V Encuentro Latinoamericano y del Caribe de

Biotecnología Agrícola
FUNDACION REDBIO
GOBIERNO DE CHILE
FUNDACION PARA LA
“Biotecnología, generando prosperidad respetando la vida”
INNOVACION AGRARIA
CHILE

Aplicaciones de la biotecnología en la
salmonicultura chilena

Dr. Roberto Neira Roa

Depto. Producción Animal
Facultad de Ciencias Agronómicas
Universidad de Chile
Santiago, Chile.
 474
1323 Chile Otros
34% 13%

Reino Unido
11%

Canada
6%
Noruega
36%

PAISES PRODUCTORES DE SALMÓN

EXPORTACIONES CHILENAS
TOTALES SALMON Y TRUCHA 331
1.200 350
300
286 300
1.000

250
800 206
182 200
600 160 155
135 150
400 98
76 100
60
50
200 33 50

0 0
1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003

Miles de Toneladas netas Millones de Dólares Fob Chile

BIOTECNOLOGÍAS APLICADAS A LA REPRODUCCIÓN
EN SALMONIDOS
CONTROL DE LA
MADURACION:
STOCK
REPRODUCTOR - INDUCCION AMBIENTAL:
Fotoperíodo

CRIOPRESEVACIÓN - INDUCCION HORMONAL:

GnRHa
CONTROL DE LA GAMETOS
FERTILIDAD:
FECUNDACION CONTROL DEL SEXO
- POLIPLOIDIAS ARTIFICIAL GENETICO:
Triploidía INCUBACION
Tetraploidía - PARTENOGENESIS
OVAS CON OJO Ginogénesis
Androgénesis

CONTROL DEL
CRECIMIENTO: ECLOSIÓN (alevin c/saco)
- TEMPERATURA ALEVINES CONTROL DE LA
PROPORCION DE SEXOS:
- FOTOPERIODO SMOLTS
- NEOMACHOS

- STOCK MONOSEXO

ENGORDA

COSECHA REPOSICION DEL STOCK

 Dos vías para obtener triploides
macho diploide macho diploide macho tetraploide
hembra 1n hembra 1n hembra 2n
diploide triploide diploide
(4c) (6c) (4c)

CB CB

1n + 1n 1n + 1n +1n 1n + 2n
+ 1n + 1n

3n 4n 3n

85 - 95% triploide 85 - 95% tetraploide 100% triploide

Stan Allen, 2003

 Como obtener todo hembra
macho diploide

hembra X 1n
diploide (4c)

UV

CB

NEOMACHOS (XX)
1n + 1n 17α-metil
testosterona
+ 1n

2n
3n
1a alimentación
52 d ! 1g
Todo hembra diploide
triploide neo machos
X X
(XX)
(XX)
 NEOMACHOS (XX)

La fecundación con semen de neomachos

produce poblaciones todo hembra
SE USAN?
 PROBLEMA DE MADUREZ SEXUAL TEMPRANA

SALMÓN DEL ATLÁNTICO

YEAR 0 YEAR 1 YEAR 2 YEAR 3 YEAR 4

JFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASOND
COSECHA
ALEVIN SMOLTS

MADUREZ
TEMPRANA GRILSE
DESOVE PARR DESOVE

TRUCHA ARCOIRIS

YEAR 0 YEAR 1 YEAR 2 YEAR 3

JFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASOND
COSECHA
ALEVIN SMOLTS

MACHOS MADUROS DESOVE

DESOVE JACKS
MADUREZ SEXUAL Y COLOR DE LA PIEL EN TRUCHA ARCOIRIS
• El principal problema para el • Gran % de calidad primium se
mercado japones de la trucha logró usando fotoperíodo y
puede ser el color de la piel peces triploides todo hembra
Salmón coho

Trucha arcoiris
 YEAR 0 YEAR 1 YEAR 2 YEAR 3 YEAR 4

JFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASOND
HARVEST
ALEVIN SMOLTS

MATURING PARR GRILSE

SPAWNING SPAWNING

7000
Salmón del 6000

Atlántico 5000

4000

3000

2000

1000

0
J A S O N D J F MA M J J A S O N D J F MA M J J A

Serie2 Serie3
N 115g J 131g

• Salmón Lochy en Chile produce una alta proporción de grilse

cuando se traslada al mar muy tarde, pero…
 QUÉ HEMOS APRENDIDO DEL SALMON COHO

• La mayoría del salmón coho producido en Chile se hace bajo un

ciclo generacional de 2 años

YEAR 0 YEAR 1 YEAR 2 YEAR 3

JFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASOND
COSECHA
ALEVIN SMOLTS

MATURING MALES DESOVE

DESOVE JACKS

YEAR 0 YEAR 1 YEAR 2

JFMAMJJASONDJFMAMJJASONDJFMAMJJASOND
COSECHA
ALEVIN SMOLTS

DESOVE DESOVE
 " La elevada variabilidad genética y la mayor
fecundidad de las especies acuícolas, permite la
aplicación de mayores intensidades de selección, lo
que se ha traducido en respuestas a la selección
mucho mayores que en otras especies animales

Atlantic salmon 10.6-14.2 % Gjerde et al., 1986

rainbow trout 13.0% Gjerde et al., 1986
channel catfish 12-20 % Dunham, 1987
Coho salmon 10.1 % Hershberger et al., 1990
Coho salmon 9,1% Neira et al., 2002
Tilapias 17.0% Eknath, 1997
Marine Shrimp 4.4% Fjalestad et al., 1997
 PROGRAMA DE SELECCIÓN PARA EL MEJORAMIENTO
GENÉTICO DEL SALMÓN COHO (Oncorhynchus kisutch)

POBLACION GANANCIA % POBLACION GANANCIA %

ESTIMACIÓN DE LA
CMG92 0.0
RESPUESTA
CMG93 0.0
CMG94
CMG94 10,5
A LA SELECCIÓN
CMG95 7,4
CMG96
CMG96 5,5 Fecha promedio de desove
CMG97 6,6
CMG98
CMG98 10,4 145 CMG99 8,8
140

D ía s d e s d e 1 °
CMG00
CMG00 13,4 135
CMG01 10,2
e n e ro
130
TEND. GENÉ
GENÉT 9,9 125 TEND. GENÉ
GENÉT 8,2
120
115
1992 1994 1996 1998 1993 1995 1997 1999
376 g / GENERACIÓN Año desove 281 g / GENERACIÓN

CLASE-AÑO PAR CLASE-AÑO IMPAR

5000

Peso Cosecha (gr)

5000,0
Peso Cosecha (gr)

4000
4000,0

3000,0 3000

2000,0 2000

1000,0 1000
0,0
CMG92 CMG94 CMG96 CMG98 CMG00 0
CMG93 CMG95 CMG97 CMG99 CMG01
Generación
Generación
Base Tendencia ambiental Tendencia genética
 Modelo
 =0,25nh Animal
0,5nh1(2X
b 2((iX – –X)+
Xi i –X) X)
 = Â
= =
0,5 h 2h(2X(X– – X) X)
 =
Yb=2(X
Xb1i ––+X)+b
Za-1) +3¼ Zhci 2–c +
X)e
i i
(n (X
 VACUNAS DE ADN
INMUNIZACIÓN GENÉTICA
ADN
(gen de antígeno en plásmido bacterial)

Expresión in situ de antígenos en células y tejidos

Producción de anticuerpos específicos

Protección contra patógenos

 SALMONES TRANSGÉNICOS
Producidos por inserción de un constructo con
secuencias “todo pez” (all-fish)
5’ 3’

AFP Growth Hormone

Promotor de gen Antifreeze Gen hormona de crecimiento
Macrozoarces americanus Oncorhynchus tsawytscha

Concepto de:

“SUSTANCIALMENTE
QUIVALENTE”
R. NEIRA.
U. de Chile
a) Pares de truchas arcoiris transgénicas
(arriba) y no-transgénicas (abajo)
producidas de poblaciones naturales
(izquierda) y domesticadas (derecha)
criadas a 8 °C.
Los transgénicos en especies acuícolas son una
realidad concreta, alrededor de 25 casos
aparecen en un informe de FAO reciente

La mayoría de ellos involucran genes de

hormona de crecimiento (HC) y gen de una
proteína anticongelante (PAC) en carpas,
tilapias, salmones y truchas.
MODELO GENÉTICO PARA CARACTERES CUANTITATIVOS

• Muchos loci • Pequeño efecto aditivo • Efecto ambiental

(Genes no pueden ser estudiados individualmente )

GENES DE EFECTO MAYOR:

Drosophila Bobbed, Scute, Scabrous

Ratón Obese, Dwarf, High growth (hg)
Pollos Dwarf,
Cerdos Halothane sensitivity (porcine stress syn)
Bovinos Hypertrophy muscular (Double muscle)
Ovejas (Booroola, D´man) Prolificidad

Estos genes en general se encuentran en baja

frecuencia debido a efectos pleiotrópicos adversos
< viabilidad < fertilidad en homocigosis

QTL con efecto mayor --- sobre 3σ (mutación mendeliana clásica)

 Padre Hijo Madre

Locus 1

Tamaño
Locus 2

Locus 3

4-plex 150 familias

Discrimina
7-plex 500 familias

DNA ‘fingerprint’ entrega información de:

# origen familiar de los individuos
# parentesco de individuos con parejas potenciales
# variación genética de la población
Ashie Norris ‘00
 Marker-Assisted Selection (MAS)
Selección asistida por marcadores

1. Desarrollo de marcadores genéticos Macadores

QTL para resistencia

a enfermedades
2. Desarrollo de mapas genómicos

QTL para crecimiento

3. Mapeo de marcadores a QTLs
QTL para tolerancia a t°

4. Marker-Assisted Selection
(Selección asistida por marcadores)
 MAPAS GENÉTICOS

• Mapas basados en microsatélites que pueden ser utilizados en

análisis de QTL’s
Tilapias, Catfish, Truchas, Salmón Atlántico, Ostra japonesa,
Camarones

• QTL’s publicados en truchas:

• Fecha de desove
• Tasa de desarrollo juvenil
• Tolerancia al temperatura
• Resistencia a IPN virus
• Crecimiento (Tilapia)
LOCI MARCADORES
1. Altamente polimórficos, de manera que pares de individuos o
líneas acarreen alelos distintos
2. Abundantes, de manera que se cubra adecuadamente todo el
genoma
3. Neutros, tanto en relación al CC como a la adecuación
reproductiva
4. Codominante, de manera de poder identificar todos los genotipos
posibles
Grupos sanguíneos – isozimas (Poco abundantes y pocopolimórficos)

MARCADORES DE ADN:
• RFLP (Fragmentos de restricción polimórficos)
• VNTR (micro y minisatélites)
• SSR (single sequence repeats, (micro))
• RAPD (Randomly amplified polimorphysm DNA) (se usa una
secuencia arbitraria de 10 bp que flanquea una secuencia de tamaño
apropiado que se clona por PCR, el producto de PCR es dominante
(presente-ausente)
 MARCADORES MOLECULARES ASOCIADOS AL SEXO
EN SALMÓNIDOS
Iturra et al, (2001)

OmyP9 Trucha arcoiris

GH2-C Salmón coho

HHibridación in situ de OmyP9 HHibridación in situ de GH2-C

 Hibridación in situ de 5S DNAr.
Lam & Iturra, (2001)
MARCADOR 5S DNA RIBOSOMAL

Identificación del cromosoma Y en salmón coho

Lam e Iturra, (2001)

Y
AUTENTIFICACION DE ESPECIES EN PRODUCTOS ELABORADOS DE
SALMÓNIDOS

N. Vergara, C. Araneda, P. Iturra (2000)

Amplificación por PCR de los marcadores Omy624 y 0my368

s.SALAR
derivados de OmyP9.

624 pb

368 pb

AA B C D E F

A: OmyP624 Salmón del Atlántico - FILETE CONGELADO

B: OmyP624 Salmón del Atlántico - CONTROL
C: OmyP368 Salmón del Atlántico - FILETE CONGELADO
D: OmyP368 Salmón del Atlántico - CONTROL
E: OmyP624 Trucha Arcoiris - FILETE AHUMADO
F: OmyP624 Trucha Arcoiris - CONTROL
 IDENTIFICATION OF DNA POLYMORPHIC MARKERS ASSOCIATED TO
MUSCLE COLORATION IN COHO SALMON, Oncorhynchus kisutch.

Pooling of extreme individuals and searching for RAPD polymorphism

Selection of 16 Selection of 16
extreme individuals extreme individuals
BREDING VALUE

Low “Color” Pool “L” High “Color” Pool “H”

(6 individuals) (6 individuals)
UBC-200 UBC-198 UBC-197 UBC-196 UBC-194 UBC-193 UBC-188
L H L H L H L H L H L H L H 100

Araneda, Neira,
Iturra 2003
Amplification of UBC-206 primer between High and
Low individuals.

High

Low

Araneda, Neira, Iturra 2003

La industria de truchas y salmones a escala mundial se
desarrollará en un futuro próximo utilizando dietas con
una importante proporción de proteínas y aceites de
origen vegetal, disminuyendo así los costos de
alimentación y haciendo de la acuicultura una actividad
más sustentable, reduciendo impactos ambientales
negativos y provocando un gran impacto económico-
social.
La principal dificultad que se enfrenta este desafío es
pretender cambiar la dieta de especies carnívoras.
Planteamos que esto puede lograrse de al menos por
las siguientes vías:
 GENÉTICA
GENÉTICA
DE
DE
PECES FUENTES TRATAR
PECES TRATAR
PROTEICAS EFECTODE
DE
EFECTO
FAN
FAN
MANEJO DE GENÉTICA
MICROBIOTA GENÉTICA
DE
DE
PLANTAS
PLANTAS
FORMULACIÓN

1. Estudiando el potencial de distintas fuentes de proteínas

vegetales, determinando su valor biológico o nutricional y
evaluando el efecto de factores antinutricionales (FAN) que puedan
estar presentes en ellas.

2. Evaluando mezclas de fuentes vegetales (+ algas) que

agregadas a los ingredientes animales satisfagan los
requerimientos nutritivos de los peces, agregando los aminoácidos
individuales y otros elementos que queden en déficit (formulación).

3. Estudiando los tratamientos postcosecha de los distintos

ingredientes vegetales que supriman o disminuyan el efecto de los
FAN que puedan estar presentes.
 GENÉTICA
GENÉTICA
DE
DE
PECES FUENTES TRATAR
PECES TRATAR
PROTEICAS EFECTODE
DE
EFECTO
FAN
FAN
MANEJO DE GENÉTICA
MICROBIOTA GENÉTICA
DE
DE
PLANTAS
PLANTAS
FORMULACIÓN

4. Manejando la microbiota normal de los peces que permitan la

incorporación de enzimas que ayuden a un mejor aprovechamiento
de insumos vegetales

5. Mejorando genéticamente a las fuentes vegetales que las

aproximen mas a los requerimientos nutritivos de los peces
salmónidos (FONDEF que se presenta asociado)

6. Mejorando genéticamente a los peces, que los conviertan en

organismos más vegetarianos, que les permitan un mejor
aprovechamiento de fuentes proteicas y energéticas vegetales
(este proyecto).
 GENÉTICA
GENÉTICA
DE
DE
PECES FUENTES TRATAR
PECES TRATAR
PROTEICAS EFECTODE
DE
EFECTO
FAN
FAN
MANEJO DE GENÉTICA
MICROBIOTA GENÉTICA
DE
DE
PLANTAS
PLANTAS
FORMULACIÓN

ComitéCoordinador
Comité Coordinador
U.de
U. deChile
Chile––INIA
INIA--AquaChile
AquaChile

GenómicaNutricional
Genómica Nutricionalde
de Peces
Peces GenéticaMolecular-
Genética Molecular- Manejode
Manejo deMicrobiota
Microbiota Productores
Productores
Directordel
Director delProyecto
Proyecto Nutricionalde
Nutricional dePlantas
Plantas Directordel
Director delProyecto
Proyecto deSalmón
de Salmón
RobertoNeira
Roberto Neira Directordel
Director delProyecto
Proyecto HugoZunino
Hugo Zunino
HaroldoSalvo-G
Haroldo Salvo-G
UTILIZACIÓN DE LA GENÓMICA NUTRICIONAL PARA DETECTAR
GENES RELACIONADOS A ASIMILACIÓN Y UTILIZACIÓN DE
PROTEÍNAS Y ACEITES VEGETALES: HACIA LA OBTENCIÓN DE
PECES SALMÓNIDOS MAS VEGETARIANOS

OBJETIVOS GENERALES

Contribuir a la sustentabilidad de la acuicultura del salmón, al

disminuir su impacto ambiental y a asegurar su viabilidad futura
mediante el estudio y utilización de la variación genética presente
en los peces de cultivo, para obtener en ellos una mayor
eficiencia en la asimilación y utilización de proteínas y aceites
vegetales a través del mejoramiento genético asistido por
técnicas de genómica nutricional.
 OBJETIVOS ESPECIFICOS

1. Búsqueda y selección de genes asociados a la asimilación y utilización

de nutrientes de origen vegetal en salmones mediante microarray

2. Identificación de rutas metabólicas relacionadas con un mejor

aprovechamiento de dietas con elevada inclusión de vegetales

3. Estimación de parámetros genéticos cuantitativos para rasgos de

importancia económica de salmones bajo condiciones de alimentación
con niveles elevados de inclusión de vegetales

4. Desarrollo de un sistema para la inclusión de selección asistida por

genes (GAS) en programas de mejoramiento genético de salmones
destinados a la obtención de peces más vegetarianos

5. Desarrollo de nuevas dietas para salmones que permitan una elevada

inclusión de proteínas y aceites vegetales

6. Selección de cepas bacterianas para alimentos con alta inclusión de

proteínas y aceites vegetales
 GENÓMICA NUTRICIONAL
Proteinas y Proteinas y
aceites aceites
animales vegetales

Hibridación

ARN ARN

ADNc ADNc

Peces de Peces de
Selección asistida por genes
baja GAS
alta
eficiencia eficiencia
 APORTE DE LOS PROGRAMAS DE MEJORAMIENTO GENÉTICO
Y DE LA BIOTECNOLOGÍA

• Utilización integrada de los distintos métodos y tecnologías para

el mejoramiento genético darán los mejores resultados.
• Los esfuerzos de la biotecnología deben centrarse en aquéllos
aspectos que los métodos tradicionales no pueden resolver con
facilidad
MEJORA

-75 -50 -25 0

AÑOS
REPRODUCCIÓN Y GENÉTICA DE PECES