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Esterilización_por_filtración

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• Introducción • Objetivo • Fundamento • Procedimiento • Resultados • Conclusiones • Bibliografía

Trabajo Práctico Nº 9

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

INTRODUCCIÓN La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La esterilización por filtración se emplea para materiales sensibles al calor, tales como ciertos medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros medicamentos, etc.

TIPOS DE FILTROS Hay varios tipos de filtros, entre ellos los que más se usan son los filtros de profundidad y los filtros de superficie o filtros de membrana. Filtros de profundidad Estos filtros están elaborados por un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio) dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vías tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayoría de los contaminantes presentes.

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Entre sus ventajas se encuentran su alta capacidad de retención de partículas sobre su superficie y a través de toda su estructura y que permiten filtrar grandes volúmenes. Sin embargo, tienen como desventajas que no presentan un tamaño de poro uniforme y existe la posibilidad de liberación, hacia el material filtrado, de partículas y microorganismos que hayan crecido dentro del filtro. Dadas sus características los filtros de profundidad se usan principalmente como prefiltros, ya que permiten eliminar las partículas grandes pero no la eliminación total de los microorganismos. Filtros de superficie Son filtros elaborados generalmente de acetato de celulosa o nitrato de celulosa y contienen poros de tamaño uniforme. Este tipo de filtro tiene como ventaja que, al conocer exactamente el tamaño de poro que presentan, se pueden seleccionar filtros capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una solución. Sin embargo, se saturan rápidamente y la velocidad de filtración a través de ellos es lenta. Para la filtración esterilizante se pueden usar combinaciones de un filtro de profundidad con un filtro de superficie que tenga un tamaño de poro de 0.22 µm. La mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y luego se manipulan asépticamente al ensamblar el equipo. EQUIPOS DE FILTRACIÓN Existen diferentes equipos de filtración, la selección del mismo está determinado principalmente por el volumen de líquido a filtrar. Así tenemos equipos de filtración para pequeños volúmenes, los cuales generalmente se esterilizan por separado y se ensamblan asépticamente en el momento de la filtración. Cuando se requiere filtrar volúmenes mayores, el filtro de membrana se dispone en un cartucho y se coloca en un estuche de acero inoxidable. También existen pequeños cartuchos de plástico que se pueden esterilizar después de la inserción de un filtro de membrana; con estos dispositivos la filtración se hace utilizando una jeringa que permite forzar el líquido a filtrar a través del filtro hasta un recipiente estéril.
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Antes de utilizar cualquier sistema de filtración hay que determinar que los filtros no presenten ninguna ruptura, ya que esto puede ocasionar fallas en el proceso de filtración. OBJETIVO Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Demostrar la esterilización de un medio de cultivo al pasarlo a través de un filtro de membrana de 0,22 μm. FUNDAMENTO Al pasar un medio de cultivo a través de un filtro de membrana de 0,22μm todos los microorganismos quedan retenidos sobre la superficie del mismo. PROCEDIMIENTO 1. Separar el medio de cultivo en dos porciones. 2. Pasar la porción A a través del equipo de filtración preparado con un filtro de membrana de 0,22 μm. 3. Recoger el líquido filtrado en un recipiente estéril y rotular. 4. Colocar la porción B directamente en un recipiente estéril y rotular. 5. Incubar ambas porciones a 32,5ºC +/- 2,5ºC durante 24 horas. RESULTADOS Observar ambas porciones después del periodo de incubación y anotar sus observaciones. Aspecto de la porción A: ______________________________________________

Aspecto de la porción B: ______________________________________________

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CONCLUSIONES Anotar sus conclusiones __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

BIBLIOGRAFÍA Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (segunda edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Filter Types, Structure and Characteristics. Millipore. Agosto 2001. URL: http://www.millipore.com/catalogue.nsf/docs/C147 Madigan, M.; Martinko, J.; Parker, J. 2000. Biology of Microorganisms. Ninth edition. Prentice Hall. Inc. New Jersey. The Pharmacopeia of the United States of America. Sterilization and Sterility Assurance of Compendial Articles. Cap 1211. 32 Edition. Rockville: USP; 2008. Tortora G. J., B. R. Funke and Ch. L. Case 2007. Introducción a la Microbiología 9na Edición. Editorial Médica Panamericana.

Prof. Sofía Gutiérrez de Gamboa Octubre 2001 Revisión 2008

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