QU ES BIOSEGURIDAD

MICROORGANISMOS
Los microorganismos son aquellos seres vivos ms diminutos que nicamente
pueden ser apreciados a travs de un microscopio. En este extenso grupo
podemos incluir a los virus, las bacterias, levaduras y mohos que pululan por
el planeta tierra.
QU ES ESTERILIZACIN
La esterilizacin est constituida por todos aquellos procedimientos fsicos o
qumicos que permiten destruir y/o eliminar toda clase de microorganismos,
tanto en su forma vegetativa como esporulada. Es decir, mediante la
esterilizacin se asegura la destruccin de todos los microorganismos y
esporas. Algunos mtodos de esterilizacin:
- Calor hmedo: autoclave.
- Calor seco: Horno de aire caliente, incinerador.
- Luz Ultravioleta (UV)
ALGUNOS MTODOS DE DESINFECCIN:
Desinfeccin por productos qumicos La mayora de los desinfectantes
qumicos tienen efectos txicos, por lo cual deben ser usados con guantes,
delantal y proteccin ocular al momento de preparar las diluciones a partir de
las soluciones patrn o estndar. La eleccin de desinfectantes qumicos para
utilizar sobre equipos, materiales, superficies de laboratorio o deshechos
contaminados dependen de muchos factores por ejemplo:
- Cantidad y naturaleza de los microorganismos a destruir, (bacterias y/o
virus).
- Interaccin con otros qumicos activos presentes.
- Tiempo de contacto.
-pH, temperatura, concentracin usada.
- Costo.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIN

DE LOS MICROORGANISMOS
a) Temperatura:
Las temperaturas elevadas tienen efectos dainos sobre los microorganismos y
se debe tener en cuenta que cuando, adems de la temperatura, tambin se
utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos en la temperatura aceleran la
destruccin de los microorganismos. Por ejemplo, la muerte de una suspensin
bacteriana por fenol es mucho ms rpida a 42C que a 30C.
b) Tipo de microorganismos:
Las especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los agentes
fsicos y qumicos. En las especies formadoras de esporas, las clulas
vegetativas son mucho ms susceptibles que las formas esporuladas.
c) Estado fisiolgico de las clulas:
El estado fisiolgico de los microorganismos puede influenciar la
susceptibilidad

un

agente

antimicrobiano.

Las

clulas

jvenes,

metablicamente activas, son ms fcilmente destruidas que las clulas viejas

cuando el agente acta interfiriendo con el metabolismo.
d) Ambiente.
Las propiedades fsicas y qumicas del medio o sustancia donde se encuentran
los microorganismos, tambin tienen una profunda influencia sobre la eficacia
de la destruccin microbiana, por ejemplo, el calor es mucho ms eficaz en
materiales cidos que en materiales alcalinos. La consistencia del material
influye notablemente en la penetracin del agente. La presencia de material
orgnico puede reducir significativamente la eficacia de un agente qumico, ya
sea inactivndolo o protegiendo de l a los microorganismos si estn
presentes.

LIMPIEZA DE MATERIAL REUSABLE NO CONTAMINADO

La limpieza se define como el proceso de remover, a travs de medios
mecnicos y/o fsicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las
superficies, equipos, materiales, personal, etc. Este proceso, junto con un
adecuado proceso de desinfeccin, es indispensable para controlar la presencia
de los microorganismos en el ambiente.
El primer paso del proceso de desinfeccin es la limpieza. La limpieza
remueve restos de tejido, moco, sangre, etc., que podran interferir con la
accin del desinfectante. Para realizar una limpieza adecuada se deben
considerar el tipo de accin del agente utilizado (remocin mecnica,
disolucin o detergente), las condiciones requeridas para aplicar la solucin
limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que sta ejerza su efecto.
Los instrumentos con partes removibles debern desensamblarse de acuerdo
con las instrucciones del fabricante, para asegurarse que todas las superficies
se expondrn al procedimiento de limpieza. Aproximadamente 99.8% del
material orgnico puede ser removido con una limpieza meticulosa. La
limpieza puede ser acompaada de lavado manual o mecnico.
Debe haber en el laboratorio cuatro tipos importantes de recipientes para
productos potencialmente infectados:
- Cestos o bolsas autoclavables de un solo uso para recibir cultivos y
muestras.
- Vasijas de un solo uso para recibir portaobjetos, pipetas Pasteur y
pequeos artculos a desechar.
- Vasijas altas para pipetas graduadas (reusables).
- Bolsas de plstico para materiales combustibles tales como cajas para
muestras y envoltorios que puedan estar contaminados.

Todos estos recipientes deben ir a la seccin de limpieza y esterilizacin para

el tratamiento final y esterilizacin de aquellos potencialmente contaminados.
Eleccin del recipiente:
Las vasijas de desechos deben ser fuertes y esterilizables por autoclave y los
recipientes ms adecuados son los bocales de 1 litro de polipropileno o los
tarros del mismo material con tapa a rosca. Son suficientemente profundos
para mantener sumergidas la mayora de las cosas que es probable se
desechen, son irrompibles y resisten muchas esterilizaciones por autoclave.
Son mejores los tarros de polipropileno con tapa a rosca, ya que pueden
cerrarse despus de su uso, invertirse para asegurar que el desinfectante est
en contacto con el material.
Un recipiente de desecho de 1 litro debe contener 750 mi de desinfectante
diluido, dejando espacio para que ascienda el nivel sin que se derrame ni que
gotee cuando se traslade.
Los supervisores de la seccin deben asegurarse de que no se coloquen en las
vasijas de desecho cosas inapropiadas. Nunca deben aadirse grandes
volmenes de lquido a los desinfectantes diluidos. Lquidos tales como los
sobrenadantes de la centrifugacin, deben verterse en vasijas de desecho, que
contienen el volumen usual de desinfectante puro, a travs de un embudo
adaptado en la parte superior de la boca. Esta disposicin impide se derramen
gotas y se formen aerosoles. No debe agregarse a los desinfectantes artculos
que contengan grandes cantidades de protena, sino que deben desinfectarse en
el autoclave o incinerarse.
Ningn material debe dejarse en el desinfectante de la vasija de desecho
durante ms de 24 horas, ya que en caso contrario se desarrollarn las
bacterias supervivientes. Por tanto, todas las vasijas deben vaciarse una vez al
da, aunque es una cuestin particular s se hacen al final del da o a la maana

siguiente. Deben vaciarse incluso las vasijas que hayan recibido poco o ningn
material al llegar ese momento. Las vasijas para las pipetas recuperables
deben estar hechas de polipropileno o de goma. Son de mayor seguridad que
el vidrio. Las vasijas deben ser suficientemente altas para permitir que las
pipetas se sumerjan totalmente sin que se derrame el desinfectante. Debe
aadirse al desinfectante un detergente compatible para facilitar la limpieza de
las pipetas en la fase final
El agente seleccionado de limpieza deber:
1. Ser capaz de remover tejido orgnico.
2. Capaz de prevenir depsitos flotantes.
3. Con baja formacin de espuma.
4. Capaz de ser enjuagado completamente.
5. Compatible con los materiales que estn siendo limpiados.
Los detergentes enzimticos estn especficamente diseados para penetrar y
desbaratar las protenas y la materia orgnica. Los agentes de limpieza
debern ser preparados de acuerdo con las recomendaciones del fabricante en
cuanto a dilucin, compatibilidad con los artculos, el uso adecuado y la
temperatura de la solucin.
Enjuague y secado:
Despus de la limpieza los instrumentos que se desinfectarn debern ser
enjuagados vigorosamente para remover cualquier residuo de detergente. Hay
que secar cuidadosamente cada instrumento usando aire para secar orificios y
ranuras pequeas para prevenir la dilucin del desinfectante.
Desinfeccin
De acuerdo a su definicin, la desinfeccin se emplea cuando se tratan los
instrumentos de uso mdico, utensilios, paredes y pisos de las habitaciones de
los enfermos, etc., con el propsito de evitar una posible infeccin. Para
realizar este proceso se usan agentes qumicos (desinfectantes) o procesos
fsicos como el calor. El trmino sanitarizacin usualmente se refiere al

proceso empleado para reducir el contenido de microorganismos viables

remanentes en una superficie limpia. En la industria se emplea este trmino
cuando se tratan, con agentes qumicos o fsicos, las reas de produccin y los
equipos empleados en la elaboracin de productos, con el propsito de reducir
el contenido microbiano hasta niveles insignificantes.
Limpieza de Equipos:
El personal de limpieza y desinfeccin tambin ser responsable de la
limpieza de los equipos de laboratorio, tales como las refrigeradoras,
autoclave (reas no tcnicas), hornos, etc , lo cual debe realizarse al menos
una vez al mes y en coordinacin con los jefes de cada seccin del laboratorio.

FLUJOGRAMA DE TRABAJO EN LA DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

DE MATERIALES DE LABORATORIO

METODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

Mtodos Fsicos:
-- Calor Hmedo (Ej. Autoclave).
-- Calor Seco (Ej. Horno).
-- Radiaciones (Ej. Ultravioletas).
-- Filtracin (Ej. Filtros Millipore ).
Mtodos Qumicos:
-- Antispticos (Ej. Alcohol).
-- Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro).
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MTODOS
- Mtodos Fsicos:
- Calor Hmedo: Autoclave
El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a temperaturas mayores
a 100C. Una temperatura de 121 C ( 15 Lbs de presin) con un tiempo
de exposicin de 15 minutos sirve para destruir microorganismos, incluso los
formadores de esporas.
Ventajas del calor hmedo:

Rpido calentamiento y penetracin.

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo.

No deja residuos txicos.

Hay un bajo deterioro del material expuesto.

Econmico.
Desventajas del Calor Hmedo:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Materiales que se pueden esterilizar con vapor:
- Material textil - Material de vidrio- Material de goma- Instrumental quirrgico de
acero inoxidable- Soluciones acuosas - Todo aquel material cuyo fabricante
certifique pueda ser esterilizado por vapor.
Materiales que no se pueden esterilizar con vapor:
- Sustancias oleosas- Sustancias grasas- Polvos- Instrumental quirrgico cromado
o niquelado- Artculos elctricos sin cobertura especial- Todo material que no
tolera la exposicin al calor y a la humedad.

AUTOCLAVE

MOVIMIENTO DEL VAPOR DENTRO DE LA AUTOCLAVE

Relacin de Presin Vs Temperatura en el Autoclave
-

Presin ( Libras ) Temperatura ( C )

5 108

10 116

15 >>>>>>>>>>> 121

20 127

25 131

30 134

Resumen de un ciclo esterilizacin en autoclaves:

1. Se abre la vlvula de admisin de vapor a la camisa precalentando la cmara.
2. Al terminar de salir el aire de la camisa, se abre la vlvula que comunica camisa
y cmara permitiendo la entrada de vapor a la cmara.
3. Cuando el vapor ocupa totalmente la cmara y el termmetro marca la
temperatura establecida empieza el ciclo de esterilizacin.
4. Al terminar el ciclo se expulsa el vapor de acuerdo a necesidades: lentamente si
se trata de lquidos para evitar una descompresin rpida o rpidamente si se trata
de otras cargas.
5. Una vez expulsado el vapor se abre la vlvula que comunica la camisa con
la atmsfera. Se produce presin negativa y se realiza el secado por medio de la
succin de aire en la cmara.
En los autoclaves de desplazamiento por gravedad que son los primeros modelos
fabricados, el tiempo de penetracin es prolongado por una incompleta

penetracin de aire y por lo tanto los tiempos de esterilizacin tambin son

mayores. En la actualidad aun cuando funcionan con el mismo principio, facilitan
su operacin y aumentan el nivel de seguridad por medio de la incorporacin de
controles automticos, bomba de vaco y microprocesadores.
Calor Seco: Horno
Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la accin del
calor. El calor provoca en ellos coagulacin y desnaturalizacin de sus protenas.
La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de :
-- Temperatura
-- Tiempo de exposicin
La estufa de esterilizacin (Horno ), es el artefacto utilizado en los laboratorios
para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de
exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C,
requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos
5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de
exposicin.

HORNO
Ventajas del Calor Seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias

viscosas no voltiles.
Desventajas del Calor Seco:

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la

baja penetracin del calor.
Materiales que pueden esterilizarse por calor seco.

Instrumental quirrgico cromado- Materiales de vidrio, aluminio o porcelanaAceites, parafina, sustancias grasas, vaselina- Polvos (talco).
Materiales que NO se pueden esterilizar por calor seco
- Material textil (algodn, sedas, lino, etc.)
- Gomas - Materiales sintticos - Todo material que se altere a la temperatura
trabajo.
Temperatura
La temperatura de esterilizacin por Calor Seco deber estar entre 160 C 170
C.
Tiempos
El tiempo de exposicin del material se determina mediante la correspondiente
validacin del ciclo.
El material a esterilizar se deber cargar con el esterilizador fro, teniendo en
cuenta las siguientes recomendaciones:
Cada unidad deber quedar separada de las vecinasLos materiales no debern
estar en contacto con las paredes, piso y techo del esterilizador. La carga del
esterilizador ser homognea y no deber superar el 80% de la capacidad total de
la cmara
Etapas del ciclo de esterilizacin por calor seco :
1. Colocar el material dentro del Esterilizador2. Encender el Esterilizador3.
Verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo y temperatura se
encuentren en la posicin correcta4. Esperar hasta que los instrumentos de
medicin registren la temperatura seleccionada para el ciclo5. Cuando se alcance
la temperatura seleccionada, se comenzar a descontar el tiempo de esterilizacin
6. Cumplido el tiempo de exposicin se apagar el Esterilizador7. La descarga del
Esterilizador se efectuar una vez que el material se haya enfriado
Precauciones
Durante el ciclo de Esterilizacin no deber abrirse la puerta del Esterilizador
porque ello implicara abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo.
Otros agentes fsicos:
- Radiaciones ionizantes (rayos Gamma)

- Luz ultravioleta
- Filtracin (Filtros Millipore )
- Ultrasonido
8.2 Mtodos Qumicos:
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan:

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma

concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos
microorganismos.

Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma

forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.

pH: el pH determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico,

pues a menor disociacin, mayor permeabilidad y mayor efectividad.
Listado de Desinfectantes (agrupados por su radical qumico)

Compuestos Fenlicos:
Fenoles
Crisoles
Alcoholes:
Etlico
Isoproplico
Halgenos:
Yodo
Cloro
Oxidantes:
Perxido de hidrgeno
Permanganato de potasio
Colorantes:
Azul de metileno
Giemsa
Acridina
Metales Pesados:
Bicloruro de mercurio
Nitrato de plata
Vapores y Gases:
Formaldehdo (2 5 %)
Ozono (O3)
Oxido de etileno
Glicol.
cidos:
cido actico (1%)
cido brico
RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DE LOS DESINFECTANTES

No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antispticos o

desinfectantes de distinta composicin.
No se debe modificar la concentracin establecida para cada procedimiento.
Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodn, gasa, corcho o
papel. Usar la tapa original.
Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antisptico, no deben
retornarse a su envase original.
Nunca debe llenarse un envase semivaco a partir de otro.
Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y segn el procedimiento indicado
por el fabricante.
Deben almacenarse en reas secas, ventiladas y protegidas de la luz.
Vigilar y controlar la fecha de vencimiento de los antispticos y desinfectantes
Seleccin de un desinfectante:
Tipo y cantidad aproximada de microbios.
Tipo y cantidad de materia orgnica presente.
Tiempo de contacto.
Tipo de superficie a ser desinfectada.
Descripcin de la fecha de eficacia e instrucciones de su uso.
Seguridad y aceptabilidad ambiental del producto.
Buena actividad residual.
Costos. No necesariamente lo mejor es lo ms costoso.

TIPOS DE METODOS DE ESTERILIZACION

Caractersticas de un desinfectante ideal

Un desinfectante ideal rene las siguientes caractersticas:
- Amplio espectro: inactiva bacterias (Gram positivas, Gram negativas,
micro bacterias), virus, hongos, esporas,
- Elevada potencia microbicida
- Accin rpida y sostenida
- No inactivado por materia orgnica
- Compatible con detergentes
- Estable a la concentracin y dilucin recomendadas
- No txico
- No potencial alergnico
No existe en el mercado un desinfectante que cumpla todas estas caractersticas.
Se escoge uno u otro en funcin del tipo de microorganismos que queremos eliminar,
del material sobre el que se apliquen, la temperatura y el pH de trabajo, el tiempo de
actuacin, la presencia de materia orgnica sobre el material a desinfectar, etc.
Factores que afectan a la eficacia de los desinfectantes
- No corrosivo (compatible con cualquier material)
- Fcil de preparar y de usar
- Inodoro o de olor agradable
- Tensin superficial baja
- Con efecto residual
- Econmico (buena relacin coste/eficacia)
- No daino para el medio ambiente.
No existe en el mercado un desinfectante que cumpla todas estas caractersticas Se
escoge uno u otro en funcin del tipo de microorganismos que queremos eliminar, del
material sobre el que se apliquen, la temperatura y el pH de trabajo, el tiempo de
actuacin, la presencia de materia orgnica sobre el material a desinfectar, etc.