Linfocitos B

Alfredo Prieto Martín

Área de Inmunología, Universidad de Alcalá
alfredo.prieto@uah.es
Unidad mixta
jorge.monserrat@uah.es CSIC/UAH

23/03/2009 1
Inmunología

Linfocitos B vs. Linfocitos T

B T

Requiere No Si
presentación
Origen ag extracell intracell

Naturaleza Ag Proteína nativa Péptido

desnaturalizado
Secreción Si No
Receptor
Afinidad Alta Baja
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Inmunología

1
 Plan de las clases sobre linfocitos B
• I. Introducción: Definición e importancia
• II. Ontogenia y diferenciación de los linfocitos B
– Diferenciación en Órganos linfoides primarios
• Generación de receptores exclusivos para cada clon
• Repertorio reactivo pero autotolerante
– Diferenciación en Órganos Linfoides Secundarios
• Control, redundancia, eficiencia, especialización y memoria
• III. Subpoblaciones de células B
– B1 vs. B2
– FO vs. MZ
– Diferenciación terminal en células plasmáticas.
– Papel inmunomodulador de las células B.
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Inmunología

Linfocitos B, importancia fisiológica

• Tienen reordenados los genes del BCR.
• Importancia
1. Secretoras de anticuerpos responsables de
inmunidad humoral.
2. Capturan y Presentan antígenos a linfocitos T.
3. Responsables de la memoria inmune humoral.
4. Contribuyen a la especialización funcional de los
linfocitos T.

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Inmunología

2
 Importancia de los linfocitos B en
patología
• Los defectos en su función:
1. Pueden producir inmunodeficiencia
2. Pueden contribuir a la autoinmunidad produciendo
autoanticuerpos y a la alergia produciendo IgE
alergeno específica
3. Su transformación origina patología tumoral:
mielomas, leucemias y linfomas de células B

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Inmunología

II. Ontogenia y diferenciación de

linfocitos B
1. Diferenciación precursores de células B en OLP
1. Etapas iniciales.
2. Generación de receptores diversos: recombinación somática.
3. Puntos de control: eliminación de células con receptores
inviables (Cadenas substitutas) o autorreactivos (selección
negativa).
4. Segundas oportunidades (Edición de receptores y
reordenamiento de alelos alternativos).
2. Diferenciación de linfocitos B en OLS
1. Cambios de isotipo.
2. Hipermutación somática y selección por afinidad.
3. Respuestas foliculares y extrafoliculares.

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Inmunología

3
 El desarrollo células B asegura:
1. la polirreactividad del repertorio y
2. la discriminación entre lo propio y lo extraño
1. Desarrollo progenitores en entornos asépticos libres de
antígenos extraños
1. La ausencia de antígeno reconocido por BCR permite su
diferenciación a célula B madura (B2)
2. El reconocimiento de antígeno dirige a apoptosis (edicion
receptores) o diferenciación en B1 autoreactiva inhibidora.
2. Repertorio seleccionado es expuesto en periferia a
antígenos propios y extraños
1. Reconocimiento de antígeno en ausencia de coestímulo impide
su diferenciación en células secretoras de anticuerpos
• Componentes activados del complemento
• Cooperación T 7
23/03/2009 Inmunología

Mecanismos de generación de
diversidad en BCR
1. Recombinación de segmentos génicos de locus
H y L. (combinatorial)
2. Introducción de bases en los puntos de corte
(aleatoria, desoxitransferasa terminal).
3. Edición de cadenas.
4. Hipermutación somática de regiones
hipervariables.
5. Combinación de cadenas H y L.

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Inmunología

4
 Procesos genéticos implicados en la producción de Abs
Proceso Función
Reordenamientos de los segmentos Generación de un repertorio de
variables de cadenas ligeras y receptores amplio y polirreactivo
pesadas.
Exclusión alélica Una célula debe ser
monoespecífica
Edición del receptor (reordenamientos Una célula merece segundas
sucesivos mismo alelo) oportunidades
Reordenamiento del alelo alternativo
Coexpresión de dos isotipos por Una célula puede tener dos
procesamiento alternativo receptores con distinta H pero la
misma especificidad
Cambio de isotipo Especialización en la producción
de isotipos 9
23/03/2009 Inmunología

Diferenciación de células B

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Inmunología

5
 Factores de crecimiento

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Inmunología

Inicio diferenciación
1. Célula madre embrionaria totipotencial
2. Células madre hematopoyetica pluripotencial
3. Autorenovación división asimétrica:
1. Una célula hija se diferencia
2. Otra se mantiene pluripotencial

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Inmunología

6
 Reordenamientos génicos, estadios y
puntos de control
1. 4.
ProB temprana PreB pequeña
2. Reordena
ProB tardia Ligera VJ

3.
PreB grande 5.
Célula B
inmadura
I. preBCR
Cadena μ con II. BCR
pseudo Cadena μ con
Cadena Cadena
vpreB ligera
lambda 5
III. Selección negativa por autoantígeno
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Inmunología

ORGANIZACIÓN GENÓMICA DE LOS LOCI DE

LAS CADENAS PESADA Y LIGERA DE
INMUNOGLOBULINA

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Inmunología

7
ETAPAS ENZIMÁTICAS EN EL REORDENAMIENTO DE
LOS SEGMENTOS GÉNICOS DE Ig

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Inmunología

Estadios de diferenciación en
Órganos linfoides primarios (OLP)

Procesos genéticos

Receptores expresados en membrana

Puntos de control
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Inmunología

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 Revalidas y convocatorias
• Reordenamientos genes cadena pesada
1. Reordenamientos DJH son productivos casi siempre
2. Reordenamientos VDJH
– Si es productivo se activa la represión del reordenamiento del
alelo alternativo.
– Si fracasa se produce edición (un reordenamiento sucesivo) del
primer alelo y si esto falla se reordena el segundo alelo.
• Productivo
• Si fracasa la célula sufre apoptosis
3. Reordenamientos VJ de cadenas ligeras κ y λ
– Reordenamiento primer alelo K Productivo
– si falla edición otros VJ y si esto falla
– Se reordena el otro κ y si vuelve a fallar
– Se reordena el primer λ y si falla
– Se reordena el otro λ Inmunología
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Linfocitos B maduros: Coexpresión de IgM e

IgD por procesamiento alternativo de RNA
Parte del RNA puede ser traducido o tratado como un intrón

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Inmunología

9
 Organos Linfoides Secundarios

Vénulas
Endoteliales
altas

APC
Ag
Aporte
linfocitos
Retorno
Celular

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Inmunología

Respuestas
de células
B
en
OLS
FO

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B1b y Zona marginal Inmunología

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 Activación timoindependiente

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Inmunología

Activación
timodependiente

Cooperación
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Inmunología

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 Diferenciación de linfocitos B en
órganos linfoides secundarios
• Transición desde linfocito B novato a efector-memoria
incluye diferenciación genética de clones.
– 1. Especializados en producción de un isotipo.
• Reordenamiento VDJ-región constante cadena pesada

– 2. Productores de anticuerpos de alta afinidad.

• Hipermutación en V

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Inmunología

1. Especialización en tipos
productores de distintos isotipos
La recombinación somática del segmento génico
VDJH (variable) con uno de los genes para el
segmento constante de cadenas pesadas (α, γ1, γ2,
γ3, γ4, ε) produce inmunoglobulinas de distintos
isotipos con distintas capacidades efectoras

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Inmunología

12
 2. Diferenciación terminal de células B
requiere CD0L y es dirigida por citoquinas
Cambio de
Hipermutación cIgA sIgA
isotipo mIgA
somática
TGFβ

mIgM
mIgD mIgGx cIgGx sIgGx
IFNγ
Célula B
Madura
IL-4
novata
mIgE cIgE sIgE
CD40L (CD154) + citocinas

Cooperación T B memoria célula plasmática

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Inmunología

2. Selección de células productoras

de anticuerpos de alta afinidad
1. Hipermutación somática produce clones mutantes
para la secuencia de sus regiones de
reconocimiento antigénico con mayor afinidad por
el antígeno.
2. Estos clones de alta afinidad son seleccionados por
el antígeno.

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Inmunología

13
 Función de los procesos de
hipermutación somática y selección
1. Creación de un repertorio de mayor afinidad.

2. Mecanismo: las células con mutaciones cuyos

receptores son más afines al ag. son seleccionadas.

3. La selección produce un aumento en la afinidad

media de los anticuerpos producidos.

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Inmunología

Tipos de respuestas de células B

en función de su histología:
foliculares (FO) y extrafoliculares (MZ)

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Inmunología

14
• 1. Respuesta rápida (extrafolicular).
células células anticuerpos no modificados
B1b plasmáticas genéticamente de baja afinidad
Y MZ de corta y en su mayoría de isotipo IgM.
vida

•2. Respuesta lenta (folicular).

•células •anticuerpos genéticamente
plasmáticas modificados y en su mayoría de
de larga isotipo IgG, Ig A e IgE
células B vida
Maduras
Foliculares Reaparición de antígeno
•células B
Cooperación T memoria
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Inmunología

Zona folicular (FO) y zona marginal (MZ) del bazo

Las células B constituyen del 5 al 15% de los linfocitos sanguíneos y

son, morfológicamente indistinguibles de las células T.
Pueden diferenciarse por moléculas de superficie: IgM en las células B
inmaduras; IgM, IgD y niveles altos de CD21 en las células B nativas
maduras.
En el bazo, las células B se disponen en la pulpa blanca formando la
zona marginal y los folículos.
Es en la pulpa blanca donde se realiza la presentación de los antígenos30
.
23/03/2009 Inmunología

15
 Centro germinal y zona marginal
1.Centro germinal porción del folículo linfoide que contiene las células
que proliferan rápidamente tras un estímulo antigénico (expansión
clonal), mientras los restantes linfocitos B del folículo permanecen en
reposo.
2. Zona marginal envuelve al resto del tejido linfoide. Los linfocitos de
la zona marginal se encuentran mezclados con un número variable de:

Macrófagos
• Células
plasmáticas
• Células T
•células B
Independientes
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de CD40L Inmunología

Efecto de la Naturaleza del antígeno en

el proceso de diferenciación B.

• Antígeno libre dirige respuestas B extrafoliculares.

• Antígeno que forma inmunocomplejos dirige las

respuestas B foliculares.

23/03/2009 32
Inmunología

16
 Maduración de la afinidad
Sucesivas
estimulaciones
seleccionan repertorio
ampliado por mutación
somática y aumentan la
afinidad de los
anticuerpos
Cantidades y afinidades
de IgG aumentan
progresivamente y
superan a las de IgM

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Inmunología

Respuestas primarias y secundarias de

células B

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Inmunología

17
 Expresión de antígenos de superficie

La determinación multiparamétrica permite establecer el estadio de diferenciación celular

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Inmunología

Diferenciación B
1. No todo es un camino de rosas, pero hay segundas
oportunidades.
– Selección a diversos niveles.
– Expresión de prereceptores y receptores.
– Receptores con especificidad apropiada al entorno “reactivo pero
autotolerante”
2. La diferenciación no sigue siempre un mismo orden
lineal.
– Orden de reordenamientos pesada-ligera, κ−λ
– Maduración en OLS diversas opciones
3. Las células B no son homogéneas.
– Líneas divergentes B1 y B2, MZ y FO
– Se especializan por cambios de isotipos
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Inmunología

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 Selección a diversos niveles
Médula ósea Periferia
Repertorio Repertorio Repertorio Repertorio Repertorio
Potencial Preimmune Preimmune expandido inmune
Central Periférico por mutación Selección
somática positiva por
preB B madura
B inmadura antigeno y
coestimulación

B memoria
Centrocitos

Selección por Selección Selección positiva

capacidad de por ag negativa Selección
Asociación con
negativa por Positiva alta Selección
falta Positiva alta
λ5 VpreB autoantígenos
23/03/2009 coestimulación afinidad 37
Inmunología afinidad

Conclusión: Procesos de diferenciación

de células B en OLS
• 1. Expansión del repertorio.
– Expansión clonal (blastos del centro germinal primario y
centroblastos).
– Hipermutación de los genes de inmunoglobulinas
(centroblastos).
• 2. Elección de los clones mejorados Selección clonal de
los clones de alta afinidad (centrocitos).
• 3. Reconfiguración de los clones elegidos
Rediferenciación a memoria o efectora.
• 4. Cambios de isotipo. Los cambios de isotipos ocurren en
paralelo pero con independencia de los estadios
mencionados.
23/03/2009 38
Inmunología

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 Tipos de Células B
B Noveles IgM IgD
Convencionales Plasmáticas CD38
B2 Memoria sIgG sIgAsIgE
CD5- (Foliculares y de la zona del manto)

B1 B1a peritoneales producen

autoanticuerpos
CD5+ La IL-10 es su factor de crecimiento
autocrino e inhibidor T y APC
B1b reconocen polisacáridos extraños
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Inmunología

B1 vs. B2

23/03/2009 40
Inmunología

20
 Maduración y fenotipo de los
linfocitos B1
1. Abandonan los OLP y maduran en tejidos no linfoides
donde mantienen proliferación homeostásica.
2. Omiten la etapa de selección en los OLS que caracteriza a
los linfocitos convencionales.
3. Son CD5+
4. Expresan elevados niveles de SIgM y bajos de SIgD
5. No intervienen en las respuestas humorales dependientes
de linfocitos T.
6. Parte de ellos son seleccionados positivamente por
autoantígenos
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Inmunología

Repertorio de receptores de
los linfocitos B1
1. Poco diverso y sin mutaciones somáticas.
2. Células B1a son seleccionadas positivamente
por autoantígenos tienen función
inmunosupresora (IL-10)
3. Células B1b reaccionan frente a antígenos
extraños
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Inmunología

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 Tipos de células B convencionales
(Oliver 1999)
• Células B con distintos patrones de infiltración de
órganos linfoides secundarios
1. MZ B cells CD21 high CD23 low IgM high IgD low CD24 high
– Células B de la zona marginal (10% bazo) adyacentes a en los
senos marginales del bazo recogen antígenos particulados
– Dan lugar a plasmablastos secretores de IgM en 3 días
– Respuesta primaria rápida
2. FO B cells CD21 int CD23 high IgM low IgDhigh CD24 low
– Células B de centros germinales (80% bazo) pueden
diferenciarse en células B memoria y plasmáticas de alta
afinidad
– Respuesta generadora de memoria actúan también en
respuestas secundarias
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Inmunología

Células Foliculares
• Centro germinal Se localiza en el interior de los
folículos linfoides de los tejidos linfoides secundarios.

•Se forma alrededor de la

malla de células dendríticas
foliculares cuando las
células B activadas migran
hacia los folículos linfoides
donde encuentran antígenos
en inmunocomplejos
proliferan y se diferencian.
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Inmunología

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 Capacidad de diferenciación de células FO y
MZ en células efectoras

Folículo
Respuesta lenta pero
generadora de memoria y
especializada en isotipo

Zona marginal
Respuesta rápida de IgM sin
memoria
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Inmunología

Regulación de células plasmáticas

• Las células plasmáticas salen a sangre, migran a
amígdalas y después a médula ósea.
• Pierden la expresión de inmunoglobulinas de
membrana pierden capacidad de recibir señales
de su antígeno.
• La síntesis de anticuerpos por células
plasmáticas es estimulada por mediadores
proinflamatorios: IL-1, IL-6 y TNFα.

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Inmunología

23
 Transición desde célula B memoria
a célula plasmática
• Células B Memoria CD27+ de sangre periférica
generan células plasmáticas mediante
estimulación antigénica y coestimulación
sinérgica de Interleuquina-10 y CD70.
• Señalización de CD27 protege de la apoptosis
inducida por IL-10.

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Inmunología

Ontogenia y patología tumoral

Pregerminal
Leucemia naive activada/
B1 B2
Linfática Posgerminal
crónica B memoria

Linfoma de células Macroglobulinemia

de centro folicular de Waldenström
Leucemia de Linfoma Tricolucemia IgM
células Pre B de Burkit Mieloma
Leucemia múltiple
Linfoblástica
aguda
B2
B2
Célula B B2
Progenitor Célula Célula B Activada/ Células
linfoide
23/03/2009 preB memoria
madura Inmunología 48
secretoras

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 Adenda

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Inmunología

Tolerancia de células B
• La tolerancia B es mediada por mecanismos que dirigen el
desarrollo de células B en muchos puntos de control.
1. Selección de células
1. Selección positiva: señal induce supervivencia del linfocito
2. Selección negativa: señal induce eliminación del linfocito
2. Edición de receptores: cambio del receptor
3. Exclusión
1. Negación de acceso a determinados ambientes impide la
diferenciación terminal de las células que no los alcanzan
4. Diferenciación de células autoreactivas en linajes (B1a)
con función reguladora negativa de la autorreactividad
1. Producción de IL-10
2. Presentación
23/03/2009 sin coestimulación
Inmunología
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 Diferenciación de las células B
maduras convencionales foliculares
(Pugh-Bernard 2001)
• B naive o Novatas IgD+CD38-
– Bm1 CD23-
– Bm2 CD23+
• B de Centro germinal (CG) CD38+IgD-
– centroblastos Bm3 CD77+sIg-
– centrocitos Bm4 CD77-sIg+
• B memoria Bm5 IgD- CD38- sIg + CD27+ CD20+
• Célula plasmática (bazo, amígdala médula) CD38++CD20lo
•23/03/2009
CD19+ CD138+ CD27++Inmunología 51

26