Ejercicios cinética enzimática

A partir de los siguientes datos calcule los parámetros cinéticos: Km, Vmax y

[1S]= 2.32 x10-3 M

[2S]= 4.55 x 10-3 M
[3S]= 12.66 x 10-3 M
[4S]= 38.50 x 10-3 M
[5S]= 200.00 x 10-3 M

a) Elaborar la gráfica de Michelis-Menten e identificar en ella Vmax y Km

b) Elaborar la gráfica de Lineweaver-Burk e identificar los parámetros cinéticos
c) Calcular los parámetros cinéticos Km, Vmax y Kcat
d) Calcular la Vo cuando la concentración de sustrato es de 8.2 x 10-3 M
e) Calcular la Vo cuando [S]=Km

A la Velocidad máx se saturan todos los protómeros

Un protómero es la unidad básica de la catálisis, es la parte de la enzima con actividad ca
nética enzimática
ientes datos calcule los parámetros cinéticos: Km, Vmax y Kcat

1
V= 0.97 µmol min-1
2
V= 1.49 µmol min-1
3
V= 2.18 µmol min-1
4
V= 2.56 µmol min-1
5
V= 2.90 µmol min-1

de Michelis-Menten e identificar en ella Vmax y Km

de Lineweaver-Burk e identificar los parámetros cinéticos
os cinéticos Km, Vmax y Kcat
la concentración de sustrato es de 8.2 x 10-3 M 0.0082
do [S]=Km

Vo=Vmax* (S)/ Km+ (s) Vo= 1.8785624

Vo= 1.48279953

saturan todos los protómeros

nidad básica de la catálisis, es la parte de la enzima con actividad catalítica

Despeje
 (S) Vo
0.00232 0.97 Gráfica de Michaelis- Menten
3.5
0.00455 1.49 Vmax
3
0.01266 2.18
2.5
0.0385 2.56
2
0.2 2.9

Vo
1.5 1/2 Vmax
1

0.5

0
0 Km 0.05 0.1 0.15 0
(s)

1/(S) 1/Vo
431.034482758621 1.03092784 Gráfica de Lineweaver-Burk
219.78021978022 0.67114094 1.2
78.9889415481833 0.4587156 1
f(x) = 0.00159083518667921 x + 0.337193014082618
25.974025974026 0.390625
0.8
5 0.34482759
1/(Vo)

0.6

0.4
1/Vmax
0.2

0
0 50 100 150 200 250 300 350 4
-1/Km
1/(s)

Calcular Vmax Calcular Km

y= 1/Vmax x= -1/Km
Cuando x=0 Cuando y=0
y= 0.0016x+ 0.3372 0=0.0016x + 0.3372
y= 0.3372 x=
Vmax= 2.9656 Despeje Km=
Parámetros cinéticos
Km 4744.95848 M
Vmax 2.9656 microM/min
Kcat (Vmax/Km) 0.000625 microl/min
de Michaelis- Menten

0.1 0.15 0.2 0.25

(s)

de Lineweaver-Burk

67921 x + 0.337193014082618

0 200 250 300 350 400 450 500

1/(s)

0.0016x + 0.3372
-210.75
0.00474496 M 4744.95848 microM
A partir de los siguientes datos identifique el tipo de inhibición

[S] [I]
mM 0 0.5 1
Vo
mM/min
0.05 0.33 0.2 0.14
0.1 0.55 0.33 0.25
0.2 0.67 0.55 0.4
0.4 0.8 0.67 0.57
0.5 0.83 0.71 0.63

Si convergen en Vmax, es una inhibición COMPETITIVA

Si convergen en Km, es una inhibición NO COMPETITIVA

Si no convergen en ningun lado y es paralela la inhibición es ACOMPETITIVA

1/(S) 1/Vo
20 3.03030303 5 7.14285714
10 1.81818182 3.03030303 4
5 1.49253731 1.81818182 2.5
2.5 1.25 1.49253731 1.75438596
2 1.20481928 1.4084507 1.58730159

En la gráfica Km se modifica y Vmax permanece igual

por lo que es una inhibición Competitiva

Sin inh 0.5 mM inh 1 mM inh

Vmax 1.03103413 1.05340777 1.03745202
Km 0.10300031 0.21342042 0.31953522
x= -9.70870871 -4.68558736 -3.12954545
e inhibición

Gráfica de Michaelis- Menten

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
Vo

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
(S)

Gráfica de Lineweaver-Burk
8
7
f(x) = 0.307974049520456 x + 0.963913947802601
6
5
f(x) = 0.202604607721515 x + 0.949318172228637
4
1/Vo

3
f(x) = 0.0999016870114404 x + 0.969944960414844
2
1
0
0 5 10 15 20 25

1/(S)
 Analice la siguiente gráfica e identifiq

A mayor Km la afinidad es menor

Km más chica, mejor afinidad

Kcat más alto, es mejor para usar en la eficiencia catalítica

Actividad específica, mejor unidad para medir

guiente gráfica e identifique el tipo de ihibidor Ensayos de inhibición

a) Tipo de inhibición mostrada

b) ¿Cuál es el compuesto más afin a la enzima?
inhibición

ición mostrada
ompuesto más afin a la enzima?
(S) sin inh con 0.05 inh con 0.1 inh
89 0.032 0.02432 0.016
75 0.032 0.02432 0.016
50 0.03 0.0228 0.015
25 0.0247 0.018772 0.01235
15 0.0199 0.015124 0.00995
5 0.0089 0.006764 0.00445

Gráfica de Michaelis- Menten

0.035
Vmax
0.03
Vmax
0.025
0.02
0.015
Vmax
0.01
Km
0.005
Km Km
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Column B Column C Column D

Calcule la Vo sin inhibidor y con 0.5 mM de inhibidor cuando se emplean 30 mM de sustrato y el factor de inhibición es de 0.76

Vo=Vmax* (S)/ Km+ (s)

Vo sin inh 0.05 inh

0.0257258991 0.01955174
1/(S) 1/Vo sin 1/Vo 0.05 1/Vo 0.1
0.01123596 31.25 41.1184211 62.5
0.01333333 31.25 41.1184211 62.5
0.02 33.3333333333333 43.8596491 66.6666667
0.04 40.4858299595142 53.2708289 80.9716599
0.06666667 50.251256281407 66.1200741 100.502513
0.2 112.359550561798 147.841514 224.719101

Gráfica de Lineweaver-Burk
250

200 f(x) = 868.871711821092 x + 48.7801591248876

150
f(x) = 571.626126198087 x + 32.0922099505839
100 f(x) = 434.435855910546 x + 24.3900795624438

50

0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25

Column I Linear (Column I) Linear (Column I)

Column J Linear (Column J) Linear (Column J)
Column K Linear (Column K) Linear (Column K)

Parámetros sinéticos sin inh 0.05 inh 0.1 inh

Vmax 0.04100041 0.03116041 0.02050021
Km 17.8122181 17.8122273 17.8120131
Kcat 0.00230181 0.00174938 0.00115092

x= -0.05614124 -0.05614121 -0.05614189

Inhibición no competitiva
 Proteína Enzi
Paso Vol. Fracción Concentración Cantidad total Conc. Act. Específica
ml mg/ml mg UI/ml UI/mg proteína
Estracto crudo 1000 25 25000 15 0.6

Precipitación 250 18 13500 19.68 0.355555555556

Precipitar 50 2500 15

Cromatografía 25 748 320 10.69518716578

Cromatografía 10 456 364 7.982456140351

HPLC 5 30 300 1700 28.33333333333

Cromatografía 1.62 8.1 5600 1120

 Enzima
Cantidad total Rendimiento Factor de purificación
unidades % veces
5000 100 1

4800 14760 1.44

0 11200 25

8000 9850 17.825311942959

3640 8500 13.3040935672515

8500 6700 47.2222222222222

9072 21184.6153846 1866.66666666667