LABORATORIO DE BIOREACTORES

PRACTICA 1

PRESENTACIÓN DE BIORREACTORES DIVERSOS

El biorreactor puede considerarse como el corazón de todo proceso biotecnológico, ya

que en él se puede llevar la transformación de la materia prima al producto de interés y
su operación deberá garantizar la maximización en la conversión.
Los biorreactores se clasifican en:
BIORREACTORES AGITADOS: Es muy empleado, empleado en escalas de producción,
laboratorios e industrias.
BIORREACTORES DE COLUMNA: Carece de sistema de transformación mecánica para
mezclar el caldo del cultivo.
BIORREACTORES DE CIRCULACION: Se clasifican en dos grupos la circulación externa e
interna.

 EXTERNA: El líquido es inducido a circular por un brazo lateral conectado al

cuerpo principal del biorreactor.
 INTERNA: El líquido circula de forma definida sin salir del cuerpo principal del
reactor.

PRACTICA 2

INSTRUMENTACION PARA EL SEGUIMIENTO Y CONTROL DE LA

BIORREACCIÓN

Estos se utilizan para facilitar el registro y análisis de variables de operación y

parámetros específicos.
Si hace necesario el uso de una determinada fuerza para modificar el estado de una
válvula se requiere de un “traductor” y de un “actuador”. El transductor es un dispositivo
que convierte un tipo de energía en otro tipo de energía, mientras que los actuadores
son dispositivos capaces de generar una fuerza a partir de energía eléctrica.
Las propiedades más comunes que se miden en un biorreactor están las siguientes:
 Temperatura
 Ph
 Flujo de aire
  Presión
 Espuma
 Concentración celular, etc.

PRACTICA 3

SERVICIOS AUXILIARES

Necesarios en la operación de un biorreactor donde incluyen aire comprimido, gases

comprimidos, agua de enfriamiento, vapor de planta y energía eléctrica.
AIRE: Indispensable para varios usos de un biorreactor. El aire debe ser seco y libre de
aceite. Incluso cuando el proceso no se afecte por la introducción de microorganismos
ajenos, será necesario que este sea estéril.
En la actualidad para la esterilización del aire que se introducirá al biorreactor se utilizan
prefiltros y filtros absolutos.
VAPOR: El vapor limpio y puro se utiliza en el procesamiento de alimentos y medicinas,
en la esterilización de productos y equipos. El vapor de planta es utilizado como el medio
principal de calentamiento en miles de industrias y para la generación de energía
eléctrica.
EXISTEN DOS TIPO DE GENERADORES DE VAPOR:

 Generadores de Tubos de Agua.

 Generadores de Tubos de Humo.
AGUA DE ENFRIAMIENTO: Esta agua, a diferencia del agua de proceso, nunca entra en
contacto con las materias primas o productos de la biorreacción, ni con las superficies
en contacto con estos.
AGUA PARA SERVICIOS VARIOS: Esta agua se utiliza para las operaciones de lavado y
limpieza del biorreactor y del área de proceso.
ENERGIA ELÉCTRICA: tiene como objetivo proporcionar la energía para accionar
bombas, compresores, motores eléctricos y otros equipos mecánicos.
PRACTICA 4

TIEMPO DE MEZCLADO EN BIORREACTORES

TANQUE AGITADO: La agitación conocida como el caldo de cultivo que se lleva a cabo
de dos formas. La agitación y aireación en un biorreactor se realiza para alcanzar los
propósitos.

 Suministrar el oxígeno necesario a los microorganismos.

 Mantener en suspensión a los microorganismos.
COLUMNA: En los biorreactores de columna la agitación del caldo de cultivo se lleva a
cabo mediante el movimiento ascendente de las burbujas de aire. El número y tamaño
de las burbujas de aire dependen de la velocidad de aireación, de las propiedades físicas
del caldo de cultivo, del tipo de dispersor, etc.
AIRLIFT: Tienen forma de columna o torre, en su interior tienen al menos dos zona, una
de flujo ascendente y otra de flujo descendente. El movimiento del líquido se debe a
que en dichas zonas la densidad de la dispersión gas-liquido es diferente porque hay
mayor cantidad de aire en la zona de flujo ascendente que en la de flujo descendente.

PRACTICA 5

TRANSFERENCIA DE OXIGENO EN BIORREACTORES AGITADOS Y

NEUMATICOS

TANQUE AGITADO: La velocidad de transferencia de oxigeno de un biorreactor de

tanque agitado depende de las condiciones de aireación y agitación y las propiedades
físicas de caldo de cultivo.
Las conversiones microbianas aeróbicas son reacciones de oxidación que requieren
oxigeno molecular disuelto. La transferencia de oxigeno puede ser uno de los principales
factores limitantes de la productividad celular.
COLUMNA: Este fenómeno conocido como coalescencia de las burbujas, es causado por
el hecho de que una película liquida entre dos burbujas de aire adyacentes se hace cada
vez más delgada hasta que eventualmente se rompe.
AIRLIFT: Si el oxígeno molecular no fuera continuamente transferido del aire al caldo de
cultivo de microorganismos, el oxígeno seria consumido en pocos segundos bajo
condiciones de fermentación.
PRACTICA 6

MANTENIMIENTO DE ASEPSIA EN BIORREACTORES

Se considera como procedimientos destinados a eliminar o retirar microorganismos de

un biorreactor y de todas las tuberías conectadas a él. La asepsia del biorreactor y de
tuberías asociadas a él, garantizan que los procesos de bioconversión se lleve a cabo sin
contaminantes por microorganismos extraños.
Para lograr este mantenimiento se deben proponer desde la etapa de diseño, una
geometría interna y arreglos de tuberías que eviten la acumulación de substancias al
llevar a cabo el vaciado de ellos. Existen diferentes métodos para probar la integridad
de filtros, como la prueba de intrusión del agua.

PRACTICA 7

ESTERILIZACIÓN DEL SISTEMA DE BIORREACCIÓN

Una esterilización adecuada del medio de cultivo es importante para garantizar el éxito
de muchas fermentaciones industriales. La técnica más común es la destrucción de los
microorganismos contaminantes, donde destrucción significa la perdida de viabilidad de
microorganismo. Los métodos pueden ser:

 Calor
 Agentes químicos
 Radiaciones
 Vibraciones sónicas
CINÉTICA DE MUERTE TÉRMICA DE MICROORGANISMOS: se clasifica en:

 Velocidad de muerte logarítmica.

 Velocidad de muerte no logarítmica.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE CINÉTICA DE MUERTE: la teoría más
frecuentemente empleada es la teoría de Arrhenius, considerando la muerte térmica de
los microorganismos de manera simular a las reacciones químicas.
ESTERILIZACION POR LOTE: El medio se coloca en el fermentador y el contenido de
calienta a la temperatura de esterilización asignada.
El ciclo de esterilización está formada por tres periodos:

 Elevación de temperatura o calentamiento.

 Mantenimiento de temperatura.
 Descenso de temperatura o enfriamiento.
PRACTICA 8

PRODUCCIÓN DE BIOMASA EN CULTIVO POR LOTE

Los sistemas fermentativos se clasifican en tres grupos:

 Cerrados
 Abiertos
 Sistemas semicerrados
La gran mayoría de las fermentaciones a nivel industrial se llevan a cabo en cultivo
por lote, esto consiste en agregar al fermentador un medio de cultivo que contiene
los nutrientes necesarios para el crecimiento del microorganismo o para la
producción de un metabolito.
El cultivo por lote tiene la particularidad de que todos los parámetros cinéticos
varían con el tiempo de fermentación.
METODOS ANALITICOS

 Determinación de la concentración celular (X)

 Determinación de azucares reductores por DNS

PRACTICA 9

PRODUCCIÓN DE BIOMASA EN CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO

Como toda resolución de sistemas de ecuaciones, la resolución del sistema de

ecuaciones diferenciales que describen este cultivo, nos dará las funciones (x, s, p)= f(t),
es decir, podremos conocer, a cualquier tiempo del cultivo, los valores de la
concentración de biomasa, sustrato residual y del metabolito de interés. Dado de todas
las variables son dependientes del tiempo, no existe solución analítica al sistema de
ecuaciones diferenciales del tiempo, no existe solución analítica al sistema de
ecuaciones diferenciales, por lo que debe resolverse utilizando algún método numérico.
Sin embargo se pueden encontrase dos soluciones particulares a este sistema bajo las
siguientes condiciones.

 El suministro del sustrato limitante es mayor que lo demandado por el

microorganismo.
 El suministro del sustrato limitante es menor que lo demandado por el
microorganismo.
En el primer caso puede existir acumulación y desacumulación de la concentración
de sustrato residual, durante el tiempo necesario para alcanzar el volumen final del
 biorreactor. En el segundo caso, como la demanda es mayor que el suministro el
sustrato limitante suministrado es completamente consumido por el
microorganismo.

PRACTICA 10

PRODUCCION DE BIOMASA EN CULTIVO CONTINUO

El cultivo continuo simple etapa pertenece al grupo denominado sistemas
fermentativos abiertos. En este sistema hay una entrada y salida de materiales.

 Suministro continuo de nutrientes

 Salida continua de biomasa
 Sustrato residual
 Producto
En estos estudios se propuso la Teoría de Quimiostato, la cual a grandes rasgos,
establece que al trabajar un volumen constante en cultivo continúo y después de un
determinado tiempo este alcanza un estado de equilibrio dinámico donde las
concentraciones de biomasa, sustrato residual y producto permanecerán constantes en
el tiempo.
En un Quimiostato una vez que se ha alcanzado el estado de equilibrio, se crean
ambientes constantes que permiten mantener indefinidamente un determinado estado
fisiológico del microorganismo.

TEORIA
BIORREACTORES

BIOPROCESOS: Uso de organismos vivos o partes de ellos para la producción de bienes

y servicios.
CAMBIOS EN EL ENTORNO AGROALIMENTARIO: Estés cambios se refieren a:

 La apertura de las economías.

 Cambios en los patrones de consumo de alimentos y demanda de alimentos.
 Creciente problema de pobreza rural y de marginalización del sector rural.
 Creciente problema relacionado con el manejo sostenible del medio ambiente y
de los recursos naturales.
 Cambios en el papel del Estado y de la sociedad civil.
LA INVESTIGACION AGRICOLA INTERNACIONAL EN UN MUNDO GLOBALIZADO
La estructura de la demanda por alimentos está cambiando drásticamente debido a tres
factores que se refuerzan entre sí.

 El creciente grado de urbanización

 Un creciente nivel de ingresos
 Cambios en el estilo de vida
Los bioprocesos o procesos biológicos constituyen una tecnología esencialmente
multidisciplinaria y basada en la ciencia y la tecnología que permite diseñar y producir
nuevas moléculas, nuevos productos y nuevos procesos.
BIOPROCESOS EN INDUSTRIAS DE ALIMENTOS
La producción de alimentos e ingredientes alimentarios utilizando técnicas
fermentativas denominadas bioprocesos, están presentes desde los primeros registros
históricos del hombre.
ALIMENTOS Y SALUD HUMANA
Los bioprocesos en alimentos están cada vez más relacionados con la salud humana o
de manera más amplia, se avanza en el uso y diseño de los alimentos como “primer
medicamento”.
TIPOS DE FERMENTADORES:
Un fermentador es un recipiente de vidrio o acero inoxidable si el uso es farmacéutico
o de material menos noble, como acero al carbono, en el caso de aplicaciones menos
exigentes en pureza. Un fermentador aparte de asegurar que la operación se
desempeñe en forma aséptica, debe responder a tres requisitos principales: mezcla
adecuada, buena transferencia del oxígeno del aire al microorganismo y remoción del
calor.
Los tipos de fermentadores son:

 Estanques aireados agitados

 Reactores tubulares (Air-lift)
 Estanques a recirculación
ETAPAS PARA LA OBTENCION DE UN PRODUCTO MICROBIANO
SON:

 Producción del biocatalizador o starter

 Preparación del medio de cultivo
 Esterilización del medio de cultivo
 Síntesis del producto
MANTENIMIENTO O CONSERVACION DE LOS CULTIVOS:
Los métodos de preservación o mantenimiento más importantes son los siguientes:
  Subcultivos
 Mantenimiento bajo capa de aceite
 Congelación
 Cultivos en tierra
 Preservación en celulosa
 Liofilización

MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Constituye una de las operaciones más utilizadas por la ingeniería alimentaria y la

biotecnología por lo cual es importante conocer la forma de cuantificación de los
mismos, sus formas de aplicación, las ventajas y desventajas de los diferentes métodos.
El cálculo del número de células que existen en una suspensión se puede llevar a cabo
mediante el recuento celular, masa celular o actividad celular. Todos los métodos se
clasifican en dos apartados.

 Métodos directos
 Métodos indirectos
PESO SECO CELULAR.- El peso seco de las células bacterianas que se encuentran e una
suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105 ◦C hasta peso
constante.
ABSORCION.- Cuando un haz de luz paralelo golpea una partícula en suspensión, parte
de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida.
Los métodos de dispersión de la luz son las técnicas más utilizadas para monitorear el
crecimiento de los cultivos bacterianos.
PESO HÚMEDO.- Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego
de la separación de las células por filtración o centrifugación. La desventaja es que el
diluyente queda atrapado en el espacio intercelular.
VOLUMEN DE CÉLULAS EMPACADAS Y NUMERO DE CÉLULAS.- Existen dos formas para
determinar el número total de microorganismos en una muestra.

 Recuentro microscópico de partículas

 Recuentro electrónico de partículas
 SISTEMA DE CULTIVO

CULTIVO DE BATCH
La evolución del cultivo en el tiempo, sigue una curva típica la cual recibe el nombre de
“curva de crecimiento en batch”.
Durante la fase estacionaria la concentración microbiana permanece constante.
CULTIVO CONTINUO
Este método ofrece mayores posibilidades de control. Por sus características especiales
permite controlar el proceso a un valor de velocidad específica de crecimiento prefijado
de manera muy simple.