Practica 6 Bioq Ramirez Landaveri

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE AGROINDUSTRIAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA AGROINDUSTRIAL
PRACTICA 6: ESPECTROFOTOMETRIA
CURSO:
BIOQUÍMICA AGROINDUSTRIAL
ALUMNO:
RAMIREZ LANDAVERI ALBER ALDAHIR
PROFESORA:
Blga. CHANCAFE GREY, SILVIA MARIBEL
III CICLO
AÑO ACADEMICO 2023
Tumbes-Perú
2023
I. PRACTICA 6: ESPECTROFOTOMETRIA
II. INTRODUCCION:
La luz del sol es una forma de energía conocida como energía electromagnética,
llamada también radiación que viaja en ondas rítmicas. Una radiación electromagnética se
puede describir como un flujo de partículas llamadas fotones o bien como una onda
propagándose en el espacio. La distancia entre las crestas de las ondas electromagnéticas se
conoce con el nombre de longitud de onda y se representa por una letra griega lambda y su
dimensión se expresa en nanómetros.
La radiación nos proporciona un espectro electromagnético que posee longitudes de onda
-5
que van desde 10 nm hasta un poco más de 1000 nm. Este espectro electromagnético está
constituido por:
- Rayos gamma
- Rayos X
- Energía Ultravioleta
- La luz visible
- La energía infrarroja
- Las microondas
- Las ondas de radio
-5 -3
Los rayos gamma poseen las longitudes de onda más cortas con 10 a 10 nm, luego los
-3
rayos X con 10 a 1 nm y después la energía ultravioleta con 1 nm a 400 nm.
La luz visible es el segmento de energía más importante para la vida y posee una banda
estrecha de longitudes de onda que van desde los 400 nm a 700 nm. Esta radiación es
conocida como la luz visible porque el ojo humano puede detectarla en forma de diversos
colores.
Las moléculas tienen un estado energético que se puede alterar por la absorción de radiación
electromagnética a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para realizar un
estudio cualitativo o cuantitativo.
ESPECTROFOTOMETRIA
Es una de las técnicas experimentales más utilizada para detección específica de moléculas.
Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta
naturaleza como contaminantes, biomoléculas y según su estado de agregación como sólido,
líquido, gas.
Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos, las
moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna, esto
permite que se inicien ciclos vitales en muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en
plantas y bacterias.
ESPECTROFOTOMETRO
Los aparatos de medida de la absorción de la radiación electromagnética se denominan

espectrofotómetros y pueden representarse mediante el esquema
Un espectrofotómetro es un equipo que hace uso de la transmisión de la luz a través de una

solución para determinar la concentración de un soluto dentro de una solución (muestra).
FUNCIONAMIENTO DEL ESPECTROFOTOMETRO

La energía del sol y la de una bombilla encendida incluye al total de la energía luminosa, si un
rayo de luz pasa por un prisma se descompone. La luz blanca que emite la lámpara del equipo
se hace pasar a través de un prisma, el cual descompone la luz, separándola en sus colores
constituyentes, según su longitud de onda formando un abanico de colores.
El espectrofotómetro tiene un mecanismo que modifica la posición del prisma de
acuerdo a la cifra de longitud de onda que se programa.
Para cada cifra programada corresponde diferente color. El rayo de luz es dirigido hacia
una rejilla metálica llamada monocromador, por la cual podrá pasar la luz del color que en ese
momento se haya escogido. Simultáneamente cuando cambia el color, aparece en la ventana
de lectura la longitud de onda del color que estamos usando.
Después de la rejilla está el espacio donde se colocan los tubos de ensayo con las
sustancias en estudio (muestras), este tubo de ensayo denominado en estos casos cubeta
óptica, recibe un rayo de luz monocromática que posee una determinada longitud de onda en
función de su color con 100% de intensidad.
El contenido de la cubeta óptica que contendrá solvente y soluto (muestra), podrá
absorber alguna parte de la energía de ese rayo luminoso a su paso a través de la misma y la
luz que logre atravesar la solución (muestra) llevara una intensidad menor.
Este rayo más débil seguirá su curso hasta chocar contra un dispositivo llamado foto
celda o tubo fotoeléctrico que es sensible a la cantidad de energía que logra pasar,
convirtiéndola en electricidad y trasladándola por medio de un galvanómetro a una pantalla
donde aparece la cifra que demuestra la cantidad de energía que logró llegar a la foto celda.
Si el rayo luminoso no hubiera encontrado ningún obstáculo en su camino, impactaría la
foto celda con toda su potencia y la pantalla mostraría su energía en el 100%.
Principales ventajas de la espectrofotometría son:

- Sensibilidad relativa elevada
- Facilidad para realizar mediciones rápidas
- Grado de especificidad relativamente elevado.
TRANSMITANCIA
Cuando la radiación electromagnética de intensidad “I” atraviesa un medio homogéneo, parte
de la radiación es absorbida por la muestra y otra parte es transmitida con una intensidad
menor “i”.
De tal manera que se define transmitancia de una muestra como la relación entre la radiación
transmitida “i” versus la intensidad luminosa incidente “I” multiplicado por 100.
%T = i x 100
I
ABSORBANCIA
La absorbancia es una medida de la cantidad de energía luminosa incidente absorbida por una
sustancia en solución. Está relacionada con la transmitancia por medio de
A = - Log T A = Log (100 / % T)
La escala de transmitancia representada en porcentaje, es la que expresa la cantidad de

energía que logró atravesar el medio absorbente de la cubeta óptica y llegar hasta la foto celda.
La escala de absorbancia representada por el logaritmo de 100 / %T es la que expresa la
cantidad de energía que quedó absorbida en las moléculas del medio absorbente sin lograr
atravesarlo.
Son escalas inversas y muestran por ejemplo una sustancia que absorba el 30% de la energía
del rayo, mostraría en la pantalla 70% de transmitancia y 30 % de absorbancia.
Como norma general se usa la escala de absorbancia porque las cifras obtenidas en logaritmos
pueden graficarse en mejor forma cuando el procedimiento de fotometría es utilizado en
estudios de investigación médica.
BASES DE LA FOTOMETRIA
La mayoría de los compuestos biológicos como las proteínas, grasas, carbohidratos y

ácidos nucleicos, absorben energía en alguna parte de las regiones ultravioleta, luz visible e
infrarroja.
Cuando el rayo de luz llega a la cubeta óptica lleva el 100% de su energía, a medida que
penetra en la sustancia, las moléculas presentes gradualmente absorberán cada vez más
energía, por lo que la intensidad de la energía del rayo luminoso progresivamente irá
perdiendo su potencia en función de 3 variables:
- El grado de concentración de solutos en la sustancia que se analiza
- La longitud del medio absorbente o sea la distancia que el rayo debe recorrer que
depende del ancho de la cubeta que se está utilizando.
- La longitud de onda o color del rayo que se está usando
Por tanto, la fracción de luz incidente (Io) absorbida por una solución a una determinada
longitud de onda, está relacionada con la concentración de la solución y con el espesor de la
capa absorbente.
LEYES EN ESPECTROFOTOMETRIA
Si hacemos pasar agua de muestra, no absorberá luz ya que no hay nada coloreado
que pueda atrapar luz, por tanto pasa 100 % de luz, habrá 100% de luz que sale y habrá 0%
que se absorbe (No se absorbe nada de luz).
Si la muestra tuviera pigmento o solutos, la luz pasa y atraviesa las partículas del
pigmento, por lo tanto la absorbancia y transmitancia variarán, pasa 100% de luz con lo cual la
absorbancia será más de 0 y la transmitancia será menos de 100.
Si la muestra estuviera más concentrada, al pasar la luz, la absorbancia será mucho
más de 0 y menos de 100. Por lo tanto se deduce que la absorbancia y transmitancia son
inversamente proporcionales, mientras una sube la otra baja.
LEY DE BEER
Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad

disminuye exponencialmente a medida que la concentración del medio absorbente aumenta
(muestra).
A = a.C
Donde:
A = Absorbancia
a = Coeficiente de absortividad
Absortividad específica de cada soluto o coeficiente de absorción molar
C = Concentración de la muestra
A mayor concentración de la muestra, mayor absorbancia y menor transmitancia.

La absorbancia era directamente proporcional a la concentración
LEY DE LAMBERT
Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad

disminuye exponencialmente a medida que la longitud del medio absorbente aumenta.
La absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la muestra, pero tiene
que ver la longitud de la cubeta, si el tubo fuera más grueso a la hora de pasar el rayo
luminoso, absorbería más luz.
A = a.L
Donde:
A = Absorbancia
a = Coeficiente de absortividad
Absortividad específica de cada soluto o coeficiente de absorción molar
L = Longitud de la cubeta donde atraviesa la luz
LEY DE LAMBERT Y BEER
Al final la a que corresponde al coeficiente de absortividad es una constante, por lo tanto, se

anula a ambos lados y queda la siguiente fórmula:
A = C. L
Donde:
A = Absorbancia
L = Distancia recorrida por el haz de luz en cm o espesor de la muestra absorbente (Cubeta
de 1 cm)
C = Concentración de la solución en moles por litro
Si la longitud de la cubeta tuviera una medida estándar de 1 cm quedaría una fórmula más
resumida:
A = C
Las relaciones anteriores se expresan en las leyes de Lambert y Beer, que expresa que la
absorbancia de una solución es directamente proporcional al camino recorrido por la radiación
electromagnética y a la concentración de la solución.
La absortividad es la constante de proporcionalidad que nos permite igualar la ecuación,
sus unidades dependerán de b y c ya que la absorbancia no tiene unidades.
La ley de Lambert Beer supone que la luz incidente es paralela y monocromática y que las
moléculas del solvente y el soluto están orientadas al azar de manera uniforme.
III. OBJETIVOS:
Determinar la concentración de una sustancia presente en una muestra problema usando el

espectrofotómetro.
IV. MATERIALES:
Equipos:
- Espectrofotómetro
Reactivos:
- Solución de azul de bromofenol
Material de vidrio y otros:

- Pipetas de 5 ml
- 3 cubetas ópticas
- Tubos de ensayo
- Una gradilla
V. METODOLOGIA
- Rotule las cubetas ópticas con “B” blanco, “E” Estandar y “M” muestra.
- Prepare el blanco “B” con 3 ml de agua destilada
- Prepare el Estandar “E” con 3 ml de la preparación de azul de bromofenol constituída
por una solución de 20 mg de azul de bromofenol en 100 ml de agua destilada,
elaborado previamente.
- Encienda el espectrofotómetro y no ponga objetos alrededor del aparato que puedan
bloquear las entradas de ventilación, ya que el recalentamiento daña los mecanismos
daña los mecanismos y acorta la vida de la lámpara.
- Asegúrese de alinear las “superficies de lectura” de las cubetas ópticas en forma
perpendicular a la fuente de luz, para evitar sesgos en el aprovechamiento de la energía
luminosa.
- Ajuste la longitud de onda. Para el propósito de esta práctica se harán varios ajustes
para encontrar el “espectro de absorción”.
- La longitud de onda necesaria vendrá definida en el procedimiento de cada práctica.
- Asegúrese de cerrar la tapa del compartimiento de muestras antes de hacer sus
anotaciones de lecturas de absorbancia, porque si llega luz ambiental a la foto celda,
habrá interferencias que alteran las lecturas.
- Ajustar la absorbancia en “cero” con el “Blanco” preparado con agua
- Determinar la absorbancia de la cubeta “Estandar”
- Se deberá obtener el espectro de absorción de una solución de azul de bromofenol
usando las longitudes de onda 400 nm, 420 nm, 440 nm, 460 nm, 480 nm, 500 nm, 520
nm.
- Definir en qué longitud de onda ocurre la máxima absorbancia
- Para calcular la concentración de una muestra según la fórmula, se tendrá que preparar
una muestra poniendo 3 ml de solución estándar anterior en un tubo de ensayo al cual
le agregara 3 ml de agua destilada.
- Con esta solución de muestra problema (Dilución a la mitad del estándar) se debe
agregar a la cubeta óptica de muestra “M”.
- Leer su absorbancia siguiendo el procedimiento anterior
- Aplicar la fórmula para encontrar su concentración.
VI. RESULTADOS
CALCULO PARA LA CONCENTRACION DE COMPUESTOS
Cuando se desea determinar la concentración de un compuesto en una solución mediante el

uso de un espectrofotómetro, se debe proceder a la preparación de 3 tubos:
- Un tubo blanco.- sirve para hacer la calibración del espectrofotómetro, lo cual se logra
ajustando la absorbancia de la pantalla en “cero”.
Contiene diluyente, estabilizadores químicos del pH, reactivos colorantes y todos los
ingredientes que sean necesarios para la técnica, pero no debe contener la sustancia
que se va a estudiar.
- Un tubo Estándar.- contiene lo mismo que el blanco y se le agrega la sustancia en

estudio pero a una concentración conocida, se prepara en el laboratorio y sirve para
comparar su absorbancia que será en función de su concentración conocida con la
absorbancia de la muestra.
El estándar sirve para definir una absorbancia “patrón” dependiente de su
concentración con la que se harán operaciones matemáticas para encontrar la
absorbancia de las muestras problemas.
- Un tubo de muestra.- contiene lo mismo que el blanco, pero aparte contiene la

sustancia en estudio de la cual no sabemos su concentración. Se prepara a partir de
fluidos biológicos como sangre, líquido cefalorraquídeo, orina u otros.
La fórmula para calcular la concentración de la sustancia en la solución (muestra) será:
Concentración de la muestra = Concentración del Estándar x Absorbancia de la muestra

Absorbancia del Estándar
En forma abreviada se escribe:
[M] = [S] x Ab-M

Ab-S
LONGITUD DE ONDA ÓPTIMA DEL AZUL DE BROMOFENOL
LONGITUD DE ONDA TRANSMITANCIA ABSORBANCIA

400 nm 86.1 % 0.048
420 nm 84.8 % 0.058
440 nm 84 % 0.068
460 nm 83.4 % 0.075 Lambda óptimo
480 nm 85.2 % 0.071
500 nm 87.9 % 0.056
520 nm 94.6 % 0.036
ABSORBANCIA DEL AZUL DE BROMOFENOL

CONCENTRACION ABSORBANCIA
2 0.036
4 0.072
6 0.108
8 0.144
10 0.180
“X” 0.054
CURVA DE CALIBRACION
Me sirve para hallar:

- La concentración de una muestra desconocida “muestra problema”
- Sirve para hallar el “factor de calibración”
FACTOR DE CALIBRACION: Fc
Es la concentración entre los estándares sobre la absorbancia de los estándares
Fc = [E]
Ab E
CONCENTRACION DE ABSORBANCIA FACTOR DE

ESTANDARES DE ESTANDARES CALIBRACION
2 0.036 55.5
4 0.072 55.5
6 0.108 55.5
8 0.144 55.5
10 0.180 55.5
“X” 0.054 55.5
Si la muestra fuera glucosa:
[G] = Fc . Ab-M
[G] = 55.5 x 0. 054
[G] = 2.997
La cubeta “blanco” sería el reactivo para la determinación de la glucosa, no debe ocurrir

reacción.
La cubeta “muestra” contiene el reactivo con la muestra donde hay reacción enzimática.
La cubeta “estándar” ya tiene una concentración conocida y en la lectura de la glucosa se lee
la absorbancia del estándar para sacar el factor para la glucosa. Se debe correr solo un tubo
estándar
Fc = [ E ]
Ab-E
VII. DISCUSION
Por regla general los colorantes de una

tonalidad más oscura tienden a absorber
mayor cantidad
de luz, presentando así un valor más
grande de absorbancia y uno menor de
transmitancia
debido a que son unidades inversas,
En efecto, en nuestra practica de la-
boratorio observamos que se cumplió
con esta norma,
aunque se preste a confusiones la inter-
pretación de las gráficas, se debe tener
en cuenta que el
Verde Brillante, si bien tiene una ab-
sorbancia más baja comparada con la
Eosina Amarilla, se
está midiendo a una longitud de onda
mayor, por ende tiene la capacidad de
absorber más luz,
mientras que la Eosina Amarillenta
presenta una mayor absorbancia res-
pecto a la del Verde
Brillante, pero se está midiendo a una
longitud de onda menor, por esto absor-
be menos luz que
la que transmite.
La Eosina Amarilla presenta un nivel
máximo de absorbancia a una longitud
de onda de 520nm,
se observa también que cuando la
curva llega a este punto, comienza a
descender
drásticamente, es decir, posee un pun-
to de máxima eficiencia. Esto permite
deducir que cada
colorante posee una longitud de onda
en la cual trabaja mejor, y en el caso
del Verde Brillante
esta longitud es 620nm.
Se calculó también el coeficiente de
extinción molar el cual nos da a cono-
cer el v alor de la
potencia con que la Eosina Amarilla
y el Verde Brillante absorben la luz
a una determinada
longitud de onda. Se pudo haber pre-
sentado un margen de error en la rela-
ción concentración
absorbancia debido a diferentes facto-
res tales como la calibración del es-
pectrofotómetro, la
exposición de los tintes a la luz por un
tiempo variable entre muestra y mues-
tra, o que las celdas
no estuvieran bien secas o limpias por
fuera, pero en general consideramos
que se llevó a cabo
un procedimiento correcto.
En cuanto a la muestra problema se cal-
culó su concentración a través de dos
métodos; gráfico
y cálculo teórico, obtuvimos resultados
muy similares pero de cualquier forma
es evidente un
margen de error puesto que el méto-
do grafico es puramente empírico y
se presta para
aproximaciones.
Por regla general los colorantes de una tonalidad más oscura tienden a absorber más luz, por
lo que representan un mayor valor de absorción y un menor valor de transmisión, ya que son
componentes relacionados. (Vega, A. De León, J. Reyes, S. 2017).
De hecho, en nuestro trabajo de laboratorio, hemos observado el cumplimiento de este

estándar, aunque la interpretación de los gráficos es confusa, se debe considerar que el verde
es verde, aunque tiene una absorción baja en comparación con el amarillo de eosina,
que se mide en longitud, por lo que puede absorber más luz,
mientras que la eosina amarilla absorbe más en comparación con el verde claro, pero se mide
en una longitud de onda más corta, por lo que absorbe menos luz.
que envía. (Montoya, E., Baltuano, Ó., & Arbildo, A. 2013).
La Eosina Amarilla presenta un nivel máximo de absorbancia a una longitud de onda de

520nm, se observa también que cuando la curva llega a este punto, comienza a descender
drásticamente, es decir, posee un punto de máxima eficiencia. Esto permite deducir que cada
colorante posee una longitud de onda en la cual trabaja mejor, y en el caso del Verde Brillante
esta longitud es 620nm. (Leon, V. 2022).
Se calculó también el coeficiente de extinción molar el cual nos da a conocer el valor de la

potencia con que la Eosina Amarilla y el Verde Brillante absorben la luz a una determinada
longitud de onda. Se pudo haber presentado un margen de error en la relación concentración
absorbancia debido a diferentes factores tales como la calibración del espectrofotómetro, la
exposición de los tintes a la luz por un tiempo variable entre muestra y muestra, o que las
celdas no estuvieran bien secas o limpias por fuera, pero en general consideramos que se llevó
a cabo un procedimiento correcto (Gonzáles, M. 2021).
En cuanto a la muestra problema se calculó su concentración a través de dos métodos; gráfico

y cálculo teórico, obtuvimos resultados muy similares, pero de cualquier forma es evidente un
margen de error puesto que el método grafico es puramente y se presta para aproximaciones.
(Montoya, E., Baltuano, Ó., & Arbildo, A. 2013)
VIII. CONCLUSIONES
La transmitancia indica la cantidad de energía que pudo pasar a través del medio absorbente, y
la absorción indica la cantidad de energía absorbida por las moléculas del medio absorbente.
 LA LEY DE LAMBRET: establece que cuando un rayo de luz monocromática atraviesa

un medio, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que aumenta la longitud
de onda de la luz absorbida (Balcázar, D. Jiménez, D. Sosa, K. 2015).
 Ley BERA: Cuando la luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su

intensidad disminuye drásticamente a medida que aumenta la concentración del medio
absorbente (Prieto, D. Malambo, E. Gregory, N. 2020).
Se puede crear una escala estándar o de calibración.
1. La espectrofotometría es una técnica

que, por medio de la medición de la
cantidad de luz absorbida
por una solución a una longitud de onda
específica, ayuda a determinar la con-
centración de un soluto
particular, aun cuando hubiera otros so-
lutos presentes en la disolución.
2. El interpretar los resultados en las

gráficas nos permitió entender los ran-
gos de absorbancia,
transmitancia, concentración y longitud
de onda siendo comparados entre sí, y
se logró comprobar
por medio de la práctica lo que dice la
teoría en cuanto que se presentan rela-
ciones directamente
proporcionales e inversamente propor-
cionales.
3. El hecho de dar buen uso al espec-
trofotómetro puede determinar resulta-
dos satisfactorios, pues
a este se procede presionando botones
ordenadamente conforme a la situación
que quieres que te
describa, su buena calibración da en-
tonces la lectura requerida para desa-
rrollar una excelente
práctica.
4. Observamos que cada colorante se
comporta de una forma distinta, esto se
puede deber a que
los colores de cada uno de estos se des-
componen de una manera distinta o
también de qué están
compuestos, y esto incide en los resul-
tados.
5. Con los resultados obtenidos logra-
mos comprender y emplear la fórmula
de Lambert-Beer para
encontrar la concentración de suero del
paciente teniendo en cuenta la curva de
calibración y poder
así especular sobre su patología.
6. La espectrofotometría se usa para di-
versas aplicaciones, como: análisis
cuantitativo y cualitativo
de soluciones desconocidas en un la-
boratorio de investigación, detección
de niveles de
contaminación en agua, y determina-
ción de trazas de impurezas en alimen-
tos y en reactivos
7. En el entorno médico el método de
espectrofotometría brinda la posibilidad
de hallar enfermedades
por medio de la determinación de la
concentración de sustancias elementa-
les, tales como la cantidad
de glucosa que se encuentra en la san-
gre

gos de absorbancia,
se logró comprobar
ciones directamente
cionales.
que quieres que te
práctica.
puede deber a que
tados.
de niveles de
tos y en reactivos

gre
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cionales.
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puede deber a que
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tos y en reactivos

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puede deber a que
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tos y en reactivos

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cionales.
que quieres que te
práctica.
puede deber a que
tados.
de niveles de
tos y en reactivos

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El trabajo realizado nos permite evidenciar la gama de actividades brindadas en este estudio,
ya que se logró determinar la cantidad de carbohidratos que se pueden utilizar en las especies
de algas Ulva sp y Chaetomorpha sp para la producción de bioetanol, que funciona como
biocombustible: teniendo para Ulvas sp 35375.33 + 3.3139 ppm y Chaetomorphas sp 48176.31
+ 2.7193 ppm. (Chang, R. Murillo, L. 2017).
El espectrómetro construido es confiable, robusto y adecuado para trabajo fotométrico
cuantitativo y cualitativo en la región visible, hasta 650 nm. Su construcción es tan simple que
puede ser realizada por los estudiantes, individualmente o en grupos pequeños y no se
requieren conocimientos de electrónica. El costo es notablemente bajo, y la parte más cara es
la cámara web. (Montoya, E., Baltuano, Ó., & Arbildo, A. 2013).
El hecho de dar buen uso al espectrofotómetro puede determinar resultados satisfactorios,

pues a este se procede presionando botones ordenadamente conforme a la situación que
quieres que te describa, su buena calibración da entonces la lectura requerida para desarrollar
una excelente práctica. . (Leon, V. 2022).
Observamos que cada colorante se comporta de una forma distinta, esto se puede deber a que
los colores de cada uno de estos se descomponen de una manera distinta o también de qué
están compuestos, y esto incide en los resultados. (Vega, A. De León, J. Reyes, S. 2017).
Con los resultados obtenidos logramos comprender y emplear la fórmula de Lambert-Beer para
encontrar la concentración de suero del paciente teniendo en cuenta la curva de calibración y
poder así especular sobre su patología. (Vega, A. De León, J. Reyes, S. 2017).
La espectrofotometría se usa para diversas aplicaciones, como: análisis cuantitativo y

cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigación, detección de niveles
de contaminación en agua, y determinación de trazas de impurezas en alimentos y en
reactivos. (Perez, E. Rojas, A. 2016).
En el entorno médico el método de espectrofotometría brinda la posibilidad de hallar

enfermedades por medio de la determinación de la concentración de sustancias elementales,
tales como la cantidad de glucosa que se encuentra en la sangre. (Perez, E. Rojas, A. 2016).
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Balcázar, D. Jiménez, D. Sosa, K. (2015). Comprobación Experimental de la Ley de Lambert-

Beer. Recuperado de: https://es.slideshare.net/KarelyRaijin/reporte-deprctica15-
comprobacion-de-la-ley-de-lambert-beer
Chang, R. Murillo, L. (2017). Determinación espectrofotométrica, de carbohidratos

aprovechables en las algas Ulva sp y Chaetomorpha sp para la producción de etanol
que funcione como biocombustible, por el método de la antrona. Recuperado de:
https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1010-29142017000100005
Gonzáles, M. (2021).Informe 1- Espectrofotometría. Recuperado de:
https://es.scribd.com/document/544400347/Informe-1-Espectrofotometria
Leon, V. (2022). Informe bioquímica. Recuperado de:

https://es.slideshare.net/VALERYLEONORARMASTOR/informe-1-bioqumicapdf
Montoya, E., Baltuano, Ó., & Arbildo, A. (2013). Espectrómetro para radiación visible hecho en
casa, de bajo costo y altas prestaciones; Recuperado de:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1810-634X2013000100011
Prieto, D. Malambo, E. Gregory, N. (2020). Informe de curva de calibración por lay de beer –
Lambert. Recuperado de: https://es.scribd.com/document/461857450/Informe-de-
aplicacion-de-la-ley-de-Beer-Lambert
Vega, A. De León, J. Reyes, S. (2017). Determinación del Contenido de Polifenoles Totales,

Flavonoides y Actividad Antioxidante de 34 Cafés Comerciales de Panamá. Recuperado
de: chrome-extension://efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj/https://scielo.conicyt.cl/pdf/
infotec/v28n4/art05.pdf
Perez, E. Rojas, A. (2016). Validació n de un método para cuantificación de acetaminofén

tabletas de 500MG por espectrofotometría ultravioleta. Para la prueba de uniforme de
contenido: Recuperado de:
chrome-extension://efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj/https://www.redalyc.org/pdf/
666/66646380003.pdf
Nforme IDACIÓNDEUNMÉTODOPARACUANTIFICACIÓN DEACETAMINOF
ÉNENTABLETASDE500MGPOR ESPECTROFOTOMETRÍAULTRAVIOLETAPARALA
PRUEBADEUNIFORMIDADDECONTENIDO

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Los aparatos de medida de la absorción de la radiación electromagnética se denominan

Un espectrofotómetro es un equipo que hace uso de la transmisión de la luz a través de una

FUNCIONAMIENTO DEL ESPECTROFOTOMETRO

Principales ventajas de la espectrofotometría son:

A = - Log T A = Log (100 / % T)

La escala de transmitancia representada en porcentaje, es la que expresa la cantidad de

La mayoría de los compuestos biológicos como las proteínas, grasas, carbohidratos y

Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad

A mayor concentración de la muestra, mayor absorbancia y menor transmitancia.

Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad

LEY DE LAMBERT Y BEER

Al final la a que corresponde al coeficiente de absortividad es una constante, por lo tanto, se

Determinar la concentración de una sustancia presente en una muestra problema usando el

Material de vidrio y otros:

CALCULO PARA LA CONCENTRACION DE COMPUESTOS

Cuando se desea determinar la concentración de un compuesto en una solución mediante el

- Un tubo Estándar.- contiene lo mismo que el blanco y se le agrega la sustancia en

- Un tubo de muestra.- contiene lo mismo que el blanco, pero aparte contiene la

Concentración de la muestra = Concentración del Estándar x Absorbancia de la muestra

En forma abreviada se escribe:

[M] = [S] x Ab-M

LONGITUD DE ONDA ÓPTIMA DEL AZUL DE BROMOFENOL

LONGITUD DE ONDA TRANSMITANCIA ABSORBANCIA

ABSORBANCIA DEL AZUL DE BROMOFENOL

Me sirve para hallar:

Es la concentración entre los estándares sobre la absorbancia de los estándares

CONCENTRACION DE ABSORBANCIA FACTOR DE

Si la muestra fuera glucosa:

[G] = 55.5 x 0. 054

La cubeta “blanco” sería el reactivo para la determinación de la glucosa, no debe ocurrir

Por regla general los colorantes de una

De hecho, en nuestro trabajo de laboratorio, hemos observado el cumplimiento de este

La Eosina Amarilla presenta un nivel máximo de absorbancia a una longitud de onda de

Se calculó también el coeficiente de extinción molar el cual nos da a conocer el valor de la

En cuanto a la muestra problema se calculó su concentración a través de dos métodos; gráfico

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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Balcázar, D. Jiménez, D. Sosa, K. (2015). Comprobación Experimental de la Ley de Lambert-

Chang, R. Murillo, L. (2017). Determinación espectrofotométrica, de carbohidratos

Leon, V. (2022). Informe bioquímica. Recuperado de:

Vega, A. De León, J. Reyes, S. (2017). Determinación del Contenido de Polifenoles Totales,

Perez, E. Rojas, A. (2016). Validació n de un método para cuantificación de acetaminofén

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