Discrepancias de grupos

sanguíneos. ABO y Rh.

Docente: Tec. Eric Alarcón.
Estudiantes:
Br. Almiñana Andrea
Br. Etcheverria Camila
Br. Godán Brisa
Br. Iglesias Martina
Br. Rodríguez Mikaela
Br. Rosés Victoria.
 Discrepancias:
Son las desviaciones de los patrones esperados, ya sea por algún error técnico o
por determinadas condiciones de la muestra en estudio.

Se pueden clasificar como:

● Discrepancias mediadas por errores administrativos y/o técnicos
● Discrepancias mediadas por células
● Discrepancias mediadas por suero

Para prevenir una discrepancia debemos tener en cuenta la regla de 3: que dos
técnicos hagan la identificación, con dos plataformas diferentes y en diferentes
momentos.
 Discrepancias ABO:

Definimos las discrepancias como cualquier desviación de los patrones ABO esperados en la
fenotipificación, tanto en los antígenos (fase celular) como en los anticuerpos (fase sérica).

Una discrepancia ABO se genera cuando la interpretación de la prueba globular no se complementa

con la de la prueba sérica.

Estos resultados deberán documentarse.

La interpretación ABO debe retrasarse hasta que se resuelva la discrepancia.

 Importancia Clínica del Sistema ABO

● Compatibilidad transfusional . Regla de oro.

● EHFN

● Trasplante renal, hepático, cardiaco por la expresión de Ags en el endotelio

 Clasificación de discrepancia en fenotipificación
ABO:
● Discrepancias por errores técnicos/administrativos.

Discrepancias medidas por células: Discrepancias mediadas por suero:

- Aglutinación de campo mixto. - Aloanticuerpos
- Subgrupos de A o B. - Autoanticuerpos
- Poliaglutinación - Rouleaux
- Sustancias en el suero o plasma - Transfusiones de componentes
- Prueba de Antiglobulina directa plasmáticos ABO no idénticos.
positiva. - Edad.
- Reactivos - Enfermedad
- Reactivos.
Discrepancias mediadas por errores técnicos y/o
administrativos
● El calentamiento de la prueba de aglutinación directa podría resultar en una falsa negativa .
● Error al adicionar los reactivos y las muestras de los pacientes.
● El uso de reactivos, eritrocitos o solución contaminada, es un error al no realizar el control
diario de los reactivos y el tiempo recomendado de uso de las suspensiones.
● Suspensión de los eritrocitos con muy alta o baja concentración.
● Sub o sobre centrifugación de las pruebas.
● Material de vidrio sucio.
● No seguir las indicaciones del fabricante de los reactivos y plataformas.
● Incorrecta interpretación de los resultados.
● No registrar los datos a medida que realizó la lectura.
● Error en la identificación de las muestras.
● No tener en cuenta registros previos e información.
Discrepancias ABO medidas por células:
➔ Subgrupos de A o B

● Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antígeno presente en la
membrana de los eritrocitos y en la saliva de los secretores, provocando reacciones débiles o
ausentes con los reactivos Anti-A y Anti-B.Se hallan con mayor frecuencia y tienen más
relevancia clínica los de A, que los de B.

● Los subgrupos podrían reconocerse por biología molecular cuando hay una discrepancia entre
la prueba globular y la sérica, pero la misma tiene un acceso muy limitado.

● En esta discrepancia la prueba directa ABO se clasifica como O, pero en la indirecta lo hace
como A o B. La técnica más utilizada para ver si hay Ag con baja densidad es potenciando la
reacción o utilizando plasma humano con Anti-A y Anti-B. Generar una adsorción con las
células problemas, y luego eluir, y el eluato enfrentarlo a células A y B con Ag normal (si hay
Ag en la cél problema esperamos que haya una reacción positiva).
Densidad antigénica del grupo A
La cantidad de Ag : A1 > A2 > A3 > Ax > Aend > Am > Ael

Figura I
A1: Es la forma más frecuente, hay un 80% de probabilidad de que en la práctica estemos frente a
un individuo con fenotipo A1. Se detecta por reacción de aglutinación con suero Anti-A y Anti-A1,
es decir que ocurre aglutinación por lectina Dolichus biflorus (Anti-A1), y no ocurre una
aglutinación por lectina Ulex europeus (anti-H). Se puede decir entonces que en estos individuos
con antígenos A1 se espera encontrar en el suero anticuerpos Anti-B.

A2: Se encuentra en aproximadamente el 20% de los individuos. En este fenotipo ocurre una
aglutinación con Ulex Europeus (Anti-H) por lo tanto reacciona más débilmente con Anti-A y no
aglutina con Anti-A1 (Dolichus Biflorus). Se puede decir que estos individuos tienen en el suero
anticuerpos Anti-B, pero del 1-8% de los individuos con antígenos A2 y el 25% que tienen
antígenos A2B pueden generar anticuerpos irregulares Anti-A1 en suero y pueden ser naturales o
inmunes.
A3: Se caracteriza por presentar dobles poblaciones con Anti-A, son dos poblaciones que se
encuentran conviviendo. Una población es capaz de aglutinar completamente y la otra no,
están superpuestas.

Aend: También se caracteriza por presentar doble población con Anti-A pero a diferencia del
otro fenotipo mencionado anteriormente el individuo presenta molécula H en la saliva y
algunos van a tener anticuerpos Anti-A1 en el suero.

Am: Se caracteriza porque no aglutinan o lo hacen muy débilmente con Anti-A y porque
tienen un Alelo raro en el locus del gen ABO.
Ael: Se caracteriza porque no aglutinan, absorbe Anti-A, son secretores no detectandose
sustancia A y tiene anticuerpos anti- A1 en el suero.
Orden de los sub-grupos de A:

Tabla II
 La cantidad de Ag : B > B3 > Bx > Bm > Bel
B3: Se caracteriza por una doble población, cuando lo enfrentamos a la lectina con
especificidad Anti-H vamos a observar una aglutinación muy intensa. Podemos
encontrar molécula B en la saliva del individuo si son secretores y por ser la forma más
frecuente de los fenotipos B débiles.

Bx: Se caracteriza por presentar aglutinación débil, cuando lo enfrentamos a la lectina

con especificidad Anti-H vamos a observar una aglutinación muy intensa. Puede tener
anticuerpos Anti-B débiles en el suero y por presentar poca expresión de B en saliva si
son secretores.
Bm: Se caracteriza por no aglutinar con Anti-B, el individuo tiene expresión de B en saliva
y ser positivo para H en saliva.

Bel: Se caracteriza por no aglutinar y es porque el individuo presenta anticuerpo Anti-B en el suero.

B adquirido: Se caracteriza por ser un fenotipo transitorio que se asocia a infecciones, es decir,
personas que son del fenotipo A pasan a ser de forma transitoria del fenotipo B.

AB: Hay 9 subgrupos que varían de acuerdo con la cantidad de antígenos A o B: A1B, A2B, A3B.
Aglutinación de campo mixta: Se produce cuando se encuentran dos poblaciones diferentes
de eritrocitos (se ven como segmentos con pequeños o grandes aglutinatos junto con células
sin aglutinar). Comúnmente se ve reflejado en una transfusión de grupo O a un receptor
diferente a grupo O, o un trasplante de médula ósea de grupo ABO diferente al del receptor.
Otra causa de campo mixto puede darse en RN prematuros que no tienen antígenos
maduros.

Poliaglutinación: Es la aglutinación de eritrocitos independientemente de su fenotipo, con

la mayoría de los sueros, excepto con el suero autólogo ni con recién nacido. Esta
discrepancia puede ser transitoria como el resultado de la exposición a Ag bacterianos
durante una infección, o puede ser persistente como resultado de problemas genéticos.
Sustancias en el suero o en el plasma: Algunas sustancias presentes en el plasma pueden
inhibir la reacción esperada en la prueba globular o generar reacciones inespecíficas. Este
tipo de discrepancia no se presenta si se lavan los eritrocitos previamente.

Prueba de antiglobulina directa (Coombs directo) positiva: Esta discrepancia es rara, se

puede dar si los eritrocitos están sensibilizados con autoanticuerpos que producen
aglutinación cuando se prueban con los reactivos Anti-A y Anti-B, siendo interpretada la fase
globular como AB.

Reactivos: La causa más común es la contaminación de los reactivos y controles diarios

inadecuados o inexistentes.
Tabla I
 Resolución de discrepancias ABO
● Verificamos en la historia clínica si tiene información que nos pueda orientar a
resolver la discrepancia.
- Diagnóstico clínico
- Embarazos
- Patologías
- Edad
- Transfusiones previas
- Antecedentes obstétricos
● Repetimos la prueba con la misma muestra para descartar errores técnicos.
● Utilizamos una técnica más sensible como la técnica en tubo o en micro placa.
● Obtener una nueva muestra, esto resuelve una discrepancia por mal etiquetado o
contaminación de la muestra.
Resolución de discrepancias en la Fase Globular
Podemos utilizar los siguientes procedimientos para intensificar la detección de antígenos
débilmente expresados
1. Incubar eritrocitos lavados durante 30 minutos con Anti A, Anti B y Anti-AB a
temperatura ambiente. Incubar a 4ºC para intensificar más la fijación del anticuerpo,
deben ser controladas con eritrocitos del grupo 0 para asegurar que las reacciones son
debidas a Anti-A y Anti-B y no aglutininas frías.
2. Tratar los eritrocitos con ficina, papaína y bromelina, para incrementar la reacción,
paralelamente se debe incluir eritrocitos del grupo 0 tratados con enzimas como control
de la especificidad de la reacción ABO.
3. Realizar absorción-elusión con Anti-A y Anti-B para adsorber el anticuerpo a los
correspondientes antígenos eritrocitarios, el eluato lo enfrentamos a células A y B con Ag
normal (si hay Ag en la cel problema esperamos que haya una reacción positiva).
4. Buscar en la saliva la presencia de sustancia H, A o B.
5. Estudiar la expresión de antígenos Lewis puede brindarnos información de los Ag A y B
ya que la FUT2 (fucosiltransferasa 2) controla la expresión de los mismos en las
secreciones.
 Discrepancias ABO medidas por suero:
Aloanticuerpos: Este tipo de discrepancia se da por la presencia de aloanticuerpos de tipo
IgM en el plasma problema y a los eritrocitos que se utilizan para la prueba sérica expresan el
antígeno al cual el aloanticuerpo está dirigido.
Autoanticuerpos: Puede estar dada por Anti-l o Anti-IH, autoanticuerpos dirigidos contra
antigenos de alta frecuencia. Son crioaglutininas que van a generar panaglutinación

Rouleaux: Cuando hay pacientes con globulinas anormales, se forman rouleaux (pila de
monedas) en los eritrocitos, parece que están aglutinados. Vamos a ver aglutinación con
todos los pooles celulares.
Transfusión de componentes plasmáticos ABO no idénticos: Se da en los pacientes que
reciben plaquetas y plasma fresco que son ABO incompatibles.

Edad: Es importante para las discrepancias, ya que los recién nacidos no expresan sus
respectivos anticuerpos ABO, y en el suero de los pacientes de edad avanzada
disminuyen los niveles de anticuerpos ABO.

Enfermedad: Inmunodeprimidos con niveles indetectables de anticuerpos en la prueba

sérica.

Reactivos: Deterioro en los pooles celulares utilizados en la fase sérica , si estos no se

almacenan correctamente, o si ha pasado el tiempo recomendado de utilidad.
Resolución de discrepancias en la prueba sérica:
● Anticuerpos débiles o ausentes
a) Verificar la edad, en recién nacidos los anticuerpos ABO no están presentes y en
personas añosas pueden verse disminuidos
b) El diagnóstico (pacientes inmunodeprimidos, quimioterapia, trasplante médula ósea)
puede explicar la falta de anticuerpos.

● Concentraciones altas de Anti-A y Anti-B pueden generar falsos negativos, en estos

casos se puede inferir mediante pruebas en eritrocitos por dilución del suero
mediante el uso de suero tratado con EDTA.
● El Anti-A en el suero de personas A2, A2B aglutina eritrocitos testigos A1.
● Las autoaglutininas: frías como las Anti-I y las Anti-HI, pueden interferir en los
resultados
a) Calentar el suero y los eritrocitos a 37ºC antes de mezclarlos y realizar las pruebas en
suero a esa temperatura y convertirlas a la fase antiglobulina si es necesario
b) Eliminar la aglutinina fría del suero mediante autoabsorción fría.
c) Tratar el suero con DTT y usar el suero tratado para pruebas de aglutinación inversa.

● Aloanticuerpos: Naturales IgM pueden aglutinar eritrocitos usados en pruebas con

suero si contienen el correspondiente antígeno, para determinar el grupo de un suero
que contenga aloanticuerpos fríos se debe realizar:
a) Elevar la temperatura va de 30-37ºC antes de mezclar el suero y la células, si la
temperatura de reacción del Ac irregular es inferior a la que reaccionan los Anti-A y
Anti-B y Anti-AB, esto puede resolver la discrepancia.
b) usar pooles de Ag negativo para los anticuerpos presentes en el plasma problema.
 Discrepancia Rh:

Las discrepancias durante la tipificación del D deben ser investigadas y resueltas siempre.

La sangre Rh negativo es la opción apropiada para pacientes que necesitan una transfusión inmediata, pero
se debe realizar una investigación de un error técnico/administrativo e inmunohematológico.

En donantes, la sangre Rh negativo se le debe realizar un Test de Coombs Indirecto, si el mismo da negativo,
la sangre es Rh negativo. En cambio, si el TCI da positivo se debe clasificar al donante como Rh positivo, ya
que puede ser un D variante, luego de hacer los controles correspondientes de cada caso.

Si el Test de Coombs Indirecto da negativo se debe usar células control de coombs, si da positivo debo
validarlo con un Test de Coomb Directo, el cual debe dar negativo.
 Generalidades del sistema Rh:

● Sistema eritrocitario polimórfico que cuenta con un total de 52 antígenos y más de

200 alelos de importancia clínica.
● Los antígenos más importantes son: D, C, E, e y c; siendo D el que define si una
persona es Rh positiva (presencia de antígeno) o Rh negativa (ausencia de antígeno).
● Cambios en los aminoácidos presentes en la proteína RhD generan variaciones en el
antígeno D lo que da lugar a los D variante.
● Los anticuerpos Rh son mayoritariamente IgG y rara vez activan el complemento.
● Los anticuerpos pueden causar reacciones transfusionales hemolíticas y EHRN.
 D variante:
● Dividido en: D parcial, D débil.
● D Variante se detecta mediante técnica en tubo, utilizando AGH o reactivos IgM. Es
importante leer los respectivos insertos.

● D parcial: se caracteriza por la ausencia de uno o más epítopos del antígeno D. Esta
variante puede producir aloanticuerpos Anti-D contra los epítopos ausentes luego de
una inmunización con hematíes D positivo. Estos requieren de TCI para su detección. El
fenotipo más frecuente y con mayor importancia clínica dentro de este grupo es el
DVI.
● D débil: en este caso el glóbulo rojo posee menor número de sitios antigénicos en
comparación con los eritrocitos D positivos. Estos requieren de TCI para su detección.
La variación más frecuente son las de tipo 1, 2, 3 y 4.
● DEL: variante D débil más frecuente. Se expresan cantidades mínimas de antígeno D lo
que lleva a que no se logre detectar con métodos serológicos de rutina, sólo mediante
pruebas de adsorción-elución
 ¿Cómo estudiar e informar?

Figura 3:
 A tener en cuenta

El primer paso a tomar frente a este tipo de discrepancias sanguíneas es la repetición de las
pruebas en las mismas muestras:

Una vez que se verifique que no hubo error en el proceso se trata de establecer su causa.
 Frente a una discrepancia Rh:
● Debemos repetir la tipificación con los reactivos originales.
● Si se confirman los resultados, realizar con otros reactivos.
● Evaluar las características de los reactivos: métodos, líneas celulares, reactividad con
variantes.
● Determinar si existe información en el instructivo del reactivo explicando la
discrepancia.
● Si esto no ocurre, contactar al fabricante.
● Enviar muestra a la prueba molecular
 Errores técnicos:
Estos errores pueden deberse a:

● La pre-analítica del estudio: ejemplo correcta rotulación de la muestra, correcta

centrifugación.
● Metodología utilizada.
● Concentración de la suspensión de glóbulos rojos.
● Estado del reactivo.
● Dispensar control y reactivo Anti-D de forma incorrecta, confundiendo los mismos.
● No respetar las indicaciones del fabricante.
 ¿Cómo evitar errores técnicos?

● Las muestras deben estar debidamente rotuladas, y haber recibido la centrifugación

adecuada.

● Asegurarnos que la concentración de la suspensión de glóbulos rojos a utilizar sea la

adecuada a la plataforma a ser utilizada.

● Es importante saber las características del reactivo usado para la tipificación y siempre
consultar y seguir las instrucciones del fabricante.

● Verificar la información antes de comenzar su utilización, previo al control de calidad del

reactivo, que los mismos no estén vencidos.
 Errores administrativos:
● Debido por ejemplo a la tipificación de un paciente con grupo Rh positivo o negativo, y
al realizarse un nuevo estudio el cual da una discrepancia con un estudio anterior.
● Podemos tener un paciente trasplantado, el cual era RhD positivo y se trasplanta con un
RhD negativo, pasando a ser negativo. No significa que haya un error, pero si una
discrepancia con un estudio anterior.
● Realizar un análisis de la Historia clínica del paciente.
 Situaciones debidas a reactivos:
Tipos de reactivos

● Monoclonales blend: IgM + IgG: detectan las variables en fase de AGH

● Monoclonales IgM: (aglutina de forma directa con la mayoría de los glóbulos rojos que presenten
antigeno D) en su mayoría no detectan variables pero en algunos el fabricante indica que si el
resultado es 2 o 1 cruz debe considerarse como variante. LEER INSERTOS
● Monoclonales IgG: (reactivo por prueba Anti-Globulina Humana Indirecta, para determinación del D
débil).
Precauciones generales a tener en cuenta:
● Es fundamental a la hora de realizar la determinación leer el inserto de cada reactivo a utilizar, ya que
cada marca y técnica tiene una concentración distinta para trabajar.
● Leer inmediatamente.
● En caso de observar cambios de color, turbidez, descartar.
● Importante utilizar el control y que de negativo.
 ● Seleccionar el reactivo correspondiente teniendo en cuenta a quien se va a fenotipar (paciente,
donante, RN, embarazada).

Si se contempla aglutinación en la lámina de control deben realizarse estudios adicionales para poder
interpretarlos correctamente.

Las reacciones positivas pueden deberse a formación de agregados en forma de rouleaux,

autoanticuerpos fríos, autoanticuerpos calientes.

Realizar una PAD, si es positiva puede indicar la existencia de una sensibilización in vivo de los eritrocitos
por autoanticuerpos calientes por complemento,en este caso solo se puede informar el grupo de manera
correcta tras la elucion del anticuerpo fijado.

Una prueba de PAD negativa puede indicar la formación de rouleaux o la existencia de anticuerpos fríos.

Se recomienda repetir la prueba lavando los hematíes 3 veces con SSF a 37ºC.
 Fenómeno de Rouleaux:
Es una pseudoaglutinación en la cual los eritrocitos se adhieren uno a otro sobre
una superficie plana dando la apariencia de una pila de monedas debido a una alta
concentración de globulina en el suero. Este fenómeno no solo afecta la tipificación
de Rh, sino también la de ABO.

Figura 4. Fenómeno de Rouleaux

 Fenómeno de Rouleaux:
● Es una condición de los glóbulos rojos que puede alterar nuestros resultados,
veríamos un control Rh positivo cuando sabemos que tiene que ser negativo.

● Para lograr dispersar este fenómeno se agrega solución salina tanto a la muestra como
al control, la posible aglutinación de la muestra no se ve afectada con esto.

● Lo que se debe lograr es que tanto el control como el Anti-RhD tenga un resultado
correcto y así poder validar la técnica.

● En caso de sospecha de fenómeno de Rouleaux debemos de lavar los glóbulos rojos

con SSF y suspender según el % que indique el fabricante en SSF.
 Test de coombs directo, discrepancia Rh
Utilizamos el test de coombs directo para validar un fenotipo D variante. El objetivo es saber
si el test de coombs indirecto que se realizó para detectar el D variante arrojó resultado
positivo debido a que el eritrocito estaba sensibilizado previo al estudio. La obtención de un
test de coombs directo positivo invalida la prueba y estamos frente a una discrepancia.
Debemos remover lo que está sensibilizando al eritrocito a través de técnicas como la
elución, para poder detectar al D variante.
 Técnicas de Elución
La elución separa los Ac de los glóbulos rojos sensibilizados y recupera el anticuerpo. Cuando nos
enfrentamos a muestras con test de coombs directo positivo y es necesario saber cual es el
anticuerpo que se unió al eritrocito o cuando necesitamos saber el fenotipo del eritrocito que está
cubierto de anticuerpos utilizamos las técnicas de elución. Las mismas consisten en “despegar” los
anticuerpos unidos a los antígenos del eritrocito que impiden validar una técnica de ABO o Rh. De
esta manera podemos conocer el fenotipo de los distintos sistemas sanguíneos en pacientes que
hayan dado positivo a la prueba de coombs directa.

Para ello realizamos cambios físico químicos a la muestra de sangre para separar el antígeno del
anticuerpo unido, de forma reversible (recordemos que las uniones antígeno anticuerpo son débiles:
enlaces iónicos, puentes de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals y enlaces hidrofóbicos) por lo tanto,
para romper estos enlaces puedo aplicar: cambios de pH, Temperatura, fuerzas iónica.

Si vamos a eluir para fenotipar debemos usar una técnica que preserve la membrana del glóbulo rojo
y los antígenos de interés.
 Preguntas:
¿Cómo podemos clasificar las discrepancias?
¿Cómo podemos evitar los errores técnicos?
¿Cuáles son las discrepancias en la tipificación RhD? Menciona alguna
¿Cuáles son las resoluciones de discrepancias debidas a la prueba sérica?
¿Dónde está la discrepancia y cuáles pueden ser las
posibles causas?
 Bibliografia:
- Nieto-Rodríguez.A, Detección, análisis y resolución de discrepancias en el grupo
sanguíneo ABO. Rev Med Inst Mex Seguri Soc. 2006; 44 (2): p 34-37.
- Asociación argentina de Hemoterapia e Inmunohematologia, Manual técnico
AABB, 17ma edición, Argentina, American Association of Blod Banks, (2012)
- Armando Cortes Buelvas, Eduardo Muñiz Díaz, Graciela Leon de Gonzalez,
Inmunohematologia Básica y Aplicada, 1era edición Columbia, Grupo
Cooperativo Iberoamericano de Medicina Transfusional, (2014).
- Decreto técnico del Mercosur - N 385/000
- Tabla I: Juárez JB. Resolución de problemas por incongruencia en el sistema ABO
[Internet]. Medigraphic.com. [citado el 18 de septiembre 2022]. Disponible en:
https://www.medigraphic.com/pdfs/transfusional/mt-2010/mt101c.pdf
- Tabla l: Bautista Juárez.J, Resolución de problemas incongruencias en el sistema ABO.
Rev Mex Med Tran.2010; 3 (1): p 14-7
- Figura 1: Detección de Análisis Inmunohematológico de Subgrupos de A. Disponible
en:
https://www.upla.cl/bibliotecas/wp-content/uploads/Vancouver-Gu%C3%ADa02-UN
AB-Tutorial-Normas2014.pdf
- Tabla II: Daniels G. Human Blood Groups. Tercer edición. Estados Unidos: WileyBlack
Well;2013
- Figura 2: Telecapacitaciones TM. DISCREPANCIAS DE GRUPO SANGUÍNEO GLOBULAR Y
SERICO [Internet]. YouTube; 2019 [citado el 17 de septiembre de 2022]. Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=k6fs-4FZJDU
- Figura 3: Estudio D variante . Teórico: Dra. Gabriela Rivas (2021)
- Figura 4: Fuente: https://www.medicine.mcgill.ca/physio/vlab/bloodlab/ESR.htm