Practica1: Tinciones diferenciales

Objetivo:

Conocer las partes que integran un microscopio, así como el correcto manejo y cuidado
de este.

Introducción:

El microscopio es un instrumento que permite observar obietos que son demasiado

pequeños como para ser vistos por la vista del ser humano. El término microscopio es la
conjunción de dos conceptos, por un lado "micro" que es equivalente a "pequeño" y

"scopio" que signi ca "observar", en suma, se re ere a la observación pequeña, o en

menor grado.

El microscopio es un instrumento óptico que aumenta la capacidad de observación a

niveles de acercamiento tal que hasta hace posible el análisis de partículas.

La imagen que se obtiene es realmente una investigación sobre la composición de los

obietos. Al estudio v análisis de los obietos pequeños se lo denomina

"microscopia"

Este instrumento fue inventado por Zacharias Janssen en el año 1590. El

descubrimiento de este instrumento fue importantísimo, principalmente por sus aportes
en la investigación médica. En 1665 apareció la investigación realizada por William
Harvey sobre la circulación sanguínea, al analizar los capilares sanguíneos. En 1667,
Marcello Malpighi, biólogo italiano, fue el primer investigador en estudiar tejidos vivos
gracias a la observación a través del microscopio.

El holandés Antón van Leeuwenhoek, utilizó microscopios para describir por primera vez
diversos organismos, protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. Se lo
puede considerar como el fundador de la ciencia que estudia el comportamiento de las
bacterias, dio origen a la bacteriología.

Material y Reactivo:

• Papel seda.

• Material biológico.

• Preparaciones jas.

• Aceite de inmersión.

• Microscopio.

• Electricidad.

• Agua.
fi
fi
fi
 Procedimiento:

Cuidado del microscopio e identi cación de sus componentes

• Recibir el microscopio, sujetándolo rmemente con ambas manos para trasladarlo,

con una mano tomarlo de su brazo y con la otra por debajo del soporte o pie, nunca
tomarlo de lado o por la platina porque se puede caer y dañarse irremediablemente.
Depositarlo sobre la mesa con suavidad.

• Identi car cada uno de los componentes del microscopio.

• Asegurarse de que se encuentren limpias las piezas ópticas, de no ser así, límpielas
cuidadosamente siguiendo el procedimiento para limpieza del microscopio. Los lentes
por limpiar son: oculares, objetivos y condensador; las cuales no deben quitarse de su
lugar porque podría introducirse polvo al interior del microscopio.

• Observar los datos del microscopio e identi car: • En el ocular, el coe ciente de
aumento.

• En el objetivo: el coe ciente de aumento, la apertura numérica, la longitud mecánica

del tubo y el espesor del portaobjeto a emplear.

• Calcular el total de ampli cación que se puede obtener con los diferentes objetivos. •
Alinear el objetivo de menor aumento con el tubo del microscopio.

• Con el tornillo macrométrico, acercar al máximo la platina al objetivo, observando

lateralmente para que no lleguen a chocar.

Iluminación
• Encender la lámpara.

• Abrir los diafragmas (de campo y de iris).

• Subir el condensador.

• Seleccionar el objetivo (5X o 10X).

• Ajustar la distancia Inter pupilar (distancia entre los ojos). • Enfocar con el
macrométrico y micrométrico.

• Cerrar el diafragma de campo.

• Descender ligeramente el condensador hasta ver nítido el borde del diafragma de

campo.

• De ser necesario, centrar el condensador con la ayuda de sus dos tornillos laterales;
una vez centrado el condensador, abrir el diafragma de campo, e intensi car un poco
más la luz.

Enfoque de la preparación
• Colocar la preparación en la platina.

• Con el tornillo macrométrico llevar la platina lo más cercano posible al objetivo.

• Observar por el ocular, mover lentamente el tornillo macrométrico para separar el

objetivo de la preparación hasta que aparezca la imagen del objeto.

• Para mejorar la nitidez de la imagen utilice el tornillo micrométrico, disminuya la

intensidad de la luz cerrando el diafragma de la lámpara o bajando ligeramente el
voltaje de esta.

• Colocar el objeto de interés en el centro del campo microscópico, moviendo

ligeramente la platina.

fi
fi
fi
fi
fi
fi
fi
fi
• Girar el revólver y alinear el objetivo de 40X con el tubo microscópico.

• Observar por el ocular y veri car que la imagen permanezca enfocada ajustar
solamente si es necesario con el tornillo micrométrico nunca con el macrométrico
porque esto dañará el microscopio.

• Girar el revolver, colocar sobre la preparación un cubreobjetos y una gota de aceite

de inmersión y continuar girando hasta alinear el objetivo de 100X.

• Observar por el ocular y veri car que la imagen permanezca enfocada ajustar si es
necesario con el tornillo micrométrico y para muestras teñidas aumentar la intensidad
de la luz.

• Después de retirarla preparación y Al terminar de hacerlas observaciones, limpiar

tanto el ocular como los objetivos siguiendo el procedimiento para limpieza del
microscopio.

• Dejar el microscopio con el objetivo de 5x alineado con el tubo y lo más cercano

posible a la platina.

• Entregar las preparaciones jas al profesor de prácticas después de quitarles el

aceite.

Evidencia fotográ ca:

fi
fi
fi
fi
 Resultados u observaciones:

Muestra Tinción Aumento total Descripción

2 Gram 100x Observamos bacilos

teñidos de color rojo
(gram negativo)
54 BAAR 100x Observamos bacilos
acido alcohol
resistentes en el 1er
campo (9), 2do campo
(9)+(3)=12, 3er campo
(7), 4to campo 11,= 39
BAAR encontrados
aproximadamente.

Cuestionario:

1. De na lo que es poder de resolución y discuta los factores que lo condicionan.

Se re ere a la capacidad de los lentes diseñados para ampliar la imagen de los
objetivos en la platina del microscopio. La imagen real (e invertida) que forman se
amplía con el sistema óptico del ocular.

2. ¿Por qué es necesario el aceite de inmersión cuando se enfoca con el lente

objetivo de alto poder?
Por su alto índice refractivo, por este motivo es muy utilizado en las observaciones
microscópicas ya que brinda la propiedad de concentrar la luz cuando está pasa a
través del objetivo de 100x del microscopio, aumentado su poder de resolución y con
ello tener una mejor visión de las muestras observadas.

3. Describa la técnica correcta para enfocar un frotis bacteriano.

-Veri car que el frotis este seco y poner una gota de aceite de inmersión al frotis.
-Poner el frotis en la platina jarla en la pinza.

-Con la perilla del desplazamiento de la platina mover el frotis al centro y colocar el

objetivo del microscopio en el objetivo de 100x.

-Observar en los oculares y enfocar el frotis con apoyo del tornillo macrométrico. y
micrométrico.

-Una vez enfocado el frotis procedemos a buscar en microorganismo en cuestión

desplazando el frotis con el desplazador de platina leyendo los campos necesarios.

4. ¿Qué cuidados se deben tener en el uso y manejo del microscopio?

Tratar con delicadeza todo el microscopio en sí, dándole su limpieza después de
ocuparlo y guardándolo, protegiéndolo del polvo. Al usarlo ocuparlo, se tienen que
usar sus partes de manera lenta y precisa, cuidando el funcionamiento de este.

fi
fi
fi
fi
 5. De na el término apertura numérica.
Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar los rayos
refractados por las estructuras nas de las cuales está constituido el objeto que se
observa, también se le conoce como (NA).

6. ¿Por qué los objetivos están ubicados en un revolver?

El revólver es una parte en microscopio óptico queda versatilidad al instrumento y
facilitar su uso. La función del revólver es permitir cambiar fácilmente el objetivo

utilizando para observar la muestra. Normalmente se pueden mostrar tres o cuatro

objetivos en un revólver de modo que esta pieza nos permitirá observar la muestra con
tres o cuatro aumentos distintos.

7. ¿Qué es el índice de refracción?

El índice de refracción se de ne como el cociente de la velocidad de luz cuando pasa
a través de dos medios. Es un número adimensional que depende de la temperatura y
de la longitud de onda de la luz. Resumiendo, el índice de refracción de ne la rapidez
con la que un haz de luz viaja a través de los medios.

8. ¿Qué es el índice de difracción?

Es la ocurrencia de la desviación de las ondas de luz a partir de bordes o esquinas,
este fenómeno produce que la luz transmitida produzca áreas donde exista
interferencia destructiva o interferencia constructiva según sea el caso.

Bibliografía:

https://www.uaeh.edu.mx/scige/boletin/prepa3/n1/m9.html

fi
fi
fi
fi
 Práctica 2: Preparación de medios de
cultivo
Objetivo:

Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de

medios de cultivo deshidratados. Indicar el método de esterilización apropiado.

Introducción:

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones

adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por
lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso asegura la
exactitud, con abilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo

que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para
preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente
solidi cante como el agar, la gelatina o la sílicagel.

Los medios de cultivo se pueden clasi car de acuerdo a la naturaleza de sus

constituyentes en:

• Medios naturales o complejos

• Medios de nidos o sintéticos

•
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasi can en:

• Medios de enriquecimiento

• Medios selectivos

• Medios diferenciales

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se pre ere el uso de
los medios de cultivo deshidratados porque, además de simpli car el trabajo, con ellos
se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.

Material y Reactivo:

• Probeta

• Matraz Erlenmeyer

• Guantes rudos

• Soporte universal

• Abatelenguas

fi
fi
fi
fi
fi
fi
fi
 • Medio de cultivo (AGAR MACCONKEY)

• Cajas de Petri

• Mechero bunsen

• Agua destilada

• Toallitas desinfectantes

• Balanza

• Papel seda

Procedimiento:

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo

asignado.

2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada
uno de los ingredientes.

3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es

necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.

4. Ajustar el pH nal de cada lote de medio preparado, preferiblemente a temperatura

ambiente.

5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el

profesor.

6. Identi car el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre Almacenar por
un periodo máximo de 24 horas bajo refrigeración.

Evidencia fotográ ca:

fi
fi
fi
Resultados u observaciones:

La practica se realizó con éxito y no hubo ningún inconveniente

Bibliografía:

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60707267ecda2.pdf

Práctica 3. Cultivo y aislamiento de

bacterias
Objetivo:

Introducción:

El aislamiento bacteriano es la separación de un determinado microorganismo del

resto de microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por

estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y

se reparte sobre la super cie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan

separadas e inmovilizadas las células bacterianas. Tras la incubación en condiciones

adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas

divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas características determinadas

fi
 Se determina la importancia del aislamiento de microorganismos en diferentes

ambientes como agua, tierra y aire con el principal n de pasar de tener una

población de microorganismos que se sabe habitan en dichos medios, pero son

imposibles de observar e identi car, a tener un cultivo que si lo permita.

en cuanto a su forma, borde, elevación, tamaño, consistencia, etc.

La microbiología es el estudio de los microorganismos y sus actividades, su

forma, estructura, reproducción, siología, metabolismo e identi cación, cómo

están distribuidos en la naturaleza, sus relaciones con otros seres, los efectos

bené cos o perjudiciales que ejercen sobre los humanos y las alteraciones físicas y

químicas que provocan en su medio.

Material y Reactivo:

-Muestra ( Heces fecales) -Mechero bunsen

-Medio de cultivo AGAR MACCONKEY ( cajas de Petri )

-Asa bacteriológica

-Mesa de trabajo

Procedimiento:

1. Lo primero que vimos en esta práctica fueron las técnicas de estría que usaríamos
en cada cuadrante en el medio de cultivo (en este caso eran 4 cuadrantes ).

2. Lo primero por hacer es prender el mechero bunsen, donde pusimos a calentar el

asa bacteriológica, con el n de esterilizarla para poder empezar hacer el estriado en el
medio de cultivo el cual es el ( AGAR MACCONKEY ) en las cajas de Petri.

3. Una vez esterilizada el asa bacteriológica, la

enfriamos en un costado del medio de cultivo,

después procedimos a tocar un poquito de la

muestra, posteriormente hicimos una línea
recta en el centro del medio cultivo, donde
empezaríamos la técnica de estriado.

4. Después de haber trazado una línea recta

en el centro del medio, volveremos a esterilizar
el asa bacteriológica, de manera que con

el poquito de muestra que trazamos en el

centro, de ahí empezaremos hacer los
estriados.

5. Desde la línea recta trazada comenzaremos

hacer el estriado en el primer cuadrante y así
sucesivamente con el resto, hasta llegar al
cuadrante cola de ratón (siendo un total de 4
cuadrantes ).

6 Una vez acabado los 4 estriados,

volveremos a estilizar el asa bacteriológica.

fi
fi
fi
fi
fi
fi
Evidencia Fotográ ca:

Resultados u Observaciones:

Bibliografía:

fi