Metodología
- Organización del laboratorio y
bioseguridad.
Se realizó un recorrido por cada
área básica del laboratorio,
empezando por el área de
almacenamiento, pasando hacia el
área de lavado y esterilización y
posteriormente se finalizó el
recorrido por el área de preparación
de medios de cultivo, siembra e
incubación. Se tomó nota de cada
uno de los componentes y equipos
de las áreas de trabajo así como los
materiales utilizados en cada una de
ellas, por último se determinó su
función y la labor que cumple dentro
del laboratorio de cultivo de tejidos
vegetales in vitro.
- Asepsia y esterilización.
Se realizó la lectura sobre los
objetivos principales de la practicas,
posteriormente se procedió a dejar
en claro conceptos fundamentales
para el desarrollo de la misma, por
último se procedió a realizar un
taller donde se dejaran en claro los
conceptos estudiados en el
laboratorio.
- Medios de cultivo.
Al igual que la práctica anterior se
realizó en primera instancia la
lectura sobre los objetivos
principales de la práctica,
posteriormente se establecieron y
definieron conceptos fundamentales
para la realización y preparación de
medios de cultivo y por último se
procedió a realizar ejercicios de
profundización para la preparación
de medios en condiciones reales de
laboratorio.
Resultados
Discusión de resultados
- Organización del laboratorio y
bioseguridad.
El éxito para la producción y
crecimiento de las plantas en
condiciones in vitro depende de
cómo estén distribuidas cada una
de las áreas en un laboratorio, están
tienen que estar dividas
esquemáticamente en áreas
separadas para las diferentes
funciones a realizar en él,
igualmente en la práctica como se
puede evidenciar en el laboratorio
de morfogénesis de tejidos
vegetales de la universidad Incca de
Colombia algunas de las funciones
pueden desarrollarse en un mismo
ambiente, como es el caso del área
de lavado y esterilización donde lo
ideal es tener en cuartos separados
el material contaminado del material
ya esterilizado y limpio y estos se
encuentran en una misma área.
(Roca, et.al, 1991)
Otro de los puntos a discutir es que
por lo general todas las áreas del
laboratorio para el cultivo de tejidos
deben estar contiguas una a la otra
para evitar posibles contaminantes
en cada una de las etapas por las
que pasan tanto los recipientes
como el material vegetal a sembrar
y ya cultivado, el laboratorio en
nuestra universidad por su
infraestructura cada una de las
áreas se encuentra separada, por lo
que esto conlleva a un mayor riesgo
de contaminación del material
vegetal utilizado así como cada uno
de los materiales utilizados en la
siembra, por lo cual en estas áreas
se deben manejar cada uno de los
procesos con la mayor y mejor para la proliferación de
asepsia posible con el fin de evitar microorganismos, estos pueden
estos posibles inconvenientes. destruir tales cultivos, competir con
(Roca, et.al, 1991) el explante por el medio de cultivo o
modificarlo, en ello radica la
por ultimo cabe discutir que el área
importancia de la asepsia en un
donde se encuentra la cámara de
laboratorio de cultivo de tejidos
flujo laminar (área de preparación y
vegetales, el evitar tales
siembra) esta debe encontrarse a
contaminaciones es un aspecto
distancia de las compuertas de
básico para el éxito no solo del
ingreso y salida, esto con el fin de
establecimiento y siembra del
que en ellos no ingrese el más
cultivo si no en su posterior
mínimo de corriente de aire y así se
incubación y manipulación (Roca,
prolongue la vida útil de los filtros,
et.al, 1991). En el caso del
no sucede esto en el laboratorio de
laboratorio de cultivos vegetales de
cultivo de tejidos vegetales de la
la Universidad Incca De Colombia
universidad Incca de Colombia, la
se deben tener en cuenta aspectos
cámara de flujo laminar se
para lograr una asepsia eficaz como
encuentra por la infraestructura de
lo son: que el ambiente donde se va
la universidad se encuentra muy
a realizar el cultivo sea el adecuado,
próxima a las compuertas de
aunque el área de preparación y
entrada y salida, esto genera
siembra cuenta con ciertos puntos a
riesgos de contaminación por los
corregir se tienen los elementos
constantes flujos de aire que
necesarios para evitar
pueden ingresar por los filtros de la
contaminantes, esterilización de
cámara lo que demanda un más alto
medios de cultivo, con el correcto
nivel de asepsia y limpieza
uso del autoclave ubicado en los
ambiental en dicha zona, de la
laboratorios, realizar la correcta
misma manera en el área de
desinfección del material a utilizar y
preparación de medios es necesario
del lugar de trabajo y por último
que se encuentre una nevera, dicho
realizar el cultivo en la cámara de
equipo se encuentra en nuestros
flujo con las condiciones asépticas
laboratorios en el área de
correctas. (Alvarado, 1998)
almacenamiento, otro punto que
puede incurrir a contaminación en Por ultimo para cumplir con éxito
este caso de los medios de cultivo cada uno de los aspectos anteriores
que tienen un desplazamiento en el laboratorio de cultivo de tejidos
mayor hacia el área de siembra vegetales de nuestra universidad se
quedando expuestos a cualquier debe entonces:
tipo de contaminante ambiental.
Monitorear fuentes de
(Toledo, et.al, 1998)
contaminación con la inspección
- Asepsia y esterilización. regular del aire en el laboratorio, la
esterilidad del medio preparado y el
La asociación explante-medio y las
funcionamiento correcto del
condiciones físicas en que
autoclave, cámara de flujo e
normalmente se incuban los cultivos
instrumentos y materiales utilizados.
conforman un ambiente propicio
Establecer organismos indicadores Roca, W., Mroginski, L., 1991.
de contaminación, con la Cultivo de tejidos en la agricultura,
determinación de tasas de fundamentos y aplicaciones, Centro
contaminación por línea vegetal internacional de agricultura tropical,
individual. Cali.
Garantizar que cada ciclo de Toledo, J., Espinoza, N., Golmirzaie,
autoclaveo se lleve a cabo con la A., 1998. Cultivo de tejidos, Centro
temperatura adecuada. internacional de la Papa, Lima.
- Medios de cultivo.
La importancia en la preparación de
los medios de cultivo radica en la
correcta preparación de las
soluciones que darán lugar a el
medio, utilizar la cantidad apropiada
o no determinara que tan exitoso
será el crecimiento del cultivo
vegetal o por si el contrario tendrá
un efecto negativo en el cultivo,
cabe tener en cuenta que ya sea
cual sea el medio que utilicemos
para realizar el cultivo de tejidos
vegetales, la elección de este y su
formulación dependerá del objetivo
al cual se enfoque con alguna de las
técnicas del cultivo de tejidos
vegetales y de la especie o tipo de
planta con la cual se va a trabajar.
(Alvarado, 1998)
Bibliografía
Alvarado, Y., 1998. Contaminación
microbiana en el cultivo in vitro de
plantas, In Pérez JN ed.
Propagación y mejora genética de
plantas por biotecnología. Instituto
de Biotecnología de las plantas,
cuba.
Biondi, S., Thorpe, T., 1981.
Requirements for a tissue culture
facility. En Thorpe, T., Plant tissue
culture: Methods and applications in
agricultures. Academic Press,
Nueva York, pp: 1-20.