INFORME DE LABORATORIO

Facultad de Ingenierías

Conceptos básicos de espectrofotometría

Dayana Fernanda Arévalo Valbuena; dfarevalov@unincca.edu.co

Juan Andrés Sánchez Barinas; jasanchezb@unincca.edu.co

Laura Mayerli Murcia Triviño; lmmurciat@unincca.edu.co

Luis Fernando; lfdiazb@unincca.edu.co

Laboratorio: Sede Biología.

Programa: Ingeniería Alimentos.
Universidad INCCA de Colombia
Fecha: 15/03/2023
Resumen

En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo realizado en
la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados como la
conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo 200
palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente.

Palabras clave: espectrofotometría, absorbancia, transmitancia, celdas de cuarzo y curva

de calibración.

Abstract

En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo realizado en
la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados como la
conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo 200
palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente. En esta parte se realiza una breve descripción de la práctica detallando claramente lo
realizado en la parte experimental, métodos usados y una breve descripción de los resultados
como la conclusión principal de la práctica de laboratorio. Este apartado debe contener mínimo
200 palabras y máximo 400. El resumen debe estar redactado en el tiempo verbal de pasado o
presente.

Palabras clave: espectrofotometría, absorbancia, transmitancia, celdas de cuarzo y curva

de calibración.

Keywords: son las traducciones de las palabras clave

Introducción estas nuevas tecnologías teniendo en cuenta

En el transcurso de los años la
tecnología y las herramientas de laboratorios
han ido evolucionando, facilitando los
procesos, resultados y análisis de estos
ayudando a las diferentes industrias. Esta
revolución ha facilitado a los sistemas
biológicos en su visualización y estudio, los
avances en la espectrometría de masas,
permitiendo la mejora en los análisis en la
identificación y cuantificación de sustancias
por consiguiente se debe saber cómo y que
funciones específicas (Lainez, 2009). Tienen
terminología o conceptos que previamente
deben ser conocidos para así poder realizar los
diferentes procedimientos tal como son
expuestos en este documento de practica con
una solución de permanganato de potasio.
Un espectrofotómetro es un
instrumento o herramienta que es empleada
para determinar la radiación electromagnética,
así identificando, calificando y cuantificando
su energía; los espectrofotómetros nos ayudan
para conocer la concentración de las diferentes
sustancias en una determinada solución y

llegar a su análisis bajo los enfoques
cualitativos (Fernando, 2021).
Estos equipos están compuestos por la
fuente de luz que consiste en la iluminación de
la muestra química o biológica que se debe
analizar, el monocromador este se encarga de
aislar las radiaciones de la longitud de ondas
que se desea, el colimador es el lente que lleva
el haz de luz que entra con determinada
longitud de onda hacia los prisma y separa
todas las longitudes de onda, por otro lado el
compartimiento de muestra es donde se coloca
la sustancia a la cual se le realizara la
correspondiente lectura (Fernando, 2021),
teniendo en cuenta que para depositar la
sustancia se usan las celdas de cuarzo, las
cuales deben ser limpiadas con agua destilada
y estas se deben secar en su exterior con papel
muy suave. Adicionalmente al ser introducidas
al equipo se debe tener la precaución de que
no existan burbujas, ni precipitación de la
sustancia o cualquier otra impureza contenida
en ellas y que en su defecto se introduzca de
manera correcta para no generar rayones o
afectaciones en la misma, estas celdas por su
tipo de material dejan pasar la radiación de la
región espectral de interés y debido a esto hay
que hacer un correspondiente proceso antes de
sus lecturas el cual consiste en que se realice
un blanco con agua destilada ya que este nos
ayuda en la corrección de los errores que se
INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías
derivan de lo anteriormente mencionado y que
antes de poner la muestra el instrumento se
encuentre calibrado y en ceros para así hacer
las mediciones en el espectrofotómetro
(Padilla, 2020)
La espectrofotometría UV-visible es
una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución.
Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que
la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo
de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de
onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la
misma.
El fundamento de la espectroscopia se
debe a la capacidad de las moléculas para
absorber radiaciones, entre ellas las
radiaciones dentro del espectro UV visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que
una molécula puede absorber y la eficiencia
con la que se absorben dependen de la
estructura atómica y de las condiciones del
medio (pH, temperatura, fuerza iónica,
constante dieléctrica), por lo que dicha técnica
constituye un valioso instrumento para la
determinación y caracterización de
biomoléculas. (Díaz et al., 2000).

Tabla 1.
Especificaciones de longitud de onda y los
tipos de colores que se presentan en absorción
atómica y cuando se observa o refleja.
Nota:  Fuente: (Díaz et al., 2000).
Seguido de ello se presenta que esta
técnica está basada en la ley de absorción, la
cual se fundamenta en la combinación de la
ley de Lambert y la ley de Beer, por lo cual es
denominada la ley de Lambert-Beer que
describe la atenuación de la luz que viaja a
través de un medio uniforme que contiene una
sustancia absorbente. La intensidad I de la luz
que viaja a través del medio decrece
exponencialmente con las distancias y está
definida por la ecuación.
I=I 0 e−ε ( λ ) cd
Donde ε(λ) es el coeficiente de
extinción de la sustancia absorbente, λ es la
longitud de onda, c es la concentración de la
sustancia absorbente que es constante en el
medio, y d es la longitud del camino óptico a
través del medio.
Las propiedades de la ley de Lambert-
Beer son válidas incluso si hay más de una
INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías
sustancia absorbente en el medio. Cada
sustancia contribuye con su parte a la
absorbancia total dando como resultado que la
misma es la suma de las n-esimas absorbancias
están presentes en el medio. (Bencomo et al.,
2016).
Dicho lo anterior se plasma en una
gráfica llamada curva espectral que se enfoca
en el comportamiento diferencial en la
cantidad de radiación que absorbe un material
que se denomina absorbancia o bien densidad
óptica de transmitancia. Por lo cual una forma
gráfica de estudiar este comportamiento es
disponer los datos de absorbancia (%) en el eje
Y y la longitud de onda λ en el eje X. Al unir
los puntos con una línea continua se origina
una representación bidimensional de la curva
espectral. (Hernández et al., 2009).
Y finalmente esta técnica se analiza con el
permanganato de sodio el cual puede
solubilizarse en ciertos disolventes orgánicos,
tales como la acetona, acetonitrilo,
benzonitrilo, piridina, ácido acético glacial y
ácido trifluoroacético, entre otros, pero las
soluciones resultantes presentan poca
estabilidad debido al ataque del ion
permanganato sobre las moléculas del
disolvente.
El efecto del pH en la oxidación por
permanganato potásico se manifiesta
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

usualmente por medio de un cambio en el  Balones

producto de reducción obtenido del mismo.  Micro pipeta
Salvo en condiciones de aplicación muy  Espectrofotómetro
extremas, por ejemplo, con una acidez elevada  Celdas de cuarzo
que causa la conversión del ion MnO4 - en la
molécula HMnO4 mucho más reactiva, es la
reactividad del propio permanganato la que se
ve significativamente influenciada por la
concentración de iones hidrógeno. (Medialdea
et al., 2005).

Objetivo

Objetivo general

Adquirir conocimientos básicos del

espectrofotómetro dentro del laboratorio, con
el fin de realizar las lecturas correspondientes
del permanganato

Objetivos Específicos

1. Lograr adquirir conocimiento de las

partes del equipo y su funcionamiento.
2. Realizar las lecturas de absorbancia y
transmitancia de forma adecuada.
3. Analizar las muestras de permanganato
encontrando la longitud de onda más
alta con el espectrofotómetro

Materiales y métodos

Materiales

 Solución de permanganato
 Agua destilada
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

Método

Figura 1.

Diagrama de flujo del proceso

 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

Resultados y discusión
VALORES EN 530nm
Tabla 2 DILUCI-
TRAMITANCIA (%T) ASORBANCIA
ONES
Lecturas de transmitancia y absorbancia de la
1 55,3 0,257
dilución 2 (0.0014mM)
2 50,1 0,301
LECTURAS DE TRANSMITANCIA Y 3 31,9 0,497
ABSORVANCIA
λ A %T 4 17,4 0,76
440 0,019 95,8 5 10 1,002
450 0,026 94,4
460 0,05 89,1
470 0,027 93,9
480 0,057 87,6 Los resultados en la práctica de
490 0,106 78,4
500 0,147 71,3 laboratorio deben ser presentados en forma de
510 0,195 63,8 tabla y/o gráfica, con el fin de mejorar la
520 0,232 58,7
530 0,26 55 visualización de los datos obtenidos en los
540 0,233 58,4
procedimientos realizados. Luego, se dispone
550 0,244 57
560 0,151 70,7 a realizar un análisis de los datos obtenidos
570 0,134 73.3
para dar solución al objetivo planteado en la
Figura 2. Diluciones de permanganato de
práctica de laboratorio. En este apartado del
documento es necesario describir el motivo
por el cual se obtiene un resultado favorable o
no en la práctica. Para lograr un buen análisis
es importante realizar una revisión
bibliográfica en fuentes confiables como
potasio. Fuente propia. artículos científicos, libros, tesis de grado,
páginas de internet, entre otras herramientas
Tabla 3
CONCENTRA para la divulgación científica. En los
DILUCIONES Vol Soluto Vol solvente
-CIÒN(mM)
1 0,0010 1,25x103 24,9987
resultados y discusiones se debe tener una
2 0,0014 1,75x103 24,9982 extensión mínimo 700 palabras y máximo
3 0,0020 2,5x103 24,9975
1200. El tiempo verbal para los resultados y
4 0,0030 3,75x103 24,9962
5 0,0040 5x103 24,995 los análisis de resultados es el presente.

Tabla 4

Conclusiones
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

Para esta parte del documento, que es
fundamental en la elaboración del informe, se
debe transmitir de forma clara al lector los
resultados más importantes de la investigación,
en la cual se debe responder a la pregunta
problema planteada y los objetivos descritos
previamente. La conclusión debe tener una
extensión mínima de 300 palabras y máxima
de 500. El tiempo verbal para estas
redacciones es en presente.
mediante las normas APA séptima edición.
Como mínimo el informe de resultados debe
contener al menos unas 10 referencias
bibliográficas. A continuación, se presenta un
ejemplo:
Centro de Escritura Javeriana. (2015). Tipos
de textos Informe de Laboratorio.
Pontificia Universidad Javeriana,
seccional Cali. 0

Pichardo, C. A. (2017). Informes de

Referencias
Laboratorio. 35.
Para las referencias bibliográficas se
debe tener presente que la forma correcta es

Referencias Bibliográficas

Hernández, J., & Montaner, D. (2009). Patrones de respuesta espectral. Tecnologías

Geoespaciales: Experiencias Aplicadas al Estudio y Gestión del Territorio. Carlos Mena
(Ed.) ISBN, 978-956.
http://www.gep.uchile.cl/Publicaciones/Hern%C3%A1ndez%20&%20Montaner
%202009%20SAF.pdf

Bencomo, S., Villazana, S., & Salas, B. (2016). Diseño y construcción de un oxímetro de
pulso. Revista Ingeniería UC, 23(2), 162-171.
https://www.redalyc.org/pdf/707/70746634007.pdf

Medialdea, J. M., Arnáiz, C., & Díaz, E. (2005). Permanganato potásico: un potente y versátil
oxidante. INGENIERIA QUIMICA-MADRID-, 37(430), 129.
http://www.elaguapotable.com/permanganato%20un%20potente%20y%20versatil
%20oxidante.pdf
 INFORME DE LABORATORIO
Facultad de Ingenierías

Díaz, N. A., Ruiz, J. A. B., Reyes, E. F., Cejudo, A. G., Novo, J. J., Peinado, J. P., ... & Fiñana, I.
T. (2000). 8. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas. Universidad de Córdoba, 1-8.
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

Aprende las ✔ Partes del Espectrofotómetro ✔ - Galileo Equipos. (2021, junio 2). ▷ Aprende en
Nuestro ✓ Blog de Laboratorio ✓ - Galileo Equipos.
https://www.galileoequipos.com/blog/partes-del-espectrofotometro/

Fernández Lainez, C. (2019). Espectrometría de masas en tándem: una nueva herramienta para el
estudio de la metabolómica en pediatría.
http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/bitstream/20.500.12103/1605/1/
actped2009_44.pdf

Padilla Salazar, M. F. Implementación de un sistema multicomponente amigable con el ambiente

por espectrofotometría UV-VIS.
http://tesis.ipn.mx/handle/123456789/29521