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Bioseguridad en Bioterios de Experimentación

(Parte I)
ARTICULOS CIENTIFICOS 15 August 2013 , por  Juan Manuel Baamonde
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Bioseguridad en Bioterios de Experimentación

Riesgo Biológico y niveles de protección
Parte I - Procedimientos y Prácticas
Autor: Joel Majerowicz MV MSc

Los riesgos biológicos en los bioterios existen porque los animales son reservorios
naturales de varias zoonosis y pueden, por lo tanto, hospedar o ser susceptibles a diversos
agentes infecciosos capaces de causar enfermedades en el ser humano. Son también
productores de alérgenos y que dependiendo de la sensibilidad individual de la persona
pueden desencadenar en el desarrollo de una reacción de hipersensibilidad, causando
problemas alérgicos de baja gravedad hasta enfermedades respiratorias graves..

Las infecciones asociadas a la experimentación con animales es el resultado de numerosos

factores, a saber, el agente infeccioso, los animales que sirven como reservorios,  la
susceptibilidad del técnico envuelto en el uso, la observación, el manejo  o en otras
actividades relacionadas con la experimentación y mantenimiento animal.

Si el propósito del uso de animales es el estudio de una enfermedad que involucre al

agente infeccioso, el agente y su reservorio están presentes. Cuando no fuera el caso, la
presencia del agente depende del estado de la enfermedad o la infección del animal. La
utilización de animales obtenidos de criaderos confiables y que certifiquen el patrón
sanitario de los animales, reduce el potencial de que porten agentes infecciosos. Un
período de cuarentena adecuado para la realización de pruebas de diagnóstico y el
tratamiento adecuado, cuando sea posible, ayuda a prevenir las infecciones en los
animales y los técnicos.

La susceptibilidad del técnico depende de su estado inmunológico. Tres factores

adicionales pueden estar presentes en las enfermedades del trabajo: Si ocurre el escape
del agente del área de experimentación, si el agente puede ser transmitido hacia el técnico
y si el agente invade el lugar de trabajo. Métodos para el control de los riesgos biológicos o
prácticas de bioseguridad son primariamente utilizados. El conocimiento de estos factores,
en particular, el agente en que se manipula, ayuda en la selección de las medidas de
bioseguridad adecuadas.

Forma de escape
El agente infeccioso puede escapar por vía natural o artificial. La eliminación del agente por
la orina, saliva y heces o a través de lesiones en la piel son ejemplos de escape natural. Hay
varios mecanismos de escape artificial, como biópsia, muestras de sangre, tejidos y fluidos
corpóreos, necropsia e instrumental quirúrgico contaminado.

Transmisión
La transmisión del agente del animal o del laboratorio puede ocurrir por varias rutas. La
más común consiste en agujas y jeringas contaminadas y la formación de aerosoles.

Exposición
La inhalación, el contacto con membranas mucosas y la inoculação parenteral son las
formas de exposición más frecuentes. En situaciones que implican la actividad ocupacional,
la exposición puede ser similar a la natural o muy diferente. Por ejemplo la Tularemia que
normalmente es adquirida por el contacto con las membranas mucosas o la inoculación
percutánea de sangre o tejidos de los conejos y en el laboratorio la inhalación de aerosoles
al manipular cultivos infectados, es el principal medio de transmisión.
Los mecanismos más comunes de exposición, cuando se trata de animales de laboratorio
son:

o Inoculación directa por agujas, contaminación de cortes o arañazos preexistentes,

por instrumentos contaminados y agresión animal;

o Inhalación de aerosoles durante el manejo animal y en los procedimientos y

manipulación en la experimentación animal;

o Contacto de las membranas mucosas de los ojos, boca o fosas nasales por gotitas
de materiales, manos y superficies contaminadas;

o La ingestión es poco común, una vez que las buenas prácticas de laboratorio
cohíben la práctica de “pipetar” con la boca.

Las características del animal, el agente infeccioso implicado, la formación y experiencia del
personal, las actividades y procedimientos requeridos en la experimentación, deben ser
considerados en la evaluación y selección de las normas de bioseguridad. Sólo con la
conciencia y el conocimiento de las particularidades vinculadas a la experimentación con
animales y que se puede seleccionar las normas de bioseguridad adecuadas,  con el fin de
minimizar o incluso eliminar los riesgos existentes, pero sólo con el uso continuo y por
todos los involucrado es que se obtienen resultados seguros.

Los laboratorios que manipulan microrganismos patógenos o que tengan la posibilidad de

contenerlos en el material de trabajo son especiales. En esos ambientes de trabajo hay
riesgo de contraerse enfermedades infecciosas, tanto por el personal que en él trabaje,
como para los que están cerca. Con la experiencia adquirida al largo del tiempo y con el
desarrollo de las ciencias y tecnologías, la disminución o aún la eliminación de los riesgos
se hace posible, cuando se hace uso de buenas técnicas de laboratorio y se emplean las
recomendaciones de bioseguridad específicas al nivel del riesgo en potencia.

Contención
Son los métodos y las técnicas, procedimientos y prácticas, equipo de protección personal
y colectiva y las condiciones de las instalaciones del laboratorio, que deben ser empleados
en la manipulación o almacenamiento de agentes infecciosos en el ambiente de
laboratorio. El objetivo de la contención es eliminar o reducir la exposición al agente de
riesgo, el personal, el laboratorio y el ambiente externo.

Contención primaria
Es la protección individual y del laboratorio delante de un agente infeccioso. Esa
contención es eficaz por el empleo de técnicas de laboratorio y el uso de equipamientos de
protección individual (EPI) y o/colectivo (EPC).
Fig 2. Vestimenta (EPI)

Fig 3. Cabina de Seguridad biológica (EPC)

Contención secundaria
Es la protección de las áreas externas al laboratorio de una contaminación del agente
microbiológico experimental en uso. Esa protección es dada por las instalaciones, sistemas
de utilidades brutas y métodos operacionales.

Esos elementos de seguridad individual y colectivo, así como las instalaciones, permiten
eliminar o disminuir los riesgos asociados a un determinado agente de riesgo.

Clases de riesgo
Fig 4. Símbolo de Riesgo Biológico

El organismo, a ser utilizado en el trabajo, será clasificado en función de su potencial

patógeno en cuatro clases de riesgo:

o Clase 1 - Organismo que no cause enfermedad al hombre o animal;

o Clase 2 – Microrganismo asociado con enfermedad humana o animal, pero que
no consiste en un serio riesgo a quién lo manipula, al ambiente de trabajo y al
medio ambiente. Normalmente la forma de contaminación se da por auto
inoculación, ingestión o exposición de las membranas mucosas;

o Clase 3 – Microrganismo patógeno que cause enfermedad grave al hombre o la

especie animal. Puede representar serio riesgo para quien lo manipula y riesgo
a la comunidad. Existen formas de tratamiento y/ó de prevención. En la mayoría
de los casos, de alto potencial de contaminación por aerosoles;

o Clase 4 -  Microrganismo patógeno que ponen en riesgo la vida del hombre o de
la especie animal por inexistencia de tratamiento o prevención. Representando
gran riesgo a quién lo manipula y teniendo gran poder de diseminación de un
individuo a otro. La transmisión se da por aerosoles o por otra forma
desconocida de transmisión.

Recomendaciones de bioseguridad en bioterios de

experimentación
Existen cuatro niveles de bioseguridad, creciente en función del grado de contención y
complejidad del nivel de protección.
El nivel de bioseguridad de un experimento se determina según el microorganismo de
mayor riesgo. La selección del nivel apropiado de bioseguridad para el trabajo con un
agente particular o experimentos con animales, depende de numerosos factores. Algunos
de los más importantes son: la virulencia, la patogenicidad, la estabilidad biológica, el
medio de propagación, la naturaleza y función del laboratorio, los procedimientos y
manipulaciones que implican al agente, la endemicidad del agente y la existencia de
vacunas o medidas terapéuticas efectivas.

Los bioterios de experimentación como los laboratorios de microbiologia, deben ser

proyectados de acuerdo con el grupo de riesgo de los agentes que serán trabajados y
sobre la visión de las recomendaciones de bioseguridad para los niveles 1, 2, 3 y 4. Otros
factores deben ser considerados, en función de la particularidad de cada laboratorio y/ó
bioterio. En relación a los animales, se debe considerar su agresividad y tendencia a
morder, o arañar; los ectoparasitos y endoparasitos que puedan estar presentes; las
zoonosis que son susceptibles y la posibilidad de diseminación de alergenos.

Los procedimientos y prácticas que deben ser considerados en el desarrollo de actividades

que involucran animales vertebrados y en función del nivel de bioseguridad están
descritos a continuación.

Orientaciones recomendadas para bioterios de

experimentación
Procedimentos y prácticas:
Niveles 1, 2, y 3
El acceso es limitado o restricto al criterio de la autoridad. Se recomienda que no sea
permitido el acceso a las salas de animales y áreas donde son manipulados animales y
materiales que tuvieron contactos con los animales o sus desechos a embarazadas, niños,
u otras personas que no tengan actividades a desarrollar en el bioterio o que no estén
debidamente imunizadas;

Las manos deben ser higienizadas, siempre que sea posible, después de quitarse los
guantes y antes de salir del ambiente de manipulación, así como antes de salir del bioterio;

No está permitido en las áreas de animales comer, beber, fumar, guardar comida, usar
cosméticos, manipular lentes de contacto.
Fig 5. Señalización de prohibido comer

Las puertas deben abrir hacia el interior de las áreas de mayor riesgo y deben, siempre
que sea posible, poseer brazo hidraúlico o similar para que no permanezcan abiertas;

La erradicación de insectos, roedores y otros animales indeseables deben ser efectivo y

regular.

Niveles 2 y 3
Todas las recomendaciones para el nivel 1 más:

o Evitar movimientos bruscos, para evitar la formación de aerosoles.

o Las áreas, bancadas e equipamentos devem ser desinfetadas após o uso ou

quando da contaminação com material patogênico;

o Las áreas, los asientos y equipamientos deben ser desinfectados después de su

uso o cuando haya contaminación con material patógeno;
Fig 6. Higienización del ambiente

o Los materiales, residuos y basuras provenientes de las áreas de animales son

descontaminados, pero es preferible que sean esterilizados por autoclave, y
después de ese procedimiento pueden ser considerados basura común. Las
carcasas infectadas son incineradas.

o Las jaulas de animales deben ser descontaminadas por autoclave, antes de que
sean enviadas para el área de lavado, donde se retirarán los desechos y el
material utilizado como cama y posterior lavado;

Nivel 4
Todas las recomendaciones para los niveles 1, 2 y 3, más:

Los equipamientos y asientos de trabajo deben ser desinfectados regularmente e

inmediatamente después del trabajo con patógenos e inmediatamente después de la
contaminación accidental con material patógeno. Equipamientos contaminados deben ser
desinfectados antes de ser retirados de las instalaciones.

Procedimentos y prácticas específicas

Nivel 1
Debe haber un responsable por la liberación del acceso de las personas a las áreas de
animales y con riesgo biológico. Las personas deben ser informadas de los potenciales
riesgos.

Las personas enferma o con baja resistencia inmunológica no deben tener acceso a las
áreas de animales.

Las normas y procedimientos deben ser elaborados de forma que las personas tomen
conocimiento de los riesgos específicos y los procedimientos que sean adoptados.
El material utilizado como “cama” para los animales y que se coloca en las jaulas debe ser
manipulado cuidadosamente para evitar la creación de aerosoles.

Figs 7 e 8 – Cabina de descarte de desechos

Las jaulas pueden ser lavadas sin ninguna recomendación específica, sin embargo el uso
de agua caliente ayuda en la reducción de la flora microbiológica presente en esos
materiales.

Se recomienda que la ropa sea la apropiada y exclusiva de uso en el bioterio.

Debe haber un manual que contemple las cuestiones de bioseguridad y que ese sea de
conocimiento de todos. Todos deben practicar las recomendaciones de ese manual.

Fig 9. Manuales de bioseguridad / Fiocruz

Nivel 2
Todas las recomendaciones para los niveles 1, más:

o En cuanto al uso de agentes patógenos en las salas de animales, deben estar

disponibles equipamientos de protección individual para el acceso a esas salas,
como por ejemplo gafas o visor de protección, máscaras con elemento filtrante,
etc.

o En la puerta de acceso debe haber un aviso con el símbolo de bioseguridad,

donde identifique el agente de riesgo, responsables, teléfonos de contacto y
equipamientos de uso obligatorio;

Fig 10. Aviso de riesgo

o Todas las personas deben ser imunizadas contra la enfermedad específica, en

caso de que exista una vacuna;

o Serología periódica de las personas involucradas debe realizarse en función del

patógeno;
 o Todas las personas deben tener entrenamiento en aspectos de bioseguridad y,
en especial, a los relativos al agente en estudio. Ese entrenamiento debe ser
reforzado anualmente y siempre que haya cambios en los procedimientos o
prácticas;

o Los materiales contaminados deben ser objeto de cuidados especiales,

principalmente los cortopunzantes. Estos deben ser exclusivos a las áreas de
animales y usados solamente cuando no hubiera método alternativo;

o Nunca se debe reencapsular las agujas hipodérmicas por el riesgo de puncionar

los dedos, así como no deben ser manipuladas con las manos después de
desechadas o cuando se caen sobre el asiento o suelo. En este y en el caso de
frascos de vidrio quebrados utilizar pinza para recogerlos. Los cortopunzantes
deben ser desechados en cajas apropiadas, de pared rígida e impermeable.

Fig 11. Recipiente para descarte de cortopunzantes

o Los cultivos celulares y bacterianos, así como los tejidos son acondicionados en
cajas apropiadas, de paredes sólidas e impermeables en los procesos de
recolección, almacenamiento y transporte;

o Los accidentes con material patógeno son comunicados al responsable para que
este pueda procurar los cuidados pertinentes y registros, así como la asistencia
médica correspondiente;
 o Los animales que no estén relacionados al experimento no deben ser admitidos
en el biotério. 

Nivel 3
Todas las recomendaciones para los niveles 1 y 2, más:

o No deben tener acceso o trabajar en ese nivel de riesgo embarazada,

imunodeficientes o imunodeprimidos y niños.

o Todas las personas deben ser informadas sobre los potenciales riesgos y
orientadas de cómo actuar para su protección y la de los demás.

o Las personas que salgan del área donde se encuentran los animales deberán
quitarse la vestimenta dentro del lugar y colocarlas en recipiente específico para
su posterior esterilización. Dicha vestimenta debe estar compuesta de todas las
piezas que sean necesarias a fin de cubrir todo el cuerpo del técnico,
componiéndose de blusa, pantalón, calzado, gorro, máscara, medias y guantes
apropiados a la especie animal en cuestión. Todos harán uso de esa vestimenta
en las áreas de animales. En la salida, es necesario quitarse la vestimenta antes
del baño obligatorio;

o Toda la basura y materiales provenientes de las áreas de animales son

autoclavados, las carcasas de animales son incineradas. El transporte de
animales para el incinerador es hecho en cajas apropiadas de paredes rígidas e
impermeables.

Nivel 4
Todas las recomendaciones para los niveles 1, 2 y 3, más:

o Sólo los técnicos con actividades específicas en los trabajos en marcha pueden
entrar en esa área. Las personas debilitadas imunologicamente no pueden
entrar en esas instalaciones. Niños, embarazadas, imunideficientes o
imunodeprimido no deben tener acceso a las áreas de riesgo.

o La entrada al biotério debe tener seguridad para controlar el acceso de las

personas.

o Debe establecerse un procedimiento operacional para situaciones de

emergencias;

o Las jeringas y las agujas hipodérmicas son usadas solamente para situaciones en
las que no haya métodos alternativos, como obtención de sangre e
inoculaciones.
o Las personas que entren y salgan deberán obligatoriamente hacer un cambio de
vestimenta y bañarse en la salida.

o Los materiales, insumos y otros productos deben ser descontaminados o

esterilizados en el “airlock”, antecámara o autoclave de doble-puerta, antes de
introducirse en el área de animales;

o Debe haber un programa de emergencia para casos de accidentes y

contaminación con patógenos, así como la verificación de ausencia del
personal.

o La asistencia médica debe ser implantada, principalmente, para enfermedades

asociadas al trabajo/investigación. En esas instalaciones debe haber una área
específica para la cuarentena, aislamiento y cuidados médicos para técnicos
sospechosos o con enfermedad asociada a la actividad