FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y ARQUITECTURA

ESCUELA ACADEMICA PROFESONAL DE INGENIERIA

AMBIENTAL

“PRODUCCION DE BIOCOMBUSTIBLES DE
MANERA INVITRO A PARTIR DE MICROALGAS
EN EL LABORATORIO GREENLAB LA CIUDAD
DE LIMA, 2018”

Plan de Tesis
Para optar El Título de Ingeniero ambiental

Presentado por: José Ramos Soto

LIMA-PERU
2018

1
 dedicatoria

Bueno dedico este trabajo a mis padres que me bridaron su apoyo incondicional a mis
amigos y compañeros que eh conocido a lo largo de los años que eh logrado cumplir
mi meta

2
 Agradecimientos

Bueno agradezco ante todo a mis padres por darme la fuerza y los ánimos
Para no rendirme y cumplir mis metas, a mis profesores por brindarme su ayuda en
todo momento y en especial a Dios por darme la perveransia y fortaleza en esta etapa
de mi vida universitaria

3
Abstrac

4
 Tabla de contenidos

- CAPÍTULO I
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1 Caracterización de la realidad problemática
1.2 Formulación del problema
1.2.1 Problema general
1.2.2 Problemas específicos
1.3 Objetivos
1.3.1 Objetivo general
1.3.2 Objetivos específicos
1.4 Justificación
1.5 Importancia
1.6 Limitaciones
- CAPÍTULO II
2. FUNDAMENTOS TEÓRICOS
2.1 Marco referencial
2.1.1 Antecedentes de la investigación
2.1.2 Referencias históricas
2.2 Marco legal
2.2.1 Ley
2.3 Marco conceptual
2.4 Marco teórico
2.4.1 Lixiviados
2.4.1.1 Origen de lixiviados
2.4.1.2 Producción de lixiviados
2.4.1.3 Composición de lixiviados
2.4.1.4 Factores que afectan a la composición del lixiviado
2.4.2 Tipos de tratamiento de contaminantes líquidos
2.4.3 Procesos de oxidación avanzada (POAs)
2.4.3.1 Fotocatálisis heterogénea
2.4.3.2 Principio de la catálisis heterogénea
2.4.4 Catalizadores
2.4.4.1 Tecnologías basadas en el uso de lámparas

5
 2.4.5 Parámetros que influyen en el proceso
- CAPÍTULO III
3. PLANTEAMIENTO METODOLÓGICO
3.1 Metodología
3.1.1 Método
3.1.1.1 Ubicación geográfica
3.1.1.2 Procedimiento para la toma de muestras
3.1.1.3 Preparación de compuestos del proceso foto
catalítico heterogéneo
3.1.2 Tipo de la investigación
3.1.3 Nivel de la investigación
3.2 Diseño de la investigación
3.3 Hipótesis de la investigación
3.3.1 Hipótesis general
3.3.2 Hipótesis específicas
3.4 Variables
3.4.1 Variable independiente
3.4.2 Variable dependiente
3.5 Cobertura del Estudio
3.5.1 Universo
3.5.2 Población
3.5.3 Muestra
3.5.4 Muestreo
3.6 Técnicas e instrumentos
3.6.1 Técnicas de la investigación
3.6.2 Instrumentos de la investigación
3.6.3 Fuentes
3.7 Procesamiento estadístico de la información
3.7.1 Estadísticos
3.7.2 Representación
3.7.3 Técnica de comprobación de la hipótesis

6
 - INTRODUCCION
Existen dos grandes problemas que enfrenta el mundo en el área
energética: la disminución de las reservas petroleras y la contaminación
causada por la quema de los combustibles fósiles.
Durante muchas décadas los combustibles fósiles han sido la principal
fuente energética y también el principal motor de la economía mundial, sin
embargo, no se han descubierto nuevos yacimientos petroleros de gran
importancia o impacto en la producción mundial.
Debido a esto esta situación demanda la necesidad del desarrollo de
tecnologías sustentables, renovables y que permitan cubrir la demanda
energética de las actividades antropogénicas Las energías renovables se
definen como formas de energía que tienen una fuente prácticamente
inagotable con respecto al tiempo de vida de un ser humano en el planeta,
y cuyo aprovechamiento es técnicamente viable. Dentro de estos tipos de
energía se encuentran: la solar, la eólica (viento), la hidráulica, la biomasa
(materia orgánica), la geotérmica (calor de las capas internas de la tierra) y
la energía oceánica, principalmente. La biomasa, es el término genérico
que se refiere al conjunto de la materia biológicamente renovable (árboles,
cultivos), de la que se puede obtener biocombustibles como el biodiesel,
obtenido de aceites de plantas o algas, y el bioetanol. Actualmente hay un
gran interés por la producción de grandes cantidades de este como
alternativa a los combustibles fósiles en todo el mundo. Una alternativa es
el uso de biocombustibles, definidos como combustibles líquidos o
gaseosos potencialmente renovables, que pueden utilizarse para la
generación de electricidad, calor y energéticos (Balat et al., 2007). Los
biocombustibles como: bioetanol, butanol, biodiesel, hidrógeno y metano,
son sintetizados a partir de fuentes biológica.

7
CAPÍTULO I
4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 Caracterización de la realidad problemática

Unos de los principales problemas que altera la calidad de vida de

las personas es la contaminación ambiental producida por el mismo
hombre.
El aumento del consumo de combustibles fósiles por la industria, la
concentración de la población en áreas urbanas, la continua y
acelerada deforestación de bosques y tierras y el advenimiento de
vehículos con motor de combustión han empeorado el problema
rápida y paulatinamente. Pero, sin lugar a dudas, el motor de
gasolina ha sido y es el principal agente contaminador.
Es por eso que se busca la sustitución de los combustibles fósiles
por biocombustibles (elaborados a partir de biomasa vegetal) puede
parecer un paso en la dirección correcta para evitar el agravamiento
del cambio climático. Sin embargo, los planes previstos para su
producción y uso no sólo no solucionan ese grave problema, sino
que agravan muchos otros.

Los biocombustibles que se plantea adoptar son el biodiesel

(obtenido de plantas oleaginosas) y el etanol (que se obtiene de la
fermentación de la celulosa contenida en los vegetales). Entre los
muchos cultivos posibles para ese fin, se destacan la soja, el maíz,
la colza, el maní, el girasol, la palma aceitera, la caña de azúcar, el
álamo, el eucalipto.

8
1.2 Formulación del problema

1.2.1 Problema general

¿Qué tan eficiente es la generación de biocombustibles
a partir de la biomasa algal de la cepa Chlorella vulgaris
En el laboratorio Greenlab en la ciudad de lima, 2017?

1.2.2 Problemas específicos

¿De qué manera los parámetros químicos de las
microalgas influyen en la producción de biocombustibles
En el laboratorio Greenlab en la ciudad de lima, 2017?
¿De qué manera los parámetros biológicos influyen en la
producción de microalgas En el laboratorio Greenlab en
la ciudad de lima, 2017?
¿De qué manera los parámetros físicos influyen en la
producción de microalgas En el laboratorio Greenlab en
la ciudad de lima, 2017?

1.3 Objetivos

1.3.1 Objetivo general

Evaluar la generación de biocombustible utilizando
biomasa algal por medio de su cultivo y cosecha En el
laboratorio Greenlab en la ciudad de lima, 2017

1.3.2 Objetivos específicos

-Medir el grado de influencia de los parámetros químicos
influyen en la calidad del biocombustible en el laboratorio
Greenlab en la ciudad de lima, 2017

9
 -Medir el grado de influencia de los parámetros
fisicoquímicos influyen en la producción del
biocombustible en el laboratorio Greenlab en la ciudad
de lima, 2017
-Medir el grado de influencia de los parámetros físicos
influyen en la producción de biocombustibles en el
laboratorio Greenlab en la ciudad de lima, 2017

1.4 Justificación
Los biocombustibles son una alternativa de solución para la
contaminación producida por la quema de combustibles fósiles ya
que genera contaminación al ambiente y a las personas causan
diversas enfermedades. Este trabajo se basa en la obtención de las
micro algas desde la etapa de cultivo, producción, análisis. Este
análisis de micro algas determerminara el nivel de calidad del
biocombustible

1.5 Importancia
La creciente demanda energética mundial, el agotamiento y elevado
costo de los combustibles fósiles y el cambio climático son
problemas que deben ser solucionados con urgencia. Para mitigar
estos problemas, nuestro país cuenta con propuestas de política de
estado para ampliar la matriz energética utilizando fuentes
renovables. Estas medidas legales han incrementado la importación
de biodiesel por la insignificante producción nacional. El Biodiesel
es un biocombustible que está constituido por ésteres de metilo de
ácidos grasos de cadena larga derivado de diversos tipos de aceite
de origen animal, vegetal e incluso de microalgas, que debe cumplir
con ciertas especificaciones técnicas

1.6 Limitaciones

10
 Las limitaciones están dadas a nivel de disponibilidad de recursos
financieros, colaboración personal, fuentes de información a nivel
nacional

CAPÍTULO II
5. FUNDAMENTOS TEÓRICOS
2.5 Marco referencial
2.1.3 Antecedentes de la investigación

Córdoba, (2010), POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO

PARA LA PRODUCCIÓN SUSTENTABLE DE
BIODIESEL DE MICROALGAS OLEAGINOSAS
AISLADAS DEL RÍO ITAYA, LORETO, PERÚ
1. Resumen
Las micro algas son una buena alternativa para producir
biodiesel, pero la falta de cepas ideales ha impedido la
viabilidad económica de estos sistemas de producción. El
objetivo fue aislar e identificar microalgas oleaginosas con
potencial aplicación para la producción sustentable de
biodiesel. Las muestras fueron colectadas del río Itaya y
enriquecidas con medio CHU. Las microalgas oleaginosas se
identificaron y aislaron con técnicas estándares. Los lípidos
totales se extrajeron con solventes orgánicos y analizaron
mediante HPLC-DAD. Se han identificado 24 especies
microalgales, de las cuales el 50% fueron oleaginosas. De
éstas, se aislaron Ankystrodesmus sp., Chlorella sp.y
Scenedesmus sp., sobresaliendo Ankystrodesmus sp., por

11
presentar 43.6% de lípidos totales con predominancia de
triglicéridos. En conclusión, varias de las especies
microalgales del río Itaya son oleaginosas que deben ser
evaluadas para determinar si son promisorias para la
producción de biodiesel. Asimismo, las tres especies de
microalgas oleaginosas aisladas muestran diferencias en sus
perfiles de crecimiento, en la cantidad de biomasa y en la
cantidad y tipos de lípidos totales. Ankystrodesmus sp. es la
especie más interesante por tener un alto contenido de lípidos
totales (>40%) con predominancia de triglicéridos, por tanto es
una micro alga oleaginosa promisoria para la producción
sustentable de biodiesel
 Conclusiones:
Varias de las especies microalgales del río Itaya son
potencialmente buenas productoras de aceites y por lo tanto
promisorias para la producción de biodiesel. Asimismo, las tres
especies de microalgas oleaginosas aisladas muestran
diferencias en sus perfiles de crecimiento, en la cantidad de
biomasa y en la cantidad y tipos de lípidos totales. Siendo
Ankystrodesmus sp., la especie más interesante por tener un
alto contenido de lípidos totales (>40%) con predominancia de
triglicéridos. Por tanto, es una micro alga oleaginosa
promisoria para la producción sustentable de biodiesel

Savedra, et al. (2011), Biodiesel a Partir de

Microalgas,Loreto
2. Resumen
La situación actual debida al agotamiento de los combustibles
fósiles, incremento del precio del petróleo y dificultades
ambientales, demanda urgentemente fuentes alternas de
energía siendo una opción promisoria el biodiesel;
biocombustible producido primordialmente a partir de aceites
provenientes de plantas oleaginosas, cuya disponibilidad
desafortunadamente, es incapaz de sustituir el mercado de

12
petrodiesel en México y el mundo. El uso de microalgas para
la producción de biodiesel es una alternativa ventajosa debido
al elevado contenido de lípidos y perfil idóneo para la
obtención del biocombustible que éstas ofrecen. Aunado a lo
anterior, otros atributos de las microalgas son su elevada
eficiencia fotosintética, su capacidad de crecer tanto en aguas
marinas, dulces, residuales y salobres, así como su velocidad
de crecimiento relativamente alta. No obstante, los sistemas de
cultivo de microalgas actualmente presentan ciertas limitantes
tales como la escasez de información para su escalamiento, la
dificultad para el mantenimiento de monocultivos, los elevados
costos de operación para la producción y recolección de la
biomasa de microalgas, entre otros. Ante estos inconvenientes,
la optimización de los sistemas de cultivo de microalgas es
imprescindible. El propósito de esta revisión es el de
proporcionar un panorama general y crítico de esta alternativa
bioenergética, mediante el análisis de los fundamentos de la
misma.
 Conclusiones

La tecnología microalgas presenta limitaciones diversas,

siendo las más destacadas la dificultad para mantener
monocultivos con altos rendimientos de biomasa, la selección
de cepas de microalgas oleaginosas, la escasez de información
relativa al escalamiento de sistemas de producción y el
consumo elevado de energía por procesos de bombeo,
transferencia de gases, mezclado, recolección y deshidratación
de la biomasa. No obstante, los costos de producción de
biodiesel microalgal pueden ser aminorados a través de
distintas estrategias. Avances en la ingeniería de
fotobioreactores, además del desarrollo de procesos
económicos para la recolección de biomasa y su posterior
transesterificación sin el requerimiento previo de

13
procedimientos de deshidratación, son aspectos trascendentales
para la reducción de costos.

PRODUCCIÓN DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE

MICROALGAS
Resumen
Se hace una revisión de la situación de los biocombustibles en
el mundo, principalmente del biodiesel. Se comparan las
diferentes materias primas para la síntesis de biodiesel y se
enfatiza en la producción de éste a partir de microalgas. Se
comparan las diferentes microalgas de agua dulce y salada en
cuanto a su contenido lipídico y productividad. Se revisa el
proceso de biosíntesis de los lípidos y como se puede mejorar
su producción de lípidos en estas. Se discute la
importancia de manipular genéticamente a Botryrococuus
braunni, Nannochloropsis sp, Noechlorisoleobundans y
Nitschia sp. También se hace un estudio de las ventajas y
desventajas de los diferentes sistemas de cultivo de microalgas.
Finalmente se presenta una perspectiva de los biocombustibles
a partir de las microalgas. Entre los principales retos a
vencer para producir biodiesel están: El costo de producción de
biomasa, que involucra la optimización de medios,
selección y manipulación de cepas y el diseño de
fotobioreactores. También se debe considerar el proceso de
separación
de biomasa, la extracción de aceites y subproductos, la
optimización del proceso de transesterificación, purificación y
uso de subproductos.
Conclusión:
Las algas como materia prima para la producción de
biocombustibles, se perfilan como la fuente
más adecuada debido a su rápido crecimiento, alto contenido
de aceite o alta productividad (mayor que las plantas), una
importante reducción de emisiones reguladas como TPH, CO,

14
 NOx y material particulado, capacidad de fijar CO2, menores
requerimientos de condiciones de cultivo y nutrientes, no
compite por suelos ni con alimentos. Así mismo, los análisis de
ciclo de vida previos desarrollados en algas indican una
obtención mayor de energía con unos requerimientos
materiales menores y por tanto unos impactos ambientales muy
por debajo de las otras materias primas.

2.1.4 Referencias históricas

2.6 Marco legal
2.2.2 Ley
- LEY Nº 28054 “Ley de promoción del mercado de biocombustibles”
- DECRETO SUPREMO Nº 013-2005-EM “Aprueban Reglamento de
la Ley de Promoción del Mercado de Biocombustibles”
- DECRETO SUPREMO Nº 021-2007-EM “Reglamento para la
Comercialización de Biocombustibles”
- DECRETO SUPREMO Nº 091-2009-EM “Modifican el Reglamento
para la Comercialización de Biocombustibles”
- DECRETO SUPREMO Nº 061-2010-EM “Modifican el Reglamento
para la Comercialización de Biocombustibles”
- DECRETO SUPREMO 071-2006-RE Ratifican Acuerdo
Complementario al Acuerdo Básico de Cooperación Científica y
Técnica suscrito con Brasil para la Implementación del Proyecto
“Desarrollo de Cultivos Alternativos para la Producción de
Biocombustible”

15
 - RESOLUCIÓN DEL DIRECTOR EJECUTIVO N° 014-2007
Aprueban Directivas "Lineamientos del Programa de Promoción del
Uso Biocombustibles -PROBIOCOM"
- RESOLUCIÓN MINISTERIAL Nº 515-2009-MEM-DM “Mediante
el cual se establecen las especificaciones de calidad para el Gasohol”
- DECRETO SUPREMO Nº 019-2012-AG “Aprueban Reglamento de
Gestión Ambiental del Sector Agrario Biocombustible”

2.7 Marco conceptual

 Ph
Es uno de los parámetros físicos de las microalgas y se enfoca en
regular el crecimiento de la microalga y a su ves de su velocidad de
reproducción
 Nutrientes
Es uno de los factores cruciales ya que dependiendo del tipo de
nutriente a usar , se verá el grado de reproducción de la cepa y su
tiempo el nutriente mas usado en el cultivo de microlgas es el CO2
 Luz
Promueve el aumento de unidades fotosintéticas y por lo tanto el
aumento de los pigmentos. Una alta iluminación, los pigmentos
disminuyen y bajo se produce gran cantidad de O2 debido a la
fotosíntesis puede producir un daño fotooxidativo en las células de
las microalgas.
 Temperatura
Factor importante que afecta el crecimiento y desarrollo de los
16
 cultivos ya que disocian las moléculas de carbono haciéndola
disponible para la fotosíntesis.
 Sistemas de producción de microalgas
Las microalgas se pueden cultivar de manera fotoautótrofa, foto
heterótrofa, heterótrofa o en condiciones mixotróficas. La
producción fotoautótrofa es el único método que resulta técnica y
económicamente viable para la producción de microalgas a gran
escala sin la producción de energía de por medio.
 Sistemas abiertos
Los sistemas empleados con mayor frecuencia en la producción
comercial de biomasa microalgal son los de tipo abierto, que a pesar
de sus formas y tamaños diversos, asemejan el entorno natural de las
microalgas. Se pueden clasificar en aguas superficiales naturales
(estanques, lagunas y lagos).
 Sistemas cerrados (Fotobiorreactores)
La producción de microalgas mediante fotobiorreactores, son
sistemas donde se busca solucionar los problemas asociados a los
sistemas abiertos para la obtención del mayor crecimiento microalgal
ya que reducen los riesgos de contaminación por otros
microorganismos, aumentan la eficiencia en la utilización de luz,
permiten controlar las condiciones del cultivo, con una mayor
productividad de biomasa
 Chlorella vulgaris
La chlorella, alga verde unicelular de agua dulce, es un de las algas
más investigadas en el mundo. A menudo se refieren a ella como el
alimento casi perfecto, ya que investigaciones que se han hecho a
través de los años han identificado que tiene un gran número de
asombrosos beneficios para la salud.
 Cosecha de la biomasa
La medición de cosecha es una medición de biomasa, entendiéndose
por biomasa el peso seco de sustancias vivientes en un momento
determinado en este caso de la biomasa obtenida se comenzará a
obtener el biocombustible.
2.8 Marco teórico

17
2.4.6 Cultivo de microalga
Es importante conocer las condiciones óptimas y los límites de
tolerancia de una microalga para todos o el mayor número de
parámetros, tanto individualmente como para el conjunto de
todos ellos. En el cultivo masivo de microalgas el rendimiento
alcanzado depende tanto de la concentración de células en el
cultivo como del grado en que las células pueden desarrollar su
potencial de crecimiento. Por tanto, para conseguir un cultivo
de microalgas en crecimiento activo es necesario un inóculo
viable

2.4.1.5 Cultivo de microalgas en un ambiente controlado

Esta técnica será aplicada en cultivos de
microalgas mantenidos en laboratorio, sometidos a
condiciones controladas de luz, temperatura,
nutrientes y CO2.
2.4.1.6 Técnica de cultivo
La técnica consiste en aumentar el cultivo de
microalgas utilizando recipientes de diferentes
volúmenes. Ésta se basa en trasvasar de un matraz
de menor capacidad a otro de mayor capacidad,
una determinada cantidad de cultivo celular, de
manera tal, que el número de células por mililitros
(capacidad de carga) aumente en un determinado
periodo de tiempo. En este nivel se usan nutrientes
químicamente puros (de 0,5 a 1,0 L) e industriales
(a partir de 7 L), los cultivos tiene que ser
altamente puros y axónicos.

2.4.1.7 Materiales, Insumos y Equipos

- Microscopio binocular de campo claro,
campo oscuro y contraste de fase
- Filtro tipo cuno de fibra de vidrio, de 1
micra para el sistema de aireación.

18
 - Campana de flujo laminar.
- Estufa.
- Matraces de 0,5 y 1,0 L.

- Botellas de plástico de 7 y 20 L.
- Tanques de 250 L.

- Mangueras siliconadas de 3/16 pulgadas de

diámetro.
- Llaves de conexión y salida de aireación.
2.4.1.8 Desarrollo del Proceso
Se preparó una cepa de Chlorella vulgaris a partir
de un cultivo sólido en cuña de agar y se desarrolló
un subcultivo matriz asincrónico (discontinuo) de
una sola microalga en Erlenmeyers de 100 mL, que
transcurridos 5 días se trasvasaron a Erlenmeyers
de 500 mL y posteriormente a frascos de vidrio de
2 L durante el mismo período de tiempo. En esta
fase el cultivo se encontraba en condiciones de
fotoautótrofa con aireación, sin suministro extra de
CO2, con un régimen de luz continua a una
densidad de flujo fotónico (DFF) de 3 000 lux
(58,59 µE m-2s-1) utilizando lámparas
fluorescentes Day light 40W.
Se inoculó el 10% del volumen efectivo del
fotobiorreactor, se añadieron 2 L del medio de
cultivo y 5,2 L de agua destilada necesarios para
completar 8 L y se ajustaron las variables pH y
concentración de nitrógeno del medio se-gún el
diseño experimental. El cultivo se aireó
2.4.7 Separación de microalgas del medio acuoso

Al pasar el período de cultivo, 150 horas, se detuvo el

compresor y se cerraron las entradas de aire a los foto-
biorreactores, quedando la biomasa dispersa en todo el

19
 volumen. Se realizó la separación por sedimentación
floculación, añadiendo una solución de sulfato de aluminio
(Al2SO4)3 con una concentración de 0,1 g/L en proporción de
1 mL de solución por cada 500 mL de cultivo. Se agitó y se
dejó en reposo por 24 horas. Posteriormente, se eliminó el agua
remanente, succionándola con una manguera por el tope,
dejando en el fondo las microalgas en medio acuoso
2.4.8 Secado y obtención de biomasa
Se secaron las microalgas utilizando bandejas de 30 cm x 40
cm x 4 cm expuestas al sol de 8 am a 11:30 am; se colocaron
en pequeñas casas de cultivo tapado hasta las 4 pm. Después se
guardaron en un lugar seco hasta el otro día. La biomasa seca
se retiró de las bandejas y se almacenó en pequeños frascos
para su posterior pesaje

2.4.9 Obtención de lípidos y preparación del biocombustible

El método consiste en la extracción de lípidos a partir de
biomasa microalgal, mediante una mezcla de solventes y el
posterior aislamiento de la fase orgánica a través de
evaporación de ellos y concentración del extracto. El método
ha sido adaptado para extraer lípidos totales en cualquier
organismo microalgal previamente secado.

2.4.4.2 Materiales
- Balanza analítica de precisión, Capacidad: 100
microgramos.
- Micropipeta de 10 µL-100 µL.
- Micropipeta de 0,5 mL-5mL.

20
 - Tubos de vidrio de 15 mL con tapa.

- Tubos de vidrio de 10 mL con tapa

- Campana extractora de gases
Reactivos
 Cloroformo p.a.
 Metanol p.a
2.4.4.3 Desarrollo del proceso
- Pese 50 mg. de microalga liofilizada en un
tubo de vidrio de 15 mL Adicione 3 mL de
una mezcla de solventes cloroformo:
metanol
- El tubo con muestra se coloca en un baño
de agua con hielo, el cual es sometido a
ultrasonido durante 15 min. (3 ciclos).
- .Incube el tubo por 24 h en refrigeración (4
ºC) y protegido de la luz, de esa manera se
favorece la extracción completa de los
lípidos.
- .El tubo con muestra en frío, se vuelve a
someter a ultrasonido por 15 min (3 ciclos)
más.
- .Centrifugue el tubo con muestra en frío a
5000 rpm por 20 min. Extraiga la fase
líquida con una pipeta Pasteur y transfiéralo
a un tubo de vidrio de 15 mL
- Agregue 2 mL de agua destilada al Tubo 2,
que contiene el extracto y agite con vortex.
Elimine el exceso de agua de la capa
superior y centrifugue a 5000 rpm por 10
min a 5 ºC y separe la fase inferior formada
de cloroformo y lípidos.
- .Agregue 1 mL de cloroformo y separe la
fase inferior (cloroformo: lípido),

21
 introduciendo con cuidado una pipeta
Pasteur y burbujeando aire hasta el fondo
del tubo. Coloque fase orgánica lipídica en
un tubo seco de 10 mL (Tubo 3),
previamente pesado y guardado en
desecador.
- Lave la fase acuosa del Tubo 2 con 1 mL de
cloroformo, mezcle con vortex y
centrifugue nuevamente a 5000 rpm
durante 10 min. recupere la fase inferior
lipídica y transfiera a Tubo 3
- Seque la fase lipídica (Tubo 3) con
nitrógeno gaseoso dentro de una campana
de extracción.
- Coloque Tubo 3 en desecador y péselo
hasta peso constante; registre peso.
2.4.4.4 Transesterificación
Las viscosidades de aceites vegetales y aceites de
microalgas, son bastantes altas, lo que impide que
estos puedan ser usados directamente en motores.
El objetivo de la transesterificación es justamente
ese, reducir esta viscosidad, incrementando la
fluidez. Para este proceso los compuestos
principales son los alcoholes, como: metanol,
etanol, propanol, butanol, etc, el mas usado es el
metanol, debido a su bajo costo y propiedades
físicas. La utilización de estos alcoholes, permite la
conversión de largas cadenas de ácidos grasos a
ésteres, pero la reacción de triglicéridos a metil –
éster es muy lenta, por lo que se hace necesaria la
utilización de un catalizador

22
- CAPÍTULO III
6. PLANTEAMIENTO METODOLÓGICO
3.8 Metodología
3.1.4 Método
3.1.1.4 Ubicación geográfica
Este trabajo se ubicara en el laboratorio de análisis
ambiental GREENLAB PERU

23
 3.1.5 Tipo de la investigación
La investigación realizada es de tipo aplicada ya que se aplica
conocimientos y teorías realizadas
3.1.6 Nivel de la investigación
El nivel de investigación es experimental ya que se puede
manejar una o más variables
3.9 Diseño de la investigación
El diseño que utilizaré en mi investigación será por objetivos, conforme
al esquema siguiente:
PG = Problema General.
PE = Problema Específico.
OG = Objetivo General.
OE = Objetivo Específico.
CP = Conclusión Parcial.
HP = Hipótesis General.
CF = Conclusión Final
3.10 Hipótesis de la investigación
3.3.3 Hipótesis general
Influirán de manera significativa la biomasa de las microalgas
en la obtención del biocombustible en el laboratorio Greenlab
en la ciudad de lima, 2017
3.3.4 Hipótesis específicas
24
 Influirán de manera significativa los parámetros físicos en la
producción de biocombustible en el laboratorio Greenlab en la
ciudad de lima, 2017
Influirán de manera significativa los parámetros fisicoquímicos
en la producción de biocombustible en el laboratorio Greenlab
en la ciudad de lima, 2017
Influirán de manera significativa los parámetros químicos en la
producción de biocombustible en el laboratorio Greenlab en la
ciudad de lima, 2017
3.11 Variables
3.4.3 Variable independiente
Biomasa de microalgas
3.4.4 Variable dependiente
Producción de biocombustibles

3.12 Cobertura del Estudio

3.5.5 Universo
El laboratorio GREENLAB en el cual desarrollare mi proyecto
de investigación
3.5.6 Población
Son los analistas los cuales me ayudaran a realizar la primera
fase del proyecto el cual consiste en el cultivo de las
microlagas
3.5.7 Muestra
Las microalgas en la cual se basa mi objeto de estudio para la
obtención de biocombustible
3.5.8 Muestreo
Chlorella vulgaris es una especie de microalga la cual tiene un
alto contenido de lípido y asu ves una alta tasa de reproducción
la cual la hace factible para el proyecto de investigación
3.13 Técnicas e instrumentos
3.6.4 Técnicas de la investigación

25
 La técnica a emplearse en este trabajo de investigación se
basará en un análisis documental y a su vez por medio de la
observación y control del medio o área de estudio
3.6.5 Instrumentos de la investigación
Los instrumentos de investigación en la cual se basará este
trabajo es la guía de análisis documental
3.6.6 Fuentes
3.14 Procesamiento estadístico de la información
3.7.4 Estadísticos
3.7.5 Representación
3.7.6 Técnica de comprobación de la hipótesis

26
 MATRIZ DE OPERACIONALISACION DE VARIABLES
VARIABLES DEFINICION CONCEPTUAL DIMENSIONES DEFINICION CONCEPTUAL INDICADORES
Estos parametros establecenla velocidad y la cantidad luz
Parametros Fisicos de reporsuccion del cultivo de la cepa dependiendo nutrientes
del metodo de cultivo a usar temperatura
Las microalgas y las cianobaterias son tiosulfato
estos parametros se ven en la etapa de obtencion del agua desionizada
microorganismos uniceluláres que tienen Parametros
lipido de la biomasa el cual reaccionara por medio de Cloroformo
la capacidad de realizar la fotosíntesis. quimicos
BIOMASA las trasnterificacion y se convertira en bidisel
Esto es, son capaces de generar biomasa Etanol de 96
MICROALGAL
orgánica a partir de CO2 y luz, usando al Nitrato Amoniacal
agua como dador de electrones, Estos patrones establecieron diversos radios de
fosoforo
oxidandola a O2 nutrientes, situación que influyó en el crecimiento
Parametros
rendimientos de biomasa y aceites, como se verá más ph
fiscoquimicos
adelante.

DBO y DQO
los biocombustibles contienen Viscosidad
componentes derivados a partir de parametros fisicos se encarga de determinar las caracteristicas del Punto de fluidez
biomasa, es decir, organismos biocombustuble obtenido mediante analisis Punto de chispa
recientemente vivos o sus desechos mide la calidad de combustion del biodisel ante Estabilidad térmica
metabólicos. Los biocomponentes parametros de
diferentes cantidades de calor por medio de pruebas Estabilidad a la oxidación
actuales proceden habitualmente del combustion
de combustion Glicerina libre y Total
azúcar, trigo, maíz o semillas oleaginosas.
BIOCOMBUSTIBLES Contenido de
Todos ellos reducen el volumen total de monoglicéridos,
CO2 que se emite en la atmósfera, ya que parametros de nos brinda el nivel de calidad del biocombustible en diglicéridos y triglicéridos
lo absorben a medida que crecen y emiten calidad compararcion con los combustibles fosiles
Residuo Carbón
prácticamente la misma cantidad que los Conradson
combustibles convencionales cuando se
queman Número ácido

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 MATRIZ DE CONSISTENCIA
DISEÑO DE
PROBLEMA OBJETIVO HIPOTESIS VARIABLES POBLACION
INVESTIGACION
PROB. GENERAL OBJ. GENERAL HIPOT. GENERAL VAR. INDEPENDIENTE La investigación MUESTRA
realizada es de tipo
aplicada ya que se
aplica conocimientos
¿Qué tan eficiente es la generación de Evaluar la generación de Influirán de manera significativa BIOMASA MICROALGAL Las microalgas en la
y teorías realizadas ,y
biocombustibles a partir de las biomasa algal biocombustible utilizando biomasa la biomasa de las microalgas en Parametros Fisicos cual se basa mi
de nivel de
de la cepa Chlorella vulgaris En el algal por medio de su cultivo y la obtención del biocombustible Parametros objeto de estudio
investigación es
laboratorio Greenlab en la ciudad de lima , cosecha En el laboratorio Greenlab en el laboratorio Greenlab en la Fisicoquimicos para la obtención
experimental ya que
2017 ? en la ciudad de lima, 2017 ciudad de lima, 2017 Parametros Quimicos de biocombustible
se puede manejar una
o más variables

PROB. ESPECIFICO OBJ. ESPECIFICO HIPOT- ESPECIFICA VAR. DEPENDIENTE MUESTREO

Medir el grado de influencia de los Influirán de manera significativa
¿De qué manera los parámetros químicos de
parámetros químicos influyen en la los parámetros físicos en la
las microalgas influyen en la producción de
calidad del biocombustible en el producción de biocombustible
biocombustibles En el laboratorio Greenlab
laboratorio Greenlab en la ciudad de en el laboratorio Greenlab en la Chlorella vulgaris
en la ciudad de lima, 2017?
lima, 2017 ciudad de lima, 2017 es una especie de
Medir el grado de influencia de los Influirán de manera significativa microalga la cual
¿De qué manera los parámetros biológicos BIOCOMBUSTIBLES
parámetros fisicoquímicos influyen los parámetros fisicoquímicos en tiene un alto
influyen en la producción de microalgas En parametros fisicos
en la producción del biocombustible la producción de biocombustible contenido de lípido
el laboratorio Greenlab en la ciudad de lima, parametros de
en el laboratorio Greenlab en la en el laboratorio Greenlab en la y asu ves una alta
2017? combustion
ciudad de lima, 2017 ciudad de lima, 2017 tasa de
parametros de calidad
reproducción la
Medir el grado de influencia de los Influirán de manera significativa
¿De qué manera los parámetros físicos cual la hace factible
parámetros físicos influyen en la los parámetros químicos en la
influyen en la producción de microalgas En para el proyecto de
producción de biocombustibles en el producción de biocombustible
el laboratorio Greenlab en la ciudad de lima,
laboratorio Greenlab en la ciudad de en el laboratorio Greenlab en la
2017?
lima, 2017 ciudad de lima, 2017

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