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UNIVERSIDAD ESTATAL DE BOLVAR

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS RECURSOS NATURALES Y DEL AMBIENTE


ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

PRCTICA N 1

TMA:
VALIDACIN DEL MTODO DE CUANTIFICACIN
DE NITRATOS EN EL AGUA POR ESPECTROFOTOMETRA
UV_VISIBLE

CURSO

DOCENTE

SPTIMO
: ING. AUGUSTA JIMENEZ

ASIGNATURA

: ANLISIS INSTRUMENTAL

INTEGRANTES :
ACTIVIDADES REALIZADAS
EDGAR BORJA
DIEGO TOALOMBO
DANIEL IBARRA
FECHA

Revisin bibliogrfica, realizacin del proyecto en Word, practica 8


Planteamiento del problema, prctica, elaboracin del proyecto 8
Prctica, elaboracin del proyecto, toma de datos en laboratorio 8
: 09 DE ENERO DEL 2015

1. INTRODUCCIN
El nitrato representa el estado de oxidacin ms alto en el ciclo del nitrgeno y
generalmente alcanza concentraciones importantes al final de la oxidacin biolgica.
En aguas de fuentes superficiales se encuentra en cantidades muy pequeas, pero en
aguas profundas puede alcanzar concentraciones importantes.
Es un nutriente esencial para muchos microorganismos auttrofo-fotosintticos y en
muchos casos ha sido identificado como el nutriente limitante de crecimiento.
En

cantidades

excesivas

contribuye

la

enfermedad

conocida

como

metahemoglobinemia infantil.
Los niveles de nitratos en aguas naturales son un indicador importante de la calidad del
agua. Ambos se encuentran relacionados con el ciclo del nitrgeno de suelo y plantas
superiores aunque los nitratos son aadidos por medio de fertilizantes que puede
ocasionar que los niveles de estos aumenten. Los nitritos tambin se forman durante la
biodegradacin de nitratos, nitrgeno amoniacal u otros compuestos orgnicos
nitrogenados y se utiliza como indicador de contaminacin fecal en aguas naturales.
Los nitratos no se consideran en s txicos, pero la ingesta de grandes cantidades
produce un efecto diurtico. Por otra parte, los nitritos pueden producir compuestos
cancergenos, las nitrosas minas, por su reaccin con aminas secundarias o terciarias,
adems de interaccionar con los glbulos rojos de la sangre produciendo
metahemoglobinemia que impide el transporte de oxgeno al cuerpo.
Se han desarrollado una gran cantidad de mtodos para la cuantificacin de estos
analitos en aguas y en otro tipo de muestras como alimentos y fluidos biolgicos.
Muchos de los mtodos estn basados en cromatografa inica de hecho, la EPA
recomienda la determinacin de nitratos

por este mtodo, aunque existen varios

mtodos enfocados a la cromatografa lquida de alta presin o a la electroforesis


capilar.
Varios mtodos analticos estn basados en la reduccin de nitratos a nitritos con
deteccin colorimtrica posterior. Se han utilizado varios agentes reductores como zinc,
cadmio o cadmio cuperizado que se han acoplado como columnas reductoras a
configuraciones de flujo continuo no segmentado para la cuantificacin simultnea de
nitratos.

2.

2.1.

OBJETVOS

OBJETVO GENERAL

Validar el mtodo de ensayo para cuantificar nitratos en agua.

2.2.

OBJETVO ESPECFICO

Determinar el contenido de nitrgeno de nitratos en el agua.

Calcular la absorbancia en el espectrofotmetro

Establecer la curva de calibracin entre la concentracin y la absorbancia

3. JUSTIFICACIN
Los nitratos y nitritos son dos compuestos qumicos que la principal fuente de
exposicin a los nitratos son los alimentos, especialmente las verduras, y en menor
proporcin el agua. Los nitratos estn presentes en la naturaleza y son utilizados por el
hombre para variados fines como por ejemplo en la prevencin del botulismo de origen
alimentario. El mayor problema sanitario a la exposicin elevada de nitratos en el agua
es la metahemoglobinemia, que slo se produce en nios menores de 4 meses que
consumen aguas con ms de 50 mg/L de ion nitrato (lmite admitido en nuestra
legislacin).
Por ello la presente investigacin pretende conocer la cantidad de nitrgeno en nitratos
en el agua que estn presentes ya que estas sustancias pueden perjudicar la salud e
integridad de las personas.

4. METODOLOGA
FUNDAMENTO DEL MTODO DE ANLISIS
NITRATOS EN AGUA
Los nitratos constituyen la especie nitrogenada ms abundante y de mayor inters en
todos los cuerpos de aguas naturales. Los nitratos suelen hallarse en aguas naturales en
concentraciones traza o de unos pocos ppms, mientras que en aguas residuales
domesticas y agrcolas pueden alcanzar niveles relativamente altos.
La determinacin de los nitratos en el agua de consumo humano es importante porque
cunado estos se encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm, como N,
pueden causar una enfermedad infantil conocida como metahemoglobinemia, que se
caracteriza por la dificultad de la sangre para absorber oxigeno.
Por otra parte, los nitratos, as como los fosfatos, constituyen parte de los nutrientes
esenciales para muchos organismos autrotofos o fotosintticos y en este sentido, su
presencia en el agua, puede ocasionar fenmenos de eutrificacion en ros y lagos.
Los nitratos, as como el amonio, constituyen indicadores apropiados de aguas
residuales domesticas. El primero, es tpico de las aguas residuales domesticas frescas y
es muy mvil y estable en condiciones aerbicas. El segundo tambin tpico de aguas
residuales frescas, pero se evapora con facilidad y/o se absorbe fcilmente en el
subsuelo.
Mtodo Espectrofotomtrica UV Visible
Este mtodo es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgnica,
tales como las provenientes de plantas suministro y/o aguas subterrneas. Las
mediciones se realizan utilizando un fotmetro a 220 nm, para concentraciones
inferiores a 10 mg/l, rango para el cual se cumple la Ley de Beer.

Teniendo en cuenta que tanto la materia orgnica como el ion nitrato absorben energa
radiante a una longitud de onda de 220 nm yque la materia orgnica mas no el nitrato,
absorbe tambin a 275 nm, el mtodo analtico realiza las mediciones a estas dos
longitudes de onda, con el objeto de corregir las primeras mediciones por la
interferencia que halla podido ocasionar la materia orgnica presente en la muestra. El
grado de esta correccin emprica se reacciona con la naturaleza y concentracin de la
materia orgnica y puede variar a partir de un agua a otra.
El mtodo fotomtrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para
muestras con materia orgnica, siempre que esta permanezca estable y constante.
La filtracin de la muestra se piensa para quitar interferencia posible de partculas
suspendidas.
DESCRIPCIN DE LA TCNICA EMPLEADA
La tcnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o despus de que ha
reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la radiacin. La
primera tcnica tiene ms restricciones, en particular con muestras complejas porque
pocas veces se puede encontrar una longitud de onda en la que solo se absorba el
analito. En ocasiones, las separaciones previas ayudan a eliminar las especies que
puedan absorber e interferir con la determinacin espectrofotometrica del analito. En
otros casos, las interferencias se pueden corregir con una segunda medicin de
absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la determinacin de nitrato en
muestras de aguas naturales (lo realizado). El ion nitrato absorbe a 220 nm, y la materia
orgnica disuelta tambin puede absorber a esta longitud de onda. Para corregir las
interferencias debidas a la materia orgnica, se toma una segunda lectura de absorbancia
a 270 nm, donde no absorbe el nitrato. Aunque tome ms tiempo a veces es preferible
hacer una separacin previa para eliminar las especies que interfieren.
Tambin es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la
reaccin se forme una especie que absorba una regin donde no haya interferencias.
En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:
Solucin stock de nitrato: se disolvi 0.3626g de KNO 3, previamente
secado a 105 C durante 24 horas, en 500 ml de agua y preservar por

adicin de 2 ml de cloroformo. Esta solucin contiene 100 ppm de


nitrato como N. (es estable por 6 meses)
Preparacin de solucin patrn intermedia de nitrato de 100ppm a partir
de la solucin stock. El cual resulta de 10 ppm.
Soluciones de patrn de nitratos: se preparan por dilucin de la solucin
intermedia. De 0 a 5 ppm de NO3- N a 50ml.
El blanco: en una fiola de 50 ml colquese aproximadamente 45 ml de
agua ultra pura, adase 1 ml de solucin de HCl 1N y luego compltese
el volumen hasta el enrase.
Tratamiento de la muestra. sobre 5 y 25 ml de muestra transparente,
filtrada si fuera preciso, adase antes de enrazar 1 ml se solucin de
HCl 1Ny mezcle vigorosamente. El HCl tiene por objeto impedir
interferencias por concentraciones de hidrxido o carbonatos que pueden
estar en las muestras.
Se prepara la curva de calibracin y se lee la absorbancia de las muestras
y patrones.
DESCRIPCIN DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS
Espectrofotmetro de doble haz
En un espectrofotmetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de la
muestra y de la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta manera
entra y sale del paso de la luz. Cuando el cortador no desva el haz, la luz pasa a travs
de la muestra, y el detector mide la potencia radiante que llamamos P. Cuando el
cortador desva el haz a travs de la cubeta de referencia, el detector mide P 0. El haz se
corta varias veces por segundo, y el circuito compara automticamente P y P0, dando as
la transmitan ca y la absorbancia. Este procedimiento permite hacer una correccin
automtica de las variaciones de intensidad de la fuente, y de la respuesta del detector
con el tiempo y la longitud de onda, porque se comparan con mucha frecuencia la
potencia que sale de las dos muestras. Los espectrofotmetros de mayor calidad
destinados a investigacin tambin permiten un barrido automtico de longitudes de

onda y un registro continuo de absorbancia. Cuando se registra un espectro de


absorbancia, es de rutina registrar primero el espectro de la lnea base con las
disoluciones de referencia (disolvente puro o blanco) en las dos cubetas. Despus se
resta el espectro base de la absorbancia medida de la muestra, para obtener as la
verdadera absorbancia de la muestra a las distintas longitudes de onda. En la figura 1 se
muestra un espectrofotmetro visible de doble haz. La luz blanca procede de una
lmpara de halgeno de cuarzo (como la de luz larga de un automvil), y la fuente
ultravioleta es una lmpara de arco de deuterio, que emite en el intervalo de 200-400
nm. En un momento dado slo se utiliza una de ellas. La red de difraccin 1 selecciona
una banda estrecha de longitudes de onda, que entra en el monocromador, y ste
selecciona una banda an ms estrecha, que es la que pasa a travs de la muestra.
Despus de cortado el haz, y una vez que pasa por las cubetas de la muestra y
referencia, la seal es detectada por un tubo fotomultiplicador, que produce una
corriente elctrica proporcional a la potencia radiante que llega al detector.

Fig. 1 Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de doble haz

Espectrofotmetro de ultravioleta visible


El instrumento con el que se trabajo en la experiencia fue un espectrofotmetro
SHIMADZU que es un espectrofotmetro de doble haz que nos evita estar en cada
medida de absorbancia poner el blanco de referencia porque tiene un comportamiento
para este, las celdas paralelopipedas con las que trabajamos fueron de cuarzo con un
lado transparente a al radiacin y el otro difuso por el no pasa la radiacin y por donde
se puede manipular, se pude trabajar con el espectrofotmetro usando la pantalla liquida
que tiene o desde una computadora usando el software UV PROVE.

DIAGRAMA DE FLUJO
PREPARACIN DE LA SOLUCIN PATRN

Secar la muestra 0,0728g (KNO3)

Estufa (105C) 24h


Pesar la muestra 0,0728g
Disolver con 100ml de agua destilada
Aforar
Agitamos para disolver la sustancia
Preparacin de las soluciones
FRMULA: v1=c2*v2/ c1
Determnanos los distintos volmenes que necesitamos
Pasamos a medir en el espectrofotmetro
Al tener esos datos Realizamos la curva de calibracin
Ingresamos los datos a EXEL

5. HIPTESIS
-Este mtodo determina el nitrgeno de nitratos en agua que contenga bajos contenidos
de materia orgnica; agua natural no contaminada, y la de suministros de agua potable?
-Este mtodo ser recomendable para aguas que requieren una correccin significativa
para la absorbancia de la materia orgnica?
EQUIPOS Y REACTIVOS

EQUIPOS

-Espectrofotmetro para usar a 220 nm y a 275 nm, con celdas de silicio de 1 cm de


trayectoria de luz.
-Filtros, se puede utilizar uno de los siguientes:
a) Membrana filtrante: de 0,45 m de dimetro de poro, y equipo adecuado para filtrar.
b) Papel filtro: lavado con cido, libre de cenizas, papel filtro fino suficientemente
retentivo para precipitados finos.
-Tubos Nessler de 50 cm3, forma corta.

REACTIVOS

-Agua libre de nitratos: Usar agua redestilada o destilada y desionizada de alta pureza
para preparar todas las soluciones y diluciones.
-Solucin patrn de nitrato: 1,00 cm3 = 100 g NO3- - N. Secar nitrato de potasio
(KNO3) en estufa a 105 C por 24 horas. Disolver 0,7218 g en agua y diluir a 1000
cm3. Preservar con 2 cm3 de CHCl3/l. Esta solucin es estable por seis meses.
-Solucin estndar de nitrato: 1,00 cm3 = 10,0 g de NO3--N. Diluir 50,0 cm3 de la
solucin patrn de nitrato (indicado en el numeral 7.2) a 500 cm3 con agua; preservar
con 2 cm3 de CHCl3/l.

6. CLCULOS DETALLADOS
Clculo de la concentracin de la solucin estndar madre en PPM
1.-Preparacin del patrn primario: Partiendo de la solucin madre de KNO 3
=0.0728 g/100cm3, se calcula el numero de mg NO-3 - N / 100ml solucin:
Entonces:
0.0728g X 14 g/mol NO-3 - N
100cm3

101.11g/mol KNO3

= 0.01009 g NO-3 - N
100cm3

Luego, para 10ml de solucin:


0.01009 g NO-3
X
X

100ml H20

1000ml =0.1009g *1000mg/g

100 mg NO-3 - N / L = 100 ppm.

2.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 5ppm a partir de la solucin


patrn primario.
(100 ppm x V1) patrn primario = (100ml x 5ppm) solucin patrn intermedia
V1 =5 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.
3.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 10ppm a partir de la solucin
patrn primario.
(100 ppm x V1) patrn primario = (100ml x 10ppm) solucin patrn intermedia
V1 =10 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.

4.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 20ppm a partir de la solucin


patrn primario.
(100 ppm x V1) patrn primario = (100ml x 20ppm) solucin patrn intermedia
V1 =20 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.
5.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 40ppm a partir de la solucin
patrn primario.
(100 ppm x V1) patrn primario = (100ml x 40ppm) solucin patrn intermedia
V1 =40 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.
6.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 60ppm a partir de la solucin
patrn primario.
(100 ppm x V1) patrn primario = (100ml x 60ppm) solucin patrn intermedia
V1 =60 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.
7.- Preparacin de patrones a partir de la soluciones
Soluciones

patrones

5ppm

1,25ml

10ppm

2.5ml

20ppm

5ml

40ppm

10ml

60ppm

15ml

7. CLCULO DE LA CONCENTRACIN DE LA MUESTRA DE AGUA


PURA
De todos los valores registrados en la tabla para mxima = 275 nm, se grafic
Absorbancia Vs. Concentracin
6.- TABLA DE DATOS Y RESULTADOS
SOLUCIN ESTNDAR MADRE (100 ppm)
Solucin de KNO3

0.0728 g /100cm3

Resultados de la solucin de KNO3


KNO3
0ml
0
0
0
0
0
0

Replicas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17

Medicin hecha a 275 nm


KNO3
KNO3
KNO3
KNO3
1.25ml
2.5ml
5ml
10ml
0
0
0
0
0,507
0,524
0,53
0,543
0,508
0,527
0,532
0,543
0,509
0,526
0,535
0,544
0,513
0,526
0,537
0,548
0,506
0,527
0,537
0,549

Concentrac Absorban
in
cia
1,25
0,508
1,25
0,508
1,25
0,509
1,25
0,509
1,25
0,508
2,5
0,515
2,5
0,514
2,5
0,513
2,5
0,515
2,5
0,515
5
0,524
5
0,525
5
0,524
5
0,523
5
0,525
10
0,543
10
0,543

KNO3
15ml
0
0,56
0,559
0,558
0,559
0,563

18
19
20
21
22
23
24
25

10
10
10
15
15
15
15
15

0,544
0,544
0,543
0,559
0,559
0,558
0,559
0,559

8. DISCUSIN DEL METODO EMPLEADO


La determinacin de nitratos en aguas es difcil dado los procedimientos complejos con
los que se cuentan, la gran posibilidad de encontrar sustancias interferentes y los rangos
de concentracin limitados que presentan las diferentes tcnicas.
El mtodo espectrofotometrico ultravioleta, no es un mtodo especfico para la
determinacin de ion nitrato en agua y debe ser utilizado con los recaudos necesarios.
Este mtodo presenta la dificultad de no ser adecuado para el estudio de aguas
contaminadas, es decir slo es vlida su aplicacin para muestras de agua con bajo
contenido en materia orgnica.

9. DISCUSIN DE RESULTADOS OBTENIDOS


El blanco se utiliza para corregir (restar) las absorbancias de las interferencias.
La celda utilizada es de cuarzo
En este equipo solo se cambia el contenido de la celda que tiene la muestra, la
otra celda contiene el blanco, esto hace que los resultados sean mas precisos.
La tecnica utilizada es solamente para seleccionar muestras con bajo contenido
de materia orgnica.
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO 3-, N- son por debajo de lo
permitido de 50 ppm segn la OMS. Por tanto de esto se concluy que el
Agua Pura es apta para el consumo humano.
En este metodo es necesario ser muy exactos en las mediciones porque se trata
de cantidades muy pequeas.

10. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Las sustancias absorben la luz que posse una longitud de onda caracteristica para
dicha sustancia y una fuente de luz de deuterio.
La sensibilidad del instrumento empleado permite la identificacion de sustancias
que pueden estar presentes como trazas.
Los instrumentos de doble haz hacen medidas de forma prcticamente continua
de la luz que atraviesa las celdas de la muestra y de la referencia.
Agitar vigorosamente los patrones y muestras antes de cada lectura ya que si no
se efecta este procedimiento el equipo no leer correctamente las absorbancias.
No tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz, las
huellas dactilares dispersan y absorben la luz es por eso que se coge de las partes
opacas.
La boca de la pipeta debe estar seca para que el lquido contenido baje con
facilidad.
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO 3-, N- son por debajo de lo
permitido de 50 ppm segn la OMS. Por tanto de esto se concluy que el
Agua Pura es apta para el consumo humano.

11. BIBLIOGRAFA
Skoog D. West D. Analisis Instrumental Edit. Mc. Graw Hill Mexico 1992
http://www.sma.df.gob.mx/sma/download/archivos/secofi_nmx_aa_079_scfi_20
01.pdf
http://www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm
http://www.scielo.br
http://www.udistrital.edu.co/comunidad/grupos/fluoreciencia/capitulos_fluorecie
ncia/calaguas_cap14.pdf#search=%22determinacion%20de%20nitratos%20en
%20agua%20mediante%20espectrofotometria%22
http://www.agua-mineral.net/592/manantial-de-agua-sin-nitratos/
NTE INEN 0995 (2003) (Spanish): Agua. Determinacin de nitrgeno de
nitratos.
NTE INEN 0975 (1984) (Spanish): Agua potable. Determinacin de nitrgeno
denitratos. Mtodo de la brucina

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