ELENA QUESADA DÍAZ

ANDREA RAMOS CASAL

CHAIMAA SMAILI MADAOUF

PRÁCTICA 1
GRADO EN BIOTECNOLOGÍA – 3er CURSO

ENSAYOS DE LAS CONDICIONES DE

PRODUCCIÓN DE BIOETANOL POR
SACCHAROMYCES CEREVISIAE EN
MODO BATCH
Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

RESULTADOS Y TRATAMIENTO DE DATOS

TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES
Botella 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
[Sacarosa]0 (g/L) 25 50 100 200 350 200 200 200 200 200
[Levadura]0 (g/L) 15 15 15 15 15 5 10 25 50 100
[EtOH]0 (g/L) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Tiempo
Hora de
Fecha Peso (g)
(00:00) reacción
(h)
11:00 0 1161,27 1177,4 1188,9 1229,8 1241,0 1209,3 1213,0 1229,6 1228,2 1244,7

12:00 1 1161,23 1177,1 1188,2 1229,4 1240,6 1209,3 1349 1281,4 1228,2 12438

13:00 2 1161,9 1176,7 1187,6 1229,0 1240,5 1209,1 12127 1227,2 1227,4 1239

14:00 3 1161,2 1176,2 1186,7 1228,2 1239,5 1208 1212,2 1224,6 1226 1233,2

20/02/23 14:55 4 1160,4 1174,7 1185,6 1227,3 1238,6 1208,7 1211,5 1221,6 1224,5 1227,3

16:00 5 1159,2 1173,3 1184,5 1226,1 1237,4 1208,4 1210,8 1218,3 1222,9 1220,1

17:00 6 1158,3 1172,3 1183,4 1224,9 1236,3 1207,8 1210 1219,9 1221,4 1202,6

18:00 7 1157,3 1171,0 1182,1 1223,9 1235,3 1207,2 1209,2 1211,8 1219,6 1206,8

19:00 8 1156,5 1169,9 1181,1 1222,9 1234,4 1206,8 1208,4 1209 1218,3 1201,5

SERIE A SERIE B

Nota: no hicimos la medida al día siguiente, así que puede ser que salgan resultados extraños

CÁLCULO Y REPRESENTACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE SACAROSA /(LEVADURA INICIAL)

(G/G) Y ETANOL/(LEVADURA INICIAL) (G/G) EN FUN CIÓN DEL TIEMPO PARA CADA ENSAYO DE
LA SERIE A (UN ÚNICO GRÁFICO PARA SACAROSA, UN ÚNICO GRÁFICO PARA ETANOL, Y CADA
ENSAYO SE IDENTIFICA MEDIANTE SU CONCENTRACIÓN INICIAL DE SACAROSA )

p = peso inicial del cultivo – peso del cultivo en el instante t (g)

Sacarosa (S): [Lev]0 = 15
𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎 𝑝g/L
[𝑆] · 𝑉 = [𝑆]0 · 𝑉 − 𝑀𝐶𝑂2 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜 · → [𝑆] = [𝑆]0 −
𝐶𝑂2 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜 0,489

p
(SERIE Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5
A)
0h 0 0 0 0 0
1h 0,04 0,3 0,7 0,4 0,4
2h -0,63 0,7 1,3 0,8 0,5
3h 0,07 1,2 2,2 1,6 1,5
4h 0,87 2,7 3,3 2,5 2,4
5h 2,07 4,1 4,4 3,7 3,6
6h 2,97 5,1 5,5 4,9 4,7
7h 3,97 6,4 6,8 5,9 5,7
8h 4,77 7,5 7,8 6,9 6,6

Universidad de Almería -1- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

[S]/[Lev]0 Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5

0h 1,7 3,3 6,7 13,3 23,3

1h 1,7 3,3 6,6 13,3 23,3
2h 1,8 3,2 6,5 13,2 23,3
3h 1,7 3,2 6,4 13,1 23,1
4h 1,5 3,0 6,2 13,0 23,0
5h 1,4 2,8 6,1 12,8 22,8
6h 1,3 2,6 5,9 12,7 22,7
7h 1,1 2,5 5,7 12,5 22,6
8h 1,0 2,3 5,6 12,4 22,4

SACAROSA SERIE A
9

7
Teimpo de reacción (h)

6
Botella 1
5
Botella 2
4
Botella 3
3 Botella 4
2 Botella 5
1

0
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0
[S] / [Lev]0 (g/g)

Figure 1

Etanol (EtOH):
𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎 𝐸𝑡𝑂𝐻 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑝 · 0,511
[𝐸𝑡𝑂𝐻] · 𝑉 = [𝐸𝑡𝑂𝐻]0 · 𝑉 + 𝑀𝐶𝑂2 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜 · · 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎 → [𝐸𝑡𝑂𝐻] = [𝐸𝑡𝑂𝐻]0 + 0,489 · 𝑉
𝐶𝑂2 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜

[EtOH]/[Lev]0 Botella 6 Botella 7 Botella 8 Botella 9 Botella 10

0h 0 0 0 0 0
1h 0,003 0,021 0,049 0,028 0,028
2h -0,044 0,049 0,091 0,056 0,035
3h 0,005 0,084 0,153 0,111 0,104
4h 0,061 0,188 0,230 0,174 0,167
5h 0,144 0,286 0,307 0,258 0,251
6h 0,207 0,355 0,383 0,341 0,327
7h 0,277 0,446 0,474 0,411 0,397
8h 0,332 0,522 0,543 0,481 0,460

Universidad de Almería -2- Procesos Biotecnológicos

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EtOH SERIE A
9
8
7
Teimpo de reacción (h)

6
Botella 1
5
Botella 2
4
Botella 3
3
Botella 4
2
Botella 5
1
0
0 0 0 0 0 0 1 1
[EtOH] / [Lev]0 (g/g)
Figure 2

CÁLCULO Y REPRESENTACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE SACAROSA / (LEVADURA INICIAL)

(G/G) Y ETANOL/(LEVADURA INICIAL) (G/G) EN FUN CIÓN DEL TIEMPO PARA CADA ENSAYO DE
LA SERIE B (UN ÚNICO GRÁFICO PARA SACAROSA, UN ÚNICO GRÁFICO PARA ETANOL, Y CADA
ENSAYO SE IDENTIFICA MEDIANTE SU CONCENTRACIÓN INICIAL DE SACAROSA ).

p (SERIE
Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5
B)
0h 0 0 0 0 0
1h 0 -136 -51,8 0 0,9
2h 0,2 0,3 2,4 0,8 5,7
3h 1,3 0,8 5 2,2 11,5
4h 0,6 1,5 8 3,7 17,4
5h 0,9 2,2 11,3 5,3 24,6
6h 1,5 3 9,7 6,8 42,1
7h 2,1 3,8 17,8 8,6 37,9
8h 2,5 4,6 20,6 9,9 43,2
Sacarosa (S):
[S]/[Lev]0 Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5
0h 40,0 20,0 8,0 4,0 2,0
1h 40,0 47,8 12,2 4,0 13,2
2h 39,9 19,9 7,8 4,0 12,6
3h 39,5 19,8 7,6 3,9 11,8
4h 39,8 19,7 7,3 3,8 11,0
5h 39,6 19,6 7,1 3,8 10,0
6h
39,4 19,4 7,2 3,7 7,6
7h 39,1 19,2 6,5 3,6 8,2
8h 39,0 19,1 6,3 3,6 7,4

Universidad de Almería -3- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

SACAROSA SERIE B
9

7
Teimpo de reacción (h)

6
Botella 6
5
Botella 7
4
Botella 8
3 Botella 9
2 Botella 10
1

0
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 60.0
[S] / [Lev]0 (g/g)

Figure 3

Etanol (EtOH):
[EtOH]/[Lev]0 Botella 6 Botella 7 Botella 8 Botella 9 Botella 10
0h 0 0 0 0 0
1h 0,003 0,021 0,049 0,028 0,028
2h -0,044 0,049 0,091 0,056 0,035
3h 0,005 0,084 0,153 0,111 0,104
4h 0,061 0,188 0,230 0,174 0,167
5h 0,144 0,286 0,307 0,258 0,251
6h 0,207 0,355 0,383 0,341 0,327
7h 0,277 0,446 0,474 0,411 0,397
8h 0,332 0,522 0,543 0,481 0,460

EtOH SERIE B
9
8
7
Teimpo de reacción (h)

6 Botella 6
5 Botella 7
4
Botella 8
3
2 Botella 9
1 Botella 10
0
-15 -10 -5 0 5
[EtOH] / [Lev]0 (g/g)
Figure 4

Universidad de Almería -4- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

CÁLCULO DE LA VELOCIDAD INICIAL DE CONSUMO DE SACAROSA (NOTA: SE OBTENDRÁN LAS

VELOCIDADES DE REACCIÓN ESPECÍFICAS (G/GH) USANDO LA CONCENTRACIÓN DE SACAROSA EN
CADA INSTANTE DIVIDIDA POR LA CONCENTRACIÓN DE LEVADURA INICIAL DE CADA ENSAYO),
QUE SE CORRESPONDE CON LA PENDIENTE INICIAL DE LOS DATOS DE [S]/(LEVADURA INICIAL)
VS. T DE CADA ENSAYO (UN ÚNICO GRÁFICO PARA LA SERIE A Y UN ÚNICO GRÁFICO PARA LA
SERIE B; EN PRINCIPIO, NO SE USARÁN LAS MISMAS GRÁFICAS QUE EN LOS APARTADOS 1 Y 2,
SINO QUE SE REPRESENTARÁ DE NUEVO [S]/(LEVADURA INICIAL) VS. T DE CADA ENSAYO, PERO
INCLUYENDO ÚNICAMENTE LOS DATOS QUE SE CONSIDEREN NECESARIOS PARA LA REGRESIÓN
LINEAL, JUSTIFICANDO LA ELECCIÓN). BREVE ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS Y CONCLUSIONE S

SERIE A:

[S]/[Lev]0 Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5

1 1,7 3,3 6,6 13,3 23,3
2 1,8 3,2 6,5 13,2 23,3
3 1,7 3,2 6,4 13,1 23,1
4 1,5 3 6,2 13 23
5 1,4 2,8 6,1 12,8 22,8
6 1,3 2,6 5,9 12,7 22,7
7 1,1 2,5 5,7 12,5 22,6
8 1 2,3 5,6 12,4 22,4

Serie A
9

7
Tiempo de reacción (h)

6
y = -7.4172x + 99.997
5 R² = 0.989

2 y = -6.5189x + 23.16y = -6.5969x + 44.906 y = -7.3684x + 173.24

R² = 0.9701 R² = 0.9895 R² = 0.9825
1
y = -8.1579x + 16.237
0 R² = 0.9032
0 5 10 15 20 25
[S]/[Lev]0

Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4

Botella 5 Linear (Botella 1) Linear (Botella 2) Linear (Botella 3)
Linear (Botella 4) Linear (Botella 5)

Figure 5

Universidad de Almería -5- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

Se ha eliminado el primer dato referente a tiempo = 0 h ya que mejora la regresión lineal de

todas las botellas y el valor de 𝑅2 es más próximo a 1.

SERIE B:

[S]/[Lev]0 Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 Botella 5

0 40 4
1 40 4 13,2
2 39,9 19,9 7,8 4 12,6
3 19,8 7,6 3,9 11,8
4 19,7 7,3 3,8 11
5 39,6 19,6 7,1 3,8 10
6 39,4 19,4 3,7
7 39,1 19,2 6,5 3,6 8,2
8 39 19,1 6,3 3,6 7,4

Serie B
9

7
Tiempo de reacción (h)

6
y = -1.1699x + 16.687
5 R² = 0.997 y = -7.2764x + 292.08
R² = 0.9484
4

2
y = -16.237x + 66.062 y = -7.0361x + 142.4
y = -3.8764x + 32.356
R²1= 0.9472 R² = 0.9968
R² = 0.98

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
[S]/[Lev]0

Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4

Botella 5 Linear (Botella 1) Linear (Botella 2) Linear (Botella 3)
Linear (Botella 4) Linear (Botella 5)

Figure 6

Se han eliminado varios puntos de las diferentes botellas puesto que podían deberse a errores
en la medida y variaban mucho con respecto al resto de datos empeorando la linealidad. Esto
mejora la regresión lineal y el valor de 𝑅 2 es más próximo a 1.

Universidad de Almería -6- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

REPRESENTACIÓN DE LA VELOCIDAD ESPECÍFICA INICIAL (G/GH) FRENTE A LA CONCENTRACIÓN

DE SACAROSA INICIAL (G/L) PARA LOS ENSAYOS DE LA SERIE A, Y DE LA VELOCIDAD ESPECÍFICA
INICIAL (G/GH) FRENTE A LA CONCENTRACIÓN DE LEVADURA INICIAL (G/L) PARA LOS ENSAYOS
DE LA SERIE B (UN GRÁFICO PARA LA SERIE A, Y UN GRÁFICO PARA LA SERIE B).

SERIE A:

Serie A
400
350
[Sacarosa]0 (g/L)

300
250
200
150
100
50
0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16
(-rs) g/gh

Figure 7

SERIE B:

Serie B
250

200
[Sacarosa]0 (g/L)

150

100

50

0
-0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0 0.2 0.4
(-rs) g/gh

Figure 8

Universidad de Almería -7- Procesos Biotecnológicos

Elena Quesada Díaz Andrea Ramos Casal Chaimaa Smaili Madaouf

SELECCIÓN DE LAS CONCENTRACIONES ÓPTIMAS DE SACAROSA Y LEVADURA PARA LA

FERMENTACIÓN. ESTAS CONCENTRACIONES SELECCIONADAS SERÁN LAS QUE SE USARÁN MÁS
ADELANTE PARA ESCALAR LA FERMENTACIÓN A UN BIOREACTOR DE 15 L. BREVE DISCUSIÓN DE
LA SELECCIÓN.

En el caso de la sacarosa, una alta concentración de ésta provocaría daños en las levaduras
debido a que sufrirían un proceso de lisis, por la salida brusca del agua de su interior para
equilibrar las concentraciones de solutos en el exterior y en el interior de la célula
(plasmólisis). Por tanto, una alta concentración de azúcar provoca la inhibición de la actividad
de la levadura.

Por otra parte, una bajo concentración de sacarosa sería insuficiente para llevar a cabo el
proceso de fermentación por las levaduras.

En función de lo comentado anteriormente y fijándonos en la Figure 5, se podría llegar a la

conclusión de que la concentración de sacarosa óptima sería de 100 g/L y de levadura 25 g/L,
ya que presenta el R2 más cercano a uno.

SEÑALAR CUÁL ES EL MODO DE OPERACIÓN MÁS HABITUAL PARA LLEVAR A CABO LA

FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA EN LA PRODUCCIÓN DE BIOETANOL A ESCALA INDUSTRIAL.

El bioetanol, procedente de campos de cosecha, se usa principalmente como un recurso

energético potencialmente sostenible con ventajas medioambientales y económicas a largo
plazo en contraposición a los combustibles fósiles.

Para llevar a cabo su fermentación se utilizan 3 materias primas para su producción a gran
escala:
- Sustancias con alto contenido de sacarosa: caña de azúcar, remolacha, melazas, sorgo
dulce.
- Sustancias con alto contenido de celulosa: madera y algunos residuos agrícolas.
- Sustancias con alto contenido de almidón: maíz, patata, yuca.

En el caso del almidón, el proceso es más complejo que a partir de sacarosa porque el almidón
debe ser hidrolizado previamente para convertirlos en azúcares. Por ello, se mezcla la materia
vegetal triturada con agua y con una enzima y se calienta. Posteriormente, se cuela
(escarificación) y se envía a los reactores de fermentación.

Dicha fermentación es llevada a cabo por microorganismos (levaduras o bacterias) y produce

etanol, así como grandes cantidades de CO2. Además produce otros compuestos oxigenados
indeseables como el metanol, alcoholes superiores, ácidos y aldehídos.

Otro camino para realizar dicho proceso sería las síntesis química de bioetanol para uso
industrial, mediante una hidratación catalítica del etileno usando ácido sulfúrico como
catalizador. El etileno suele provenir del etano (un componente del gas natural) o de nafta
(un derivado del petróleo). Tras la síntesis se obtiene una mezcla de etanol y agua que
posteriormente hay que purificar. Este camino presenta un menor coste que el anterior.

Universidad de Almería -8- Procesos Biotecnológicos