PRACTICA 3

ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS BIOLÓGICOS PARA CULTIVO

INTRODUCCIÓN

La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través de

un material capaz de retener los microorganismos presentes.
La esterilización por filtración se emplea para materiales sensibles al calor, tales
como ciertos medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros
medicamentos, etc.

TIPOS DE FILTROS

Hay varios tipos de filtros, entre ellos los que más se usan son los filtros de
profundidad y los filtros de superficie o filtros de membrana.

Filtros de profundidad

Estos filtros están elaborados por un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio)
dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vías
tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayoría de los contaminantes
presentes. Entre sus ventajas se encuentran su alta capacidad de retención de
partículas sobre su superficie y a través de toda su estructura y que permiten filtrar
grandes volúmenes. Sin embargo, tienen como desventajas que no presentan un
tamaño de poro uniforme y existe la posibilidad de liberación, hacia el material
filtrado, de partículas y microorganismos que hayan crecido dentro del filtro. Dadas
sus características los filtros de profundidad se usan principalmente como pre-filtros,
ya que permiten eliminar las partículas grandes pero no la eliminación total de los
microorganismos.

Filtros de superficie

Son filtros elaborados generalmente de acetato de celulosa o nitrato de celulosa y

contienen poros de tamaño uniforme. Este tipo de filtro tiene como ventaja que, al
conocer exactamente el tamaño de poro que presentan, se pueden seleccionar filtros
capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una solución.
Sin embargo, se saturan rápidamente y la velocidad de filtración a través de ellos es
lenta. Para la filtración esterilizante se pueden usar combinaciones de un filtro de
profundidad con un filtro de superficie que tenga un tamaño de poro de 0.22 µm. La
mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y luego
se manipulan asépticamente al ensamblar el equipo.
EQUIPOS DE FILTRACIÓN
Existen diferentes equipos de filtración, la selección del mismo está determinado
principalmente por el volumen de líquido a filtrar.

Figura 1. Fundamento de la esterilización a través de una

membrana de filtración

OBJETIVO

Conocer un método de esterilización de medios líquidos empleado en cultivo de

células animales

MATERIAL

● Medio de cultivo
● Jeringa de 10 ml estéril
● Tubos Falcon
● Membrana de nitrocelulosa.
● Alcohol al 70% (P/V)
● Azúcar (10 g)
● Marcador
MÉTODO

● Lavarse las manos

● Dar asepsia con alcohol al 70%
● Desinfectar el área de trabajo
● En la campana de flujo laminar se procederá a filtrar el medio de cultivo al
cual se le agregara previamente azúcar (aproximadamente 5 cucharadas).
● Se tomaran 10ml de medios con la jeringa estéril, se procederá a retirar la
aguja y colocar el filtro evitando tomarlo con las manos para no contaminar.
● Depositar el medio filtrado en el tubo estéril, rotularlo con el nombre y fecha,
e incubar a 37 ºC durante 72 horas.

DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué es la esterilización? Y ¿Qué no es la esterilización?

2.- ¿Por qué es importante la esterilización del material utilizado en el laboratorio de

cultivo de células animales?
3.- ¿Cuantos tipos de esterilización hay? (mencione y describa al menos tres)
4.-¿Cuando es necesario utilizar la esterilización por filtración? Argumente su
respuesta
5.- Defina las ventajas y desventaja de la esterilización por calor húmedo, calor seco
y filtración
6.- ¿Qué tipo (s) de esterilización es recomendada para el laboratorio de cultivo de
células?

Bibliografía
● Aquiahuatl Ma. Ángeles, Volke T., Prado Lilia A., Shirai K., Ramírez F.,
Salazar M. (2012) Manual de prácticas de laboratorio, Microbiología general,
Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa.
● Arias, J. 2005, Manual Microbiología Farmacéutica, Editorial Ceja.
● CLavell, L. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales. 2º Edición.
Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela
● Clavell, L; Rossi, L. 1994. Campanas de Flujo Laminar. Universidad Central
de Venezuela. Facultad de Farmacia.
● Collard P. (1985), El desarrollo de la microbiología, Editorial Reverté, España.
● Gutiérrez de Gamboa, Sofía, 2008, Esterilización por filtración, México.
● Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, 2016, CPFEUM, México.
● Organización Mundial de la Salud, 1998, Guia de la OMS sobre los requisitos
de las practicas adecuadas de la fabricación (PAF) Segunda parte: Validación.
● Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000). Microbiología. 6ª ed. McGraw
Hill. México.