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Estructura y actividades enzimáticas de la albúmina de suero humano

Artículo en Diseño Farmacéutico Actual · Marzo 2015

DOI: 10.2174/1381612821666150302113906 · Fuente: PubMed

CITAS LEE

31 1,426

3 autores, incluyendo:

yu wang Mingdonghuang

Universidad de Agricultura y Silvicultura de Fujian Universidad de Fuzhou

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Diseño farmacéutico actual, 2015, 21, 1831-1836 1831

Estructura y actividades enzimáticas de la albúmina de suero humano

Yu Wangab , Shihua Wanga y Mingdong Huangb*

a
Laboratorio clave de bioplaguicidas y biología química del Ministerio de Educación y la Facultad de Ciencias de la Vida, Fujian
b
Universidad de Agricultura y Silvicultura, Fuzhou, Fuijan, China; Laboratorio Estatal Clave de Química Estructural, Fu
Instituto Jian de Investigación sobre la Estructura de la Materia, Academia de Ciencias de China, Fuzhou, Fuijan, China

Resumen: La albúmina sérica humana (HSA) es la proteína más abundante en el plasma y desempeña múltiples funciones en la
fisiología, incluso como proteína transportadora de compuestos endógenos y exógenos. Estudios recientes proporcionan nuevas
evidencias para respaldar las actividades enzimáticas de HSA y nuevos conocimientos moleculares para tales actividades. Aquí, se
revisan las características estructurales y las características enzimáticas de HSA.

Palabras clave: albúmina sérica humana, estructura, absorción y distribución de fármacos, metabolismo de fármacos, actividad
enzimática, actividad tipo esterasa, actividad peroxidasa, glicación.

1. INTRODUCCIÓN
La HSA desempeña varias funciones importantes en la fisiología humana,
incluido el mantenimiento de la presión osmótica coloidal del plasma, la
regulación del potencial redox del plasma y el transporte de compuestos
endógenos y exógenos. HSA tiene una capacidad extraordinaria para unirse
a varias moléculas pequeñas, funcionando como una esponja química.
En particular, HSA también posee una serie de actividades enzimáticas.
Aquí, se revisarán las actividades enzimáticas de HSA y la estructura base de
tales funciones.
2. ESTRUCTURA DE LA ABLUMINA SÉRICA HUMANA
HSA es la proteína más abundante con una concentración de 600 M en
la sangre humana [1, 2]. La secuencia primaria de HSA se identificó en 1975
[3]. La HSA de longitud completa contiene un péptido señal (residuos 1-18),
propéptido (residuos 19-22) y proteína madura (residuos 23-609). HSA se
sintetiza principalmente en vivo. Después de la eliminación del péptido señal
y los propéptidos, la proteína madura de HSA (peso molecular de 66 kDa) se
secreta en la sangre. La estructura tridimensional de HSA fue resuelta por
primera vez por Carter y colaboradores en 1989 a baja resolución (6,0 Å) [4],
y se mejoró a una resolución relativamente alta (2,8 Å) en 1992 [5]. En 1999,
el grupo Sugoi proporcionó una estructura HSA de mayor resolución (2,5 Å).
De estos estudios, HSA es una proteína puramente helicoidal que contiene un
67% de hélices en su estructura secundaria, junto con algunas vueltas y bucles
extendidos. La molécula de HSA se pliega en forma de corazón, con unas
dimensiones aproximadas de 80x80x30 Å. La estructura completa de esta
proteína contiene tres dominios, I (residuos 1–195), II (196–383) y III (384–
585). Cada dominio consta de diez hélices antiparalelas y se divide en dos
subdominios (un subdominio A con seis hélices (h1-h6) y un subdominio B con
cuatro (h7-h10) hélices).
Además, HSA contiene 35 residuos de cisteína que forman 17 puentes
disulfuro que estabilizan la conformación de esta molécula globo y tiene un
residuo Cys libre (Cys34) que es bastante raro para las proteínas en el espacio
extracelular oxidante.
HSA tiene una capacidad fenomenal para unir compuestos endógenos
y exógenos [1]. Los ácidos grasos de cadena media y larga (FA) se unen a
HSA con alta afinidad con una constante de disociación en el rango de 10-7
M [1]. En 1998, el grupo Curry publicó la estructura HSA en complejo con este
importante compuesto endógeno [6], y
*Correspondencia dirigida a este autor en el Laboratorio Estatal Clave de Química
Estructural, Instituto de Investigación sobre la Estructura de la Materia de Fujian,
Academia de Ciencias de China, Fuzhou, Fuijan, China; Correo electrónico:
mhuang@fjirsm.ac.cn
encontraron que HSA acomodaba siete moléculas de ácidos grasos medianos
(miristato), con los respectivos sitios de unión llamados FA1 a FA7 [7] (Fig. 1).
Además, la unión de ácidos grasos da como resultado algunos cambios
conformacionales de HSA. Los dominios I y III giran en relación con el dominio
II debido a la unión de ácidos grasos en los sitios FA 2 y 3 en las interfaces
entre dominios [8]. Los lípidos, que son otra clase importante de compuestos
endógenos, generalmente se unen con HSA con menos fuerza que los ácidos
grasos de cadena larga [1]. Una estructura cristalina de HSA en complejo con
lisofosfatidiletanolamina (LPE) revela que LPE se une al sitio FA7 [9]. Las
estructuras cristalinas de HSA en complejo con muchos otros compuestos
endógenos (incluyendo hemo [10], tiroxina [11], bilirrubina [12]) y compuestos
exógenos (como aspirina [13], fenilbutazona [14], warfarina [15]) también
fueron reportado. Los estudios estructurales muestran que la mayoría, pero
no todos, de estos ligandos se unen a dos sitios primarios de unión a ligandos
en HSA (sitio I y II de Sudlow, que se encuentran en el subdominio IIA y el
subdominio IIIA, respectivamente) [16, 17]. Estos dos sitios fueron identificados
originalmente por Sudlow usando aminoácidos de fluorescencia dansilados
[16-17], y fueron confirmados por un estudio estructural posterior [18]. El sitio
I de Sudlow es un gran bolsillo de unión y se puede dividir en tres subsitios
que no se superponen: un subsitio salicílico (SAL) ubicado en la parte inferior
del sitio I [13], y un subsitio de indometacina (IMN) [14] y un subsitio 3 Subsitio
'-azido-3'-desoxitimidina (AZT) ubicado cerca de la apertura del sitio I [19].
Varios residuos cargados de HSA, incluidos Lys195, Arg218, Arg222 y Glu292,
se ubican en la apertura del sitio I de Sud low. Por otro lado, el fondo del sitio
I es de naturaleza hidrofóbica. Algunos fármacos como la oxifenbutazona, la
fenilbutazona y la warfarina se unen a la HSA en este sitio I [14]. Los grupos
aromáticos de estos compuestos están intercalados por las cadenas laterales
de Leu238 y Ala291 en el subsitio SAL [13, 14, 18, 20]. Residuos polares
como His242, Arg257, Arg218 y Arg222 ajustaron sus conformaciones para
adaptarse a la unión de estos compuestos [21]. El sitio II de Sudlow tiene un
tamaño más pequeño de bolsa de unión que el sitio I de Sudlow. Esta bolsa
de unión también tiene características hidrofóbicas. El diflunisal, el diazepam
y el ibuprofeno se unen al centro hidrofóbico del bolsillo de unión [14]. Arg410
y Tyr411 son residuos polares principales que forman un lado de la entrada
de este bolsillo de unión y también proporcionan enlaces de hidrógeno o
puentes salinos para la unión de estas moléculas de fármaco.
Debido a su capacidad de unión a fármacos, HSA juega un papel
importante en la distribución de fármacos. Las moléculas de fármacos
hidrofóbicos tienen comúnmente solubilidades acuosas pobres. HSA es capaz
de unirse a tales moléculas de fármacos y facilita su transporte y dispersión a
través de la circulación sanguínea. Por otro lado, una unión demasiado fuerte
entre el fármaco y la HSA puede dificultar la liberación del fármaco de la HSA
y afectar a la distribución del fármaco en la sangre. HSA también posee enzima

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1832 Diseño farmacéutico actual, 2015, vol. 21, núm. 14
Figura 1. Estructura general de HSA. La estructura de HSA se muestra en representación gráfica y está coloreada con gris. Se muestran dos sitios importantes de
unión a fármacos (sitio Suldow I y II) y sitios de unión a ácidos grasos (esferas negras). Los residuos reactivos potenciales en HSA se muestran en barra negra.
Lys199, Lys402, Lys519 y Lys525 son sitios primarios que son acetilados por la aspirina. Lys4, Lys12, Tyr411, Lys413 y Lys414 son los residuos clave que se
acetilan con p nitrofenil acetato. Lys 195, Lys199, Lys281, Lys439 y Lys525 se modifican mediante glicosilación no enzimática.
actividades máticas, y puede afectar la excreción de moléculas de fármacos.
Así, entre los cuatro aspectos importantes de la farmacocinética de fármacos
(absorción, distribución, metabolismo y excreción, o ADME), HSA tiene un fuerte
impacto en los últimos tres. La modulación de la afinidad de unión al suero de los
compuestos principales se suele tener en cuenta durante el desarrollo de fármacos.
3. ACTIVIDAD TIPO ESTERASA DEL SUERO ALBUMINA HUMANO
Además de su capacidad de unión a ligandos, HSA muestra propiedades
enzimáticas notables. La actividad similar a la esterasa de la HSA hacia el p-
nitrobenceno en el plasma se descubrió en la década de 1950 [22]. Cuando se
propuso inicialmente la actividad similar a la esterasa, fue objeto de fuertes críticas
[23, 24]. Tal función de HSA ha sido extensamente explorada durante décadas
desde entonces. Ahora es un consenso general que tal actividad existe en HSA.
3.1. Características comunes de la actividad similar a la esterasa de HSA
Una esterasa es una enzima hidrolasa que divide los ésteres en un ácido y un
alcohol en una reacción química. La incubación de HSA con ésteres conducirá a la
hidrólisis de los ésteres, lo que sugiere la actividad esterasa de HSA. Sin embargo,
HSA no se considera una hidrolasa genuina por las siguientes razones [24]. En
primer lugar, la actividad esterasa de HSA es muy lenta, en comparación con
muchas otras hidrolasas [25]. En segundo lugar, esta reacción hidrolítica por HSA
no siempre es catalítica. El producto hidrolizado (ácidos carboxílicos) de ésteres
reacciona covalentemente con HSA y forma un aducto estable. Estos aductos
estables no tienen actividad hidrolítica [26]. A veces, el aducto se puede hidrolizar,
aunque a un ritmo lento, dando HSA fresca capaz de una reacción hidrolítica
adicional [26]. En tercer lugar, no se ha establecido el mecanismo catalítico de la
actividad similar a la esterasa de la HSA. La tríada catalítica o un agujero de
oxianión de las proteasas no se ha identificado en HSA [24].
Se propuso una tríada catalítica no estándar que consiste en un nucleófilo de lisina
(Lys199), una base de histidina (His242) y un grupo carbonilo de Leu232 [27], pero
no ha sido validada. Finalmente, a diferencia de la mayoría de las enzimas
hidrolíticas que muestran especificidad de sustrato, la HSA hidroliza varios ésteres
muy diferentes. Su especificidad de sustrato no está bien definida. Por estas
razones, la actividad esterasa de HSA se denominó actividad similar a la esterasa.
Debido a la alta concentración de HSA en plasma (~0,4 mM), representa alrededor
del 40 % de la actividad de esterasa plasmática total [28].
Wang et al.
Se descubrió que HSA hidroliza una variedad de ésteres como sustratos para
los correspondientes ácidos carboxílicos y alcoholes. Los sustratos incluyen acetato
de p-nitrofenilo [22, 29], aspirina [30], ésteres de nicotinato [24], soman [31],
ciclofosfamida [32], acilglucurónido de carprofeno [33], glucurónido de ketoprofeno
[34], pesticidas organofosforados [ 35], o-nitroacetanilida [36] y ésteres de ácidos
grasos de cadena larga y corta [37]. No se ha establecido la especificidad de la
actividad similar a la esterasa de HSA hacia los ésteres, pero parece ser
estereoselectiva para dos sustratos: glucurónido de cetoprofeno y acilglucurónido
de carprofeno [34]. La reacción de hidrólisis mediada por HSA fue estereoselectiva
para el sustrato de glucurónido de (R)-ketoprofeno con una velocidad de reacción
mayor que con (S)-ketoprofeno [33, 34].
Las actividades de tipo esterasa de HSA contra sustratos para p-nitrofenil
éster (Kcat = ~0.3 s-1) [25], p-nitrofenil acetato (Kcat=~0.3 s-1 ) [29], soman
(Kcat=0.015 +/ - 0.003 min-1) [31] son mucho más lentos que una enzima verdadera
como la trombina (Kcat = 35-130 s-1)
[38]. La actividad similar a la esterasa de la HSA no se ve afectada por el tratamiento
con ácido (pH 1,3) o calor (60 °C durante 30 min) [32]. Algunos compuestos
químicos pueden afectar la reacción de hidrólisis por HSA. Se encontró que los
agentes organofosforados inhibían rápidamente la actividad de la HSA hacia el
acetato de p-nitrofenilo con una constante de disociación de 3,6 x 103 M [39]. Para
el sustrato ácido acetilsalicílico (aspirina), la reacción de hidrólisis es inhibida de
manera eficiente por su producto de hidrólisis, el ácido salicílico [40]. Además, las
velocidades de hidrólisis de la aspirina son proporcionales a la concentración de
HSA: cuando la relación molar fármaco/HSA es baja, la actividad enzimática de
HSA aumenta considerablemente.
En asociación con la hidrólisis de ésteres, algunos residuos de HSA serán
modificados covalentemente por el producto de hidrólisis (ácidos carboxílicos),
formando aductos estables. Los aductos de HSA suelen perder la función de
hidrolizar ésteres. Se informa que se modifican diferentes tipos de residuos de HSA,
incluidas lisinas, serinas, treoninas y tirosinas [26]. Por ejemplo, Tyr411 en HSA se
acetila con acetato de p-nitrofenilo [29, 39], y el producto acetilado se acumula
rápidamente (t1/2= 0,56 min) con una desacetilación muy lenta de la acetilalbúmina
(t1/2= 61 h) [29]. En esta reacción en la que la albúmina se trata con un equivalente
de 9 veces de acetato de p-nitrofenil [14C] [29], solo se consumen 5,2 equivalentes
molares del acetato. En la reacción hidrolítica de la aspirina por HSA, se encontró
que los grupos -amino de varios residuos de lisina de la albúmina estaban acetilados.
La HSA acetilada covalente se detectó tanto in vitro como in vivo, y
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Estructura y actividades enzimáticas de la albúmina de suero humano Diseño farmacéutico actual, 2015, vol. 21, nº 14 1833

la lisina acetilada fue estable durante al menos 21 días a pH 7,4, 37°C [41, 42]. ácidos [1]. Los estudios estructurales mostraron que dos ácidos grasos (miristato)
A bajas concentraciones de aspirina (0,3 mM) con HSA, las lisinas acetiladas se se unieron en el sitio II de Sudlow (sitios FA3 y FA4), que eran sitios de unión
localizan principalmente en la superficie de la proteína HSA, incluidas Lys199, estrechos de ácidos grasos [13]. Los grupos carboxilato de ácidos grasos
Lys402, Lys519 y Lys545 [43]. El tratamiento con aspirina de mayor concentración interactúan con Arg410 y Tyr411 en el sitio FA4 [6] y bloquean el acceso de
(20 mM) dio como resultado la acetilación de residuos de lisinas adicionales. Del estos dos residuos clave para llevar a cabo la hidrólisis de es
total de 59 residuos de lisina en HSA, se observó que 26 residuos de lisina ters.
estaban acetilados [43]. No hubo acetilación del residuo Tyr411 en la reacción Es interesante señalar que la hidrólisis de la aspirina está mediada por la
de HSA con aspirina, pero este Tyr411 se considera un residuo clave en la Lys199 y no por la Tyr411, y la Tyr411 no es acetilada por la aspirina [43]. La
reacción de HSA con otro sustrato [44]. razón de esta selectividad de sustrato de la hidrólisis mediada por Tyr411 no se
entiende totalmente, pero tal vez se deba a la desalineación de la molécula de
aspirina en relación con Tyr411, que es desfavorable para la hidrólisis de aspirina
3.2. Mecanismo estructural de actividad similar a la esterasa para HSA
[43].
El Lys199 de HSA se propuso como un residuo relacionado con la hidrólisis
En resumen, la actividad similar a la esterasa de HSA está estrechamente
[45]. Se encontró que este residuo se modificaba en la hidrólisis de algunos
relacionada con los sitios de unión a fármacos de HSA: sitio I y sitio II de Sudlow,
sustratos, incluida la aspirina [43, 46] y HNE (4-hidroxi-trans-2-nonenal) [45]. El
y está mediada principalmente por los residuos en el sitio I de Sudlow (Lys199)
residuo Lys199 también fue uno de los principales sitios de unión en la reacción
y el sitio II (Tyr411).
de acil glucurónidos con HSA [47]. El Lys199 está ubicado en el sitio Sudlow I de
HSA, un importante bolsillo de unión a fármacos de HSA. La pared interior de 4. ACTIVIDAD DE PEROXIDASA QUE IMPLICA Cys34 DE HSA
este bolsillo de unión es muy hidrófoba, mientras que la entrada al bolsillo está
En el cuerpo humano, el plasma sanguíneo está expuesto a un estrés
rodeada de residuos cargados positivamente, incluidos los residuos Lys195 y
oxidativo más severo que los fluidos intracelulares. Se pensó que HSA
Lys199. La alta reactividad de Lys199 puede estar relacionada con su localización
desempeñaba un papel en el mantenimiento del potencial redox reducido en el
específica en la estructura HSA, lo que lleva a un pKa inusualmente bajo de 7,47
plasma debido a la presencia de un residuo de Cys34 libre en HSA [54, 55], que
[48, 49] (el pKa normal de la lisina es 10,76).
es bastante raro entre las proteínas extracelulares. Además, Cys34 puede unirse
a algún ion metálico con alta afinidad, como los iones Au(I), Pt(II), Hg(II), Cd(II)
Se sugirió que este residuo, junto con otros dos residuos (His242 y Arg257), son
y Zn(II) [1, 56-59]. El Cys34 está ubicado en la parte inferior de la grieta
los residuos clave que median la actividad similar a la esterasa [27].
semiabierta en el subdominio IA y tiene acceso limitado al solvente. Asp38, His39
y Tyr84 son tres residuos alrededor de Cys34, y mantienen a Cys34 en estado
En 2007, se propuso la base estructural de la actividad esterasa de HSA reductor y en pKa bajo, y previenen la formación de dimerización de HSA por
basándose en dos estructuras cristalinas de HSA en complejo con aspirina o enlaces disulfuro intermoleculares a través de Cys34 [60].
ácido salicílico [13]. Los cristales de proteína se empaparon con aspirina o ácido
salicílico. Curiosamente, la estructura del complejo HSA:aspirina mostró que la
Este grupo sulfohidrilo libre de Cys34 está muy conservado en todas las
aspirina se hidrolizó en ácido salicílico y Lys199 se modificó con un grupo acetilo.
especies de mamíferos [2]. En una persona sana, aproximadamente el 70-80%
Este estudio sugirió que la hidrólisis de la aspirina ocurrió en dos pasos: la
de Cys34 de HSA está en forma reducida [61]. En el HSA comercialmente
aspirina se une inicialmente en el sitio Suldow I de HSA cerca del residuo Lys199.
disponible, del 20 al 60% de Cys34 permanece como grupos sulfhidrilo libres, y
el resto se modifica con otros compuestos de sulfohidrilo como cisteína,
Con un pKa bajo [48], el grupo amino de Lys199 es capaz de iniciar un ataque
homocisteína o glutatión [62]. En particular, el 40-80% de la actividad antioxidante
nucleofílico sobre el carbono carbonilo del grupo acetoxilo de la aspirina, lo que
total de HSA se debe a la presencia de residuos de Cys34 y Met [63]. Cys34
lleva a la hidrólisis de la aspirina, formando ácido salicílico y ácido acético. El
también funciona como eliminador de radicales libres. Además, Cys34 actúa
ácido acético reacciona además con el Lys199, formando un aducto de HSA con
como un antioxidante fisiológico contra el óxido nítrico (NO) [64, 65]. En
una acetillisina en la posición 199. Es interesante notar que, aunque los
condiciones fisiológicas, el tiol de Cys34 reacciona con la molécula de NO (muy
productos de hidrólisis tenían dos ácidos carboxílicos, el Lys199 fue modificado
probablemente en forma de ión nitrosonio), debido a su bajo pKa y abundancia
por el ácido acético, pero no en absoluto por el ácido salicílico. Este hecho
en el plasma [64]. En la sangre, se pensaba que alrededor del 82 % del NO se
sugiere que la hidrólisis de la aspirina y la formación del aducto suceden al
unía a la Cys34 de HSA en forma de S-nitrosotiol [1].
mismo tiempo, y Lys199 reacciona cuantitativamente con la aspirina y no es un
sitio catalítico para la hidrólisis de la aspirina.
5. REACCIÓN DE GLICACIÓN EN HSA
El Tyr411 es otro residuo clave propuesto como importante para la actividad
Muchas proteínas son modificadas por carbohidratos. Tal reacción se llama
similar a la esterasa de la HSA [26, 50]. En la hidrólisis del p nitrofenil acetato,
glicación. En el sistema circulatorio, la glucosa o sus derivados reaccionan de
este residuo de HSA se acetila [29, 39]. El Tyr411 está ubicado en el sitio II de
forma no enzimática con una amplia variedad de proteínas para formar aductos
HSA Sudlow (subdominio IIIA de HSA), y tiene un pKa bajo, lo que hace que su
estables [66]. Esta reacción es típicamente entre los residuos libres de lisina o
capacidad de ataque nucleofílico al grupo carbonilo de los ésteres [44, 51]. El
arginina de la proteína y la glucosa, lo que conduce a la formación reversible de
residuo Arg410 está cerca de Tyr411 (4.5 Å) como lo muestra la estructura de
una base de Schiff, que puede reorganizarse químicamente en productos más
HSA en ausencia de ácido graso [52, 53], y parece facilitar la hidrólisis del
complejos (productos de Amadori) y eventualmente dar como resultado la
sustrato al formar enlaces de hidrógeno con el oxígeno del carbonilo del éster y
formación de un extremo de glicación avanzada (AGE). ) productos [66, 67]. En
promover el ataque nucleofílico del carbono carbonílico del éster con el oxígeno
personas prediabéticas o con diabetes mellitus, el nivel de glucosa suele ser
fenólico de Tyr411. La desacetilación de la acetil-albúmina procede por catálisis
superior a 7 mmol/litro, lo que puede conducir a la formación de productos AGE.
ácida o básica general y con la participación de la molécula de agua [51] y
Dichos productos AGE pueden causar complicaciones crónicas adicionales,
promovida por las argininas cercanas [26, 44]. El apoyo a este mecanismo es un
como microangiopatía, retinopatía y nefropatía [68-70].
estudio de mutagénesis dirigida al sitio. Para el mutante HSA-Arg410Ala, el tipo
de esterasa es aproximadamente el 12% del de HSA de tipo salvaje. La actividad
hidrolítica de HSA hacia el acetato de p-nitrofenilo se anulaba si Tyr411 mutaba En comparación con la mayoría de las proteínas, la HSA es un objetivo
en alanina o fenilalanina [44]. Este mecanismo está respaldado por otra altamente sensible para la glicación debido a su larga vida media (alrededor de
observación de que la actividad similar a la esterasa involucrada en Arg410 y 18 días) y su alta concentración [1, 71]. En personas sanas, se encontró que la
Tyr411 en HSA está fuertemente inhibida por bajas concentraciones de ácidos albúmina estaba glicosilada en el rango de entre 1% y 10% [72]. En pacientes
grasos de cadena media. con diabetes mellitus, el nivel de glicación de HSA puede aumentar bastante
(20-30%) [73, 74]. En pacientes diabéticos severos con mal control glucémico,
la tasa de albúmina glucosilada puede llegar incluso al 90%.
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1834 Diseño farmacéutico actual, 2015, vol. 21, núm. 14
[75]. El nivel de HSA glicosilada es un biomarcador importante en la clínica y se
utiliza para el control de la diabetes.
5.1. Sitios de glicación de HSA y consecuencias funcionales de la glicación de
HSA Los sitios de glicación de HSA se identificaron en múltiples tipos de residuos,
incluidos los residuos de lisina, arginina y cisteína. La glicación ocurre
comúnmente en los grupos de amina en la superficie de la proteína, comúnmente en
los residuos de lisina [48, 76, 77]. En los primeros estudios, se encontró que cuatro
residuos de lisina (Lys199, Lys281, Lys439 y Lys525) estaban modificados por
glicosilación no enzimática [72, 76]. Posteriormente, se identificaron residuos de lisina
adicionales (Lys12, Lys51, Lys93, Lys159, Lys205, Lys233, Lys276, Lys286, Lys378,
Lys414, Lys439, Lys538, Lys545) y algunos residuos de arginina (Arg98, Arg160,
Arg197, Arg472 y Arg521). ser glicosilado in vitro [48, 78, 79].
Se pensó que Lys525, un residuo expuesto en la superficie, era el sitio principal de la
glicosilación no enzimática en HSA en algunos estudios [72, 76, 80]. Alrededor del
33% de las glicaciones de HSA ocurren en este sitio [76].
Lys195 y Lys199 también son sitios comúnmente glicosilados en HSA. Los péptidos
glicosilados (residuos 181-200 [78], residuos 198-218 [48], residuos 191-205 [48] y
residuos 187-197 [43]) fueron identificados in vitro por diferentes grupos. Para la
albúmina sérica en personas sanas, se glucosiló el péptido 187-197 de HSA y Lys195
o Lys190 fue el sitio de glucación en este péptido [81]. Los determinantes moleculares
para la especificidad del sitio de glicación y el análisis del mecanismo de la reacción
de glicación no enzimática se han estudiado durante años [72, 76, 82-84]. Se
propusieron que los aminoácidos cargados positivamente situados cerca de una lisina
en la estructura primaria o tridimensional fueran los residuos clave para catalizar la
glicación del residuo de lisina [85]. En otro estudio, se propusieron residuos de
glutamato y lisina para catalizar la glicación de las lisinas cercanas, y los glutamatos
catalíticos se ubicaron principalmente en el extremo C-terminal del sitio de glucación,
mientras que los residuos de lisina catalítica se identificaron principalmente en la
región N-terminal del sitio de glicación. sitio de glicación [82].
También se observó una perturbación de la función de HSA por glucosilación:
por ejemplo, la HSA glucosilada de los pacientes muestra una menor capacidad de
unión a ligandos y propiedades antioxidantes más pobres que la HSA in vivo [86].
La glicación no enzimática de HSA también altera las características de unión de
ácidos grasos de HSA in vitro [87].
5.2. Mecanismo estructural de la reacción de apertura del anillo de glucosa en
la glicación temprana en HSA
La glucosa existe en cuatro conformaciones en solución acuosa: dos piranosas
anoméricas (anillos de seis miembros con carbono anomérico en la posición 1), una
forma menor de furanosa (anillo de cinco miembros) y una forma abierta de aldehído
lineal [88]. La forma abierta de la glucosa es un aldehído lineal y es la forma más
reactiva, y es el intermediario esencial para la conversión entre estas formas [89].
Solo menos del 0,25% de la glucosa existe en esta forma en solución. La tasa de
glicación es directamente proporcional al porcentaje de azúcares en forma abierta
[66].
La glicación implica la apertura del anillo de glucosa, que reacciona con los
grupos de amina primaria de la proteína [90]. El mecanismo de la reacción de
apertura del anillo es de gran interés para entender la especificidad de la glicación
de proteínas por la glucosa.
Recientemente, se informaron dos estructuras cristalinas de proteína de HSA
en complejo con glucosa o fructosa [20]. Estas estructuras cristalinas revelan la
presencia de formas lineales de azúcar para ambos monosacáridos. La forma lineal
de la glucosa forma un enlace covalente con Lys195 de HSA, pero este no es el caso
de la fructosa que también se localiza en el sitio I de Sudlow. A través de los estudios
estructurales, el mecanismo molecular de glicación de Lys195 en el sitio I de Sudlow
de HSA es propuesto de la siguiente manera: un residuo vecino, Lys199, se encuentra
en un entorno hidrofóbico, lo que reduce su pKa y lo convierte en un fuerte donante
de protones. Cuando la glucosa entra en el sitio I de Sudlow, se encuentra cerca del
residuo Lys199. Lys199 protona el átomo de oxígeno (O5) de la glucosa, lo que lleva
a la ruptura del enlace C1-O5 de
Wang et al.
la glucosa Tras la apertura del anillo de glucosa, el extremo C1 de la glucosa se
separa de Lys199 y se captura con el residuo Lys195. El NH2 de Lys195 reacciona
con el aldehído C1 de la forma abierta de glucosa en una reacción de adición
nucleófila, formando un enlace covalente entre ellos [20]. Dicho mecanismo fue
verificado por el estudio estructural del complejo HSA-fructosa [20].
6. CONCLUSIÓN
La HSA se considera una “esponja” química, capaz de unirse a muchos tipos
de moléculas, incluidas las moléculas de fármacos, y de facilitar su transporte en la
circulación sanguínea. Se sabe desde hace mucho tiempo que HSA también posee
actividad enzimática. Parece que las actividades enzimáticas de HSA están
subestimadas, en base a la alta concentración de HSA en sangre y la importante
ramificación funcional de que tales actividades pueden afectar la eficacia y el ADME
de los fármacos.
CONFLICTO DE INTERESES
Los autores alegan no tener ningún conflicto de intereses.
AGRADECIMIENTOS
Nuestra investigación relacionada con esta publicación está respaldada por
subvenciones de la Fundación de Ciencias Naturales de China (31161130356 y
21171167), la Academia de Ciencias de China (XDA09030307) y el Programa de
Asociación Internacional CAS/SAFEA para Equipos de Investigación Creativa.
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