Urocultivo.

El cultivo de orina, también llamado urocultivo, es la prueba

indicada para el diagnóstico de infección del tracto urinario.

Indicaciones:
Se realiza preferentemente con la primer orina de la mañana o
en su defecto con una retención mínima de 3 horas.
El recipiente utilizado para recolectar la orina debe ser estéril.
Abrir el frasco sólo en el momento de juntar la muestra sin
tocar el borde del frasco con los dedos y tapar
inmediatamente.
El primer chorro de orina es siempre descartado, ya que
solamente sirve para limpiar las impurezas que se quedan en
la uretra.
De preferencia no estar en tratamiento con medicamentos,
indicar si lo está.

Procedimiento:
Sexo femenino:
- Higienizar genitales externos con agua y jabón neutro
separando los labios vulvares.
- Colocar tapón vaginal.
- Descartar el primer chorro de orina
- Recolectar el chorro que se emite a continuación (chorro
medio) en un frasco estéril.

Sexo masculino:

-Higienizar los genitales externos con agua y jabón neutro

(retrayendo el prepucio y limpiando el glande).

- Descartar primer chorro de orina

- Recolectar el chorro que se emite a continuación (chorro
medio) en frasco estéril
Inoculación:

Homogenizar la muestra e introducir el asa calibrada (0.1) sin tocar

las paredes del recipiente, realizar el estriado correspondiente
(imagen). Cambiar el asa entre cada medio.

Medios Utilizados:
Agar Sangre.
Chromocult.
Cled.
MacConkey.

Se incuba de 34 a 37 Co de 24 a 48 horas.

Coprocultivo.
El coprocultivo o examen coproparasitoscópico consiste en el cultivo
de materia fecal. Es un método de diagnóstico microbiológico que
permite identificar diferentes organismos causantes de
enfermedades gastrointestinales.
Indicaciones:
Se realiza con heces frescas o con un hisopado rectal.
Se debe utilizar un frasco limpio, no es necesario que sea
estéril. Al momento de tomar la muestra se debe tener cuidado
de no mezclarla con orina.
 Obtenga la muestra antes de todo tratamiento con
antibióticos. En caso que esto no sea posible, informe al
laboratorio el tratamiento que está recibiendo.
El paciente debe lavar sus manos antes y después de la toma
de la muestra.
Procedimiento:
En adultos y niños que no usan pañales:
1. Recolecte la muestra de materia fecal en el frasco. Cualquier
deposición del día es válida.
2. Mantenga la muestra a temperatura ambiente.
En adultos y niños que usan pañales:
1. Observe cuando se produce la defecación.
2. Retire el pañal y tome una porción de materia fecal (elegir la
que presente sangre o mucosidad).
3. Coloque la muestra en el frasco.
4. Mantenga la muestra a temperatura ambiente.
Hisopado rectal:
1. Con hisopo estéril introducir en el ano 4 centímetros
(adulto) y 2.5 centímetros (niños). 2. Rotar tres veces el hisopo
y retirar.
Inoculación:
Con un asa en argolla se inocula en el agar correspondiente,
flameando entre cada estriado.
Incubar en condiciones aerofílicas de 34 a 36 C o por 24 a 48 horas.
Medios utilizados: AGAR SS, XLD, McCONKEY, HECTOEN, TCBS.

Orocultivo.
Un cultivo del exudado faríngeo es una prueba para detectar
microbios (como bacterias o un hongo) que pueden causar una
infección.
Indicaciones:
El paciente no debe comer ni beber antes del examen.
El paciente no debe lavarse los dientes ni enjuagarse la boca
antes del examen.
Si el paciente ya desayunó deben esperarse 2 horas antes de
tomar la muestra.
Procedimiento:
Pedir al paciente que incline la cabeza hacia atrás con la
boca bien abierta, si es necesario utilizar un baja lenguas.
Buscar puntos sépticos (coloración blanquecina en las
amígdalas).
Pedir al paciente que trague saliva 3 veces.
Con un hisopo estéril tomar la muestra frotando los puntos
localizados, el hisopo NO debe tocar la boca, lengua y
mejillas.
Se realiza un frote en una lámina porta objetos para realizar
una tinción de Gram.
Inoculación:
 Se inocula con asa en argolla, realizando cortes en el agar
entre cada estriado.
Se coloca un taxo de Bacitracina sobre el inóculo inicial.
Se incuba en condiciones microaerofílicas en jarra con
candela, de 34 a 37 Co de 24 a 48 horas.

Medios utilizados: Agar Sangre de carnero al 5%

Cultivo de secreción vaginal
Los cultivos vaginales son una prueba que se realiza en el
laboratorio para detectar cualquier tipo de infección en el aparato
reproductor femenino.
Indicaciones:
La paciente no debe estar recibiendo tratamiento
antimicrobiano, no practicarse duchas vaginales, ni tener
relaciones sexuales 24 horas antes de la obtención de la
muestra. Así mismo, no debe bañarse el día de la recolección
de la misma.
La paciente no debe aplicarse ningún tipo de crema o polvo en
la zona.
Para el uso del espéculo debe tomarse en cuenta la edad de la
paciente.
Procedimiento:
Se pedirá a la paciente que se desnude de cintura para abajo y
que se coloque en la camilla con las piernas abiertas y
 apoyadas en los estribos, del mismo modo que se realizan los
exámenes ginecológicos rutinarios.
Para la obtención de la muestra vaginal y/o cervical, se debe
emplear un espéculo estéril; la maniobra puede ser realizada
por el médico en la consulta o por el microbiólogo en el
laboratorio.
Se introduce el espéculo en la vagina de la paciente, a
diferencias de los exámenes ginecológicos, no se podrán
utilizar lubricantes para este paso, ya que podrían alterar los
resultados de los análisis.
Con una lámpara iluminar el interior, con dos hisopos
estériles tomar muestra de las paredes vaginales y/o del flujo
vaginal.
Realizar un frote en lámina porta objetos para tinción de Gram
utilizando uno de los dos hisopos.
Inoculación:

El inóculo se realiza con el hisopo previamente utilizado para

la toma de la muestra.
Incubar en condiciones microaerofílicas de 34 a 36 C o por 24 a
48 horas las cajas de Agar sangre, chocolate y Thayer Martin.
McConkey en condiciones aerofílicas.

Medio de transporte: Amies o Stuart.

Medios de cultivo: agar sangre (AS), agar Thayer-Martin (ATM),
agar Chocolate y agar MacConkey (AMK)
Cultivo de secreción uretral.
Es un examen de laboratorio que se lleva a cabo en hombres y
niños. Este examen se utiliza para identificar microorganismos en
la uretra que puedan estar causando uretritis.
Indicaciones:
El paciente no debe estar recibiendo tratamiento
antimicrobiano, abstención sexual de 24 horas, el paciente no
se bañará el día de la recolección de la muestra y debe tener
una retención urinaria de al menos 4 horas.
Procedimiento:
Se recomienda obtener la muestra en la mañana. Previa
retracción del prepucio, inspeccionar la presencia de la gota
matinal, en su defecto, practicar la asepsia del meato urinario
con un hisopo y solución salina fisiológica estéril. Indicar al
paciente previo lavado de manos que presione el glande para
estimular la salida de la secreción. Introducir y rotar el hisopo
dentro de la uretra aproximadamente 2 centímetros y obtener
la muestra.
Realizar un frote en lámina porta objetos para tinción de Gram
utilizando uno de los dos hisopos.
Inoculación:
Con el hisopo se realiza el inóculo de la siguiente manera.
 Incubar en condiciones aerofílicas de 34 a 36 C o por 24 a 48
horas las cajas de Agar sangre, chocolate y Thayer Martin.
McConkey en condiciones aerofílicas.
Medio de transporte: Amies o Stuart.
Medios de cultivo: agar sangre (AS), agar Thayer-Martin (ATM),
agar Chocolate y agar MacConkey (AMK)
Cultivo de Secreciones Varias
Es un análisis que permite detectar gérmenes, como bacterias,
hongos o virus, en una herida abierta o en un absceso.
Indicaciones:
Explicar al paciente el procedimiento para brindarle seguridad y
confianza.
Procedimiento:
Lavarse las manos y puesta de guantes para evitar infecciones
cruzadas.
Limpiar con solución salina estéril y algodón la superficie de la
herida
Retirar costras o restos secos de la superficie de la lesión.
Presionar la punta del hisopo estéril en la herida y girarlo
suavemente para recoger una muestra. Otro método consiste
en retirar pus o líquido de la herida con una jeringa y una
aguja pequeña. Este método recibe el nombre de "aspiración
con jeringa".
Es posible que sea necesario cortar la piel sobre el absceso
para llegar al pus que se encuentra en el interior. Este método
se denomina "incisión y drenaje". El corte suele ser pequeño.
Realizar un frote en lámina porta objetos para tinción de Gram
utilizando uno de los dos hisopos.
Inoculación:
Con el hisopo se realiza el inoculo de la siguiente forma.
 Incubar en condiciones aerofílicas de 34 a 36 grados C o de 24
a 48 horas las cajas de Agar sangre, chocolate, la de
McConkey en condiciones aerofílicas.
Medios: AGAR SANGRE, McCONKEY y CHOCOLATE.
Antibiograma
Definición:
Es el método de estudio de sensibilidad o resistencia "in vitro" de
las bacterias a los antibióticos, con los resultados obtenidos en este
proceso se clasifica a las bacterias en sensibles, moderadamente
sensibles y resistentes, a un determinado antimicrobiano.
Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más
adecuado para el tratamiento de una enfermedad.

Objetivos:
Medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha
es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos.
Seguir la evolución de las resistencias bacterianas.
Prueba de la Catalasa
La prueba de la catalasa hace que sea fácil distinguir entre
Streptococcus y Staphylococcus, Staphylococcus porque es catalasa
positivo y Streptococcus son catalasa negativo.
Realización de una prueba de catalasa
Materiales necesarios:
Placa de agar que contiene colonias bacterianas que han
demostrado ser gram positivo
El peróxido de hidrógeno (3% de solución)
Portaobjetos de microscopio
Asa para recoger una colonia bacteriana
Procedimiento de prueba
Coloque una gota de peróxido de hidrógeno al 3% en un
portaobjetos de microscopio.
Hacerse con una colonia de bacterias a prueba de la placa de
agar utilizando el asa.
Agitar la colonia bacteriana en el peróxido de hidrógeno para
que se formen burbujas.
Si la colonia bacteriana es Staphylococcus, abundantes
burbujas se verán inmediatamente. Si no aparecen burbujas,
la colonia es una especie Streptococcus.
El principio de esta prueba es que la enzima catalasa reacciona con
peróxido de hidrógeno para formar agua y oxígeno - las burbujas
observadas son oxígeno.

Oxidasa
Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas
oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un
sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que
es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por
tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora
de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo se
encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios
facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo, pero los
anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.
Se investiga la presencia del enzima citocromo-oxidasa en la
bacteria en estudio.
Realización práctica
Utilizamos tiras de papel impregnadas con el reactivo para-amino-
N-dimetil-anilina, que se oxida por la citocromo-oxidasa. El
procedimiento consiste en impregnar la zona coloreada de la tira
reactiva con una masa de bacterias.
Se observa si en el transcurso de un minuto la zona impregnada
vira a un color azul-violeta.

Tinción de Gram
Procedimiento:
Tras recoger la muestra de bacterias que queremos teñir con
un isopo procederemos a extenderla en un portaobjetos y a
secarla o bien dejándola secar a temperatura ambiente o con
un mechero, con cuidado de no quemar las bacterias. El
siguiente paso es fijar la muestra en el portaobjetos mediante
la aplicación de metanol durante un minuto.
Posteriormente se aplica el tinte de violeta de genciana,
también conocido como cristal violeta, al portaobjetos y se deja
reposar un minuto. Este colorante puede atravesar cualquier
tipo de pared bacteriana por lo que tiñe tanto bacterias gram
positivas como gram negativas.
 Luego se enjuaga la muestra con agua y se aplica lugol, de
forma que cubra toda la muestra y se espera durante un
minuto. El lugol es un compuesto formado principalmente por
yodo que en este caso lo que hace es fijar el colorante violeta
de genciana aún más a la muestra. El yodo del lugol y el
violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua
capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de
alcohol y acetona durante 30 segundos, en este momento, es
cuando finaliza realmente la tinción de Gram, ya que esta
mezcla de alcohol y acetona lo que hace es disolver los
complejos de lugol y violeta de genciana.
De forma opcional, puede realizarse un último paso que
consiste en someter a las bacterias a una última tinción para
teñir aquellas que son gram negativas de color rosa o rojo. Se
hace de forma fácil aplicando durante un minuto un colorante
como la safranina o fucsina y luego lavamos con agua.

KOH
Los médicos utilizan la prueba de KOH (o preparación de KOH) para
averiguar si usted tiene una infección por hongos. Este tipo de
infección puede suceder en varias partes del cuerpo, como en la
piel, las uñas, la boca o la vagina.
KOH es la abreviatura de hidróxido de potasio, la solución que se
utiliza en la prueba.
El examen directo con KOH consiste en la toma de muestras:
escamas, pelos o fragmentos de uñas, su incubación con hidróxido
potásico al 10-30% y su posterior visualización en el microscopio, lo
que permite observar la existencia de hifas septadas
(dermatofitosis), formas levaduriformes o pseudohifas (candidiasis)
que son suficientes para confirmar el diagnóstico.