Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Xochimilco

Introducción a la guía de validación

del colegio de QFB
Módulo VI. Evaluación de Materias Primas para la Producción de Medicamentos

-Hernández Fuentes Jonathan.

-Hilario García Kevin Michel.
-Sánchez Díaz Ariadna.
-Sique Santos Hazel.
-Vergara Luviano Raúl.
 Introducción
“Guía donde se establecen los requisitos mínimos,
que es necesario satisfacer con la validación y que
no limita de ninguna manera el interés que pudiera
tener el profesionista para profundizar, de manera
particular, en alguno o algunos de los temas
involucrados”.

2
 ¿Qué es la validación de métodos analíticos?
Proceso por el cual queda establecido, mediante
estudios de laboratorio, que la capacidad del
método satisface los requisitos para las aplicaciones
analíticas deseadas.

3
 Objetivo y campo de aplicación
Establecer lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el
proceso de validación de métodos analíticos en aquellos establecimientos
dedicados a:

-Fábricas o laboratorios de materias primas.

-Fábrica o laboratorios de medicamentos.

-Laboratorio de control químico biológico, farmacéutico o de toxicología

-Laboratorio de control auxiliar de la regulación

4
 Método analítico: Descripción metodológica
Justificación necesaria para llevar a cabo el análisis de un
componente particular de la muestra.
6
Definiciones:
Adecuabilidad del Analito: Componente Calibración: Operaciones
sistema: Verificación de específico de una que determinan la Documentación:
que el sistema opere con muestra a medir en relación entre los valores Información que sustenta
base a criterios un análisis. indicados por un una actividad realizada.
preestablecidos. instrumento y los valores
conocidos.

Especificaciones: Especificidad: Exactitud: Concordancia Estabilidad analítica:

Descripción de las Capacidad del entre un valor empleando Propiedad de conservar su
propiedades del material método para obtener el método y el del valor integridad fisicoquímica y
o producto. una respuesta del de referencia. la concentración
analito de interés. del analito.

Límite de cuantificación: Límite de detección: Método analítico no oficial:

Concentración mínima del Concentración Método analítico oficial: Método que no se
analito para que pueda mínima que puede Método que aparece en encuentra en la literatura
ser determinada con ser detectada, más la literatura oficial oficial.
precisión y exactitud. no cuantificada. reconocida.
7

Muestra: Parte del material a evaluar.
Sustancia de referencia: sustancia
con uniformidad reconocida, utilizada
en comprobaciones analíticas.
Validación del método analítico:
Proceso por el cual se demuestra que
la capacidad del método satisface los
requisitos para la aplicación.
Precisión: Grado de Protocolo de validación: descripción
concordancia entre de pruebas específicas para
resultados analíticos demostrar que un proceso da
individuales cuando el resultados que cumplen con criterios
procedimiento se aplica preestablecidos.
repetidamente.
Sustancia de referencia Sustancia de referencia secundaria:
primaria: Sustancia Sustancia cuyas propiedades se
designada por poseer la asignan por la comparación con una
más alta calidad. sustancia de referencia primaria.
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 b1 — Pendiente
b11 — Pendiente del método 1
b0 — Ordenada al origen
b01 — Ordenada al origen del método 1
BP — Farmacopea Británica
BPF — Buenas Prácticas de Fabricación
CLAR — Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución

Símbolos y
COSUFAR — Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia
FCC — Códice Químico de Alimentos
abreviaturas: IC(𝝻) — Intervalo de Confianza para la media poblacional
LNSP — Laboratorio Nacional de Salud Pública
NF — Formulario Nacional
ppm — partes por millón
Sref — Sustancia de referencia
SSA — Secretaría de Salud
USP / USPC — Comité de la Farmacopea de los Estados Unidos
VMA — Validación de Métodos Analíticos
Clasificación de métodos analiticos

Es necesario recordar que un método analítico es la descripción metodológica

necesaria para llevar a cabo el análisis de un componente particular de la muestra.

Todos los métodos analiticos se clasifican en 5 apartados los cuales tienen

criterios específicos, en primer lugar tenemos:

1.- En función de su estado regulatorio en:

A. Métodos farmacopeicos: Entran todos aquellos métodos que

aparecen en cualquier farmacopea (FEUM, USP, SP, Europea, etc.).
B. Métodos no farmacopeicos: Se consideran aquellos métodos no
comprendidos en una farmacopea, para su posterior validación.
2.- En función a su aplicación en: Se basan fundamentalmente en las
siguientes Normas Oficiales Mexicanas:
A. Métodos para productos a granel. ● NOM-059-SSA1. Buenas prácticas
B. Métodos para producto terminado. de fabricación de medicamentos.
C. Métodos para materia prima. ● NOM-073-SSA1. Estabilidad de
D. Métodos indicadores de estabilidad. fármacos y medicamentos, así
como de remedios herbolarios.

3.- En función de la naturaleza de su respuesta

analítica en:

A. Métodos físico-químicos: Cuando la respuesta es

de carácter físico por ejemplo: absorción de luz,
emisión de luz, voltaje, etc. o químico cuando
existe consumo de iones (OH)-, consumo de un
acomplejante, etc.
B. Métodos biológicos: Cuando la respuesta es de
carácter biológico por ejemplo: Crecimiento de
un microorganismo, protección, muerte, etc.
11
4.- En función de su propósito analítico en:
Espectrofotometría.
A. Métodos para cuantificar el analito Potenciometría.
(contenido).
B. Métodos para establecer la presencia del Colorimetría.
analito a un límite. Volumetría.
C. Métodos para identificar el analito.

5.- En función de la naturaleza del sistema de

medición se clasifican en:

A. Métodos donde el instrumento de medición de la

respuesta analítica, permite medir una señal de
ruido. Ejemplos: Cromatógrafo de líquidos,
cromatógrafo de gases, espectrofotómetros,
etc.
B. Métodos donde el instrumento de medición no
permite medir una señal de ruido. Ejemplos:
Buretas, pipetas, potenciómetros, entre otros.
12
Parámetros de desempeño

(1) La falta de especificidad de un

método analítico, puede ser
compensada por otra alternativa
analítica de soporte, como por
ejemplo cromatografía de capa fina.

(2) También es definido como

un estudio de tolerancia.

(3) Un método que es exacto y

lineal, por definición es específico
al placebo analítico o a los otros
componentes de la muestra.

(*) Puede ser requerida

dependiendo de la
naturaleza del método.
01 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Precisión del sistema

Metodología

Se deberán preparar al menos seis soluciones

a la misma concentración del analíto, que
representará la concentración de la solución de
referencia que se usó
Criterios de aceptación

CV menor o igual al 1.5% para métodos

físico-químicos.

CV menor o igual al 3% para métodos

biológicos.

14
Ejemplo

15
 02 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.
Adecuabilidad del Sistema (Métodos cromatográficos).
Metodología

Se debe inyectar por quintuplicado la solución

de adecuabilidad. Reportar la respuesta del
analito, calcular el CV y para cada inyección
informar sobre: el factor de capacidad (K),
resolución (si procede, Rr), factor de coleo (T),
número de platos teóricos (N).

Criterios de aceptación

El CV debe ser menor o igual a 2% para la

respuesta analítica, de la misma forma, los
valores superiores deben ser justificados.
Para cada inyección se recomienda que K>
2, R> 2, y T< 2.
16
Ejemplo

17
03 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.
.

Linealidad del sistema Criterios de aceptación

Metodología

Se deben preparar al menos por triplicado 5

R2: mayor o igual a 0.98
niveles de concentración (intervalo) de la solución
de referencia.
IC (B1), no debe incluir cero.
Para contenido/ potencia/ valoración se sugiere un
mínimo de más o menos 20%.

Para contenido/valoración de impurezas desde un

nivel apropiado hasta un 20% por arriba de la
especificación.

Para métodos indicadores de estabilidad desde un

nivel apropiado hasta un 20%
18
Fórmulas

19
Ejemplo

20
Ejemplo

21
Ejemplo

22
04 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Metodología

Especificidad
Identificación: Sustancias que interfieran en la
determinación (precursores, sustancias relacionadas, Contenido/ valoración de impurezas: agregar
vías degradativas etc. las impurezas al analito. Someter a condiciones
que aumenten su inestabilidad química.
Contenido/ potencia/ valoración: placebo del producto,
sustancias relacionadas, precursores, homólogos, y
una mezcla del producto con cualquiera de ellos.

Límite de impurezas: muestras individuales de la

impureza, el producto de pureza aceptable y la mezcla
de ambos.

23
04 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Especificidad
Metodología

Indicadores de estabilidad:

● Someter el analito, la muestra y el placebo en un horno a 70-120° C o a 20°C por debajo del punto de
fusión del analito de 2 a 4 semanas.

● Exponer al analito, placebo y muestra a la luz UV, fluorescente y/o humedad relativa, por un tiempo
apropiado.

● Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12, y someterlas a 60°-80°C por un
tiempo apropiado.

● Para formas farmacéuticas, líquidas o semisólidas, adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la
oxidación del analito.
24
 05 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Exactitud y repetibilidad del método.

Metodología

Cuando se conocen los componentes: preparar el placebo por

sextuplicado.
Cuando no se conocen los componentes: analizar la muestra
con el método y preparar 6 muestras adicionadas del analito.

25
 05 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.
Exactitud y repetibilidad del método.
El IC (media poblacional) debe incluir el 100% o que el
promedio aritmético del % de recobro se incluya en el
intervalo:

98-102% si el método es cromatográfico.

98-102% si el método es volumétrico.

Criterios de aceptación
97-103% si el método es químico o espectrofotométrico.

95-105% si el método es microbiológico.

El CV del porcentaje de recobro:

No debe ser mayor al 2% si el método es volumétrico.

No mayor a 3% si es químico o espectrofotométrico.

No mayor del 5% si es microbiológico.

Ejemplo

27
Ejemplo

28
06 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Linealidad del método.

Metodología

Cuando se conocen los componentes: preparar el

placebo por triplicado.

Cuando no se conocen los componentes: analizar la

muestra con el método y preparar 3 muestras
adicionadas del analito.

29
06 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.
Linealidad del método. Porcentaje del recobro:

Criterios de aceptación El IC (m) debe incluir el 100% o que el

promedio aritmético del % de recobro se
incluya en el intervalo:
R2 mayor o igual a 0.98.

El IC (B1) debe incluir la unidad.

98 - 102% si el método es cromatográfico,

El IC (B0) debe incluir el cero. 98 - 102% si el método es volumétrico,

El CV xy del porcentaje de recobro no debe ser: 97 - 103% si el método es químico o

espectrofotométrico,
Mayor de 2% si el método es volumétrico.
95 - 105% si el método es microbiológico.
Mayor al 3% si es químico o
espectrofotométrico.

Mayor del 5% si es microbiológico.

30
06 DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE
ACEPTACIÓN.

Linealidad del método.

Criterios de aceptación

El CV del porcentaje de recobro:

No debe ser mayor de 2% si el método es cromafográfico.

No mayor de 2% si el método es volumétrico.

No mayor de 3% si es químico o espectrofotométrico

No mayor del 5% si es microbiológico.

31
Ejemplo

32
Ejemplo

33
Ejemplo

34
 Ejemplo

Para % de recobro

35
Ejemplo

36
 Determinaciones, metodología
y criterios de aceptación

07.- Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista)

● Metodología: ● Criterios de evaluación:

Analizar por triplicado una muestra homogénea del A. CV≤2% para métodos cromatográficos y
producto que tenga un nivel cercano o igual al 100% volumétricos.
(en el caso de contenido/potencia/valoración), en B. CV≤3% para métodos químicos o
dos días diferentes y por dos analistas diferentes. espectrofotométricos.
Utilizar de preferencia la misma sustancia de C. CV≤5% para métodos biológicos.
referencia y los mismos instrumentos y/o equipos.
Reportar el contenido/potencia/valoración del Valores superiores deben ser justificados.
analito de todas las muestras.
Los resultados pueden ser analizados,
Calcular la media aritmética (Ӯ)desviación estándar utilizando otros métodos estadísticos
(S) y coeficiente de variación (CV) del apropiados, que permitan sustentar que la
contenido/potencia/valoración, empleando todos precisión del método es aceptable.
los resultados obtenidos.
37
 Ejemplo
CONTENIDO DE ANALITO EN mg/g
PARA UN MÉTODO BIOLÓGICO ● Calcular Σyi , Σyi2 y determinar n

Σyi=49.85+48.70+...+52.30=621.97
Σyi2=49.852+48.702+...+52.302=32264.7003
n=12

● Calcular Ӯ y S

● Calcular el CV

El CV no excede el 5%
para métodos biológicos.
38
 Determinaciones, metodología
y criterios de aceptación

08.1 Límite de Cuantificación (Señal de ruido)

● Metodología: ● Criterios de evaluación:

Este procedimiento aplica a métodos que utilizan un El LC debe ser menor a la especificación
instrumento para medir la respuesta analítica y que del contenido/valoración de la prueba de
presentan una señal de ruido basal. Un analista debe impurezas.
determinar la señal de muestras blanco y la señal
analítica de muestras a concentraciones conocidas
del analito, inferiores o que incluya la especificación
del contenido/valoración de la prueba de impurezas.
Determinar aquella cantidad del analito cuya señal
sea similar o mayor a la de la muestra blanco en una
proporción de 10 a 1, lo que corresponde a la
cantidad asociada al límite de cuantificación.

39
 Ejemplo
● Tabular los resultados obtenidos

El límite de confianza se estima en 15 ppm, que es la cantidad de

analito, inmediatamente posterior a 10 veces el ruido.
40
 Determinaciones, metodología
y criterios de aceptación

08.2 Límite de cuantificación con base en la curva de calibración basado en la desviación estándar de regresión
● Metodología: ● Criterios de evaluación:

Este procedimiento aplica tanto a métodos A. r2≥O.98.

instrumentales como a no instrumentales. Un B. IC(β1), NO debe incluir el cero.
analista debe preparar mínimo 3 concentraciones C. El LC debe ser menor a la
de la sustancia de interés a valores menores o que especificación del contenido/
incluya la especificación de contenido/valoración valoración de la prueba de
de la prueba de impurezas, ya sea por dilución o impurezas.
por pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas. Calcular el valor de la Cualquier otro criterio de aceptación,
pendiente (b1), el coeficiente de determinación (r2), debe ser justificado
la desviación estándar de regresión (Sy/x) y el
intervalo de confianza para la pendiente (IC(β1)).
41
 Ejemplo
● Tabular los resultados: Cantidad adicionada (x) ● Calcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy y determinar n.
- respuesta analítica (y).

Σx=0.963+0.963+...+1.926=11.556

Σy=0.315+0.314+...+0.629=3.765

Σx2=0.9632+0.9632+...+1.9262=17.72305

Σy2=0.3152+0.3142+...+0.6292=1.88164

Σxy=0.963*0.315+0.963*0.314+...+1.926*0.629=5.77479

● Calcular el CV n=8

42
 Ejemplo
● Calcular b1 y r2: ● Calcular b0, Sy/x y Sb1:

Ordenada al origen.

D.E de
regresión

D.E de
pendiente

El valor de r2 es mayor a 0.98, por

lo tanto es resultado aceptable. 43
 Ejemplo
● Calcular
IC(β1): ● Calcular el límite de cuantificación (LC):

El límite de cuantificación obtenido es

menor al estimado en la señal de ruido
El cero no se cuenta en el intervalo, por lo que es un resultado que cumple
por lo tanto es un intervalo aceptable. con las especificaciones establecidas.

44
 Determinaciones, metodología
y criterios de aceptación

09 Tolerancia
● Metodología: ● Criterios de evaluación:

Se deben establecer aquellos factores ajenos al A. CV≤2% para métodos cromatográficos

método como diferentes equipos, lotes de y volumétricos.
reactivos, columnas, etc., que se puedan B. CV≤3% para métodos químicos y
presentar al reproducir el método en otras espectrofotométricos.
condiciones de uso. Fijar por lo menos 2 C. CV≤5% para métodos biológicos.
condiciones de uso y analizar una misma muestra
por lo menos por triplicado a cada condición.
Calcular la media aritmética (Ӯ), desviación
estándar (S) y coeficiente de variación (CV) del
contenido/ potencia/valoración.

45
 Ejemplo
VALORACIÓN DEL ANALITO
TOLERANCIA DE UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO A EQUIPOS ● Calcular Σyi , Σyi2 y determinar n

Σyi=98.69+98.51+...+98.11=589.06
Σyi2=98.692+98.512+...+98.112=57832.8908
n=6

● Calcular Ӯ y S

● Calcular el CV

El CV no excede el 2% para
métodos cromatográficos.

46
 Sustancias de referencia
Para SR primarias: Información para el resgitro:

Nombre de la sustancia de referencia. Nombre.

Cantidad. Lote.

Lote del producto. Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.)

Fecha de adquisición. Fecha de adquisición.

Clave (para uso interno del laboratorio). Para que se emplea.

Pureza (potencia). Cantidad emplea.

Fecha de caducidad. Analista que la utiliza.

Riesgo de potencial de manejo. Caducidad.

47
 Sustancias de referencia
Datos adicionales:
Para SR secundarias:
Nombre.
Nombre de la SR.
Lote.
Cantidad certificada.
Cálculos para obtener la pureza de
Lote interno. la sustancia analizada.

Clave. Graficas (espectros,

cromatogramas, etc.)
Fecha de certificación.
Certificado de análisis de material.
Potencia en relación con la
SR.

48
Revalidación

49
 Comparación de 2 métodos analíticos
Cuando se tiene interés en comparar 2 métodos analíticos para aplicaciones de contenido/
potencia/ valoración, se pueden emplear los siguientes procedimientos
❖ Estudio de Comparación de ❖ Estudio de correlación
Parámetros de Desempeño ▪ Los resultados de los métodos esta
▪ Ambos métodos están ya validados expresados en unidades diferentes
▪ Se quiere comparar sus parámetros de ▪ Por ejemplo actividad biológica vs
desempeño concentración.
▪ Por ejemplo comparar un método
volumétrico con uno por CLAR
Parámetros a comparar
 Parámetros mínimos a comparar
1) Especificidad: se debe cumplir para cada A)
método analítico; ya sea demostrando su
especificidad o exactitud.
2) Repetibilidad en Exactitud.

Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para

B)
la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.

D) C)
3) Repetibilidad en Linealidad del Método
A)

Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para

la razón de varianzas debe incluir el valor de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación, debe ser
justificado. B)

D)

C)
4) Exactitud.
A)

Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para

la diferencia de las 2 medias poblacionales del
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El análisis estadístico de los resultados, presenta 2
situaciones
a) Los métodos tienen la misma repetibilidad (varianzas
iguales) B)
b) Los métodos tienen diferente repetibilidad (varianzas
diferentes)
F) D)

E) C)
G)

H)
5) Linealidad del Método.
A)

El intervalo de confianza: para la diferencia de las

pendiente de cantidad adicionada cantidad
recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las B)
ordenadas al origen de cantidad adicionada - cantidad
recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las
medias poblacionales del porcentaje de recobro, debe
incluir el valor de cero.
El análisis estadístico de los resultados del porcentaje
de recobro,
a) Los métodos tienen la misma repetibilidad (varianzas
iguales)
b) Los métodos tienen diferente repetibilidad (varianzas
diferentes)
C)

D)

E)
6) Precisión del Método.
Metodología: De los datos de precisión del método, A)
utilizar la información del contenido / potencia / valoración
del analito de cada método. Calcular las varianzas.
Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para
la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1

B)

D)

C)
 Estudio de Correlación
1) Proporcionalidad
Metodología: se debe seleccionar por lo menos 9
muestras del producto, cuyo nivel de analito cumpla
con la especificación. Se debe fijar una etapa de los
métodos analíticos, en los cuales transfiera una
mayor o menor cantidad de la muestra con el objeto
de poder variar el nivel del analito, como puede ser
al pesar la muestra, al transferir un volumen. al
efectuar una dilución, entre otras.
Es conveniente que 3 muestras tengan un nivel bajo.
3 el nivel correspondiente al 100% de la
especificación y 3 un nivel alto de analito.
Las 9 muestras deben ser identificadas y analizadas
por ambos métodos. bajo las mismas condiciones
analíticas de cada método. Determinar el contenido I
valoración I potencia de cada muestra.
A) B)

C)

D)
 E)

F)
2) Precisión.
Metodología: Por lo menos 2 analistas. en por lo A)
menos 2 días, deben analizar por triplicado muestras
independientes (pesadas o alícuotas) de un lote
homogéneo de producto, cuyo nivel de analito esté
incluido dentro de la especificación; tanto con el método
de referencia como con el método a comparar.
Reportar el contenido I potencia I valoración del analito
de todas las muestras en %, para ambos métodos.
Criterios de aceptación: El intervalo de confianza
unilateral inferior, para la razón de varianzas del método
a comparar respecto del método de referencia, no debe
exceder el valor de 1

D)

C) B)
 Documentación
Las actividades de la validación de un método analítico, deben ser sustentadas por los siguientes
documentos.
¡GRACIAS POR SU
ATENCIÓN!