31

Medios de cultivo sólidos

32

Se emplean para:
a) obtener crecimiento en la superficie del medio
(colonias).

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 Medios de cultivo sólidos
33

Se emplean para:
b) cuantificar microorganismos.

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 Medios de cultivo sólidos
34

Se emplean para hacer :

c) pruebas de sensibilidad,

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 Medios de cultivo sólidos
35

Se emplean para hacer:

d) muestreo de superficies, entre otros.

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 Clasificación
36

 Medio sintético o Medio natural, complejo

químicamente o químicamente
definido. indefinido:

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 Clasificación
37

Ej. g
 Medio sintético o
⚫ NaNO3 1.5
químicamente
⚫ K2HPO4 3H2O 0.04
definido: La
composición ⚫ CaCl2 2H2O 0.075
química se ⚫ Acido cítrico 0.006
conoce, tanto ⚫ Na2CO3 0.02
cualitativamente ⚫ Agua destilada 1000 mL
como pH final 7.4
cuantitativamente
.
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 Clasificación
38

Medio natural, complejo

oMmmmmmmmmmmmmmmmmmm
químicamente Ej: Agar nutritivo
indefinido: Se prepara
con componentes  Peptona de carne 5 g
complejos, cuya  Extracto de carne 3 g
composición nutritiva
exacta no se conoce y  Agua destilada 1000 mL
no se puede controlar. pH 7.4 ± 0.2
Ej. Medios con Peptonas

¿C, N, P, S, ….?

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 Clasificación
39

Por su uso:
 Generales
 Selectivos
 Diferenciales
 De enriquecimiento
 Enriquecidos
 De transporte

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 Medios generales
40

Medios generales
Son aquellos que permiten el desarrollo de los
microorganismos más comunes.
Ej. Caldo Nutritivo - Escherichia coli

FÓRMULA (en gramos por litro)

Peptona de carne ............ 5.0

Extracto de carne …….…. 3.0
Agua
pH final: 6.9 ± 0.2

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 Medios de cultivo selectivos
41

 Estos medios permiten el crecimiento de un

grupo de microorganismos e inhiben el
desarrollo de otros.
 Se usa para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones
mixtas.
Ejemplos de medios selectivos: EMB, Manitol sal,
Agar Cetrimide, Agar ENDO, entre otros.

Ejemplos de inhibidores Sales biliares, colorantes

(cristal violeta), altas concentraciones altas de
NaCl, pH*, antibióticos, temperatura** entre
otros.

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 Medio de cultivo selectivo
42

Ejemplo
Caldo bilis verde brillante

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Bilis de buey deshidratada 20.0 Suspender 40 g del polvo deshidratado
Lactosa 10.0 por litro de agua destilada. Disolver y
Peptona 10.0 distribuir 10 ml por tubo con campanita de
Aaa Preparar además, el medio a
Durham.
A concentración.
doble
Verde brillante 0.0133 A
Esterilizar en autoclave a 121°C durante
a minutos.
15
pH final: 7.2 ± 0.2AGM MG 23/I Presentación con fines didácticos. 07/09/2022
 Medio de cultivo selectivo
43

Ejemplo
Caldo bilis verde brillante

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Bilis de buey deshidratada 20.0 Suspender 40 g del polvo deshidratado
Lactosa 10.0 por litro de agua destilada. Disolver y
Peptona 10.0 distribuir 10 ml por tubo con campanita de
Durham. Preparar además, el medio a
doble concentración.
Verde brillante 0.0133 Esterilizar en autoclave a 121°C durante
15 minutos.
pH final: 7.2 ± 0.2AGM MG 23/I Presentación con fines didácticos. 07/09/2022
 Ej.

Caldo Bilis Verde Brillante 2%.

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales,
por la técnica del número más probable.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los ¿nutrientes necesarios? para el
adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas
a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con
producción de ácido y gas.

44 AGM MG 23/I Presentación con fines didácticos. 07/09/2022

 Medios de cultivo diferenciales
45

 La composición de estos medios de cultivo

permite distinguir la fisiología de los
microorganismos.

 Sirven para determinar el tipo de enzimas que un

microorganismo tiene, ya sea por cambios visibles
que realizan a los sustratos, por el color de las
colonias o por la adición de reveladores al
cultivo.

AGM MG 23/I Presentación con fines didácticos. 07/09/2022

 Medios de cultivo diferenciales
46

 Determinar el tipo de enzimas que un microorganismo tiene,

ya sea por los cambios visibles que realiza a los sustratos, por
el color de las colonias o por la adición de reveladores
agregados al medio para ese fin.
Agar almidón
(adición de revelador: lugol)
Ej. Agar leche descremada
(cambios visibles)

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 Agar EMB
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Ejercicio de integración
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA
Agar 13.5 Lactosa 5.0
Azul de metileno 0.065 Peptona especial 10.0
Eosina Y 0.4 Sacarosa 5.0
Fosfato dipotásico 2.0

1. Identificar la fuente de carbono.

2. Fórmula del Fosfato dipotásico .
3. El compuesto que lo hace selectivo es:
4. El compuesto que lo hace diferencial es:
5. ¿Cuál es la fuente de nitrógeno?
6. ¿En que porcentaje esta el agar en el medio?
7. ¿Qué son los coliformes?

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 Medio de cultivo diferencial
48

 Determinar el tipo de enzimas que un microorganismo tiene,

ya sea por los cambios visibles que realiza a los sustratos, por
el color de las colonias o por la adición de reveladores
agregados al medio para ese fin.

Ej. Agar EMB (color de colonias)

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 Agar EMB (enzimas y reacciones)
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50

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 Medios de cultivo selectivos y
diferenciales
51

Hay medios de cultivo que pueden ser

selectivos y diferenciales . Selectivo
Ej. Agar EMB
Bacterias Gram ( - )

Diferencial
Lac ( + )

Lac ( - )

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 Medios de enriquecimiento
52

 Tienen sustancias que permiten la

recuperación de microorganismos de
diversas muestras, favorecen el desarrollo
de un tipo microbiano y disminuyen la
velocidad de crecimiento de la biota
acompañante.

 Estos medios son útiles cuando los

microorganismos están sometidos a
condiciones de estrés (congelamiento,
refrigeración desecación, tratamiento
químico o físico).

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 Medios de enriquecimiento
53

Ejemplos

Caldo Selenito**
Recuperación de Salmonella a
partir de heces fecales
AGM MG 23/I
Agua alcalina para recuperar
Vibrio de mariscos
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 Medio enriquecido
54

 Tiene un exceso de nutrientes y/o la adición extra de

suplementos.
 Se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.

 Ej. Agar sangre.

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 Medio enriquecido
55

 Ej. Caldo soya tripticaseína y agar chocolate con polivitalex ®

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 Medio enriquecido y diferencial
56

Ej.
Agar sangre: medio enriquecido y diferencial.
a) enriquecido: por el componente que extra que tiene (sangre).

b) diferencial porque se usa para distinguir bacterias hemolíticas

de las NO hemolíticas.

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 Medios de transporte
57

Algunos medios
semisólidos se emplean
como medio de
transporte. Ej. Stuart

Sirven para llevar las

muestras que contienen a
los microorganismos,
del sitio de la toma del
producto hasta el
laboratorio donde va a
efectuarse el estudio.
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 Factores que intervienen en
la preparación de medios
58

• El medio está en función del microorganismo (s) en

estudio y de la composición química de la célula,
que es reflejo de los nutrientes que necesita.
• Ver el procedimiento.
• Revisar si es un medio para hidratar o para preparar
por componentes.
• Usar material de vidrio limpio y seco.
• Emplear agua destilada.
• Ajustar el pH.
• Contar con equipo adecuado.
• Distribuir el medio en recipientes adecuados
• CONTROL DE CALIDAD
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 Preparación en diferentes ambientes
59

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 Durante la preparación I
60

 Seleccionar materias primas: medios de cultivo

deshidratados, pureza de reactivos y
suplementos.
 Registrar todos los detalles de la preparación
(peso, volumen, fecha, operador, etc.)
 Utilizar agua destilada de calidad apropiada.
 Verificar la calidad del agua empleada (carga
bacteriana, presencia de inhibidores, etc.)
 Seleccionar material adecuado: matraces,
tubos, cajas.
 Usar matraces de por lo menos 2 veces más
del volumen del medio a preparar
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 Medios de cultivo sólidos
61

Para que los resultados sean satisfactorios, la

dureza del gel debe estar entre 300 y 500
dinas/cm2
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 Durante la preparación II
62

 Leer las instrucciones del marbete.

 Pesar exactamente la cantidad solicitada.
 Uso de probetas adecuadas.
 Hidratar antes de disolver.
 Ajustar y registrar el pH (utilizar instrumental
adecuado y calibrado)
 Disolver completamente el medio, aplicar
calor si contiene agar.
 Agitar el medio mientras se disuelve.
 Tener cuidado de no sobrecalentar el
medio.
 Esterilizar ***
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 Control de materias primas
63

El agua es la materia prima más

importante.
Parámetros que deben controlarse:
 Iones Cu2+

 Conductividad = 15 mS

 pH= ligeramente ácida (no menor

a 5.5)
 Cajas petri (<1 mg de óxido de
etileno)
 Cristalería de borosilicato de sodio

 Aditivos o suplementos (sangre: la

homogeneidad, la viscosidad y el
color o certificado de calidad y
esterilidad)
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 Actividades incorrectas en la preparación
de medios de cultivo
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 Posibles defectos en la preparación
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DEFECTO CAUSA
⚫Agua no neutra
Desvió de pH ⚫Envase mal cerrado
⚫Sobrecalentamiento

⚫Recipientesucio
Turbidez, ⚫Sobrecalentamiento

precipitado ⚫Pérdida de agua por

evaporación

sucio⚫Recipiente

Desviación del color ⚫Sobrecalentamiento

⚫Valor erróneo del pH

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 Medios de cultivo
66

• Generalmente se presentan en forma de

polvo seco, fino o granular.

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 Medios de cultivo
67

▪ Puede presentarse también pre-hidratados o listos

para usarse.

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 Microsistemas
(semiautomatizados – automatizados)
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 Microsistemas
(semiautomatizados – automatizados)
69

Sistemas miniaturizados API (Bio-Mèrieux) Índice

Analítico de Perfil (Analytical Profile Index, API)
Ej. Sistema 20E (20 por veinte determinaciones y E
de enterobacterias
Hay varios tipos de tiras API

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 Microsistemas
(semiautomatizados – automatizados)
70

• Sistemas Vitek (Bio-Mèrieux).

• Sistema automatizado
• Usa tarjetas de identificación
• Hay varios tipos de tarjetas

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 Microsistemas
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https://youtu.be/ErcI4PAt-Oo

Vitek: Ver el video, es de 4 min, aproximadamente.

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 BIBLIOGRAFÍA
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**CONTROL DE CALIDAD
NORMATIVIDAD: NOM-065-SSA1-1993
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.
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