PRÁCTICA N°2.

DETERMINACIÓN DE UNA MUESTRA PROBLEMA

POR “UV-Vis”
1
Bothía Carlos Andrés, Castillo Yamid Antonio, Morales Cristian Leonardo, Oñate Steffanya

Docente: 2 PhD. Mario Romero Calonge

1,
Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Atlántico, Km 7 Via Puerto, Barranquilla, Atlántico
E-mails: cbothia@uniatlantico.edu.co, yacastillo@mail.uniatlantico.edu.co, clmorales@mail.uniatlantico.edu.co,
sonates@mail.uniatlantico.edu.co
2
Químico, Universidad de Córdoba, Doctor en Ciencias Químicas, Pontificia Universidad Católica de Chile,
Postdoctorado en diseño de materiales nano-estructurados para celdas fotovoltaicas, PUCV
E-mail: marioromero@mail.uniatlantico.edu.co

20-09-2022

RESUMEN by adding chloroform, thus creating two

phases, one organic and one inorganic
En el desarrollo de esta experiencia se realizó la where the substance present in acid
variación de la concentración de ZnSO4 y media had a noticeable color change
CuSO4, disoluciones de una pila de Daniell, para compared to the other two samples
evaluar el efecto que produce esta perturbación where there was no reaction.
sobre el valor de potencial de la reacción,
además se estudió la influencia del pH en
KEYWORDS: Redox balance, Daniel's cell,
equilibrio redox analizando 2 sustancias, KIO3 y
pH, potential, ions.
KI en medios ácido, neutro y básico para
observar el comportamiento de estos y
presenciar la generación de I2 al agregar INTRODUCCIÓN
cloroformo, creando así dos fases, una orgánica La adición estándar consta de un tipo de
y otra inorgánica donde la sustancia presente enfoque en la química analítica basado en
en medio ácido tuvo un cambio de coloración el análisis cuantitativo, por este método
notable en comparación con las otras dos de calibración podemos adicionar de
muestras donde no hubo reacción. manera in situ estándar previamente
preparado y de concentración conocida a
PALABRAS CLAVES: Equilibrio REDOX, las alícuotas de la muestra analizada. Este
pila de Daniell, pH, potencial, iones. tipo de metodología se emplea en
circunstancias en las que la señal analítica
ABSTRACT se ve alterada por cualquier otra sustancia
presente en la matriz, a este tipo de
In the development of this experience,
sustancias en análisis cuantitativo se las
the variation of the concentration of
conoce como "interferentes".[1]
ZnSO4 and CuSO4, solutions of a Daniell
cell, was carried out to evaluate the effect
that this disturbance produces on the
potential value of the reaction, in addition
the influence of the pH in redox balance
analyzing 2 substances, KIO3 and KI in acid
media, neutral and basic to observe their
behavior and witness the generation of I2

1

Imagen 1. Preparación de un set de
disoluciones para adición estándar.
En un ejemplo práctico, si queremos
calcular en una muestra de desechos
fotográficos la concentración de plata
presente, se haría mediante
espectrometría de absorción atómica. Un
analista podría calibrar mediante el uso de
la curva de calibración, el espectrómetro
con algunas disoluciones acuosas de una
sal de plata pura y usar el gráfico de
calibración resultante en la determinación
de la concentración de plata de las
muestras problema que desea analizar. A
pesar de esto, hay que tener en
consideración que está metodología solo
surte efectos fiables si la muestra
problema de desechos fotográficos y las
disoluciones de sal de plata dan los
mismos valores de absorbancia. Es decir,
al usar soluciones puras para establecer el
gráfico de calibración, se asume que no
hay " efectos de matriz", esto último hace
referencia a que no existe reducción o
incremento de la señal de plata debido a
otros componentes.
En muchas áreas del análisis cuantitativo
este tipo de suposiciones tienden al error.
Los efectos de la matriz ocurren incluso
con métodos cómo la espectrometría de
plasma, que tiene la reputación de estar
relativamente libre de interferentes. De
este modo al emplear el método de
adición estándar se busca eliminar los
efectos de la matriz que pudieran
comprometer la absorbancia del analito
problema[2].
En el desarrollo de este método de
calibración se toman volúmenes iguales
de soluciones de muestra, todas excepto
una de las soluciones de muestra se añade
con cantidades conocidas y diferentes de
analitos, y luego todas se diluyen al mismo
volumen. A continuación, se determinan
las señales del instrumento para todas
estas soluciones y se representan
gráficamente los resultados.
Imagen 2. Como graficar una adición
estándar
Como de costumbre, la señal se traza en
el eje y; en este caso, el eje x está
graduado por la cantidad de analito
añadido (peso absoluto o concentración).
La línea de regresión (no ponderada) se
calcula de la forma habitual, pero hay una
opción para extrapolarla a un punto en el
eje x en y = 0. Esta intersección negativa
en el eje x corresponde a la cantidad de
analito en la muestra de prueba. El valor
viene dado por b/a, la intersección y la
pendiente de la línea de regresión[3]. En
esta practica se emplea el uso de este
método de calibración a una muestra
problema de CuSO4*5H2O contaminada
para denotar únicamente la absorbancia
de este analito y así determinar su
concentración.
METODOLOGÍA
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
A continuación, se describen los
resultados obtenidos al realizar el análisis
cuantitativo (concentración) de una
muestra de CuSO4, por el método de
adición estándar, dicho proceso se realiza
cuando el analito esta implícito en la
matriz, es decir hay otras sustancias o
interferentes en la muestra a estudiar.
2
Para llevar a cabo este análisis, se realizo
una curva de calibrado de CuSO4*5H2O
donde estuviese el analito implícito; a
partir de una disolución madre (50 ml) de
la misma sustancia con concentración
conocida (102,1 mM), se realizaron 5
disoluciones estándar (25 ml) en las cuales
teníamos 10 ml de la muestra problema y
valores añadidos de la disolución estándar
0, 2, 3, 4 y 5 ml respectivamente en los 5
matraces, por último fueron aforados y
llevados al espectrofotómetro, donde,
nos arrojo valores de absorbancia para
cada una de las 5 disoluciones, a partir de
Fig. 1. Disolución madre a 0,1021 M.
dichos resultados se pudo realizar la curva
de calibrado de concentración (nm) vs Abs Cabe aclarar que, a la hora de pesar en la
(UA), de acuerdo a esto se aplicó balanza analítica, se tuvo un error en la
regresión lineal simple (RLS) y medición de 0,0004 g, el cual debió ser
extrapolación de datos para determinar la considerado al momento de preparar la
concentración del analito en la muestra disolución madre (Fig. 2).
problema.
Aplicamos nuevamente el calculo de la
Preparación de la disolución madre: molaridad que debe tener esta disolución,
con el peso experimental tomado.
Como primer paso se preparó la
disolución madre de CuSO4 5H2O al 0,1021
M (Fig. 1), la cual fue usada para la 1,2742 g
creación de las 5 disoluciones, estas nos 249,69 g /mol
ayudaron a crear la curva de calibrado. Se [ M ]= ≈ 0,1021 M
calcularon teóricamente los gramos de 0,05 L
CuSO4 5H2O (98%) necesarios para realizar
50 ml de esta disolución.
Para este cálculo usamos la siguiente
ecuación.

w ( g )=( M ) ( V s/ n L ) ( PM ) ( 100P ) Ecu 1

Remplazando en la ecuación 1 tenemos
que:

w ( g )=( 0,1mo / L ) ( 0,05 L ) ( 249,68g /mol ) ( 100

98 )
w ( g )=1,2738 g de CuSO4 5 H 2 O

Fig. 2. Valor experimental de la masa del

CuSO4 5H2O (98%) para la realización de 50
ml de disolución madre.

3
 ( 0,1021 M ) ( 0,002 L )
Preparación del set de disoluciones
C 2= =0,0082 M
0,025 L
estándar:
En segunda instancia se procedió a
Factor de conversión M a mM.
realizar 5 disoluciones (A, B, C, D y E) en
matraces de 25 ml, agregando 10 ml de la 1000 mM
( 0,008 M ) =8,2 mM
muestra problema a cada matraz y luego a 1M
cada una se le fue agregando un volumen
progresivo de la disolución madre, es decir
 Matraz C (3 ml)
0, 2, 3, 4 y 5 ml a cada matraz
respectivamente, de igual forma se ( 0,1021 M ) ( 0,003 L )
calculó la concentración molar y milimolar
C 2= =0,0122 M
0,025 L
de cada matraz teniendo en cuenta los ml
de disolución madre agregados, estas son
las concentraciones estándares conocidas Factor de conversión M a mM.
que se sumaran a la concentración 1000 mM
desconocida de la muestra, para esto, ( 0,012 M ) =12,2 mM
1M
usamos la fórmula de dilución:
C 1 V 1=C 2 V 2 Ecu 2
 Matraz D (4 ml)
( 0,1021 M ) ( 0,004 L )
C1= Concentración de disolución madre. C 2= =0,0163 M
0,025 L
V1= Volumen añadido de disolución madre
a cada matraz.
Factor de conversión M a mM.
C2= Concentración disolución estándar.
V2= Volumen de disolución estándar. 1000 mM
( 0,016 M ) =16,3 mM
1M
Donde C2 es la concentración que se
quiere hallar.  Matraz E (5 ml)
Despejamos C2 ( 0,1021 M ) ( 0,005 L )
C 2= =0,0204 M
C1V 1 0,025 L
C 2= Ecu 2.1
V2
Factor de conversión M a mM.
 Matraz A (0 ml) 1000 mM
( 0,020 M ) =20,4 mM
Como no se agregaron ml de la disolución 1M
madre, solo se encontraba la
concentración del analito y es lo que En la siguiente tabla se encuentran
registro el espectrómetro UV-Vis. registrados todos los datos de las 5
disoluciones preparadas (Tabla 1), de igual
 Matraz B (2 ml) forma se presenta evidencia de las
disoluciones realizadas (Fig. 3).

Matraz A B C D E
V añadido de disolución madre (ml) 0 2 3 4 5
[] M 0,004 0,008 0,012 0,016 0,020
1 2 2 3 4

4
 [] mM 4,1 8,2 12,2 16,3 20,4

Tabla 1. Datos de concentración molar y milimolar de las 5 disoluciones estándar según los ml agregados
a cada matraz (no se tienen en cuenta la concentración que hay en los 10 ml de la muestra existente en
cada matraz).

Grafica 1. Espectro de la muestra

problema donde se encuentra el analito e
Fig. 3. Set de disoluciones que contienen interferentes.
10 ml de la muestra problema más valores
de concentración estándar conocidos.

Creación de la curva de calibrado:

Para la creación de esta curva,
primeramente, se llevó una muestra de la
disolución problema al espectrofotómetro
UV-Vis (Grafica 1), aquí se evidencia un
pico en los 810 nm aproximadamente, el
cual hace referencia a la señal del CuSO4 y
uno más pequeño en los 520 nm Grafica 2. Espectro de absorción de la
aproximadamente, dicha medida hace disolución madre, donde se denota el
referencia a los interferentes que pueden punto máximo en los 810 nm
estar en la muestra problema. Luego, se aproximadamente.
tomó el espectro de la disolución madre,
en el cual se denoto nuevamente el punto
A continuación, se llevó cada disolución
más alto del espectro a los 810 nm,
(A, B, C, D y E) al espectrofotómetro UV-
reafirmando el valor máximo de absorción
Vis con el fin de obtener las absorbancias
del CuSO4 (Grafica 2.). teniendo en cuenta
de cada una de estas, teniendo en cuenta
estos resultados de absorción, se restaron
la medición de absorbancia de un blanco
los dos espectros, con el objetivo de que,
(solvente agua) que fue restada a las
a la hora de tomar la absorción de las 5
demás muestras, luego se procedió a
disoluciones para la creación de la curva
crear la curva de calibrado en el programa
de calibrado, solo se tuviese en cuenta la
Excel, donde, en el eje de las x teníamos la
absorción en el punto mas alto del CuSO4
concentración de cada muestra en mM y
(810 nm aproximadamente) y se obviara la
en el eje de las y, la absorbancia
absorción de otras sustancias en la matriz,
presentada por cada disolución, la curva
ya que estos eran interferentes para
de calibrado (grafica 3) se realizó de
nuestro análisis.
acuerdo a los datos suministrados en la
(tabla 2).

5
 Esto solo se cumple en las longitudes de
Curva de calibrado CuSO4 + 10 ml de onda donde la sustancia absorbe
muestra problema. mayormente, en este caso a 810 nm.
[mM] Abs (UA) En relación a lo anterior se procedió a
calcular la concentración de esta muestra,
4,1 0,071 de acuerdo a la ecuación dada por la curva
8,2 0,168 de calibrado y aplicando extrapolación.
12,2 0,220
16,3 0,272 y=0,0116 x +0,0739 Ecu 4
20,4 0,320 Donde:
Tabla 2. Datos de absorbancia (810 nm) y Y=absorbancia de la muestra.
concentración de las 5 disoluciones, con X=concentración de la muestra.
las cuales se realizo la curva de calibrado.
Sabiendo esto, se realizó el siguiente
tratamiento, se aplica regresión lineal
simple y se extrapolan los datos de
acuerdo a la ecuación 4, teniendo en
cuenta que usamos el método de adición
estándar, tenemos que considerar que
nuestra señal analítica en este caso
observancia sea cero, pues en este punto
sabremos la concentración de nuestro
analito, tal como se explica en la Fig 4.

Grafica 3. Curva de calibrado de CuSO4

más concentración del analito.

Cálculo de la concentración de la muestra

problema de CuSO4:
Como última prueba se realizó el cálculo
de la concentración de la muestra
Fig 4. Explicación grafica del método de
problema de CuSO4 proporcionada por el
adición estándar usando RLS y
docente, basándonos en la ecuación dada
extrapolación [#].
por la curva de calibrado, la cual obedece
a una ecuación lineal del tipo y=mx+b o
ecuación de la recta, esta tiene relación De la ecuación 4, considerando que el
con la ley de Beer Lambert, dicha ley nos valor de absorbancia es cero, tenemos
dice que: que:

Donde:
A=ε . b . c Ecu 3
x= |−0,0739
0,0116 |
=6,3707 mM
Y= A: es decir, la absorbancia de la
muestra. Factor de conversión mM a M.
m= ε.b: es decir, la pendiente es igual a la
1M
multiplicación del diámetro de la celda por ( 6,3703 m M ) =0,0063703 M
el coeficiente de absortividad molar de la 1000 m M
sustancia a estudiar.

6
Para saber la concentración real, hay que Para calcular el % error se usa la siguiente
tener en cuenta el factor de dilución que formula:
se uso al momento de realizar las 5 V teorico−V experimental
disoluciones que se llevaron al %E= ×100 Ecu 6
espectrofotómetro en comparación a la V teorico
muestra problema, como se adicionaron
10 ml de esta disolución a cada matraz de Cabe aclarar que los datos que se tomaron
25 ml, el factor de dilución será 2.5, para este calculo son las concentraciones
aplicamos el siguiente tratamiento experimentales y teóricas de la muestra
matemático. en unidades de mM.
[ mM ] ×2.5=[ mM real ] Ecu 5 De la ecuación 6 tenemos que:
15,11mM −15,9267 mM
%E= ×100
De la ecuación 5 tenemos que: 15,11 mM
6,3707 mM × 2.5=15,9267 mM %E=−5,4050 %

Factor de conversión mM a M. Con base en los resultados obtenidos se

1M pudo denotar errores que, aunque
( 15,9267 m M ) =0,0159 M pequeños influyen en gran manera en el
1000 m M
análisis cuantitativo de la experiencia,
estas alteraciones corresponden a
Además, se realizó el cálculo del %Error al desaciertos sistemáticos relacionados a la
contrarrestar la concentración hallada por calibración de los equipos, mediciones con
medio de la extrapolación de la curva de cierto margen de error al real u otras; de
calibrado y la concentración teórica dada igual manera se hace referencia a la
por el docente. eficiencia y aplicabilidad de las curvas de
Los cálculos para hallar las calibrado por el método de adición
concentraciones teóricas de las muestras estándar, puesto que son una herramienta
fueron los siguientes: muy útil para el cálculo cuantitativo de
sustancias.

 Muestra problema:
W de CuSO4 5H2O = 0,9626 g
CONCLUSIONES
W de CuSO4 5H2O según su pureza (98%).
La variabilidad de los métodos de
98
( 0,9626 g ) =0,9433 g calibración analíticos está sujetos a
100 márgenes de precisión y eficacia muy
específicos en los que, el tipo de sistema
Cálculo de la concentración molar (M). experimental que se desea analizar
denota el marco de referencia principal
0,9433 g para regirse por uno u otro en los análisis
249,69 g /mol cuantitativos de sustancias. En el caso que
[ M ]= =0,01511 M
0,25 L nos competen en esta práctica, el método
de adición estándar posee una serie de
particularidades que tuvimos que tener en
Factor de conversión M a mM. cuenta a la hora de realizar el respectivo
1000 mM análisis de resultados, tales como
( 0,0151 M ) =15,11 mM imprecisiones en el aforo de los patrones
1M
de concentración conocida, el estado del
material volumétrico y algunos errores

7
sistemáticos además de ciertas
discrepancias en las lecturas de los valores
y los cálculos correspondientes. Mismos
que presentaron cierto margen de error
aproximados a 5,4%. lo suficientemente
influyente para desviarlos de los valores
teóricos del análisis del CuSO 4*5H2O con
respecto a los otros “contaminantes”
presentes en la muestra problema. La
adición estándar resulta en una técnica de
análisis cuantitativo perfecta para
delimitar y eliminar la participación de
estos llamados interferentes que puedas
estar presentes junto al analito de interés
en la disolución problema.
BIBLIOGRAFÍA
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Farmacéuticos Bió logos
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Validació n de Métodos
Analíticos. (2002).
Validación de Métodos
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2016.12.013

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James Holler, and Stanley R.
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