UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA

DE MEXICO

Facultad De Estudios Superiores Zaragoza

Carrera QFB
BIOLOGIA CELULAR Y DE LOS TEGIDOS II

Catabolismo de la hemoglobina
Grupo: 1501 Equipo: 7
Prese nta:
Armendáriz Roa Alejandro
León Reséndiz Brandon Raúl
Vázquez Hernández José Antonio

Profesor responsable: Gabriela Rosas Gavilán

Fecha de entrega: 07 /10/2022

Tabla de contenido
Resumen ................................................................................................................................. 1
Marco teórico ......................................................................................................................... 2
Funciones del hígado .............................................................................................................. 2
Afecciones por bilirrubina alta ............................................................................................... 2
Ictericia. Definición y síntomas.............................................................................................. 2
Afecciones por la bilirrubina baja .......................................................................................... 3
Valores normales de bilirrubina ............................................................................................. 3
Enfermedad de Kernicterus .................................................................................................... 3
Objetivos: ............................................................................................................................... 3
Material y método: ................................................................................................................. 4
Material: ................................................................................................................................. 4
Reactivos: ............................................................................................................................... 4
Equipo: ................................................................................................................................... 4
Condiciones de reacción:........................................................................................................ 4
Método: .................................................................................................................................. 5
Resultados .............................................................................................................................. 6
Cálculos: ............................................................................................................................... 10
Discusión .............................................................................................................................. 11
Conclusiones ........................................................................................................................ 11
Referencias: .......................................................................................................................... 12
Resumen
El hígado produce y segrega de 250 a 1000 mL de bilis por día, un líquido verde y de sabor
amargo que interviene en los procesos de digestión y cuyos componentes son el pigmento
biliar (bilirrubina), sakes biliares, fosfolípidos (principalmente lectina), colestrerol y también
iones inorgánicos. La bilis sirve como ruta de excresión para el producto resultante de la
transformación del grupo hemo de la hemoglobina. Para la eliminación de la bilirrubina como
componente de la bilis, intervienen varios procesos no orgánicos, primero forma complejos
con la albúmina sérica para transportarse al hígado (porque no es soluble), esto se conoce
como bilirrubina no conjugada o indirecta. Ya en el hígado, esta se libera de la albúmina en
el espacio sinusoidal y es transportada por una proteina llamada ligandina hasta el retículo
endoplasmático. Ahí es rapidamente conjugada cuando los grupos caboxilo de los propionilo
de la bilirrubina se esterifican mediante la conjugación con sus moléulas de ácido
glucoriónico para fromar bilirrubina conjugada.
En esta práctica se analizó la cantidad de bilirrubina total y conjugada que tenía la muestra
de sangre extraída a un donador. Para esto, como primer paso se llevó a cabo la extracción
de la muestra con el uso de un tubo vacutainer de tapa color rojo, la extracción se llevó a
cabo de manera cuidadosa y rápida. Posteriormente este tubo se envolvió con papel aluminio
para evitar ser expuesto a demasiada luz ya que esto puede afectar al resultado de la
bilirrubina. Después de esto, el tubo se metió a centrifugar durante 15 minutos y mientras
tanto, se prepararon 5 tubos de ensaye, etiquetados para poder introducir los diferentes
reactivos en ellos, siendo estos y sus contenidos, suero, el blanco de bilirrubina total con 1.5
mL de reactivo 2 y 100 μL de suero, bilirrubina total con 1.5 mL de reactivo 2, 50 μL de
reactivo 3 y 100 μL de muestra de suero, blanco de bilirrubina directa con 1.5 mL de reactivo
1 y 100 μL de muestra y bilirrubina directa con 1.5 mL de reactivo 1 y 100 μL de suero.
Al momento de poner el suero dentro de los tubos, se contaron 5 minutos para incubar la
muestra a 25 ºC a partir de que se entra en contacto el suero con el reactivo. Después de esto,
inmediatamente se procedió a medir las absorbancias de todas estas muestras y con un blanco
de agua destilada. Estos resultados de absorbancia se debían comparar con un estándar
preparado por un equipo pero esto no se realizó, se proporcionó un dato ya realizado y
comparando nuestros resultados, estos quedaron fuera de los parámetros establecidos,
dándonos un valor de bilirrubina total de 1.337, bilirrubina conjugada 0.2101 y bilirrubina
no conjugada 1.1269.

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Marco teórico
Funciones del hígado
• Compensación, depuración de la bilirrubina (si se produce una acumulación de
bilirrubina, la piel y los ojos se ponen amarillos).
• Producción de bilis (ayuda a transportar los desechos y a descomponer las grasas en
el intestino delgado durante la digestión)
• Producción de ciertas proteínas para el plasma sanguíneo
• Producción de colesterol y proteínas especiales para ayudar a transportar las grasas
por todo el cuerpo
• Conversión del exceso de glucosa en glucógeno de almacenamiento (este glucógeno
más tarde se puede convertir nuevamente en glucosa para la obtención de energía)
• Equilibrio y producción de glucosa según fuera necesario
• Regulación de los niveles de aminoácidos en la sangre (son las unidades formadoras
de proteínas)
• Procesamiento de la hemoglobina para la distribución de su contenido de hierro (el
hígado almacena hierro)
• Conversión del amoníaco tóxico en urea (la urea es uno de los productos finales del
metabolismo de las proteínas y se excreta en la orina)
• Depuración de fármacos y otras sustancias tóxicas de la sangre
• Regulación de la coagulación sanguínea
Afecciones por bilirrubina alta
Los niveles más altos de bilirrubina están relacionados con un amplio abanico de
enfermedades y problemas, entre las que estarían la ictericia relacionada con hepatitis y
cirrosis, anemia, la enfermedad de Gilbert y la enfermedad de la célula de hoz. La ictericia
es habitual en bebés. Un nivel muy alto en bebés puede provocar daños permanentes.

Ictericia. Definición y síntomas

Trastorno que provoca un exceso de la bilirrubina. Ésta es un producto de desecho de la
hemoglobina, que es el principal contenido de los glóbulos rojos. Esta bilirrubina está
transformada en el hígado y transportada a través de la vía biliar al intestino delgado y se
elimina por las heces. Por ello, la ictericia se produce cuando existe un aumento en el ritmo
de destrucción de los glóbulos rojos, en las enfermedades hepáticas y en las enfermedades
en las que se produce una obstrucción de la vía biliar.

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El principal síntoma de la ictericia es la coloración de la piel amarillenta y de las mucosas.
En algunos casos, pueden presentarse otros síntomas como la coluria (orinas de color muy
oscuro) y la acolia (heces muy claras por la ausencia de pigmentos derivados de la
bilirrubina).
Afecciones por la bilirrubina baja
La hipobilirrubinemia (valores de bilirrubina en sangre por debajo de lo normal) es poco
frecuente y no se considera de importancia. Incluso en muchos laboratorios se admiten como
valores normales valores de cero o no detectados de bilirrubina total.
Sin embargo, algunos estudios consideran que valores bajos de bilirrubina en sangre son un
factor de riesgo para sufrir una enfermedad coronaria (angina de pecho, infarto, etc.).

Valores normales de bilirrubina

• Bilirrubina total → 0.2 a 1.0 mg/dL
• Bilirrubina conjugada → 0 a 0.2 mg/dL
• Bilirrubina no conjugada → 0.2 a 0.8 mg/dL

Enfermedad de Kernicterus
El kernícterus es la lesión encefálica causada por el depósito de bilirrubina no conjugada en
los ganglios basales y los núcleos del tronco encefálico. la bilirrubina puede atravesar la
barrera hematoencefálica y causar kernícterus cuando la concentración de bilirrubina sérica
es muy alta (hiperbilirrubinemia), y cuando la concentración de albúmina sérica es muy baja,
por ellos es común en recién nacidos y puede provocar parálisis cerebral atetoide, pérdida
auditiva, problemas en la vista y los dientes; y puede provocar, algunas veces, discapacidades
intelectuales.

Objetivos:
• Conocer la estructura de la bilirrubina, de donde proviene y como se metaboliza.
• Entender la importancia de las determinaciones sobre la bilirrubina y las principales
enfermedades que provocan los valores anormales de esta.
• Aplicar las técnicas y metodología adecuadas para las determinaciones así como
interpretar sus resultados

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Material y método:
Material:
• Material Biológico: Suero libre de hemolisis
• Tubos para extracción sanguínea tapón color rojo
• Sistema de extracción sanguínea: Ligadura, capuchón y aguja
• Algodón (torundas con alcohol)
• Celdas
• Pipetas graduadas de 0.1 mL
• Pipetas graduadas de 5 mL
• Papel aluminio
• Sanitas
• Reloj/cronómetro
• Vasos de precipitados de 250 mL
• Gradilla
• 5 tubos de ensaye 13x100
Reactivos:
• Kit de reactivos para bilirrubina Spinreact
• Alcohol
• Hipoclorito de sodio

Equipo:
• Espectrofotómetro
• Centrífuga
• Balanza de dos platos

Condiciones de reacción:
• Longitud de onda: 555 nm
• Temperatura 15-25 ºC
• Tiempo de reacción: 5 minutos
• Centrifugadora: 3500 rpm

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Método:
Se extrajo una muestra sanguínea del paciente, con uso del tubo para extracción sanguinea
tapón color rojo.
Se prepararon todos los tubos de ensaye 13x100 etiquetando cada uno y se colocaron en
gradilla para su uso posterior, luego procedió a centrifugar la muestra de sangre a 3500 rpm
durante 15 minutos. Una vez terminada la centrifuga se cubrió el tubo con papel aluminio.
NOTA: Es importante tapar el tubo con papel aluminio inmediatamente después de la
extracción sanguínea, esto para evitar la degradación de la bilirrubina por la luz.
Una vez centrifugada la muestra, se procedió a extraer el suero sanguíneo y pasando a un
tubo de ensaye previamente etiquetado, (cuidando que éste se encuentre completamente
tapado con papel aluminio). Después se conecto el espectrofotómetro 15 min antes de
utilizarlo, pasados los 15 minutos se ajustó a cero con una celda que contenía agua destilada.
Cada tubo de ensaye se rotuló de la siguiente manera: el tubo uno “Blanco de Bilirrubina
total”, el tubo dos “Bilirrubina total”, el tubo tres “Blanco de bilirrubina directa” y él tuvo
cuatro “Bilirrubina directa”.
Los reactivos que se utilizaron para esta práctica contenían:
Reactivo 1, ácido sulfanilico reactivo diazo (30 mmol/L) y ácido clorhídrico (150 mmol/L).
Reactivo 2: ácido sulfanilico (30 mmol/L), ácido clorhídrico (50 mmol/L) y dimetilsulfoxido
(7 mmol/L) “acelerador”
Reactivo 3: Sodio nitrito (29 mmol/L) “Desarrollador”
Una vez identificado los reactivos y los tubos de ensayo a utilizar, se procedió a colocar
alícuotas de la siguiente manera:
Tubo blanco de bilirrubina total: 1.5 mL de Reactivo dos y 100 micro litros de muestra de
plasma sanguíneo.
Tubo Bilirrubina Total: 1.5 mL de Reactivo dos y 50 micro Litros de reactivo tres y 100
micro litros de muestra de plasma sanguíneo
Tubo Blanco de Bilirrubina Directa: 1.5 mL de reactivo uno y 100 micro litros de muestra de
plasma sanguíneo.
Tubo Bilirrubina directa: 1.5 mL de reactivo uno, 50 micro litros de reactivo tres y 100 micro
litros de muestra de plasma sanguíneo

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Teniendo las mezclas en cada tubo de ensayo se procedió a mezclar por inversión e incubar
por 5 min en un baño maría de tal manera que la temperatura se mantenga en un rango de 15
a 25 °C. NOTA: Inmediatamente después de los 5 minutos, se colocaran las muestras en la
celda para lectura de absorbancia.
Finalmente, se colocaron en ¾ de celda, una muestra de cada tubo de ensaye y se leyó la
absorbancia de cada una a 555nm. Se realizo los cálculos pertinentes para la determinación
de bilirrubina total y bilirrubina directa.
NOTA: El espectrofotómetro debe encenderse 15 minutos antes de utilizarse para leer
absorbancias, primero se calibra con el blanco y posteriormente se lee la muestra.

Resultados

Descripcion Imagen
Muestra de sangre extraida
exitosamente, cubierta de
inmediato con papel aluminio para
evitar el contacto con la luz

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Tubo de muestra de sangre
cubierta con pepel aluminio

Muestra de sangre despues de

centrifugar durante 15 minutos a
3500 rpm

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Extraccion de plasma sanguineo

Reactivos utilizados

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Tubos de ensaye etiquetados con
mezcla de reactivos y muestra
como corresponde

Incubacion de tubo de bilirrubina

directa

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 Diferencias de color al preparar las
mezclas. (izquierdo blanco de
bilirrubina total, derecha
bilirrubina bilirrubina total)

Tabla 1. Imágenes capturadas durante la realizacion de la practica

Componente Absorbancia
Blanco de bilirrubina total 0.017
Bilirrubina total 0.087
Blanco de bilirrubina directa 0.019
Bilirrubina directa 0.030

Cálculos:
Tabla 2. Datos obtenidos en espectrofotómetro a 555 nm
Con factor:
• Para Bilirrubina Total y Conjugada (directa)
((A) Muestra – (A) Blanco muestra) x Factor = mg/dL bilirrubina en la muestra
*Factor: 19.1 mg/dL
Bilirrubina Total:
BT= (0.087 – 0.017) (19.1 mg/dL) = 1.337 mg/dL
BC= (0.030 – 0.019) (19.1 mg/dL) = 0.2101 mg/dL
• Para Bilirrubina No Conjugada (Indirecta)
BNC= BT – BC
BNC= (1.337 – 0.2101)
BNC= 1.337 mg/dL

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Discusión
La muestra sanguínea se tomó adecuadamente con supervisión de la profesora Gabriela
Rosas Gavilán, obteniendo una muy buena porción de sangre, de modo que se obtuvo
suficiente material biológico con el que trabajar la determinación.
Una vez obtenidos los resultados de la cuantificación espectrofotométrica nos percatamos de
un resultado anormal para la bilirrubina no conjugada, debido a que el valor resulto más
elevado de los rangos normales, este resultado se dio en más equipos del laboratorio,
considerando que los tiempos de reacción en incubación se respetaron así como el cuidado
de la muestra para que la luz no influyera en ella y afectara la molécula a determinar, se le
atribuye la anormalidad en el dato a que el reactivo 2 tenía una fecha de caducidad ya vencida,
y se considera que ese fue el factor determinante para la dispersión del dato.
Otro error a considerar podría ser al centrifugar la muestra que al meter y sacar la muestra de
la centrifuga se tuvo que quitar el papel aluminio y al sacarlo se colocó de nuevo, por lo que
pudo haber una interacción de la luz.
Se aconseja trabajar con una parrilla de calentamiento en las mejores condiciones posibles
ya que la temperatura se debe mantener estrictamente entre los 15 y 25 grados centígrados,
de lo contrario puede haber una desnaturizacion de la molécula. Del mismo modo usar un
termómetro en buenas condiciones, propio de preferencia ya que muchos de los prestados
por el laboratorio están fraccionados y esto da una lectura errónea de la temperatura usada
para las reacciones necesarias.

Conclusiones
Con la realización de esta práctica logramos comprender el metabolismo de la bilirrubina y
aprendimos a cuantificar la bilirrubina total y la bilirrubina conjugada con base en los
resultados obtenidos de la muestra del paciente.
La metodología se llevó a cabo de manera correcta, desde la extracción de la muestra hasta
el final midiendo las absorbancias.
Al momento de interpretar los resultados de bilirrubina no conjugada, estos no estaban dentro
del valor establecidos como normales en un adulto, esto no quiere decir que el paciente
presente alguna enfermedad o que tenga los valores elevados, esto puede ser debido al exceso
de reactivo 1 o 2 al momento de pipetearlos al tubo de ensaye y debido a otros errores al
momento de manipular los instrumentos o el material como la temperatura de incubación, el
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tiempo de incubación o al momento de poner el papel aluminio para proteger la muestra de
la luz.

Referencias:
1. Gonzales de Buitrago J. Tecnología y métodos del laboratorio clínico. Barcelona,
1998
2. Ruiz Argüelles, Guillermo J. Fundamentos de Hematología 2ª ed. México D.F.
Médica Panamericana, 1998
3. McKenzie, Shirley B. Hematología clínica. 2ª ed. México. Manual moderno, 2000
4. Turgeon, Marg Louise. Hematología clínica: Teoría y procedimientos. 4ª ed.
México D.F. Manual moderno, 2006
5. Tortora Gj, Grabowski S. Principios de Anatomía y fisiología. 9ª ed. México:
Oxford University Press, 2002

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