Informe Biohack

Nombre: Aidan Peñaherrera

Fecha: 3/17/2023

Grado: 2 IB “E”

Tema: Tinción Gram bacterias gram - y gram+ teñidas, Técnica de frotis

sanguíneo, preparación y coloración de frotis, Observación simple de
hongos

Objetivo: Realizar practicas experimentales de cada uno de los temas

previstos para conocer el procedimiento de estos mismos y su función

Materiales: Caja Petri, cinta adhesiva, microscopio, colorantes, algodón,

portaobjetos, asa microbiológica, mechero, tubos, placas, sangre, corredera,
agua destilada

Muestras biológicas

Hongos, sangre, bacterias

Reactivos agua destilada

Fundamento teórico

Tinción Gram

La combinación de colorantes, mordientes y disolventes están

directamente relacionados con la composición química cuando hacen
efecto sobre los microorganismos es por eso que las bacterias deben
provenir de cultivos jóvenes de 12 a 18 horas comúnmente
Técnica de frotis sanguíneo

Al esparcir una gota de sangre sobre un portaobjetos el frotis debe

terminar antes del final del portaobjetos de muestra en un borde
emplumado, al secar el aire y cuando se tiña el portaobjetos se puede
diferenciar el acido del Básico donde el colorante básico se une a los
componentes de ácidos de la célula, ácidos nucleicos, gránulos en
neutrófilos y proteínas acidas mientras que la Eosina se una a la
hemoglobina con las estructuras celulares y los granulas de los eosinófilos

Preparación y coloración de frotis

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de

una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los
microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy
difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente
fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales
de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin
que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una
extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas
al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las
posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
Observación simple de hongos

Para la correcta identificación de hongos de interés es necesario observar

las estructuras fúngicas con una alta calidad y contraste para ello se utilizan
diversos compuestos químicos que permitan la tinción entre la pared y el
citoplasma de las células fúngicas. La tinción de azul algodón de lactofenol
no es considerada una tinción diferencial. Sin embargo, posee
características tinto riales que permiten observar cada uno de los
componentes fácilmente apreciando las estructuras de una forma correcta

Procedimiento

Tinción Gram

Preparar un frotis bacteriano y fijar a la llama

Cubrir la preparación con cristal violeta, lavar y dejar actuar durante 1

minuto

Cubrir la preparación con Lugol y dejar actuar 1 minuto

Añadir disolvente diferenciador

Añadir colorante de contraste y dejarlo reposar 1 minuto

Observar la preparación con el objetivo de inmersión y diferenciar las Gram

+ de las Gram -

Técnica de frotis sanguíneo

Hacer el frotis y secarlas en temperatura ambiente

Cubrir las láminas con 15 a 20 gotas de colorante

Dejar hacer efecto por 2 a 3 minutos

Poner 20 gotas de agua destilada en la lámina y homogeneizar

Colorar durante 3 a 5 minutos. Escurrir y lavar en agua corriente

Secar las láminas en posición vertical

Preparación y coloración de frotis

Colocar el mechero y la preparación o muestra que contenga los

microorganismos en un lugar fácilmente accesible

Tomar el asa de siembra y flamee al alambre hasta que alcance un rojo

incandescente y dejar enfriar

Colocar la placa invertida de la caja Petri sobre la mesa de trabajo y levante

con la mano izquierda la parte de la placa que contiene el medio de cultivo
de los microorganismos para llevarlo al mechero

En la proximidad de la llama introduzca el aza de siembra y tome una

pequeña muestra del cultivo que crece sobre la superficie del agar

Con la muestra en el extremo del asa coloque sobre la gota de agua el

portaobjetos y proceda a realizar el frotis

Realizar la fijación por calor en el portaobjetos y deje enfriar hasta que la

muestra se encuentre evaporada

Observación simple de hongos

Seleccionar las colonias para realizar las improntas

Cortar segmentos de cinta adhesiva transparente de 1cm^2

Pegar los segmentos de cinta en un asa microbiológica

Poner una gota de azul de algodón en el portaobjetos

Con el lado adhesivo de la cinta tocar la parte superior del hongo

Colocar la cinta sobre la gota azul de algodón y observar en 40x

Conclusión

Cada uno de los experimentos tuvo datos resultantes como lo previsto al

llegar a identificar la mayor parte de componentes de interés mediante la
ayuda de los microscopios o reacciones químicas como por ejemplo el
burbujeo. En el experimento de Tinción Gram se logró identificar las
grandes negativas y positivas por efecto del colorante gracias a un enfoque
exacto, por otro lado, en técnica de frotis sanguíneo se hicieron varias
pruebas hasta que la sangre se encuentre esparcida de la manera correcta
para posteriormente aplicar los colorantes y el agua destilada para así
poder diferenciar los componentes ácidos de la hemoglobina con ayuda
del metileno y la eosina.

Como tercer experimento después de poner la bacteria en el portaobjetos y

colocar agua encima se evaporizo esta misma en el mechero
manteniéndolo por periodos en el calor mas no en constante contacto
puesto que la bacteria se quemaría así pudiendo realizar el frotis y su
fijación mediante el calor. En el ultimo experimento se logro apreciar la
estructura bacteriana de un hongo al sacar una muestra microbiológica por
una cinta adhesiva y con ayuda de una gota de azul de algodón se resalto
la estructura ayudando así a su visibilidad a 40 x en el microscopio
Anexos