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Acta Chromatographica 20 (2008) 2, 239–246

DOI: 10.1556/ACrom.20.2008.2.8

Análisis de Aditivos Alimentarios por Capilaridad

electroforesis

HUITAOLIU1*, YINGYENDOWES1, FESPLUAN1,YYUANGRAMOOA2

1Departamento de Química Aplicada, Universidad de Yantai, Yantai 264005, PR China

2Facultad de Ingeniería Ambiental y de Materiales, Universidad de Yantai, Yantai 264005,
R. P. de China

Correo electrónico: liuht-ytu@163.com

Resumen.Se propone un método electroforético de zona capilar simple y rápido para el

análisis de antioxidantes y conservantes en alimentos. Se investigaron en detalle los factores
importantes que afectan la separación y la detección, por ejemplo, el pH y la concentración del
electrolito tampón y el modificador orgánico. Separación de cinco antioxidantes (galato de
propilo, éster isoamílico del ácido gálico, ácido gáliconorte-octil éster, ácido
nordihidroguaiarético y trihidroxibutirofenona) y un conservante (ácido benzoico) en un
capilar de sílice fundida de 50,5 cm (longitud efectiva) × 75 μm id, con 15 mmol L−1tampón de
borato, pH 9,18, que contiene 25% (v/v) acetonitrilo como tampón de separación. La detección
UV fue a 219 nm y el potencial aplicado fue de 25 kV. El análisis de regresión reveló relaciones
lineales entre el área del pico y la cantidad de cada aditivo de 10 a 1000 μg·mL−1
(R=0,9992–1,0000). La RSD del tiempo de retención y el área del pico fueron de 0,44 a 0,74 % y de
1,25 a 4,31 %, respectivamente. El método se utilizó con éxito para el análisis simultáneo de los seis
compuestos en los alimentos con recuperaciones del 89,3 al 115,8 %.

Introducción

Los antioxidantes y conservantes sintéticos se encuentran entre los aditivos alimentarios

más importantes. Los antioxidantes [1] se utilizan para prevenir el enranciamiento
oxidativo y los conservantes se utilizan para proteger los alimentos de la degradación
microbiana, lo que reduce la pérdida de calidad nutricional y aumenta la vida útil de una
amplia variedad de alimentos que contienen lípidos. Los antioxidantes actúan
interrumpiendo la reacción en cadena responsable de la producción de peróxidos: al
donar hidrógeno, inactivan los radicales libres, que se estabilizan por resonancia. Los
antioxidantes sintéticos, por ejemplo los compuestos polifenólicos, que son más o
menos liposolubles, y los conservantes, por ejemplo el ácido benzoico, no deben ser
tóxicos y no deben dar sabores extraños a los alimentos a los que se añaden [2].

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240 Huitao Liu et al.

Entre los antioxidantes sintéticos se encuentran los ésteres de ácido gálico (galato de propilo, octilo
e isoamilo), ácido nordihidroguaiarético y trihidroxibutirofenona. Las mezclas de estos actúan
sinérgicamente. Los conservantes normalmente utilizados en los alimentos son el ácido benzoico y el
ácido hexadienoico. Aunque tienen un poderoso efecto protector sobre la calidad del producto en la
distribución de alimentos, el exceso de antioxidantes y conservantes agregados a los alimentos
puede ser tóxico o mutagénico y, por lo tanto, ser peligroso para la salud. En la mayoría de los
países, las cantidades de antioxidantes fenólicos en los alimentos procesados están estrictamente
limitadas [3], por lo que el desarrollo de nuevas técnicas analíticas para el análisis rápido de
antioxidantes en los alimentos ha aumentado sustancialmente recientemente como resultado de
una mayor preocupación de los consumidores por la seguridad alimentaria [2, 4].

La cromatografía en capa fina (TLC) es el método utilizado convencionalmente

para el análisis de antioxidantes [5]; sin embargo, suele ser laborioso y requiere
mucho tiempo. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se ha utilizado
para el análisis de antioxidantes de calidad alimentaria [6], pero estos métodos
suelen ser costosos, ya que a menudo se requieren grandes cantidades de reactivos
orgánicos. La cromatografía de gases (GC), aunque es muy sensible y permite una
buena separación, no es adecuada para el análisis de sustancias térmicamente
inestables [7].
El desarrollo de la electroforesis capilar de alto rendimiento se ha revisado
muchas veces [8]; continúa siendo un área de investigación muy activa en la
ciencia de la separación porque, a menudo, su poder de resolución es mayor
que el de TLC y HPLC y su tiempo de análisis y costo operativo son menores. Yin
et al. utilizó electroforesis capilar junto con detección electroquímica (CE-EC)
para el análisis de antioxidantes, galato de propilo (PG) yTercio-
butilhidroquinona (TBHQ) en cosmética [9]. Boyce et al. desarrolló un método
electroforético capilar electrocinético micelar mixto para la separación de
nueve antioxidantes en aceite de sésamo y vino [10]. Ding et al. utilizaron
cromatografía electrocinética micelar de microchip con detección
amperométrica pulsada para el análisis de los antioxidantes PG, galato de octilo
(OG), galato de laurilo (LG) y ácido nordihidroguaiarético (NDGA) [11]. Sin
embargo, no se ha informado la determinación simultánea de los antioxidantes
PG, OG, NDGA, TBHQ, IAG y éster isoamílico del ácido gálico (IAG) y el
conservante ácido benzoico (BEN) en alimentos mediante electroforesis de zona
capilar simple (CZE) con detección UV. .
En el trabajo discutido en este documento, se desarrolló un método CZE simple
y rápido para la separación y el análisis de PG, IAG, OG, NDGA, THBP y BEN. La
separación se logró en 11 min. El método se utilizó para el análisis de estos aditivos
en la comida china con resultados satisfactorios. El método propuesto es muy
simple y puede ser adecuado para el control de calidad rutinario de los alimentos.

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Análisis de Aditivos Alimentarios por Electroforesis Capilar 241

Experimental

Muestras y reactivos

Se compraron papas fritas, arroz crujiente, ramitas de camarones, fideos

instantáneos y dos tipos de bebidas en un supermercado local. PG, IAG, OG,
NDGA y THBP se adquirieron de Aldrich y BEN de Sigma (St Louis, MO, EE. UU.).
En todo momento se utilizó agua ultrapura Milli-Q.
Se prepararon soluciones madre de PG, IAG, OG, NDGA, THBP y BEN en
metanol y se obtuvieron una serie de estándares de calibración por dilución
apropiada con metanol. Todos los productos químicos, por ejemplo, metanol,
borato, ácido clorhídrico, acetonitrilo e hidróxido de sodio eran de grado
reactivo analítico.

Tratamiento de muestras

Las muestras de alimentos (2 g) se molieron hasta obtener un polvo y se extrajeron con 5

ml de metanol en un baño ultrasónico durante 30 min. Después de la centrifugación, el
extracto se filtró a través de papel de filtro. El procedimiento de extracción se repitió dos
veces. La solución de extracto combinado se concentró casi hasta sequedad y se añadió
metanol para disolver el residuo en un volumen final de 1,0 ml. A continuación, esta
solución se filtró a través de un filtro de membrana de 0,45 μm.

electroforesis

La electroforesis capilar se realizó con un sistema Lumex (19 Moskovsky Pr, San
Petersburgo, 198005, Rusia) Capel 105 controlado por una computadora personal.
Las separaciones se realizaron en un capilar de sílice fundida de 60,0 cm (50,5 cm
hasta el detector) × 75 μm de diámetro interno (Fábrica de fibra fotoconductora
Yongnian, provincia de Hebei, China). Las muestras se introdujeron en el capilar
mediante inyección a presión a 30 mbar durante 5 s. La detección UV directa se
realizó a 219 nm. Todas las operaciones se realizaron a 25°C.
Los capilares nuevos se llenaron con 0,1 mol L−1NaOH y se dejó toda la noche. Cada día
antes del análisis, los capilares se activaron secuencialmente con agua durante 2 min, seguido
de 0,1 mol L−1NaOH durante 5 min, agua durante 5 min y solución amortiguadora durante 5
min. Para lograr una buena reproducibilidad, los capilares se purgaron entre corridas
mediante lavado durante 2 minutos con tampón de corrida. Todos los tampones y las
soluciones estándar y de muestra se filtraron a través de filtros de membrana de 0,45 μm
antes del análisis.

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242 Huitao Liu et al.

Resultados y discusión

Selección de la mejor longitud de onda para la detección

Para detectar los seis analitos simultáneamente con alta sensibilidad, se midieron los
espectros de absorción UV de los aditivos en el rango de longitud de onda de 200 a 400
nm. Los resultados se muestran enFigura 1. DeFigura 1Se seleccionó 219 nm como la
longitud de onda de detección UV.
1.4
NDGA
1.2 IAG
PG
1.0 ben
OG
0.8
THBP
A

0.6

0.4

0.2

0.0

200 250 300 350 400

λ/Nuevo Méjico

Figura 1. Espectros de absorción UV de las seis sustancias.

Optimización de las Condiciones de Separación

CZE fue seleccionado como un método simple. Las condiciones experimentales se

eligieron optimizando el pH del tampón y las concentraciones de modificador
orgánico y borato [12]. (Se usó un pH/Ion 510 Bench pH/Ion/mV Meter (Oakton
Instruments, Vernon Hills, IL 60061, EE. UU.) para las mediciones de pH). En CZE, la
condición con el mayor efecto en la resolución del analito es el tampón
pH. Es bien sabido que el pH afecta la carga de los analitos, por lo que su electricidad
la movilidad troforética varía con el pH del tampón. Para determinar el efecto de
tampón pH sobre el comportamiento de migración, los experimentos se realizaron
usando 10 mmol L−1borato de diferente pH (8.18, 8.68, 9.18, 9.68 y 10.18) como
electrolito de fondo. Los resultados mostraron que se logró una mala resolución
excepto a pH 8,68 y pH 9,18. Debido a que se logró una mejor separación de OG e
IAG a pH 9,18, se seleccionó este para trabajos posteriores.

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Análisis de Aditivos Alimentarios por Electroforesis Capilar 243

Se ha informado que la adición de modificadores orgánicos al tampón es una forma

eficaz de mejorar la selectividad, la eficiencia y la resolución de la separación [13]. En este
estudio se investigaron el metanol y el acetonitrilo como modificadores orgánicos. Sus
concentraciones variaron de 10 a 30% (v/v). Primero se estudió el efecto del metanol. La
presencia de metanol en el tampón de separación afectó fuertemente la separación,
pero debido a que no se logró la resolución requerida, se utilizó acetonitrilo. Los
resultados mostraron que la adición de acetonitrilo tuvo más efecto sobre la separación
que el metanol y los tiempos de retención fueron más cortos. La mejor separación con
una buena forma de pico y un tiempo de migración más corto se logró cuando el
contenido de acetonitrilo fue del 25 %.
Para optimizar el efecto de la concentración de tampón en el tiempo de migración y
la eficiencia de separación, 10, 15 y 20 mmol L−1Se usó borato a pH 9,18 que contenía
25% de acetonitrilo para separar los analitos. El tiempo de migración aumentó con el
aumento de la concentración de borato y la separación de línea de base se logró a
concentraciones de borato de 15 y 20 mmol L−1; 15 mmol L−1El borato fue elegido por un
tiempo de análisis más corto.
Sobre la base de los resultados descritos anteriormente, las condiciones óptimas de
separación utilizadas en este trabajo fueron 15 mmol L−1borato que contiene 25% de
acetonitrilo a pH 9,18. Un electroferograma típico obtenido de los seis compuestos se
muestra enFigura 2.

70 3 6

60 2
1 5
50

40 4
A/mAu

30

20

10

2 4 6 8 10 12 14

Figura 2. Electroferograma capilar obtenido a partir de una mezcla estándar. Picos: 1, OG;
2, IAG; 3, GP; 4, THBP; 5, AGND; 6, Ben

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244 Huitao Liu et al.

Calibración

Se construyeron parcelas de calibración en el rango de concentración de 10,0 a

1000,0 μg mL−1para OG, IAG, PG, THBP, NDGA y BEN. Las ecuaciones de regresión
lineal y los coeficientes de correlación obtenidos se enumeran enTabla I.

Tabla I. Ecuaciones de regresión y coeficientes de correlación

Compuesto Ecuación de regresión Coeficiente de correlación

OG y=1.8518X−24.452 0.9995

IAG y=2.1223X−9.9549 1.0000

PG y=2.8187X−23.264 0.9998

THBP y=1.5713X−9.539 0.9999

NDGA y=2.5888X+24.235 0.9992

ben y=2.4149X−13.33 0.9999

yes el área del pico (mAU·s) yXes la concentración de analito (μg mL−1)

Pruebas de idoneidad del sistema

El método fue validado para la reproducibilidad de los tiempos de migración y las áreas de los
picos de los analitos. Intradía (norte=6) y entre días (norte=6) las desviaciones estándar
relativas (RSD) de los tiempos de migración y las áreas máximas se enumeran en Tabla II.

Tabla II. Reproducibilidad del tiempo de migración y el área del pico de los analitos (norte=6)

RSD intradía (%) RSD interdiario (%)

analito
Tiempo de migración área de pico Tiempo de migración área de pico

OG 0.44 4.05 1.23 6.64

IAG 0.49 1.87 1.36 3.66
PG 0.54 2.35 1.49 5.47
THBP 0.57 4.31 1.34 7.23
NDGA 0.74 2.83 2.75 4.32
ben 0,67 1.25 3.31 3.03

La recuperación se determinó mediante la adición de estándares de analito a las muestras y el

análisis posterior. Los resultados mostraron que la recuperación osciló entre 89,3 y 115,8 %
para los seis analitos en todas las muestras.

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Análisis de Aditivos Alimentarios por Electroforesis Capilar 245

Solicitud

Las soluciones de extracto de muestra se inyectaron y separaron en

condiciones óptimas. Un electroferograma típico se muestra enFig. 3. Los
límites de detección fueron 1.38 μg mL−1para OG, 1,36 μg mL−1para IAG, 1,25
μg·ml−1para PG, 1,42 μg·mL−1para THBP, 1,48 μg·ml−1para NDGA, y 1.10 μg mL−1
para BEN. Los picos se identificaron añadiendo estándares de analitos. Los
resultados analíticos se resumen enCuadro III.
6

4
A/mAu

5
2

6 8 10 12 14 dieciséis

t/min
Fig. 3. Electroferograma capilar obtenido a partir de extracto de ramita de camarón. El pico 5 es el de
NDGA

Cuadro III. Cantidades (μg g−1) de los analitos en muestras de alimentos (norte=5)a

Muestra OG IAG PG THBP NDGA ben

Fideos instantáneos – – 9,17 ± 0,39 – – –
Patatas fritas – – – – 4,86 ± 0,21 –
arroz crujiente – – – – – –
ramita de camarones – – – – 4,19 ±0,19 –
Bebida 1 – – – – – 135,23 ± 4,87

Bebida 2 – – – – – 121,34 ± 3,40

aLos valores son medias ± desviaciones estándar de cinco mediciones

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246 Huitao Liu et al.

Conclusiones

Los resultados muestran que CZE es una técnica útil, simple y rápida para la
identificación, separación y cuantificación de antioxidantes y conservantes en
alimentos. En comparación con otros métodos cromatográficos, en los que se
necesitan columnas y solventes costosos [6, 7, 14], este método CZE es una buena
alternativa para el análisis simultáneo de aditivos alimentarios. Además, el método
es muy simple de realizar y puede ser adecuado para el control de calidad rutinario
de los alimentos.

Expresiones de gratitud

Este proyecto fue apoyado financieramente por la Fundación del Departamento de

Educación Provincial de Shandong (J04D01) y la fundación posdoctoral de la
Universidad de Yantai (HY03B12).

Referencias

[1] L. Turner, Mejor Nutrición,59, 22 (1997)

[2] MM Delgado-Zamarreno, I. Gonzalez-Maza, A. Sanchez-Perez, and R. Carabias
Martinez, Food Chem.,100, 1722 (2007)
[3] B. Lu, X. Wu, J. Shi, Y. Dong y Y. Zhang, Food Chem. Toxicol.,44, 1739 (2006)
[4] C. Ceballos y H. Fernández, Food Res. En t.,33, 357 (2000)
[5] I. Malinowska, TG Andronikashvili y JK Rozylo, Chem. Reinar. Res.,14, 215 (2005)

[6] CA Hall III, A. Zhu y GZ Michael, J. Agric. Química alimentaria,42, 919 (1994)
[7] L. Guo, MY Xie, AP Yan, YQ Wan y YM Wu, Anal. Bioanal. quimica,386, 1881 (2006)

[8] Q. Xiang, Y. Gao, YH Xu y E. Wang, Anal. ciencia,23, 713 (2007)

[9] BB Sha, XB Yin, XH Zhang, XW He y WL Yang, J. Chromatogr. A,1167, 109 (2007)

[10] MC Boyce y EE Spickett, J. Agric. Química alimentaria,47, 1970 (1999)

[11] YS Ding, MF Mora y CD García, Anal. quim. acta,561, 126 (2006)
[12] HT Liu y Y. Gao, Cent. EUR. J. Chem.,5, 221 (2007)
[13] W. Robert y SL Ira, Anal. quimica,63, 823 (1991)
[14] AZ Graciano-Verdugo, E. Peralta, H. Gonzalez-Rios, and H. Soto-Valdez, Anal. quim.
acta,557, 367 (2006)

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