Guía de laboratorio N°2: Características y función del microscopio óptico.

2.1- Nombre y número de la Unidad de aprendizaje del programa de asignatura.

1. Introducción al estudio de la célula y la aplicación del método científico

2.2- Horas requeridas para la realización del paso práctico

Duración: 2 horas pedagógicas.

2.3. Indicador(es) de logro(s) del aprendizaje esperado.

1.3. Describe las características y funciones del microscopio óptico mediante su aplicación en el estudio de la
biología celular humana.

2.4 Parte Experimental

El microscopio óptico es una herramienta indispensable en el laboratorio debido a su capacidad de

aumentar significativamente el tamaño de los objetos y consta de un dúo de lentes amplificadores de imagen.
Este es un sistema de amplificación dual donde la muestra observada es amplificada inicialmente por un
complejo sistema de lentes del objetivo y luego por un segundo lente en el ocular. Dos características
esenciales en microscopía que deben ser consideradas son: 1) su poder de amplificación, que hace referencia
al número de veces que puede amplificar el objeto y, 2) su poder poder de resolución, que corresponde a
que tanto puede amplificarse un objeto sin perder el detalle de él. Esta última es la característica más
importante pues de nada serviría un microscopio que permitiera ver los objetos de gran tamaño si estos se
observan borrosos.

El microscopio óptico consta de 3 partes: un sistema mecánico, un sistema óptico y un sistema de

iluminación.

a. Sistema mecánico: está conformado por una base, el brazo, el tubo del microscopio, la platina, los
tornillos de enfoque y el revólver.

• Base: pieza de forma circular o rectangular en la que descansa todo el microscopio y cuya función es
mantener la mayor estabilidad posible. En ella pueden estar empotrados o no , la lámpara de
iluminación y el espejo.
• Brazo o columna: se une por una bisagra a la parte posterior de la base, en la mayoría de los casos
es fijo y posee una inclinación apropiada. Este brazo se utiliza cuando se debe tomar el microscopio
para transportarlo.
• Tubo de microscopio: se sitúa en el extremo del brazo que queda en sentido opuesto a la base. En
su interior se encuentran varias lentes que contribuyen con el sistema óptico para formar las
imágenes.
• Revólver: pieza giratoria en el extremo inferior del tubo del microscopio, en él se atornillan los
diferentes objetivos, los que se pueden cambiar con la simple rotación manual del revólver.
• Platina: superficie plana cuadrangular con un orificio central por el que pasa la luz procedente del
sistema de iluminación. Se sitúa aproximadamente a la mitad de la longitud del brazo, arriba del
condensador y se utiliza para colocar sobre ella las preparaciones a observar, las que se sujetan con
un par de pinzas removibles.
• Tornillo para enfoque: Se localiza en la parte inferior o media del brazo. Pueden ser de dos tipos: 1)
De cremallera o macrométrico, de mayor tamaño, se usan para realizar un desplazamiento rápido y
amplio y 2) Micrométrico, de menor tamaño, se utiliza para el enfoque fino.
 b. Sistema óptico: consta de tres sistemas de lentes: el condensador, los objetivos y el ocular.

• Objetivos: Se atornillan al revolver generalmente en número de 4 o 5. Cada uno de ellos se identifica

según el aumento el cual está indicado por el número grabado en ellos. La lente inferior es siempre
plano-convexa, de foco muy corto y diámetro que depende del aumento (a menor diámetro mayor
aumento). Detrás de esa lente hay otras que corrigen las aberraciones cromáticas o esféricas.
Seguido de los aumentos se encuentra la apertura numérica (AN) que es la relación entre la distancia
de trabajo y el seno del ángulo de refracción de la luz para cada uno de los objetivos. Su función es
proyectar una imagen aumentada del objeto en dirección al ocular.
• Oculares: se encuentran en la parte superior del tubo del microscopio y por ello más cerca del ojo
del observador. Son intercambiables. La parte superior se denomina lente ocular y la inferior lente
de campo, ambas en conjunto dan un aumento parcial. Cada ocular tiene grabado un número seguido
con una X que indica los diámetros de aumento que se pueden lograr. Además existe otro número
que corresponde al índice del campo visual en milímetros (mm). El ocular amplifica la imagen
proveniente del objetivo y la proyecta sobre la retina, una pantalla o una placa fotográfica.

c. Sistema de iluminación: se encuentra bajo la platina y tiene la función de iluminar la muestra por
medio de luz transmitida debido a que la mayoría de las observaciones se realizan por transparencia.
Consta de el espejo, el condensador y el diafragma.

• Espejo: presenta dos superficies, una plana y una cóncava. Está empotrado en la base del
microscopio y se puede girar. La cara plana se utiliza cuando se hacen observaciones en objetivos
secos de menor aumento y la cóncava para grandes aumentos.
• Condensador: consta de un conjunto de lentes cuya función es concentrar la luz sobre el campo de
la preparación a observar. Se encuentra debajo de la platina y se puede subir o bajar accionando el
tornillo colocado debajo de la platina. En el condensador encontramos filtros y el diafragma. La
fuente luminosa puede ser natural o artificial. Esto influye en la nitidez y riqueza de detalles de la
imagen observada del objeto deseado, debido a que actúa sobre el límite de resolución del sistema
óptico del microscopio, el que a su vez depende principalmente del objetivo.
• Diafragma: Forma parte del condensador y consta de una serie de laminillas unas sobre otras que
actúan como las laminillas del diafragma de una cámara fotográfica. Este se puede abrir o cerrar
permitiendo o impidiendo el paso de la luz hacia la lente superior del condensador por medio de una
palanca que sobresale del condensador, regulando así la cantidad de luz.

La ampliación total del objeto observado en el microscopio depende de cada objetivo a utilizar y está
dada por el aumento del objetivo usado multiplicado por el aumento del ocular.
 Figura 2. Componentes del microscopio

Medidas microscópicas:

La unidad de longitud más utilizada en microscopía es la micra (u) y equivale a una milésima
de milímetro (1/103 mm). Para el cálculo del diámetro del campo visual (DCV) de cada uno de los objetivos se
puede utilizar un trozo de papel milimetrado y contando los cuadrados milimétricos que se observan en el
campo visual.

Errores frecuentes en el uso del microscopio:

• En la iluminación: 1) condensador muy bajo o descendido en la base. 2) diafragma muy cerrado o

lateralizado. 3) Filtros inconvenientes o en exceso
• Imágenes extrañas: 1) Polvo u otros elementos extraños: Se pueden reconocer en el ocular al
girarlo. Si se encuentran en el objetivo se reconocen porque persisten en el campo visual aun al
retirar la preparación a observar. Si se encuentran en la muestra se reconocen porque se desplazan
al mover la preparación y están en un plano focal diferente al objeto. 2) Burbujas de aire: se
reconoce porque forma un circulo con bordes negros que cambia de aspecto según el foco. 3)
Gotas de grasa: se reconocen porque son muy refringentes con el centro brillante y contornos
oscuros.

2.4.1- Modalidad de trabajo.

Los estudiantes deberán trabajar en grupos de 3 personas máximo. Estos grupos deberán
mantenerse durante todo el semestre.
2.4.2- Procedimiento.
Objetivos: Los estudiantes deberán:

• Reconocer los componentes básicos del microscopio óptico y su funcionamiento.

• Calcular el aumento y magnificación de las muestras observadas

1. Examinar cuidadosamente el microscopio de luz instalado en el mesón de trabajo y con la ayuda de

la imagen anterior reconozca cada uno de los componentes del microscopio.
2. Verificar que el microscopio está enchufado y encenderlo. Verificar que el objetivo de menor
aumento (10x) esté en posición de empleo y descienda totalmente la platina (la encontrará en esa
posición si el microscopio fue dejado correctamente la última vez que se utilizó).
3. Montaje de la muestra: Colocar en el centro de un portaobjeto que encontrará en su mesón de
trabajo un trozo pequeño de papel milimetrado y con un gotero depositar sobre él una gota pequeña
de agua. Luego colocar sobre el papel un cubreobjetos formando un ángulo de 45° con el
portaobjetos y luego dejar caer para evitar la formación de burbujas.
4. Montar la muestra sobre la platina, de tal forma que este quede encima de la abertura y fijar
utilizando las pinzas que hay sobre la platina.
5. Enfoque de la muestra: Girar el revólver hasta que el objetivo 10x quede en posición.
6. Observando el microscopio lateralmente y girando el tornillo macrométrico descender suavemente
el tubo hasta que el objetivo 10x (el de menor aumento) se encuentre a un par de milímetros de la
muestra. Precaución debe observar el descenso del tubo siempre para evitar romper el portaobjeto
con el objetivo y dañar el objetivo.
7. Finalmente realizar el enfoque fino de la muestra girando suavemente el tornillo micrométrico y en
paralelo observando la muestra a través de los oculares. Medir el diámetro del campo
correspondiente contando el número de cuadrículas observadas.
8. Luego girar el revólver posicionando el objetivo 40x en posición y realizar el el enfoque fino de la
muestra girando suavemente el tornillo micrométrico. Medir el diámetro del campo
correspondiente contando el número de cuadrículas observadas.
9. Registre sus resultados de acuerdo a lo solicitado en el informe.

* En caso de contar con objetivos de inmersión, consultar al docente sobre el uso de este objetivo o revisar el
siguiente material visual https://www.youtube.com/watch?v=0Hy1Q_a96w4.

RECUERDE

AL TÉRMINO DE CADA ACTIVIDAD DE MICROSCOPÍA DEBES DEJAR EL MICROSCOPIO EN CONDICIÓN DE

DESCANSO.

• Platina abajo.
• Puesto el revólver del microscopio en el lente de 10X o de menor aumento.
• Fuente luminosa apagada.
• Apague el microscopio y desenchufelo.
• Lentes limpios.
• Cubrirlo con la funda protectora.
Informe

En base a la actividad realizada conteste las siguientes preguntas:

1. Al mover el portaobjetos en dirección contraria a usted ¿En qué dirección se mueve la imagen?
Explique desde el punto de vista óptico.
 2. Al mover el portaobjetos hacia la derecha ¿En qué dirección se mueve la imagen? Explique desde el
punto de vista óptico.
3. Complete la siguiente tabla según el cálculo del campo visual realizado con los objetivos 10X y 40X

Objetivo Aumento Aumento Aumento DCV del obj. en DCV del obj. en
ocular total micrones milímetros
10x 10
40x 40

4. ¿Cuál es la relación entre el diámetro del campo entre ambos objetivos?

2.5.- Tablas de Insumos y Activos:

2.5.1.- Insumos:

Nombre del Tipo de Estándar de uso Cantidad de

Insumo Insumo del insumo insumo a utilizar

Papel milimetrado Sólido, papel Por laboratorio 1

Portaobjetos Sólido, vidrio Por grupo 1

Cubreobjetos Sólido, vidrio Por grupo 2

Piseta agua destilada Líquido Por grupo 1

Pipeta pasteur Sólido, plástico Por grupo 1

Vaso precipitado 50 mL Sólido, vidrio Por grupo 1

muestra hilo Sólido Por grupo 1

muestra letra Sólido Por grupo 1

2.5.2. Activos:

Estándar del uso

Nombre del Activo. Característica relevante del activo
del activo

Laboratorio de Biología celular y Todo el curso De acuerdo a las normas vigentes de aforo y
microbiología trabajo

Microscopio óptico 1 por grupo Olympus binocular

Microscopio óptico 1 para el docente Olympus trinocular con cámara integrada

para conectar al computador
 Computador y proyector 1 para el docente En buen estado para el desarrollo y demostración
del práctico.

2.6.- BIBLIOGRAFÍA:

• Alberts, B., Bray, D., Lewis J., Raff, M. Roberts, K., Watson J. (2011). Biología molecular de la célula.
Garland Pub.
• Karp G. (2010). Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos. Mc Graw-Hill
Interamericana.