIS PREPARACION DE LA MUESTRA FASE PREANALITICA FASE ANALITICA FASE POSTANALITICA
8. CRITERIOS PARA EVALUAR LA AUTOMATIZACIÓN Complejidad del nivel hospitalario Volumen de trabajo ( Rutina y Especiales ) Visión de futuro ( Perspectivas )
Infraestructura Recursos Económicos Soporte Técnico Garantizado
9. ¿PORQUÉ AUTOMATIZAR? Reducir costos operativos Obtener mayor eficiencia Aumentar la productividad Competir en un ambiente globalizado Sobrevivir en el
mercado
10. ¿QUÉ BUSCAN LOS LABORATORIOS HOY? Mejor productividad y mejor calidad Flujo de muestras mas rápido y eficiente Reducción de costos
11. AUTOMATIZACIÓN VENTAJAS Incremento del número de pruebas realizado por una persona en un período de tiempo Minimiza las variaciones en los resultados
Minimiza errores de la parte manual (e.g. pipeteo) Usa menos muestra y reactivo por cada prueba
12. AUTOMATIZACIÓN LIMITACIONES Metodología varía con el tipo de instrumento Costo del equipo, mantenimiento, CC Personal debe conocer operatividad y cuidados de
rutina
13. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA Sangre total con anticoagulante EDTA K2 (K3)en tubo al vacío
14. ELEMENTOS CELULARES
15. PRINCIPIOS BÁSICOS Impedancia electrónica Radiofrecuencia Dispersión óptica
16. IMPEDANCIA ELECTRÓNICA (PRINCIPIO COULTER) Electrodo interno Electrodo externo Flujo del diluyente Vacío regulado Cubeta de conteo Micro orificio Diámetro apertura
aprox. 4mm 1 pulso = 1 partícula
17. DISCRIMINACION DE PULSOS a = Ruido Eléctrico b = Discriminador bajo c = Separación de células grandes y pequeñas a b c Señal células grandes Señal células pequeñas
18. 60 70 80 90 100 110 120 fl Pilas: Células son agrupadas con similar tamaño de pulso. La Pila con el mayor número de células es el 100% de altura relativa. Eje X = tamaño
celular Eje Y= número de células HISTOGRAMAS
19. RADIOFRECUENCIA ( impedance) Conductividad (RF) – proporcional a la densidad interior de la célula (gránulos y núcleo)
20. DISPERSIÓN ÓPTICA Desvía la luz •Cel. en solución corren a través de una celda de cuarzo •Enfoque hidrodinámico (líquido envolvente, “flujo laminar”) •Enfoque del láser
•Análisis por computadora de los grupos (citogramas)
21. ABBOTT - MAPSS (MULTI ANGLE POLARIZED SCATTER SEPARATION) Numeración Tamaño Complejidad del núcleo Láser ARGON 7° 0° 90°, Polarizado PMT2 Complejidad del
citoplasma Granulaciones Eosinófilos 90° ,Depolarizado PMT1
22. Parte Inf. (fija) Pipeta VÁLVULA DE SEGMENTACIÓN Parte Int. (movible) Parte sup. (fija)
23. VÁLVULA DE SEGMENTACIÓN Parte sup. (fija) Parte Inf. (fija) Pipeta Parte Int. (movible)
24. Parte Int. (movible) Parte sup. (fija) Parte Inf. (fija) Pipeta VÁLVULA DE SEGMENTACIÓN
25. SEPARACIÓN DE LA MUESTRA 12µl (WBC) 4 µl (RBC) 6 µl (Hb)
26. DILUCIÓN - RBC Bomba del diluyente Cámara de mezcla 4 µl (RBC)
27. DILUCIÓN WBC - HGB 12µl (WBC) 6 µl (HGB) Bomba del Diluyente Bomba de HGB Canal WBC Celda HGB
28. Stromatolyser-3WP Sulfolyser Mixing- Chamber 1:500 SampleRotorValve (SRV) RBC Channel 1:25.000 40 µl 2,0 ml Cellpack
29. Stromatolyser-3WP Sulfolyser Mixing- Chamber 1:500 SampleRotorValve (SRV) WBC Channel 1:250 1,0 ml 0,5 ml 6 µl Cellpack
30. Stromatolyser-3WP Sulfolyser Mixing- Chamber 1:500 SampleRotorValve (SRV) Hgb Photometer 1:500 3 µl 1,0 ml 0,5 ml Cellpack
31. HISTOGRAMA WBC Discriminadores posicionados en el pico y valle para separar las células Células clasificadas como: Neutrofilos, Linfocitos y Mixtas (M, E y B) Alturarelativa
LD T1 T2 UD Células mixtas (Monos, Eos y Basos) Células grandes (neutrófilos) Células pequeñas (linfocitos)
32. MEDICIÓN DE LA HEMOGLOBINA • RBC son lisados (amonio cuaternario, ferricianuro, etc.), permite la liberación de Hb CianMetHb • Una parte de la dilución de los WBC pasa a
una cubeta espectrofotométrica para la medición a 540 nm • Existen otros métodos libres de cianuro, donde ocurre lísis de los RBCs seguido de la formación de un complejo
imidazol-hemoglobina que posee un pico de absorción a 540 nm. Fuente luminosa LED C. de medición Filtro Foto-detector
33. • Aglutininas frías: • Bajos contajes de RBC y altos MCV pueden ser causados por las aglutininas de los hematíes. Si están presentes, también el hematocrito y los MCHCs pueden
ser también incorrectos. • Pueden presentarse en la mononucleosis infecciosas y en las infecciones por mycoplasma (neumonía). • Si se observan RBC aglutinados en el frotis de
sangre periféricas, calentar la muestra a 37°C, mezclarla y analizarla mientras esté caliente. FUENTES DE ERROR
34. • RBC fragmentados o microcíticos: • Pueden causar conteos bajos de RBC y pueden dar un aviso en el conteo de las plaquetas puesto que se vuelven muy cercanas al tamaño
de las plaquetas y pueden originar un histograma plaquetario anormal.
35. • Acúmulo de plaquetas y satelitosis: • Esto causa un conteo falsamente disminuido de las plaquetas y se puede confirmar revisando el frotis. Siempre tratar de examinar el
borde del frotis cuand se tienen contajes bajos de plaquetas.
36. • Plaquetas gigantes: • Se aproximan al tamaño de un hematíe. Pueden causar que la cola derecha del histograma permanezca elevada y pueda verse a la izquierda del
histograma de los RBC.
37. RBC Nucleados: Estos pueden interferir con los WBC en algunos instrumentos y ser contados como leucocitos(linfocitos)
38. • Cualquier elemento que pueda causar turbidez e interferir con el método espectrofotométrico. • Como ejemplos: Alto contaje de WBC, lipemia y hemoglobinas resistentes a la
lisis (Hb S y C) FUENTES DE ERROR EN LA MEDICIÓN DE LA HEMOGLOBINA
39. • HISTOGRAMA RBC – Histograma normal de 36- 360 fl – (24- 36 fl ) Aviso puede deberse: 1- RBC fragmentos 2- WBC fragmentos 3- Plaquetas gigantes 4- Microcitos – Desviación a
la derecha: - Leucemia - Anemia Macrocítica - A. Megaloblastica – Desviación a la izquierda: - Anemia microcítica – Bimodal - Aglutininas frías - Anemia Megaloblástica con
transfusión. - A. Sideroblástica. – Trimodal - Anemia con transfusión.
40. • HISTOGRAMA PLAQUETAS – Histograma normal de 2-20 fl. • 0-2 fL – Burbujas de aire – Polvo – Ruido eléctrico • > 20 fL – Microcitos – Scishtocitos – Fragmentos WBC –
Plaquetas gigantes – Aglutinación
41. Luz dispersada frontal ( Volumen Celular ) Luz dispersada lateral (Estructura celular interna) WBC Canal WBC/Baso Baso Side scatter Forwardscatter RBC ghost Mono Canal Di!
Side scatter Lymph Neut + Baso RBC ghost Fluorescence Eo
42. Canal DIFF DISPERSIÓN LATERAL (Estructura Celular Interna) FLUORESCENCIA (informacióndelRNA/DNA)
43. LINFOCITOS MARCAJE DE CD4/CD8
44. BECKMAN COULTER • Principios de Medición – Medición directa: • RBC – Impedancia • WBC - Impedancia, enfoque hidrodinámico • Plaq. – Impedancia (2-20 fl) • Hb –
Cianometamoglobina modificado (525 nm) • MCV – media del volumen de RBC (histograma) – Medición indirecta: • Hct, MCHC, y MCH (calculados) – RDW y MPV (CV de sus
respectivos histogramas) – WBC Diferencial • VCS – volumen, conductividad, dispersión – Reticulocitos • Coloración Supravital (nuevo azul de metileno) • VCS
45. SYSMEX • Principios de Medición – Medición directa: • RBC – Impedancia, enfoque hidrodinámico • WBC – Impedancia, enfoque hidrodinamico • Platelets –Impedancia, enfoque
hidrodinamico • Hb – SLS-Hb (555 nm) (oxihemoglobina + sodio lauril sulfato) • Ht – Detección de pulsos acumulativos – Medición indirecta: • MCV, MCHC y MCH (calculados) –
RDW y MPV(CV de sus respectivos histogramas) – WBC Diferencial • Detección con DC/RF • Emplea lísis diferencial – Reticulocitos • Colorante Supravital (Aramina O) • Detección
Fluorescente
46. ABBOTT • Principios de Medición – Medición directa: • RBC – Impedancia • WBC – Dispersión óptica (primaria), Impedancia (secondaria) • Plaquetas – Impedancia (2-30 fl) • Hb –
Cianomethemoglobina modificada (540 nm) • MCV – volumen medio de RBC (histograma) – Medición Indirecta: • Hct, MCHC y MCH (calculados) – RDW (valor relativo equivalente
al CV) – WBC Diferencial • MAPSS – Reticulocitos • Coloración proprietaria • Dispersión Multiángulo • Detección Fluorescente
47. SIEMENS • Principios de Medición – Medición directa: • RBC – Enfoque hjdrodinámico, láser de bajo y alto ángulo • WBC - Enfoque hjdrodinámico, dispersión óptica y absorpción
• Platequetas – Enfoque hidrodinámico, láser de ángulo bajo y alto(1-60 fL) • H¡b – Cianomethemoglobina modificada (546 nm) • MCV – volumen medio de RBC (histograma) –
Medición indirecta: • Ht, MCHC y MCH (calculados) – RDW y MPV (CV de sus respectivos histogramas) – WBC Diferential • VCS – volumen, conductividad, dispersión – Reticulocitos
• Coloración Supravital (Oxazina 750) • Dispersión óptica de bajo y alto ángulo
48. Pentra 120 Retic Horiba-ABX Sysmex XT-4100i CELL-DYN RUBY Abbott Laboratories LH 780 Beckman Coulter CELL-DYN 3700 ADVIA 2120 SIEMENS
49. LH 1500 Series Automation Beckman Coulter CELL-DYN WorkCell Abbott Laboratories
50. MANTENIMIENTO • Limpieza diaria • Conteo del lecturas de fondo • Chequeos electrónicos • Comparar los modos abierto y cerrado (usando muestra normal) • Correr controles
(dentro de lo límites especificados)
51. ASEGURAR FUNCIONAMIENTO ADECUADO 1. Chequear los contenedores de reactivo: Verificar cantidad suficiente Verificar fecha de vencimiento No deben visualizarse
precipitados, ni turbidez ni mostrar un color inusual Conecciones adecuadas entre el instrumento y los contendedores
52. 2. Chequear contenedor de desecho: Capacidad suficiente Conecciones adecuadas 3. Realizar inicio diario 4. Verificar que exista una aceptable: Reproducibilidad
Arrastre Resultados de control ASEGURAR FUNCIONAMIENTO ADECUADO
53. AUTOMATIZACIÓN EN HEMOSTASIA
54. HEMOSTASIA = BALANCE plaquetas Coagulación Fibrinólisis Organismo HemorragiaTrombosis
55. FASES DE LA HEMOSTASIA • Hemostasia primaria formación de un trombo plaquetario • Coagulación o hemostasia secundaria formación de un trombo de fibrina • Fibrinólisis
rotura del coagulo de fibrina
56. Factores procoagulantes Factores anticoagulantesFXI I FXIIa FXI FXIa FIX FIXa FIXa FXa FVIIIa FX FVa FII TROMBINA Fibrinógeno Fibrina FT FVIIa AT PCa PS TFPI Si hay déficit,
HEMORRAGIA Si hay déficit, TROMBOSIS CASCADA DE LA COAGULACIÓN
57. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA Plasma con anticoagulante citrato trisódico Na3C6H5O7 . 2H20 al 0.109 mol/L (3.2%) Sangre venosa recolectada en un tubo con citrato de sodio
a una proporción de 1:10 ( 1 parte de citrato y 9 partes de sangre). Tiempo de compresión no mayor a 60 seg. Un tiempo mayor puede elevar los valores de fibrinógeno.
58. ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS Las muestras deben mantenerse a temperatura ambiente (18 – 25°C). El almacenamiento en hielo o en la nevera puede provocar la
activación de los factores VII y XII. Estabilidad de las muestras (18 – 25°C) : TP : 8 horas APTT : 4 horas (terapia con heparina 2 horas) Factores : 4 a 8 horas
59. CONGELAMIENTO DE LAS MUESTRAS Los plasmas libres de plaquetas se pueden alicuotar y congelar. El congelamiento se debe realizar tan pronto como sea posible, de
preferencia a –80°C; es suficiente a –20°C si es por un período corto ( 6 meses PT y APTT; 3 meses TT y Factores). Las muestras se deben descongelar a 37° C por 15 minutos y
sólo una vez.
60. PRUEBAS DE LABORATORIO RUTINA PT APTT T. TROMBINA FIBRINÓGENO ESPECIALES FACTORES TROMBOSIS LA – AC. ANTICARDIOLIPINA PROTEÍNA C PROTEÍNA S APC – R
ANTITROMBINA FIBRINÓLISIS DÍMERO D PLASMINÓGENO TPA (Activ.Plasm.Tisular) PAI – 1 (Inhib.Act. Plasm.)
61. MÉTODOS DE DETECCIÓN
62. MÉTODO MANUAL Detección por aparición del coágulo
63. MÉTODO MECÁNICO Método del garfio de Koller
64. MÉTODO MECÁNICO Método KC Amelung Billa de metal estacionaria
65. MÉTODO FOTOMÉTRICO
66. SISTEMA DE DETECCIÓN BASADO EN LA VISCOSIDAD
67. La detección está basada en el incremento de la viscosidad del plasma analizado. El incremento de la viscosidad es medido a través del movimiento de la billa de metal
68. Cuando se añade el reactivo, inmediatamente se inicia la detección.
69. El cronómetro inicia la medición cuando la billa inicia la oscilación de derecha a izquierda.
70. Cuando el coágulo aparece, la viscosidad se incrementa y la amplitud disminuye.
71. MÉTODO Coagulométrico: formación de fibrina Fibrinógeno ----------------> Fibrina Tiempo de Coagulación : Tiempo empleado para detectar la formación de fibrina. TROMBINA
turbidimetría
72. ANÁLISIS CENTRÍFUGO Pipeteo automático de muestra + reactivo. Mezcla por centrifugación Nefelometría hasta 1200 lecturas por cada determinación (ej. TP)
73. Sistema Centrífugo Reactivo Muestra Rotor
74. MÉTODO • Cromogénico: incremento de color Peptido-pNa ---------------> Peptido + pNa ENZIMA Color (Sust. Cromogénico)
75. Sustratos Cromogénicos Luz transmitida Cubeta de reacciónFuente de luz 405 nm Detector180º
76. MÉTODO • Inmunológico: incremento de la turbidez Plasma + reactivo de látex--> aglutinación Reacción del antígeno presente en el plasma con anticuerpo (unido a las
partículas de látex) específico al analito a estudiar. turbidimetría
77. Reacción inmunológica Luz transmitida Cubeta de reacciónFuente de luz 671/405 nm Detector180º
78. Partículas de Latex con anticuerpo sensible al Dímero-D Las partículas de látex se aglutinan, la suspensión tiene mas absorbancia INMUNOTURBIDIMETRIA INMUNOENSAYO
TURBIDIMÉTRICO
79. Dímero-D ▬ Dímero-D +
80. Tiempo CURVA DE REACCIÓN INMUNOTURBIDIMÉTRICA Delta Medida de la turbidez inicial y de la turbidez final producida por la aglutinación de las partículas de latex
Turbidez (mAbs) Inicial Final
81. SIEMENS BCS XP
82. STA – COMPACT
83. STA – COMPACT
84. STA – COMPACT
85. ACL ELITE PRO
86. Fluídrica • Botella de 1 L de solución de lavado/referencia con sensor nivel y medición de líquido en tiempo real. • 2 dilutores de pistón para dispensado y aspiración de
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