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LDH-L

C Para la determinación de lactato deshidrogenasa en
suero, plasma y líquido cefalorraquídeo

SIGNIFICACION CLINICA INSTRUCCIONES PARA SU USO
La determinación de la actividad lactato deshidrogenasa Reactivos Provistos: listos para usar.
(LDH) tiene una gran variedad de aplicaciones clínicas. Por
ser una enzima intracelular, su elevación es índice de daño PRECAUCIONES
tisular con la consecuente liberación de ésta a la circula- Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
ción. El daño puede variar desde una simple anoxia con Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
ligero daño celular y pérdida de citoplasma hasta necrosis de trabajo en el laboratorio de química clínica.
celular severa generando diversos grados de elevación de Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
la actividad enzimática. acuerdo a la normativa local vigente.
En el infarto agudo de miocardio, la actividad de LDH total
(junto con las CK y AST), constituye un elemento importante ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
de diagnóstico. La misma comienza a elevarse 12-24 horas ALMACENAMIENTO
después de producido el infarto; alcanza un pico entre las 48- Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC)
72 horas y permanece elevada hasta el séptimo o décimo día. hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Una vez
También se registra un aumento de actividad de LDH total abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera del refri-
en pacientes con necrosis hepática (producida por agentes gerador por períodos prolongados. Evitar contaminaciones.
tóxicos o por infección aguda como la hepatitis viral) e incluso Proteger de la luz directa.
acompañando a necrosis tubular renal, pielonefritis, etc. En
los tumores sanguíneos como leucemias y linfomas también MUESTRA
se observan valores aumentados de la LDH. Suero, plasma o LCR
En el líquido cefalorraquídeo (LCR) el valor normal es de a) Recolección: obtener el suero de la manera habitual, libre
aproximadamente el 10% de su valor en suero, aumentando de hemólisis. También pueden usarse plasma o LCR. El plas-
marcadamente su valor en meningitis bacterianas. En las ma debe estar libre de hemólisis y de células ya que las pla-
meningitis virales la LDH aumenta su valor solo en el 10% quetas poseen elevadas concentraciones de LDH. El plasma
de los casos. recogido en tubos primarios de acuerdo a las instrucciones del
fabricante puede contener células en suspensión, generando
FUNDAMENTOS DEL METODO resultados falsamente aumentados. Se recomienda transferir
El método se basa en el siguiente esquema de reac- el plasma a un tubo secundario y centrifugar.
b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
ción:
ma, se recomienda el uso de heparina como anticoagulante.
LDH
También puede utilizarse EDTA o citrato. En caso de utilizar
L-lactato + NAD+ piruvato + NADH + H+
EDTA, se ha demostrado que puede disminuir la actividad
La velocidad de formación de NADH es directamente pro- de la LDH hasta un 10%.
porcional a la actividad catalítica de la LDH y se determina c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
midiendo el aumento de la absorbancia a 340 nm. interferencias por triglicéridos hasta 1400 mg/dl, bilirrubina
Las concentraciones del ensayo están optimizadas de hasta 30 mg/dl. La hemoglobina interfiere significativamente
acuerdo a los procedimientos de referencia para la me- en todo su rango de concentraciones por lo que se recomien-
dición de la actividad catalítica de las enzimas a 37oC da usar muestras libres de hemólisis.
descriptos por la Federación Internacional de Química Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
Clínica (IFCC) drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
REACTIVOS PROVISTOS separar el suero o el plasma del coágulo o de las células y
A. Reactivo A: solución de metilglucamina (MEG) 400 mM efectuar el test inmediatamente. En caso de no procesarse
y lactato 61 mM; pH 9,4 a 37oC. en el momento, puede conservarse 7 días a 20-25oC, 4 días
B. Reactivo B: solución conteniendo NAD 61 mM. a 2-10oC o 6 semanas a -20oC.

REACTIVOS NO PROVISTOS MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
- Calibrador A plus de Wiener lab. - Micropipetas para medir los volúmenes indicados
- Solución fisiológica (NaCl 9 g/l). - Analizador automático

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120 ml: . con cada determinación. PERFORMANCE PROCEDIMIENTO a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente repli- (Analizador automático) cados de una misma muestra. 2002. Approved Guideline. 2009.2 x 60 ml Reactivo A METODO DE CONTROL DE CALIDAD . o [LDH] = (∆A/min) x factor. 2002. Approved Guideline. 2/6 . D. CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI .1 x 100 ml Reactivo A El Calibrador A plus es procesado de la misma manera . CLSI EP6-A Vol. Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. CLSI Para preservar la integridad de los reactivos deben evitarse EP9-A2 Vol. 864107100 / 02 p. empleando para la medición . dado que los mismos dependen del método o sistema utilizado. ya que con controles . Samples. Clinical Chemistry 54/8:1349-1355. 1999726) pondiente. se obtienen los siguientes A continuación se detalla un procedimiento general para valores: LDH-L en un analizador automático. 1009625) Adultos 135 -240 U/l Niños (2 . (Cód. Limits of Quantitation. Para Muestra o Calibrador 4 ul valores superiores.IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement alimenticios. 4th ed. 40/6:643-648.Journal de otras marcas comerciales pueden obtenerse valores dife- of Emergency Medicine.. colocar: b) Linealidad: la reacción es lineal hasta 1000 U/l. Iserson . 23 Nº 16. siga 150 U/l ± 2. diluir la muestra 1+4 partes con solución Reactivo A 100 ul fisiológica (NaCl 9 g/l). lab. Chem. .S. mente la técnica en un analizador en particular. Approved Guideline . calculan automáticamente Para las instrucciones de programación consultar las adap- la actividad de LDH de cada muestra. D. taciones correspondientes a los analizadores de la línea Wiener lab para el método LDH-L. Med.Second Edition. C. repetir la determinación y multiplicar Incubación durante 300 segundos a 37oC el resultado por el factor de dilución.2 x 10 ml Reactivo B cambiar lote de reactivo y cuando el control de calidad lo (Cód.75 U/l 1.V."Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests". edad. 2003.S. Lab.0167 = LDH (ukat/l) AACC Press.Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Procedures: A Statistical Approach. Reactivo B 20 ul d) Límite de cuantificación: 20 U/l.600 U/l . Clin.1 x 20 ml Reactivo B que las muestras y a partir de él se calcula el factor corres. 1009364) (Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de lactato deshidrogenasa. hábitos . Cuando se imple- Nivel D. 2001. Vázquez. K. c) Límite de detección: 4 U/l.2 x 15 ml Reactivo B VALORES DE REFERENCIA (Cód.Protocols for Determination of Limits of Detection and únicamente micropipetas perfectamente limpias y secas. rentes al rango especificado.15 años) 120 -300 U/l BIBLIOGRAFIA Recién nacidos (4 a 20 días) 240 . 24 Nº 34. Las muestras de plasma deben ser centrifugadas previa- .2 x 60 ml Reactivo A . En una cubeta 250 U/l ± 3. 150 ml: . teniendo en cuenta sexo. 2004. valores de referencia.69 U/l 1. todo tipo de contaminaciones. 120 ml: . Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios 2008. Adducci. como material de control de calidad.J. M. CLSI EP17-A Se recomienda utilizar Standatrol S-E 2 niveles de Wiener Vol. CALIBRACION El método LDH-L fue estandarizado frente a la fórmula PRESENTACION original del IFCC usada como referencia.2 x 50 ml Reactivo A Se recomienda usar calibración a dos puntos después de . 22 Nº 19. εNAD/NADH = 6230 M-1 cm-1 PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS Los analizadores Wiener lab. Monzón. of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37oC. LDH (U/l) x 0.8 % las instrucciones de trabajo del mismo. 37/1:93-97. . medicación y otros factores de su población. Incubación durante 120 segundos a 37 C.2 x 15 ml Reactivo B Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Cód.Conmutable Calibrador with Value Assigned by the IFCC Reference Procedure. Para la calibración debe utilizarse Calibrador A plus de Wiener lab.5 % mantenida a la temperatura elegida.Method Comparison and Bias estimation Using Patient mente a realizar el ensayo.Young. 150 ml: . 1009213) requiera.

wiener-lab.M.Símbolos Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab. Téc.Rosario .ar Dir. 2000 .A.T. 3/6 UR130916 .com. Calibrador b Control F Riesgo biológico Volumen después de la reconstitución b Control Positivo Cont.Argentina http://www. Cétola Bioquímica Producto Autorizado A.C.Argentina 864107100 / 02 p. Riobamba 2944 Wiener lab.: Viviana E. C Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro" M Elaborado por: P Xn Representante autorizado en la Comunidad Europea Nocivo V Uso diagnóstico "in vitro" Corrosivo / Caústico X Contenido suficiente para <n> ensayos Xi Irritante H Fecha de caducidad i Consultar instrucciones de uso l Límite de temperatura (conservar a)  No congelar Calibr. PM-1102-70 2000 Rosario .A.I.N. Contenido c Control Negativo g Número de lote h Número de catálogo M Wiener Laboratorios S.