TECNINOTAS

Laboratorio de
Inseminación
Artificial porcina

En el laboratorio de Inseminación Artificial se

analizan las muestras de semen colectadas
para producir las dosis de inseminación con las
características de calidad óptimas para la
productividad de la granja de cría. Te invitamos
a profundizar más sobre el tema.

Porcicultura
Para proceder a la colección y procesamiento de semen es necesario contar con un equipo
especial. El operario debe tener cuidado a la hora del procedimiento para evitar cualquier
perdida de líquido o ingreso de algún agente externo.

Equipo necesario para la colección del semen

LO MÍNIMO REQUERIDO ES:

Termo de boca ancha para colección.

Guantes desechables para colección y guantes higiénicos de plástico.
Filtro para semen o gasa estéril.
Microscopio con lente de 100X, 40X y 10X, en lo posible con platina térmica.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Pipeta volumétrica de 1 mililitro.
Dos termómetros de 12 pulgadas (30 CM).
Botellas de 1 litro para preparar el diluyente (tapa roja o tapa azul).
Horno esterilizador.
Bolsa estéril para colección de semen.
Balón volumétrico 100 ml.
Suero formolado.
Cámara de Bürker.
Diluyente.
Agua destilada estéril.
Botellas de inseminación.
Nevera de conservación.
Baño María.
Termómetro de máxima y mínima.
 LO MÍNIMO REQUERIDO ES:

Papel aluminio.
Cepillo para uñas.
Armario libre de humedad para almacenar materiales.
Nevera para transporte de las dosis de semen.
Puntero o abridor de frascos.
Servilletas de mano.

La limpieza del laboratorio de Inseminación Artificial y del material utilizado para procesar el
semen es imprescindible para mantener en óptimas condiciones las dosis seminales para su
conservación.

En Italcol lo podemos asesorar en el montaje del

laboratorio de Inseminación Artificial.

Colección de semen

Cuando se va a realizar el proceso de colec- Tomando en cuenta esto, el material que se va

ción de semen, son varios los factores y cuida-
dos que se deben tomar en cuenta debido a
que las células espermáticas son muy sensi-
bles a cambios de temperatura (±2 ºC), a
cambios de presión osmótica y a impurezas.
a emplear para el procedimiento debe haber
sido esterilizado y se debe encontrar tibio.
Para la colección del semen se debe conside-
rar una serie de recomendaciones:

Preparar el termo para la toma con una bolsa estéril para colección,
debe contener 50 CC de diluyente a 37 grados centà grados, tapar-
lo con un filtro para semen o gasa y protegerlo con papel aluminio.

Ingresar al corral del macho, si se encuentra muy sucio, lavar el

prepucio con agua y secarlo.

Dirigir el macho hacia el corral de toma de semen.

 Colocarse un guante de colección y luego un guante plástico para
realizar el aseo del prepucio.

Antes de llegar al lugar de la toma, evacuar el prepucio masajeando

de atrás hacia delante y secar con una servilleta de mano.

Dirigir el macho para que monte al potro.

Con el macho ya en el potro, esperar a que desenvaine el pene, el

operario debe quitarse el guante plástico y tomar el pene por la
punta dejando libre el extremo para permitir la salida libre del
semen, sin que este toque la mano.

Recoger en el termo solo la fracción rica (eyaculado cremoso y

lechoso), la fracción pobre (tapón y secreción cristalina) puede
recolectarse en otro termo o recipiente.

Nunca se debe soltar el pene del macho.

La toma termina cuando sale la última fracción pobre, el pene

pierde erección y comienza la retracción.

Vea este video en la versión online de la clase.

Clasificación del semen

Tras realizar todo el procedimiento requerido medio ambiente contaminante.

para la colección del semen, se debe proce-
der de inmediato y en el menor tiempo posi-
ble a su evaluación y calificación, esto debido
a que hay que procurar evitar disminuciones
de temperatura y exposición del semen al
Lo primero es colocar la bolsa con el semen a
baño maría con una temperatura de 37
grados centígrados, la misma debe ser cerra-
da con una pinza.
En el proceso de calificación se debe evaluar:
el volumen, color, olor, motalidad, concentra-
ción, morfología espermática y se debe sacar
un cálculo del número de dosis posibles.
Veamos en los siguientes contenidos el deta-
lle de cada uno de estos procedimientos.
Volumen
Esta medición se cuantifica en centímetros
cúbicos o mililitros. Por lo general,un verraco
eyacula entre 150 y 250 ml, pero puede
variar entre 50 y 500 ml dependiendo de la
edad, raza y tamaño testicular del verraco.
Otra alternativa para medir el volumen
cuando se utiliza bolsa estéril para la colec-
ción, es pesar el eyaculado (1 gramo es igual
a 1 mililitro). Los resultados deben ser anota-
dos en el registro de producción de dosis
seminales del centro de Inseminación Artifi-
cial (IA).
Color
El color normal es blanco cremoso, en caso de
la coloración sea rosada, amarilla o café,
indican presencia de sangre o alguna sustancia
contaminante que posiblemente se deba a
hemorragias internas del área genital. Se debe
observar el color y anotar en el registro de
producción de dosis seminales del centro de IA.
Olor
Un eyaculado normal produce muy poco olor,
pero cuando se encuentra contaminado con
Equipo necesario para la colección del semen
Referente a la concentración para el conteo de espermatozoides, veamos cómo se realiza el
método más empleado para ello.
algún fluido prepucial tiene un olor distintivo.
Porcicultura Laboratorio de Inseminación
Artificial porcina.
Motilidad
Es una medida de la viabilidad del semen. Se
realiza colocando una pequeña gota en un
portaobjetos y sobre ella se coloca el cubre
objetos los cuales deben estar a 37 grados
centígrados. Esta muestra luego es observa-
da en el microscopio con el objetivo de 10X.
La motilidad observada en porcentaje de
acuerdo a la proporción de espermatozoides
que muestren movimiento progresivodebe
ser anotada en el registro de producción de
dosis seminales del centro de IA. “Esta califi-
cación es subjetiva y requiere de personal
bien entrenado”, Manual Italcol.
Concentración
Consiste en la determinación del número de
espermatozoides por unidad de volumen.
Esta medición se puede realizar por diferen-
tes métodos pero el más usado es el conteo
en cámara de Bürker.
Morfología espermática
En esta evaluación también se puede deter-
minar la viabilidad del semen y puede reali-
zarse al mismo tiempo que se efectúa el
conteo en la cámara de Bürker, registrando
el número de espermatozoides anormales
que se encuentren en cada cuadro.
 Haz click en cada imagen para conocer información

1 En un balón volumétrico de 100 ml, se 2 El conteo se realiza utilizando el micros-

debe diluir 1 ml de semen puro en una copiocon lente de 40X (400 aumentos),
solución de suero fisiológico formulado, se cuentan los espermatozoides encon-
agregando 1 ml de semen y 99 ml de trados dentro de 40 cuadros pequeños
suero. Luego agitar suavemente hasta de la cámara.
tener una solución homogénea.
3 La concentración espermática del eya-
Con un pitillo o pipeta pasteur tomar culado por milímetro cúbico es igual al
una gota de la dilución y colocarla en el total de espermatozoides contados por
retículo de la cámara. 10.000.

Escala de motilidad

Como se mencionó anteriormente, la motilidad es una medida de la viabilidad del semen, al ser
estudiada microscópicamente se debe clasificar de acuerdo a la siguiente escala.

Calificación
Características
de motilidad
Muy pocos espermatozoides presentan movimientos progresivos.
0 A 20%
Se observa gran cantidad sin movimiento fijo.

Una pequeña proporción de espermatozoides tienen movimientos

20 A 40%
progresivos, una cantidad mayor tienen movimientos oscilatorios.

Una buena proporción de espermatozoides tienen movimiento pero de tipo circular

40 A 60%
o fijo, con una baja proporción de espermatozoides con movimientos progresivos.

La mayoría de los espermatozoides muestran movimientos progresivos

60 A 80%
y vigorosos, pero de movimientos lentos a través del campo.

80 A 100% La mayoría de los espermatozoides muestran movimientos progresivos y vigorosos.

Fuente:Almond,G, Britt,J, Flowers,B, et al. (1998). El libro de la Inseminación Artificial en el

Cerdo. II edición, Universidad Estatal, Carolina del Norte, EE.UU.
 Escala de motilidad

También debe tomarse en cuenta el tipo de movimiento del espermatozoide en el microscopio

con lente de 40X tomando en cuenta la siguiente clasificación:

Tipo de
movimiento Características
TIPO 0 Espermatozoides sin movimiento.
TIPO 1 Espermatozoides sin movimiento progresivo, girando sobre sí mismos.

TIPO 2 Espermatozoides con movimientos anormales y algunos progresivos.

TIPO 3 Espermatozoides con movimientos progresivos lentos y en zigzag.

TIPO 4 Espermatozoides con movimientos progresivos rápidos.
TIPO 5 Espermatozoides con movimientos progresivos muy rápidos.

Fuente:Almond,G, Britt,J, Flowers,B, et al. (1998). El libro de la Inseminación Artificial en el

Cerdo. II edición, Universidad Estatal, Carolina del Norte, EE.UU.

En caso de detectar cuerpos extraños y aglutinaciones en el semen, se deben clasificar de la

siguiente manera:

Aglutinaciones Características Clasificación

Poca Menos de 2 aglutinaciones por campo +

Media Entre 3 y 5 aglutinaciones por campo ++

Abundante Más de 5 aglutinaciones por campo +++

Anomalidades espermáticas

Gota citoplasmática Tipos de colas anormales

Gota Citoplasmática Distal. Cola en látigo.

Gota Citoplasmática Proximal. Cola enrollada.
Cola Doblada.
 Cola Flexionada

Cola Suelta
Cola doble
Cola Partida Cola en Ovillo
Cola en Látigo

Gota Citoplasmática Gota Distal

Gota Distal y
Cola en Látigo
Gota Proximal

Fuente: Manual de Inseminación Artificial Porcina, Kubus.

Cabezas anormales

Asimétrica.
Piriforme.
Micro cabeza.
Alargada.

Gota Citoplasmática Cola en Ovillo Cola en Látigo

Proximal

Fuente: Manual de Inseminación Artificial Porcina, Kubus.

 Microcabeza Doble Afilada Alargada

Nomral Suelta

Macrocabeza Piriforme Achatada Desintegrada

De acuerdo con el porcentaje de anormalidades obtenido, el semen debe descartarse o la

concentración de las dosis debe ser ajustada tomando en cuenta los siguientes términos:

Parámetro No usar
- Cola en látigo. - Mayor de 40%

- Gota proximal. - Mayor de 50%

- Gota distal - Mayor de 60%

Fuente: Manual de Inseminación Artificial Porcina, Kubus.

Fuente:Almond,G, Britt,J, Flowers,B, et al. (1998). El libro de la Inseminación Artificial en el
Cerdo. II edición, Universidad Estatal, Carolina del Norte, EE.UU.

Cálculo del número de dosis posibles

Está considerado que la dosis mínima recomendada es de 2x10 espermatozoides, pero la

dosis que más se utiliza es de 3x10 para un semen de buena calidad.

Este cálculo se realiza multiplicando los espermatozoides normales por el volumen del eyacu-
lado y se divide por 300, cuando se quieren dosis con concentración de tres mil millones de
espermatozoides.

La fórmula aplicada es:

V: Volumen del eyaculado.
A: Espermatozoides normales encontrados en cuarenta cuadros.

El espermatozoide normal tiene cola y cabeza, en el extremo de la cabeza se encuentra el

acrosoma el cual contiene enzimas que le ayudan a penetrar las membranas del óvulo.

Preparación del diluyente

Este debe hacerse siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante. Cuando se intenta
utilizar menor o mayor cantidad de agua a la indicada, se corre el riesgo de matar los esperma-
tozoides.

La mayoría de los diluyentes para semen porcino vienen en presentaciones para un litro y se
preparan de la siguiente manera:

Calentar en baño de María a 37 grados centígrados 1000 CC de

agua estéril.

En un frasco tapa azul previamente esterilizado, verter el conte-

nido de un sobre de diluyente, observar que no contenga impu-
rezas y agregar 500 CC de agua destilada estéril, agitar vigoro-
samente hasta obtener una solución transparente, agregar los
otros 500 CC de agua destilada estéril y agitar nuevamente.

Colocar el frasco con diluyente en baño de María a 37 grados

centígrados.

Preparar mínimo dos horas antes de hacer la dilución del semen

y máximo 24 horas antes.

Preparación del semen

Cuando se tenga el dato del número de dosis posibles, se debe

multiplicar ese número por 100, restar el volumen de eyaculado
obtenido y la diferencia será la cantidad de diluyente a utilizar.

Medir la cantidad de diluyente que se necesita y ajustar la tem-

peratura la cual debe ser la misma del semen. Tomar la tempera-
tura con un termómetro estéril.

Adicionar el semen al diluyente en forma suave por las paredes

de la bolsa, moverla suavemente para homogenizar la dilución.
 Con un pitillo o pipeta tomar una muestra y evaluar nuevamente
motilidad, si ésta es menor de 65% no se debe utilizar.

Cortar la punta de la bolsa con una tijera estéril y empacar el

semen en las bolsas o botellas de 100 ml, estas deben estar a
37 grados centÍgrados, hacerlo suavemente y sacar el aire antes
de colocar la tapa.

Dejar las dosis acostadas por dos horas protegidas de la luz,

luego conservar en la nevera a 16 grados centÍgrados.

Anotar en el registro de producción de dosis seminales del

centro de IA el número de dosis a conservar y toda la informa-
ción requerida.

Conservar las dosis por un tiempo máximo de 48 horas y 7 días

para el caso de diluyente de larga vida.

No utilizar dosis con menos de 24 horas de preparación para

evitar choques de temperatura.

Cuando se tenga el dato del número de dosis posibles, se debe

multiplicar ese número por 100, restar el volumen de eyaculado
obtenido y la diferencia será la cantidad de diluyente a utilizar.

Vea este video en la versión online de la clase.

En casos donde no se conozca la concentración del semen es posi-

ble realizar la dilución utilizando una parte del mismo por cuatro
partes de diluyente, pero la recomendación es realizar siempre la
evaluación completa del semen.
Porcicultura