GUIA DE LABORATORIO DE

CITOGENÉTICA

ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL

CORPÚSCULO DE BARR

DOCENTE: PUJUELO YAIPEN, BELÉN CARIDAD NELLY

INTEGRANTES :
● HUIZA DAVILA, AMANDA 100%
● TORPOCO GONZALES, KLORIEL 100%
● ROJAS FIGUEROA, KELLY IVONNE 100%
 ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL
MEDIANTE LA TÉCNICA DE CARBOLFUCSINA
Y ACETATO DE ORCEINA

1. PROPÓSITO

Reconocer a través de una técnica fácil y sencilla los Corpúsculos o cuerpos de Barr o también

llamados cromatina sexual X que se encuentran en los núcleos de las células somáticas de las

mujeres donde uno de los cromosomas X, el que completa su replicación más tarde que su

homólogo, queda condensado e inactivo durante la interfase de células somáticas.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

2.1. CROMATINA SEXUAL.

Es la condensación de la cromatina de uno de los dos cromosomas sexuales femeninos, se

representa como una masa heterocromática de 0.7 -1,2u en la parte interna de la membrana

nuclear de las células somáticas femeninas , durante la interfase. También conocida como el

Corpúsculo de Barr o Corpúsculo X , gracias a los estudios de Murray Barr y Ewart George Bertram

(1949) quienes observaron masas heterocromaticas en los núcleos de células nerviosas de gatas, a

pesar que inicialmente fueron mal interpretadas al ser utilizadas para determinar el sexo del

individuo, por la presencia o no de la cromatina sexual. Las investigaciones de Mary Lyon

explicarían el mecanismo de formación de la cromatina sexual, su hipótesis del cromosoma X

silenciado brinda una propuesta de la inactivación del cromosoma X sexual en hembras, para evitar

la sobre expresión de genes y compensar el desequilibrio genético entre hembras y machos.

Estudios que fueron apoyados por muchos investigadores, y que hoy han servido para realizar

múltiples investigaciones relacionadas con la genética clínica y el diagnóstico citogenético, así

también el daño genotóxico.

2.2 HIPÓTESIS DE MARY LYON

Consistía en que las masas heterocromáticas eran respuesta de la condensación e inactivación de

uno de los cromosomas X (sexual) y que se inicia durante la etapa del desarrollo embrionario en

células somáticas femeninas, y de forma aleatoria entre los cromosomas homólogos paterno o

materno (XP o Xm) . Una vez que se establece la inactivación, el mismo cromosoma continuará

inactivo en las células hijas descendientes.

2. 3 . INACTIVACIÓN MOLECULAR DEL CROMOSOMA X

Se va dar por medio de la transcripción del gen xist que va recubrir todo el cromosoma x

desencadenando una serie de modificaciones epigenéticas:

-Des-acetilación de histonas

-Metilación de K27 de H3

● Replicación tardía

● Reclutar una nueva histona macroH2A

● Todos estos cambios van hacer que el cromosoma se convierta en heterocromatina

facultativa y por tanto quede silenciado.

NOTA:Se inactiva uno de los cromosomas para compensar la dosis génica

2.4. Anomalías numéricas y su relación con el corpúsculo de barr

Cariotipo Masa N° de Fenotipo

cromatínica corpúsculos

46,XX 0 Varón normal

47,XYY 0 Sindrome de “Super Macho”

45,X 0 Síndrome de turner

46,XX 1 Mujer normal

47,XXY 1 Síndrome de Klinefelter

47,XXX 2 Sindrome de “Super hembra”

48,XXXY 2 Variante de Klinefelter

2,4,1 Síndrome del “Super Macho”
El 47,XYY usualmente ocurre como evento aleatorio durante una formación del

espermatozoide.Esta anomalía rara vez se hereda a la descendencia.Un error en la división celular

durante la metafase II de la meiosis, llamada no disyunción meiótica, puede dará como resultado

un espermatozoide con una copia extra del cromosoma Y.Si uno de estos espermatozoide atípicos

contribuye a la formación genética del niño, este tendrá un cromosoma Y extra en cada célula de

su cuerpo.En algunos casos, la adición del cromosoma Y extra resulta de la no disyunción durante

la división celular postcigótica en el desarrollo embrionario temprano.Esto puede producir

46,XY/47,XYY.

2.4.2 Síndrome de “Super hembra”

El síndrome de triple X es caracterizado por la presencia de un cromosoma X adicional, es decir

tres copias del cromosoma x en lugar de 2. La trisomía X suele ser consecuencia de un problema

durante la separación de ambos miembros de un par de cromosomas en la división celular (no

disyunción en la meiosis) , aunque en un 20% de los casos se debe a una falta de disyunción

postcigótica.

2.4.3 Síndrome de turner

El síndrome de Turner es un trastorno genético que se presenta en las niñas. Provoca que sean

más bajas que el resto y que no maduren sexualmente a medida que alcanzan la edad adulta. La

gravedad de estos problemas varía entre los individuos afectados.A veces, se produce un error

durante la formación del óvulo o del espermatozoide, y esto causa la ausencia de un cromosoma

sexual. Cuando esta célula no puede otorgar el cromosoma sexual al embrión, y por lo tanto existe

solo un cromosoma sexual X en el feto, el resultado es el síndrome de Turner. El hecho de tener

una sola copia de un cromosoma determinado, en lugar del par habitual, se denomina

"monosomía".
2.4.4 Síndrome de Klinefelter
Trastorno genético de los varones que ocurre cuando hay más cromosomas X que lo normal. Los

varones con este trastorno a veces tienen mamas más grandes que lo normal, poco vello en la cara

y el cuerpo, figura corporal redondeada y testículos pequeños. El SK no se hereda, pero

generalmente ocurre como un evento aleatorio durante la formación de células reproductivas

(óvulos y espermatozoides) que resulta en la presencia de una copia extra del cromosoma X en

cada célula (47, XXY).

*Anomalías estructurales y su relación con el corpúsculo de Barr.

Anomalía estructural del Masa cromatínica Tamaño

cromosoma X

Ninguna Normal

Deleción Pequeño
Cromosomas en anillo
Isocromosoma

Isocromosoma Grande
Duplicación

2. 5 Deleción
Es la pérdida de segmentos de un cromosoma o de una cantidad muy pequeña de material que

puede incluir solo un gen. Algunos ejemplos: Síndrome de Prader-Willi: deleción en el cromosoma

15 de origen paterno. Síndrome de Angelman: deleción en el cromosoma 15 de origen materno.

2. 6 Cromosomas en anillo
Un cromosoma en anillo ocurre después de la rotura en ambos brazos de un cromosoma, seguida

de la fusión de los extremos rotos para completar el anillo

2.7 Isocromosoma
Cromosoma metacéntrico anormal que se produce durante la meiosis o mitosis, cuando la división

del centrómero se produce según el plano horizontal en vez de vertical. Ambos brazos del

isocromosoma son genéticamente idénticos pero en sentido inverso.

2. 8 Duplicación
Las duplicaciones ocurren cuando parte de un cromosoma se copia (duplica) en forma anormal.

Este tipo de cambio cromosómico da como resultado copias adicionales de material genético del

segmento duplicado

Cromosoma en anillo Isocromosoma Duplicación Deleción

3.0 MATERIALES:

Microscopios

Solución de acetato de orceina

.Lámina portaobjetos
.Lámina cubreobjetos

. Carbolfucsina

Alcohol
4.0 PROCEDIMIENTO:

4.1 TOMA DE MUESTRA

Paso 1: limpieza de la mucosa bucal y raspado en nuestro caso lo hicimos con una lámina.

Paso 2: se realiza el extendido y se deja secar

4.2 FIJACIÓN, HIDRÓLISIS Y COLORACIÓN:

paso 3: fijación con Alcohol de 96°, 15 minutos
paso 4: Hidrólisis en HCL 5N POR 25 o 30 minutos y luego enjuagar en agua corriente

Paso 5: Coloración con Carbol Fucsina por 8 minutos

Paso 6: Decoloración con alcohol de 96°, realizar 2 pasadas de 5 segundos y dejar secar para
proceder a su lectura.
5.0 RESULTADOS : OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

NÚCLEOS ENCONTRADAS Y CORPÚSCULOS DE BARR EN LA PRÁCTICA:

6.0 LECTURA : INTERPRETACIÓN DE LA CROMATINA SEXUAL

CRITERIOS PARA CONTEO DE CORPÚSCULO DE BARR:

1.- No se cuenta:
● Núcleos superpuestos, con borde irregular ,irregular cromatina o doblados

● Campos con abundante celularidad

● Hiper Picnóticos
2.-El recuento se hace en base a 100 células

● Valores normales : 20 - 40 % en Mujeres

OTRAS TÉCNICAS DE COLORACIÓN PARA LA OBSERVACIÓN DE CORPÚSCULO DE BARR

Los cuerpos de Barr pueden teñirse mediante una gran cantidad de colorantes como:

● Tionina
● Hematoxilina
● Verde de metilo
● Técnica de Feulgen
2. Preparación del carbolfucsina:

● SOLUCIÓN A: Fucsina básica 3g +100 ml alcohol al 70%

 ● SOLUCIÓN B:
❖ 10 ml de solución A o solución madre
❖ 90 ml Fenol al 5%
❖ 10 ml Ácido acético
❖ 10 ml de formol al 37 %

7.0 CONCLUSIONES

● El corpúsculo de Barr es una masa condensada de heterocromatina sexual que se

encuentra en el núcleo de las células somáticas de las hembras, específicamente en la

superficie interna de la membrana nuclear, lo cual es visible durante la interfase del ciclo

celular.

● Los corpúsculos de Barr fueron vistos por medio de la técnica de acetato de orceína al

revisar en el microscopio el portaobjeto con la muestra, después de haber realizado todo el

proceso se podrá ver una porción de cromatina adherida a la superficie inferior de la

membrana.

● Esta práctica fue de gran utilidad pues aprendimos a través de una técnica sencilla poder

reconocer los corpúsculos de Barr para que más adelante podamos reconocer las

diferentes anomalías genéticas .

 Cuestionario: Casos de interpretación

Escribe el o los probables cariotipos y su diagnóstico citogenético de los siguientes casos de

resultados de estudios de cromatina sexual o Corpúsculo de Barr (CB):

a. Paciente con fenotipo femenino con CB positivo 12%.
● Probabilidades (cariotipo) 45,x/46,xx - Síndrome de Turner

● Dx Citogenético: Mosaico de Síndrome de Turner

SÍNDROME DE TURNER : Trastorno cromosómico en el que una mujer nace con un cromosoma

X . o en algunas mujeres tienen ambos cromosomas o les falta un pedazo de estas.

El síndrome de Turner es llamado síndrome de Turner en mosaico (cuando algunas células

tienen un cromosoma X y algunas tienen dos cromosomas X) que es causado por un error

aleatorio en el desarrollo fetal temprano (poco después de la concepción).

b. Paciente con fenotipo femenino con CB únicos 25% y CB dobles 15%.
● Probabilidad (cariotipo) : :46,XX/47,XXX

● Dx Citogenético: Mosaico de super hembra

Mosaico de Super Hembra:Anomalía cromosómica en la que la mujer posee un cromosoma de

más.Este síndrome es la anomalía cromosómica más común entre mujeres y afecta a una de cada

mil nacidas. Pero la mayoría de las mujeres que padecen esta anomalía no presentan ningún

síntoma o simplemente presentan una leve afectación. Según estudios realizados, se estima que

sólo un 10% de los casos de esta patología se han diagnosticado.

c. Paciente con fenotipo femenino con CB positivo 10%, pero estos corpúsculos son pequeños
● Probabilidad (cariotipo) : 45,X / 46,XX

● Diagnóstico Citogenético: Síndrome de turner con una deleción

Deleción : Algunas mujeres con síndrome de Turner tienen dos cromosomas X, pero a uno de

ellos le falta una pieza (tiene una deleción). En este pedazo que falta hay genes específicos y la

falta de estos genes puede resultar en el síndrome de Turner.

d. Paciente con fenotipo femenino con CB positivo 28% pero estos corpúsculos son grandes.

● Probabilidad (cariotipo) : 46,XX

● Diagnóstico Citogenético: Alteración a nivel estructural de un cromosoma Duplicación

Duplicación:El término "duplicación" significa simplemente que parte de un cromosoma está

duplicado, o presente en dos copias. Dado que una parte muy pequeña de un cromosoma puede

contener muchos genes diferentes, el material genético extra presente en una duplicación

puede causar que esos genes no funcionen correctamente. Como consecuencia de estas

"instrucciones adicionales", pueden producirse errores en el desarrollo de un bebé.

e. Paciente con fenotipo femenino con CB doble 25% y CB triple 22%.
● Probabilidad (cariotipo) : 47,XXX/48,XXXX

● Diagnóstico Citogenético:Síndrome de “Super Hembra”/ Tetrasomia X

f. Recién nacido con genitales ambiguos con CB positivo 30%.

● Cariotipo:46, XX

● Dx Citogenético: Síndrome del varón

Sindrome del Varon: El síndrome del varón 46XX es un trastorno de la diferenciación sexual en

el que existe una discordancia entre el sexo cromosómico (femenino), y el fenotipo y el tipo

gonadal, que son masculinos. Los varones 46XX pueden dividirse en dos categorías: los que

tienen cantidades variables de secuencias del cromosoma Y, y los que no las presentan, que

constituyen tan solo el 10% de los casos

g. Recién nacido con genitales externos femeninos, con ecografía que evidencian testículos,
presentan CB negativo.
● Cariotipo: 46, XX

● Diagnóstico Citogenético: Pseudohermafroditismo femenino

Disgenesia: ( Pseudohermafroditismo femenino)Trastorno del desarrollo embrionario que impide

la maduración completa del tejido gonadal en su diferenciación hacia testículo u ovario.

La disgenesia gonadal mixta es un trastorno del desarrollo sexual en el que las gónadas son

anormales porque hay algunas células con cromosomas XY y algunas con un solo cromosoma X,

lo que se conoce como mosaicismo del cromosoma Y. Esto causa una amplia gama de genitales

masculinos/femeninos que no son típicamente, o claramente, masculinos o femeninos. Los niños

con este trastorno pueden tener una o dos gónadas que pueden no descender y/o no ser fáciles

de identificar como testículos típicos.

 Pseudohermafroditismo femenino
● Hiperplasia suprarrenal congénita

● Aplasia muelleriana

● Agenesia ovárica y trompas de falopio

● Falla Ovárica temprana

h. Recién nacido con genitales externos masculinos, con ecografía que evidencian ovarios,
presenta CB positivo 25%.
● Cariotipo: 46, XY
● Diagnóstico Citogenético: Pseudohermafroditismo masculino

Disgenesia: (Pseudohermafroditismo masculino): Desarrollo testicular de rudimentario a

normal, producción inadecuada de testosterona
i. Paciente con fenotipo masculino presenta corpúsculo de Barr único positivo 26% pero además
presenta doble corpúsculo Y . Escriba ud el o los probables cariotipos, asi como los dx
citogenéticos.
● Cariotipo:46, XX/ 47,XXX
● Dx Citogenético: Mosaico de síndrome de “Superhembra”

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

https://embriotareas.weebly.com/uploads/5/8/9/7/58970755/2._corp%C3%BAsculo_de_barr.pdf

https://www.scielo.cl/pdf/ijmorphol/v28n4/art17.pdf

https://es.wikipedia.org/wiki/Orce%C3%ADna#:~:text=Es%20una%20sustancia%20que%20se,los
%20cromosomas%20en%20divisi%C3%B3n%20celular.

https://www.youtube.com/watch?v=EUFWEqGm8WA&ab_channel=GEN%C3%89TICADRRANGEL

https://es.khanacademy.org/science/biology/classical-genetics/sex-linkage-non-nuclear-chromoso
mal-mutations/a/x-inactivation

https://www.stanfordchildrens.org/es/topic/default?id=structuralabnormalitiesdeletionscriduchata
ndduplicationspallisterkillian-90-P05254

https://rarediseases.info.nih.gov/espanol/11866/sindrome-de-triple-x

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