UNIVERSIDAD PRIVADA AUTÓNOMA DEL SUR

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica

“Titulo”

Proyecto de Tesis Presentado por:

Jhajaira Ccapa Flores
Daniela Jimena Nieble Valero

“Evaluación del efecto Antimicrobiano in vitro del

extracto hidroalcohólico de la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi)
frente a Escherichia coli ATCC 25922”

Asesor:

Arequipa-Perú
2022
 RESUMEN
La presente investigación plantea el objetivo de determinar la actividad
antimicrobiana “in vitro” del extracto hidroalcohólico de la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a Escherichia coli ATCC
25922. El método usado para determinar el efecto antimicrobiano fue Kirby-
Bauer y en el caso de la concentración mínima inhibitoria (CIM) y concentración
mínima bactericida (CBM) se empleó microdilución en caldo. El ensayo
microbiológico es de tipo experimental, cuenta con un diseño de experimento y
es de corte transversal. El ensayo requirió del uso de 5 repeticiones y tuvo los
grupos I: Extracto al 100%; II: Extracto al 80%; III: Extracto al 60%; IV: Extracto
el 40%; V: Extracto al 20%; VI: Extracto al 10%; VII: Extracto al 5%; VIII:
Ciprofloxacino; IX: Azitromicina y X: Control negativo. El ensayo microbiológico
por el método de Kirby-Bauer evidenció que los extractos hidroalcohólicos de la
raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) al 100%, 80%, 60%,
40%, y 20 %, Ciprofloxacino, y amikacina presentaron halos de inhibición de
21.84, 18.18, 13.44, 10.12, 8.50, 32.60 y 39.60 mm respectivamente en el
crecimiento de la cepa bacteriana Escherichia coli ATCC 25922. En cuanto a la
CIM y CBM estas fueron determinadas a 10 y 20 % respectivamente. Se
concluye que el extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus
Poepp & Endl. (Chawi) a las concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100%
presentan efecto antibacteriano frente a una cepa de Escherichia coli ATCC
25922.

Palabras clave: Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.; antimicrobiano;

extracto.
 Abstract

This research aims to determine the "in vitro" antimicrobial activity of the
hydroalcoholic extract of the root of Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi) against Escherichia coli ATCC 25922. The method used to determine
the antimicrobial effect was Kirby-Bauer and in the case of the minimum
inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC),
microdilution in broth was used. The microbiological test is experimental, has an
experimental design and is cross-sectional. The test required the use of 5
repetitions and had groups I: 100% extract; II: 80% extract; III: 60% extract; IV:
Extract 40%; V: 20% extract; VI: 10% extract; VII: 5% extract; VIII:
Ciprofloxacin; IX: Azithromycin and X: Negative control. The microbiological test
by the Kirby-Bauer method showed that the hydroalcoholic extracts of the root
of Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) at 100%, 80%, 60%, 40%,
and 20%, Ciprofloxacin, and amikacin presented inhibition halos of 21.84,
18.18, 13.44, 10.12, 8.50, 32.60, and 39.60 mm respectively in the growth of
the strain bacterial Escherichia coli ATCC 25922. As for the MIC and CBM
these were determined at 10 and 20% respectively. It is concluded that the
hydroalcoholic extract of the root of Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi) at concentrations of 20, 40, 60, 80 and 100% have an antibacterial
effect against a strain of Escherichia coli ATCC 25922.

Keywords: Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.; antimicrobial; extract.

 INTRODUCCIÓN

A lo largo del tiempo las especies vegetales cumplen un rol muy importante en
nuestras vidas. Son varias las generaciones que se han utilizado las plantas
como fuente medicinal, de alimento, ornamental, combustible, material de
construcción y otras herramientas de todo tipo; incluso éstas tienen un lugar
relevante en sus costumbres, creencias y ritos, es por ello que en la actualidad
su uso sigue siendo muy importante, sobre todo en el ámbito medicinal (1).

Un problema de salud pública son los microorganismos que pueden producir

enfermedades graves, uno de ellos es Escherichia coli, aunque la mayoría de
las cepas son inofensivas. La sintomatología que muestra esta infección va
desde fiebre, cólicos, vómitos, inclusive diarrea con sangre; aunque la mayoría
de los casos se recuperan a los diez días otros concluyen en la muerte del
paciente. La forma de contagio más común de esta bacteria es mediante los
alimentos; existen numerosos reportes de brotes de Escherichia coli incluso en
países con medidas de regulación alimentaria (2).

La Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación

(FAO) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima en base a
información obtenida de 21 países en todo el mundo que las enfermedades
producidas por Escherichia coli se encuentran entre 0,6 casos por cada 100,00
habitantes al año en los países africanos, sin embargo, en países de la región
Mediterráneo oriental la cifra ascendería a 136 casos por 100,000 habitantes
por año (3).
Desde la década de 1930 cuando se introdujeron los antibióticos, estos fueron
muy eficaces en un comienzo, a lo largo del tiempo las cosas han ido
cambiando y hoy en día es la causa principal de la resistencia de dichas
bacterias a estos medicamentos. Debido a ese motivo, hoy en día se buscan
alternativas de origen natural que tengan la capacidad de atacar bacterias
resistentes y al mismo tiempo tener efectos inocuos en el paciente.
Últimamente se ha prestado atención a los extractos de plantas medicinales
utilizado por algunas comunidades, ya que se ha demostrado que pueden ser
utilizados como fuente de nuevos fármacos con actividad antibacteriana (4).
Es por ello, que el presente estudio tiene como objetivo conocer la actividad
antimicrobiana “in vitro” del extracto hidroalcohólico de la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a Escherichia coli.
1. Descripción de la Realidad problemática
Los cuadros diarreicos ha sido un gran problema de morbi-mortalidad
elevada, especialmente en niños menores de cinco años, cuyos episodios
durante el primer año de crecimiento infantil pueden deteriorar el estado
nutricional, ocasionando posteriores secuelas; con mayor frecuencia en
países en vías de desarrollo, asociados a problemas socioeconómicos,
malos hábitos higiénicos, falta de agua y desagüe, carencia de agua y
desagüe, mala nutrición e inadecuada atención medica primaria (1).

A nivel mundial cada diez personas resulta afectada con cifras de

mortalidad de 420000 personas; de las cuales, el 30% corresponde a
menores de cinco años, lo que representa el 9% de la población mundial.
La incidencia y tasas de mortalidad más elevadas se presentan en el
continente africano y Asia sudoriental (2).

El agente más conocido y causante de diarreas en países en vías de

desarrollo es Escherichia coli enteropatógeno, pero los cuadros pueden
verse acompañados con agentes etiológicos como virus, bacterias y
parásitos (3).

Según datos epidemiológicos reportados en el Perú, se ha manifestado

que ésta bacteria aislada a partir de la orina originario de pacientes
dudoso de tener infección al tracto urinario (ITU) (4).

Estudios realizados en plantas y sus derivados dieron buenos resultados

para combatir a bacterias en el organismo (5). Actualmente existe amplia
demanda de agentes antimicrobianos naturales, a partir de plantas con
compuestos fitoquímicos, que son básicamente sus metabolitos
secundarios, como el caso de los isotiocianatos conocidos por inhibir el
crecimiento de la bacteria E. coli (6).

En la región de Arequipa, hasta el mes de abril del año 2020, se reportó

las enfermedades más frecuentes como infecciones intestinales
bacterianas, infecciones respiratorias agudas e infecciones de vías
urinarias. (13)
2. Formulación del Problema
A. Problema Principal
¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroalcohólico de
la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi)) frente a
Escherichia coli cepa ATCC 25922?

B. Problemas Secundarios
 ¿Cuál es la concentración mínima inhibitoria del extracto hidroalcohólico
de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a
Escherichia coli?

 ¿Cuál es la concentración mínima bactericida del extracto

hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi)) frente a Escherichia coli?

 ¿Cuál es la sensibilidad de Escherichia Coli frente al extracto

hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi)?

3. Horizonte de la Investigación
Área: Salud Humana
Campo: Farmacia y Bioquímica
Especialidad: Microbiología

4. Justificación
Este estudio permitirá conocer el valor biológico y farmacológico de esta
especie vegetal, la cual podrá sevir de alternativa como tratamiento de
enfermedades infecciosas. Es por ello que se quiere determinar la
actividad antimicrobiana “in vitro” del extracto hidroalcohólico de la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a Escherichia coli.
(2).
Por lo tanto, también es importante ya que, se busca comprobar
científicamente el uso que le da la población a las raíces de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi), para las infecciones de
tracto urinario. Lo cual beneficiaria a descubrir y desarrollar una nueva
generación de agentes antibacterianos que combaten de una forma más
 natural y efectiva los microorganismos, siendo necesario promover el uso
de las plantas medicinales, que han demostrado gran diversidad
antibacteriana para el desarrollo de nuevos medicamentos para la
población. Además, en el Perú la población más susceptible a las
infecciones urinarias son las mujeres, siendo la primera población en
recurrir más a los centros de atención primaria(2).

Por lo expuesto el presente proyecto busca promover una alternativa

natural para contrarrestar las enfermedades infecciosas que aquejan a
personas de bajos recursos o que se encuentran en zonas alejadas de los
Centros de Salud esto podría ser más accesible en relación al costo. En
especial, a los pacientes pediátricos que con diferentes patologías
ameritan el uso de antibacterianos; llegando así a recurrir a un esquema
terapéutico saturado de estos medicamentos. (7)

5. Objetivos:
a. Objetivo General
Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroalcohólico de la
raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a
Escherichia coli cepa ATCC 25922.

b. Objetivos Específicos
• Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto
hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi) frente a Escherichia coli.

• Determinar la concentración mínima bactericida del extracto

hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi) frente a Escherichia coli.

• Determinar la sensibilidad de Escherichia coli frente al extracto

hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
(Chawi).

6. Variables:
a. Identificación de Variables
 Variable independiente
 Extracto extracto hidralcohólico de la raíz de Paranephelius
uniflorus Poepp & Endl. (Chawi).
Variable dependiente
 Efecto antibacteriano
b. Definición conceptual de variables
Variable independiente
Extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp &
Endl. (Chawi).
Mezclas complejas de compuestos producidos por plantas y aislados por
maceración con solvente hidroalcohólico.
Variable independiente
Efecto antibacteriano
Capacidad para inhibir el crecimiento microbiano
c. Definición operacional de variables
Variable independiente
Extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp &
Endl. (Chawi).
La mezcla compuestos químicos contenidos en el extracto adsorbidos se
expusieron a la bacteria Escherichia coli.
Variable dependiente
Efecto antibacteriano
Inhibición del crecimiento bacteriano

7. Operacionalización de Variables

VARIABLE
INDICADOR SUBINDICADOR
INDEPENDIENTE
Extracto hidroalcohólico Concentración del Extracto
Porcentaje
de la raíz de hidroalcohólico de la raíz
(gramos de extracto en
Paranephelius uniflorus de Paranephelius uniflorus
100 mL de solución)
Poepp & Endl. (Chawi) Poepp & Endl. (Chawi).
VARIABLE INDICADOR SUBINDICADOR
 DEPENDIENTE

Porcentaje de extracto
necesario para impedir el
Concentración mínima
crecimiento de un
inhibitoria
microorganismo.

Porcentaje de extracto
Efecto antibacteriano
necesario para destruir el
Concentración mínima
99.9 % de una muestra
bactericida.
inoculada.
N° de colonias/ml
Diámetro de los halos de
Sensibilidad bacteriana. sensibilidad (mm)

8. Antecedentes Investigativos
a. A nivel Internacional (2 fuentes como mínimo)
Carrillo T., Díaz T; (2019). En su trabajo “Actividad antimicrobiana de
extractos hidroalcohólicos de hojas de dos variedades de Mangifera
indica L”. Guayas, Ecuador. (7).
El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antimicrobiana de
extractos hidroalcohólicos (90% y 50%) de la variedad Tommy Atkins y
extracto hidroalcohólico (50%) de la variedad Edward, seleccionados por
su alto contenido de compuestos fenólicos, anteriormente publicado. Los
extractos fueron obtenidos por maceración, digestión y ultrasonido. La
actividad antimicrobiana se evalúo mediante los métodos Kirby Bauer y
Kirby Bauer modificado; las cepas utilizadas fueron Pseudomona
aeuroginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus (ATCC 29213),
Salmonella Typhimurium (ATCC 14028), Escherichia coli (ATCC 25922) y
Enterococcus faecalis (ATCC 29212), ajustándose las suspensiones a
turbidez 0.5 en escala McFarland. La mayor actividad antimicrobiana se
evidencia frente a P. aeruginosa y S. aureus; los extractos de la variedad
Tommy Atkins mostraron mayor actividad antimicrobiana, encontrándose
 halos de inhibición entre 10 y 15 mm según la bacteria. El método Kirby
Bauer modificado mostró mayor efectividad. Se concluye que todas las
cepas estudiadas presentaron sensibilidad frente a los extractos, siendo
S. aureus y P. aeruginosa las más sensibles.

Hernandez L., Pabón L., Hernández P.; (2020). En su “Estudio

fitoquímico y actividad antimicrobiana de plantas medicinales
empleadas para el control de infecciones urinarias”. Colombia. (8).

La actividad antimicrobiana se evaluó por difusión en agar, microdilución

en placa y bioautografía frente a Escherichia coli (atcc 25922),
Staphylococcus aureus (atcc 25923) y Pseudomonas aeruginosa (atcc
9027). Se determinó que S. aureus y P. aeruginosa presentaron inhibición
frente a cinco extractos en los tres métodos realizados, mientras que E.
coli no fue inhibida por ningún extracto.

Espinoza V. (2021). “Efecto antimicrobiano de extractos de plantas

contra bacterias de importancia clínica en la provincia de Chiriquí,
Panamá” (9).

Se determinó el efecto de los extractos hidroalcohólicos de algunas

plantas contra bacterias Escherichia coli y Staphiloccocus aureus. Los
resultados del estudio indican que las especies de ají y la canela tuvieron
efectos sobre E. coli y S. aureus.

b. A nivel Nacional

Elliott Huayanay J. (2019). “Efecto antimicrobiano del capsicum

pubescens sobre escherichia coli comparado con amoxicilina/ácido
clavulánico, estudio in vitro”. Trujillo, Perú. (2).
La oleorresina del fruto del Capsicum pubescens “rocoto” demostró que a
concentraciones altas tuvo bajo efecto antimicrobiano sobre Escherichia
coli ATCC 35218 no superando a amoxicilina/ácido clavulánico 20/10 µg.
A la concentración de 500 mg/ml se obtuvo un halo de inhibición de 12,97
mm. A la concentración de 375 mg/ml el halo de inhibición fue de 11,28
mm. A la concentración de 250 mg/ml el halo de inhibición fue de 11,07
 mm. A la concentración de 125 mg/ml el halo de inhibición fue de 9,97
mm. La amoxicilina/ácido clavulánico tuvo un halo de inhibición de 18.14
mm frente a Escherichia coli.

Tenorio P; Estrada R. (2016). “Efecto inhibitorio in vitro del extracto

etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli
aislada de pacientes con Infecciones del Tracto Urinario”.
Lambayeque, Perú. (4).
Se estudió la acción inhibitoria in vitro del extracto etanólico de
Tropaeolum majus, demostrándose que tanto las hojas, flores y frutos
presentan propiedades antibacterianas y antifúngicas; asimismo se
determinó que los frutos tuvieron una mayor actividad inhibitoria
significativamente mayor a la de hojas y flores. Se determinó que los
extractos de frutos y flores de Tropaeolum majus “mastuerzo” a una
CMI100 de 0,2 mg/ml inhibieron a Escherichia coli, Proteus vulgaris,
Klebsiella pneumoniae.

Chuquilin A, Vásquez E; (2021). “Efecto antimicrobiano del extracto

etanólico de las hojas Ocimun basilicum Albahaca sobre Candida
albicans y Escherichia coli.” Huancayo, Perú. (10).

Se preparó un extracto etanólico por maceración a base de hojas de

albahaca y se obtuvieron concentraciones de 100 y 50%, y se evaluó su
efecto antimicrobiano sobre las cepas en estudio mediante el método de
difusión en pozo. Resultados: el extracto etanólico al 100% y 50% obtuvo
un halo de inhibición promedio de 15,72 mm y 13,06 mm sobre C.
albicans, para E. coli fue de 13,92 mm y 10,88 mm. Conclusión: El
extracto etanólico de Ocimun basilicum “Basil” al 100% y 50% mostró
efecto antimicrobiano sobre Candida albicans y Escherichia coli.

c. A nivel Local
Escobar A., Ccasa E. (2019), “Efecto antimicrobiano del extracto de
hojas de psidium guajava l. (guayaba) sobre Staphylococcus aureus
ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 y Cándida albicans ATCC
10231”, Arequipa, Perú (12).
 La Concentración Mínima Antimicótica (CMA) del extracto de hojas de P.
guayaba sobre C. albicans ATCC 10231 fue de 12.5 mg/ml.
Finalmente, el estudio de sensibilidad de E. coli ATCC 25922 demostró
que dicha cepa es resistente a todas las concentraciones de P. guayaba
ya que dieron como resultado halos de inhibición entre 7.6 a 13.4 mm. En
cuanto a S. aureus ATCC 25923 resultó ser sensible a concentraciones
del 100 % del extracto de P. guayaba con 22.5 mm de halo de inhibición,
de sensibilidad intermedia a concentraciones del 60 y 80 % con halos de
inhibición de 16.4 y 17.5 mm respectivamente y C. albicans ATCC 10231
resultó ser sensible a una concentración del 100 % del extracto de P.
guayaba con halos de inhibición de 19.6 mm y de sensibilidad intermedia
a la concentración del 80 %.

Coaquira M, Quenaya V; (2017). “Evaluación de la Actividad

Antimicrobiana In Vitro del Extracto de Achyrocline Alata (Huira
Huira) en Cepas de Staphylococcus Aureus, Escherichia Coli y
Pseudomona Aeruginosa”. Arequipa, Perú (13).

Los resultados obtenidos demuestran que el extracto etanólico de

Achyrocline alata (Huira huira) muestra un mayor efecto antimicrobiano
frente a bacterias Gram positivas como es el caso de Staphylococcus
aureus (CIM 78mg/ml), en cuanto a bacterias Gram negativas,
Escherichia coli (CBM 88mg/ml) y Pseudomona aeruginosa no presentan
efecto antimicrobiano.

9. Base Teórica (Marco Teórico)

9.1. Plantas Medicinales
La flora peruana está conformada por 25 mil especies y un tercio son
endémicas. Debido a los diversos nichos ecológicos que presenta, es el
quinto país en el mundo en número de especies y uno de los primeros
en número de especies de plantas con propiedades conocidas y
utilizadas por la población. Una gran parte de estas plantas se encuentra
en la amazonía u oriente peruano, algunas de ellas ni siquiera han sido
determinadas botánicamente hasta el momento. Un aspecto importante
 es el uso medicinal, alimenticio y ritual que hace la población peruana de
muchas estas especies vegetales, aproximadamente 5,000 plantas han
sido identificadas botánicamente: la mayor parte son nativas de nuestro
país (unas 4,400) y unas 600 especies son introducidas. Igualmente, la
mayoría de las especies nativas utilizadas son silvestres y cerca de dos
mil son cultivadas (14).

9.2. Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi)

a. Descripción:

Planta herbácea de origen de sudamerica, es una hierba

nativa silvestre, según la zona recibe diversos nombres comunes
(15).

b. Taxonomia

- Reino: Plantae

- División: Magnoliophyta

- Clase: Magnoliopsida

- Orden: Asterales

- Familia: Asteraceae

- Subfamilia: Cichorioideae

- Género: Paranephelius

- Especie: Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.

Fuente: Mariño L (16).

Nombres comunes:

“Cargarosa”, “Chawi”, Achicoria grande”

c. Distribución y hábitat:

Se hallan terrenos altos desde los 3500 a 4200 m.s.n.m.,

Cajamarca, Cuzco, Puno. En Sudamérica crece en Bolivia en las
faldas de los cerro como hierba silvestre. (17).
 d. Usos:

Para afecciones bucales, sistema gastrointestinal, bronquitis,

diarrea, dolor de estómago, cálculos renales e inflamación de
ovarios y útero (15).

e. Forma de Preparación:

Cocimiento, infusión y extracto macerado las raíces y hojas

Se hace hervir las hojas y tomar en caliente para afecciones del

utero y ovarios. (15).

9.3. Métodos de extracción de drogas

Fig. 1 Métodos de Extracción de droga

Figura 1:

Fuente: Kuklinsky Fuente

especificada no válida.

a. Extracción con Solventes:

Este método consiste en la separación de los principios activos de la
planta al ponerla en contacto con un solvente o la mezcla de ellos,
capas de solubilizar dichos principios (18).
b. Extracción continua o progresiva:
En la extracción continua, el solvente se va renovando o recirculando
y actúa sobre la planta en una sola dirección. La percolación, la
 repercolación y el soxhlet son las técnicas que pertenecen a este
grupo y se describen a continuación:

Soxhlet:
Esta técnica centra en la extracción sólido-líquido mediante un
equipo Soxhlet que tiene como función recircular los vapores
condensado (18).
En el balón se lleva a ebullición el solvente, sus vapores
ascienden hasta el refrigerante, donde condensan. El condensado
cae sobre la muestra, generalmente contenida en un cartucho y
colocada previamente en el cuerpo extractor, y la macera hasta
cuando el cuerpo extractor se llena y el extracto sifonea por el
tubo lateral, para desembocar en el balón evaporador. Esta
operación se repite sucesivamente, con lo que el solvente se va
reciclando y los principios activos se van concentrando en el balón
inferior.

Fig. 2 Equipo de Extracción Soxhlet (19).

i. Selección del solvente

Es de gran importancia la elección del solvente, se recomienda un

solvente con un mejor balance de diversas características deseables,
alto límite de saturación, una buena selectividad con respecto al soluto
por extraer, que tenga una gran capacidad para producir el material
 extraído con una calidad no alterada por el disolvente, estabilidad
química en cuanto a las condiciones del proceso, baja viscosidad,
facilidad y recuperación de la corriente de extracto y bajo costo (20).

9.4. Escherichia coli

a. Descripción

Se define como uno de los microorganismos que se halla presente a

nivel del tracto gastrointestinal y su determinación en alimentos es
indicativo de contaminación al momento del procesamiento de los
mismos. Además, este microorganismo presenta diversas cepas que
son patógenas para el ser humano, las cuales ejercen un efecto
negativo mediante diversos mecanismos, pudiéndose resaltar los
siguientes: producción de toxinas, adhesión e invasión a las células
del huésped, interferencia con el metabolismo celular, destrucción de
tejidos; entre otros. Debido a la existencia de cepas virulentas de E.
coli y al ser un microorganismo Gram (–) que presenta una estructura
compleja formada por una doble membrana fosfolipídica (21).

La E. coli (Escherichia coli), es una bacteria que se encuentra

normalmente en nuestros intestinos. También se encuentra en el
intestino de algunos animales. La mayoría de los tipos de E. coli son
inofensivos e incluso ayudan a mantener saludable el tracto
digestivo, aunque algunas cepas pueden causar diarrea si se ingiere
alimentos contaminados o se bebe agua sucia. Si bien muchos de
nosotros asociamos la E. coli con la intoxicación alimentaria, también
se puede contraer neumonía e ITU. De hecho, entre el 75% y el 95%
de las ITU’s son causadas por E. Coli (22).

b. Estructura antigénica

Los antígenos de esta bacteria se utilizan para la biotipificación. Se

presentan los antígenos O (somático), H (flagelar) y K (capsular) y
son importantes como referencia inmunológica. El antígeno O es un
polisacárido termoestable, que forma parte del LPS localizado en la
membrana externa de la bacteria. El antígeno K corresponde al
 polisacárido capsular que envuelve a la bacteria. En la actualidad se
conocen un total de 185 antígenos somáticos, 56 flagelares y 60
capsulares (21).

c. Patogenia y patología

Principalmente E. coli puede causar infecciones intestinales y

extraintestinales la mayoría graves, como infecciones del aparato
excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y
neumonía, o en diversas ubicaciones (articulaciones, globosoculares,
glándulas, hígado, cerebro, corazón, venas y otros). Aunque, la
mayoría de las cepas de este microorganismo no son patógenas,
debido a que dependen del sitio anatómico, pueden ser patógenos
oportunistas causando infecciones en el hospedador
inmunocomprometido (22).

A su vez, estos tipos comparten diversos factores de virulencia. Así,

ciertos antígenos O actúan como factores de adhesión/colonización
necesarios para que se dé la infección, otros actúan como toxinas.
Por otro lado, los antígenos H están ligados a la producción del
síndrome hemolítico urémico (SUH) y los antígenos K como su
variante capsular K1 de E. coli se asocian al desarrollo de meningitis
neonatal, bacteriemia e infección urinaria (21).

10. Conceptos Básicos (Marco Conceptual)

a. Metabolitos secundarios: son compuestos químicos sintetizados
por las plantas que cumplen funciones no esenciales en ellas, de
forma que su ausencia no es letal para el organismo, al contrario que
los metabolitos primarios. Los metabolitos secundarios intervienen
en las interacciones ecológicas entre la planta y su ambiente.
b. ATCC
Marca registrada de la colección de cultivos microbiológicos de tipo
americano. (23)
c. Cepas
 Son agrupaciones de células clones, que se origina a partir de
células iniciales únicas, en la cual se han seleccionado y aislado.
Son consideradas como colonias puras bacterianas. (24)
d. Concentración mínima Inhibitoria (IMC):
Es la mínima concentración del extracto que inhibe el crecimiento del
microorganismo después de un periodo determinado de incubación.
(25)
e. Efecto Antibacteriano in vitro
Es un proceso que permite medir la actividad antimicrobiana in vitro
para determinar el efecto de un antimicrobiano y la sensibilidad de
un determinado microorganismo a una concentración conocida del
fármaco. (26)

11. Hipótesis
a. Hipótesis Principal
Dado que la plantas medicinales presentan propiedades
terapéuticas, es probable evaluar el efecto antibacteriano in vitro
del extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus
Poepp & Endl. (Chawi)frente a Escherichia coli cepa ATCC 25922.

b. Hipótesis Secundarias
- Es probable establecer cuál es la concentración mínima inhibitoria
del extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus
Poepp & Endl. (Chawi), frente a Escherichia coli.

- Es probable determinar la concentración mínima bactericida del

extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus
Poepp & Endl. (Chawi), frente a Escherichia coli.

- Es probable determinar la sensibilidad de Escherichia coli frente al

extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus
Poepp & Endl. (Chawi).

12. Planteamiento Metodológico

Nivel, Tipo y Diseño de la Investigación:
 Nivel de la Investigación
Investigación de tipo experimental
Tipo de Investigación
Según manipulación de variables: Experimental
Según número de mediciones: Transversal
Según la temporalidad: Prospectivo
Enfoque: Cuantitativo
Paradigma: Positivista

Diseño de la Investigación
Experimental

13. Técnicas e Instrumentos de recojo de datos: (según corresponda al tipo

de investigación)
La técnica que se utilizará será la observación y el instrumento para la
recolección de datos será anotado en fichas de registro de los resultados
del ensayo microbiológico.

14. Planteamiento Operacional

14.1. Ámbito de Estudio:
Ubicación espacial
El presente trabajo de investigación se llevará a cabo en la ciudad de
Arequipa, en 2 etapas; en la primera se desarrollara la obtención del
extracto hidroalcoholico, se realizará en el laboratorio de control de
calidad de Industrias Médicas y Farmacéuticas SRL, Cerro Colorado; la
parte experimental microbiológica se llevara a cabo en el Centro de Salud
Francisco Bolognesi, calle 20 de abril 204, Cayma, Arequipa..

Ubicación temporal
El presente trabajo de investigación se llevará a cabo en los meses Juliol
a Agosto del 2022 en la ciudad de Arequipa.

14.2. Unidad de Estudio:

Identificación de la Unidad de Estudio
 Para el desarrollo del trabajo de investigación se recolectaran la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) en el distrito de Sicuani a
una altitud de 3546 m.s.n.m., Latitud: -14.2714, Longitud: -71.2292 14°
16′ 17″ Sur, 71° 13′ 45″ Oeste; provincia de Canchis, departamento de
Cuzco.

a. Criterios de Inclusión
 Raíces en buen estado, frescas y limpias.
 Raíces de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi)
recolectadas en el distrito de Sicuani, Cuzco.
b. Criterios de Exclusión
 Raíces contaminadas, deterioradas y que no sean frescas.
 Raíces de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi),
recolectadas de otros lugares que no sean de Sicuani, Cuzco.

15. Población, muestra y muestreo:

a. Población
Es el conjunto total finito o infinito de elementos o unidades de observación
que se consideran en un estudio, o sea que es el universo de la
investigación sobre el cual se pretende generalizar los resultados (27).
Dicha población la constituye los seres con características comunes sobre
quien estarán referidas las conclusiones (27). Entonces la población es un
conjunto de elementos, seres o eventos, concordantes entre sí en cuanto a
una serie de características, de los cuales se desea obtener alguna
información.
En el presente trabajo, la población estará determinada por la raíz de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) y cepas de Escherichia coli
ATCC 25922.

b. Muestra
La muestra de esta especie vegetal estará constituida por 2 kilos de raíces
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi). Recolectada de acuerdo a
los criterios de inclusión y exclusión, en el mes de Julio entre las 8:00 y
10:00 am.
 c. Muestreo
Será no probabilístico.

16. Procedimiento
16.1. Recolección del material vegetal
Se recogerá 2 kilos de raíces de manera aleatorizada del lugar de
recolección, entre las 8:00 am y 10:00 am; con ayuda de una tijera de acero
inoxidable, paleta inoxidable para el escarbado a fin de facilitar la recolección.
Las raíces recolectadas, serán envueltas en papel craft, colocadas de esa
forma en una caja de cartón y transportadas a la ciudad de Arequipa. La
especie botánica mencionada será identificada y clasificada taxonómicamente
en la Universidad Nacional San Agustín, a cargo del Dr. Mariño.
16.2. Preparación del material vegetal
Se seleccionará las raíces que se encontraron en buen estado, libre de
manchas oscuras o atacadas por insectos, luego se procedió; a lavar con
abundante agua, seguidamente serán trozadas en pequeños tamaños y
secados a temperatura ambiente por 48 horas, bajo sombra. Luego se llevará
a ser trituradas en un molino eléctrico de granos para obtener una proporción
homogénea de las partículas, las cuales serán vertidas en un envase de vidrio
oscuro a temperatura ambiente.
16.3. Obtención del extracto hidroalcohólico
Para obtener la muestra se elaborará el extracto hidroalcohólico por la técnica
de maceración, que consistirá en sumergir 300 gramos de las raíces
trituradas en 500 ml de etanol de 70 %, a temperatura ambiente y protegida
de la luz; tomando en cuenta que esta mezcla se dejó en reposo
aproximadamente 10días. Durante este periodo se realizará agitaciones
diarias de 5 minutos durante la mañana. Terminado el periodo de reposo, se
procederá a filtrar con papel filtro, luego se llevará a baño maria a 40 ± 1 °C,
hasta peso constante, de esta manera se pudo obtener el extracto
hidroalcohólico.

16.4. Reactivación de la cepa ATCC de Escherichia coli

La activación de la cepa de Escherichia coli ATCC 25922 serán reactivadas
en medio de cultivo Agar Mueller Hinton a 35 ºC de 2 a 8 horas, esto se
realizará manteniendo las medidas de bioseguridad según lo que precisa el
proveedor en la ficha técnica y el manual de bioseguridad en el laboratorio
elaborada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) (28).
Se extraerá el hisopo que contiene la cepa del estuche, se presionara la punta
con la finalidad de liberar las bacterias cristalizadas de Escherichia coli. Se
frotara el hisopo sobre el medio Agar Mueller Hinton, distribuyendo sobre la
superficie la cepa certificada, luego se llevara a incubación por un espacio de
2 a 8 horas a 35°C. Posteriormente con un asa bacteriológica se tomará
colonias de este medio y se sembrara en agar Mac Conkey, el cual es un
medio selectivo para este microorganismo. Incubaremos a 37 °C x 24 horas;
obteniéndose colonias de Escherichia coli, las cuales se emplearan para los
ensayos microbiológicos y elaboración del inóculo.

16.5. Preparación de los medios de cultivo a emplear

Las preparaciones de los caldos de cultivo y los medios de cultivo (agares), se

elaboraron de acuerdo a especificación de los fabricantes, y esterilizados en
autoclave a 121°C x 15 minutos, luego de ello, los medios de cultivo (agar) se
colocaron en placas Petri estériles hasta su empleo de acuerdo a la
metodología.

Preparación de Caldo Peptonado: se suspenderá 15 g del polvo en 1 litro

de agua purificada. Mezclar calentando hasta ebullición durante 1 minuto.
Distribuir en recipientes apropiados. Esterilizar en autoclave a 121°C durante
15 minutos (29).

Preparación de Agar Mueller Hinton: se suspenderá 37 g del polvo en 1 litro

de agua purificada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación
frecuente y hervir durante 1 minuto para disolución total. Esterilizar a 121°C
durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir en placas de Petri estériles,
en volumen apropiado para que el espesor sea de 4 mm aproximadamente
sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm de diámetro) (29).

Preparación de Agar Mac Conkey: Suspender 50 g del polvo en 1 litro de

agua purificada. Reposar 5 minutos y calentar con agitación frecuente,
llevando a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total. Distribuir en
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15
minutos. Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles (29).

16.6. Escala de Mac Farland

Para la preparación de la escala McFarland se utilizará Ácido Sulfúrico
(H2SO4) adicionando diferentes concentraciones de iones Bario que es el
reactivo limitante, manteniendo el uso de Cloruro de Bario (0,048M) como
reactivo portador del ion Bario y se procedió a preparar las escalas en una
relación de volúmenes detallada en la Tabla 2. Finalmente, se compararon las
escalas preparadas utilizando un espectrofotómetro UV-Vis a 625 nm. (30)
Cada uno de los tubos del patrón de acuerdo con la turbidez, representa un
número de bacterias, para suspensiones de igual turbidez, que ha sido
determinado por recuento de colonias. De esta forma, al comparar una
emulsión de bacterias con el tubo del patrón de Mc Farland que más se
asemeje se puede saber aproximadamente el número de bacterias en la
suspensión. (31).
Tabla Nro. 2: Elaboración de escala de Mac Farland

Fuente: Gamarra J., Borbor E., Coello L. y Guaman S. (32).

16.7. Preparación del inóculo

De la placa de Agar Mac Conkey se tomara colonias de Escherichia coli y se
colocara en un tubo estéril que contenga caldo peptonado, ajustando a la
turbidez del tubo de 0,5 de Mc Farland. Esta turbidez será muestra de que los
medios de cultivo contienen 1.5 x 10 8 UFC/mL de inóculo. Se corroborará
mediante el uso del Espectrofotómetro UV-Vis a 625 nm, la absorbancia
deberá estar en el rango de 0,080 a 0,100 (33).

16.8. Elaboración de los discos de difusión

Para la realización de este proyecto hemos considerado los siguientes
grupos:
Control negativo, ciprofloxacino 5 µg, Extractos al 5%, 10 %, 20%, 40%, 80%
y 100%. Estos se consiguieron de la siguiente manera:
Se cortará papel filtro N° 1 en forma circular con un diámetro de 6 mm y
posteriormente será esterilizado. Estos posteriormente serán sumergidos en
agua estéril para sus posterior desecado y luego serán agrupados y
etiquetados como grupo control.
Se cortará papel filtro N° 1 en forma circular con un diámetro de 6 mm y
posteriormente será esterilizado. Luego, se verterán 10 µl de las soluciones
del extracto a las concentraciones 5%, 10%, 20 %, 40%, 80% y 100 % en los
discos de difusión. Estos posteriormente serán agrupados y etiquetados como
grupos experimentales.
El grupo ciprofloxacino 5 µg será comprado como disco estándar.

16.9. Sembrado del inoculo en placas de Mueller Hinton (difusión en

agar)
El inóculo bacteriano de Escherichia coli, será colocado en los medios de
cultivo ya solidificados y con ayuda de un hisopo estéril se empezaran a
distribuir en diferentes direcciones. Se dejará reposar aproximadamente 5
minutos antes de aplicar los discos evitando así un posible daño a la bacteria
(34).
Luego de que las placas sean inoculadas, se distribuirán los grupos de los
discos de difusión de manera equidistante uno del otro.
Se incubarán a 37°C durante 24 horas. Las cepas bacterianas evidenciarán
crecimiento sobre la superficie del Agar Mueller Hinton, pero no proliferarán
sobre alrededor de los discos con efecto antibacteriano. Se medirá el
diámetro de esta zona, denominada halo de inhibición (33).
 Fig. 3 Esquema de la técnica de antibiograma por difusión en agar
Fuente: Illanes A. (35).

16.10. Concentración mínima inhibitoria

Para la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) se
empleará el método de la dilución en caldo. La cual consiste en preparar una
serie de tubos con medio de cultivo líquido, en este caso se empleará caldo
peptonado, en las cuales se colocará diluciones seriadas del extracto
hidroalcoholico obtenido.
Para ello se tomaran 9 tubos esteriles y se marcaran cada uno con la
concentración final del extracto a ensayar, que va a oscilar entre 0,15% a
40%, de acuerdo a la siguiente distribución:

Tabla 3. Concentración mínima inhibitoria

Cantidad de Volumen final Concentración
Tubo Agua Extracto Volumen Completar con Final del
estéril hidroalcohólico de inóculo caldo peptonado extracto
de raíz de chawi
0 100 uL 0 uL 0 uL 10 mL 0.00%
1 0 15 uL 100 uL 10 mL 0.15%
2 0 31 uL 100 uL 10 mL 0.31%
3 0 62 uL 100 uL 10 mL 0.62%
4 0 125 uL 100 uL 10 mL 1.25%
5 0 250 uL 100 uL 10 mL 2.50%
6 0 500 uL 100 uL 10 mL 5.00%
7 0 1000 uL 100 uL 10 mL 10.00%
8 0 2 mL 100 uL 10 mL 20.00%
9 0 4 mL 100 uL 10 mL 40.00%
Fuente: elaboración propia
 Al tubo marcado como 0 se le adicionarán 100 µl de agua estéril. Una vez
preparados todos y cada uno de los tubos, se adicionarán 100 µl de la
bacteria a ensayar, y se incubarán a 37ºC durante 24 h.
Tras 24 h de incubación se observa la turbidez existente en cada uno de los
tubos inoculados y se considera como que hay crecimiento en todos aquellos
tubos en donde se aprecie turbidez, aunque no sea tan intensa como en el
tubo control. Se considera que no hay crecimiento en aquellos tubos en donde
no se observa turbidez alguna. La concentración mínima inhibitoria (CMI) de
un antibiótico frente a una determinada bacteria será la más diluida de todos
los tubos en donde no se observa crecimiento alguno (35).

16.11. Concentración Bactericida Mínima (CBM)

Para establecer la CMB, se eligió los tubos que presentaran menor turbidez en
la determinación de la CIM y se sembrará en agar Mueller Hinton incubándose
a 37 ºC por 24 h.; en este método se determinará el cero crecimiento de UFC
en placa en las diferentes concentraciones elegidas en el CMI del extracto
hidroalcohólico de la raíz de Chawi. (36).

16.12. Estrategia de recolección de datos

Los datos recolectados serán analizados estadísticamente utilizando
estimadores de media y dispersión del diámetro de la zona de inhibición (mm)
en lo que respecta al análisis de sensibilidad a través de la técnica de difusión
por discos en agar Kirby Bauer. Asimismo, se determinará la normalidad de
cada grupo definido por la variable factor a través de la prueba de Shapiro-Wilk
(n < 50), asimismo se utilizará la prueba de homogeneidad de varianzas de
Levene para determinar si los grupos definidos por la variable factor proceden
de poblaciones con la misma varianza. Luego, se procederá al análisis de
varianza. En cuanto a la concentración mínima inhibitoria y concentración
mínima bactericida estos serán evaluados por triplicado y por comparación
analógica con el tubo 0,5 de la escala de Mac Farland. Los datos serán
procesados con el Programa SPSS Versión 23, con un nivel de significancia del
5%.
16.13. Equipos y materiales
a. Materiales
• Matraz de 250 mL
• Frasco de vidrio de 250 mL tapa hermética
• Probeta de 50 mL y 100 mL
• Placa Petri descartables estériles de 150 mm x 10 mm
• Tubos de ensayo 15 mm x 200 cm
• Varilla de vidrio
• Espátulas metálicas con mango de madera
• Picetas
• Beaker de 250 mL

b. Equipos:
• Autoclave vertical
• Estufa de 50 litros
• Horno esterilizador
• Balanza analítica de 0,001 g de sensibilidad. 0 a 300 gramos.
• Cocina eléctrica plancha metálica
• Equipo de Purificación de agua
• Espectrofotómetro UV/VIS
• Mecheros Bunsen

17. Organización, Recursos y Financiamiento

Investigador: Bachiller ….
Asesor: Dra. Giselle Delgado
Expertos:

RECURSOS MATERIALES Precio Total

Unitario
N° Cantidad Tipo Descripción
1 800 Und Papel Bond 0.05 40.00
 2 1 Und Laptop 0.00 0.00

3 1 Und Impresora 50.00 50.00

4 1 Und Material de oficina 250 250.00

5 1 Und Pasajes 200.00 200.00

6 1 Und Viaticos 250.00 150.00

7 1 Und Cepa ATCC E. coli 380.00 380.00

SERVICIOS

8 1 Und Alquiler de Laboratorio y 1500.00 1500.00

materiales
9 1 Und Servicios de asesor 500.00 500.00

TOTAL 3070.00

Fuente de Financiamiento
Fuente de Financiamiento Total
Padres de Donaciones Préstamo Autofinanciamiento
Familia Bancario
3070.00 3070.00

9. Cronograma

AÑO 2022
Junio Julio Agosto
ACTIVIDADES
Semanas
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Elaboración del Proyecto X
Planteamiento del Problema X
Aprobación del proyecto X
Coordinación X
Aplicación de Instrumentos X X
Procesamiento de
X X
información
Presentación de resultados X X
Formulación de conclusiones X
Planteamiento de
X X
sugerencias
Presentación de propuestas X
Elaboración de informe final X
Aprobación del informe final X
Sustentación de tesis X
 CONCLUSIONES

Primera: La concentración mínima inhibitoria del extracto hidroalcohólico de

la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) fue de 10%.
Segunda: La concentración mínima bactericida del extracto hidroalcohólico
de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) se determinó al
20%
Tercera: La sensibilidad de Escherichia coli ATCC 25922 sobre extracto
hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi)
fue sensible a la concentraciones de 100%, 80, 60, 40 y 20%.
 RECOMENDACIONES

1. Realizar investigaciones para aislar compuestos bioactivos a partir de del

extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp &
Endl. (Chawi).
2. Continuar con nuevas investigaciones del extracto hidroalcohólico de la raíz
de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) sobre diferentes cepas
bacterianas.
3. Realizar estudios comparativos sobre la actividad antibacteriana de las
diferentes partes de Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi).
Bibliografía
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x
 17. Apéndices
Matriz de Consistencia
 MATRIZ DE CONSISTENCIA
Planteamiento
Título Hipótesis (Hi) Objetivos Variables Indicadores Valor Metodología
del problema
Concentración Halos de
“Evaluación del efecto Antimicrobiano in vitro del extracto hidroalcohólico de la raíz de

VARIABLE
- ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius

Hipótesis general Objetivo General:

DEPENDIENTE mínima inhibitoria sensibilidad MÉTODO
Es probable evaluar el efecto
Evaluar el efecto antibacteriano in vitro
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a Escherichia coli ATCC 25922”

antibacteriano in vitro del extracto

del extracto hidroalcohólico de Extracción por maceración
hidroalcohólico de la raíz de Concentración Halos de
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. Método difusión en agar
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl. mínima bactericida sensibilidad
(Chawi) frente a Escherichia coli cepa
(Chawi) frente a Escherichia coli cepa Sensibilidad
uniflorus Poepp & Endl. (Chawi) frente a Escherichia coli cepa ATCC 25922?

ATCC 25922.
ATCC 25922. antimicrobiana
Hipótesis secundarias Objetivos Específicos: TIPO: Cuantitativo
Es probable establecer cuál es la
Determinar cuál es la concentración NIVEL:
concentración mínima inhibitoria del extracto Experimental
mínima inhibitoria del extracto
hidroalcohólico de la raíz de Paranephelius
hidroalcohólico de Paranephelius
uniflorus Poepp & Endl. (Chawi), frente a
Escherichia coli. uniflorus Poepp & Endl. (Chawi), frente a Transversal
Escherichia coli.
Es probable determinar la concentración Determinar la concentración mínima Prospectivo
mínima bactericida del extracto hidroalcohólico bactericida del extracto hidroalcohólico de VARIABLE POBLACION.
INDEPENDIENTE
de la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp &
la raíz de Paranephelius uniflorus Poepp Concentración del Extracto
Endl. (Chawi), frente a Escherichia coli. Extracto
& Endl. (Chawi), frente a Escherichia coli hidroalcoholico de hidroalcohólico de la raíz Porcentaje Raíz de Liabum ovatum Wedd
la raíz de
de Paranephelius uniflorus (%) J. Ball (Chawi)
Paranephelius
uniflorus Poepp & Poepp & Endl. (Chawi)
Endl. (Chawi)
Es probable que exista sensibilidad Determinar la sensibilidad antibacteriana MUESTRA.
antibacteriana por el método Kirby-Bauer del por el método Kirby-Bauer del extracto 250 g de polvo de raíz para
extracto hidroalcohólico de la raíz
hidroalcohólico de la raíz de cada extracción
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.
Paranephelius uniflorus Poepp & Endl.      
(Chawi), frente a Escherichia coli. 
(Chawi), frente a Escherichia coli   INSTRUMENTO:
 
Ficha de registro de datos