UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NAYARIT

AREA DE CIENCIAS BIOLOGICO AGROPECUARIAS Y PESQUERAS

UNIDAD ACADEMICA DE AGRICULTURA

PROYECTO DE INVESTIGACION

Producción de cultivos bajo un enfoque de Agricultura

Regenerativa en diferentes ecosistemas del Estado de Nayarit
(PROTOCOLO DE AISLAMIENTO PARA HONGOS
FITOPATOGENOS)

Docente: M.C. Ana Luisa Sánchez Monteon

Jared Guadalupe Peña Barrios
Jesús Armando López Zavala
UAA-UAN Xalisco; Nayarit México
 PROTOCOLO DE AISLAMIENTO PARA HONGOS FITOPATOGENOS
MATERIAL Y EQUIPOS

• Cajas Petri estériles

• Frascos de laboratorio estériles
• Bisturí estéril
• Tijeras estériles
• Tubos Falcón de 50ml estéril
• Medios de cultivos PDA casero
• Mecheros
• Incubadora
• Microscopio
• Shaker
• Bactericida agrícola

Objetivo: Aislar hongos que causen enfermedades desde nuestras vegetales

TOMA DE MUESTRAS

Para seleccionar los diferentes hongos patógenos se realiza una recolección de muestras de
distintos lotes de o zonas de producción agrícola; las muestras deben incluir hongos presentes
en fruto, a nivel suelo, en tejido vegetal (botones florales, flores, hoja, órganos como a raíz,
tallos), se da prioridad a hongos que muestras signos de distinta morfología, tratando de
conformar un cepario con la mayor cantidad de hongos patógeno diferenciados. Cada muestra
se recolecta en tubos Falcón de 50 ml estériles y se almacenan a 4°C; hasta su uso.

AISLAMIENTO DE HONGOS A PARTIR DE FRUTOS

Para el aislamiento, se adicionaron directo al tubo Falcon 20 ml de agua destilada estéril y se

procedió a realizar una dilución seriada 1:10 y 1:100. De esta última dilución, se siembran 4
cajas Petri de medio PDA casero conteniendo bactericida (Cuprimicina 2gr/L) y se siembran
2 cajas mas de la primera dilución.

Hongos que presentan una coloración elevada o cualquier rasgo de morfología diferente serán
repicados a nuevas placas con medio PDA casero y se incubaran una vez terminado su
crecimiento se almacenaran a 4°C para su posterior identificación morfología o bien en su
caso identificación molecular.

AISLAMIENTO DE HONGOS A PARTIR DE TEJIDO VEGETAL ENFERMO

El aislamiento consiste en un proceso de separación de microorganismo de su sustrato natural

(plantas), para hacerlos crecer en un medio de cultivo artificial. Con las muestras recolectadas
se procedió de la siguiente manera, según Espadas et al. (2003):

a) Se lava el material enfermo con agua corriente y se dejo secar a bajo corriente de aire
en un cámara de flujo laminar.
b) El tejido vegetal afectado fue seleccionado y se corta procurando dejar trocitos de
0.3-0.5 cm de longitud.
c) Para desinfectar el material vegetal seleccionado se lava los trocitos con agua
destiladas estéril para quitar los restos de tierra, luego posteriormente son sumergidos
en solución de hipoclorito e sodio al 10% por 1 minuto, posteriormente se enjuagan
con agua destilada para eliminar cualquier residuo de solución de cloro, y finalmente
se secan sobre papel absorbente estéril y se depositan el material vegetal en placas
Petri con Agar papa dextrosa (PDA), con bactericida comercial Cuprimicina 2gr/L.

Las cajas sembradas con el material vegetal se sellan e incuban a una temperatura de 20-
25°C para luego observar el crecimiento micelial.

Una vez alcanzado el crecimiento total en caja Petri, se procede a la observación e

identificación bajo microscopio o bien a las pruebas de antagonismo.