FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y

BIOLÓGICAS

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y

ZOOTECNIA.
TÍTULO: “Detección de Salmonella typhimurium en animales de compañía
del distrito de Ventanilla.”

Autores:

Rodrigo Bustamante

Karina Díaz

Miguel Escala

Diana Morales

Docentes:

Dante Meza

Hellen Dellepiane

Curso:Microbiología

LIMA - PERÚ

2020- II

Índice del protocolo

1. Introducción
2. Planteamiento del problema
3. Objetivos
3.1. Objetivo general
3.2. Objetivos específicos
4. Antecedentes
5. Materiales Y Métodos
5.1.Toma de muestra
5.2. Cultivo y métodos de siembra
5.3. Identificación bacteriana
5.4. Antibiograma
6. Conclusiones
7. Referencias bibliográficas

1. Introducción

Las afecciones más frecuentes en el tracto intestinal son causadas por

microorganismos bacterianos en alimentos contaminados habitualmente por
heces. La salud del tracto digestivo va a depender de varios factores como la
 flora intestinal, mecanismos inespecíficos que limitan el número de bacterias y
el sistema inmunitario gastrointestinal. Cuando alguno de estos factores falla,
ya sea por enfermedad o por la aplicación de agentes antimicrobianos, ocasiona
un mal funcionamiento en el intestino. Los signos clínicos son fiebre, vómitos,
dolor abdominal y diarreas que pueden ser acuosas y de olor fétido. Finalmente,
la deshidratación, el shock y la muerte pueden sobrevenir.

Entre los agentes que se han identificado como causales de diarrea,

encontramos bacterias, virus y parásitos. En este trabajo, nos enfocaremos en
bacterias que pueden desencadenar infecciones. Entre los agentes bacterianos
que causan gastroenteritis tenemos a los bacilos Gram negativos y Gram
positivas.

Este protocolo está enfocado en la afección de tipo bacteriana causada por la

Salmonella spp. en animales de compañía, siendo una bacteria de tipo gram
negativa. Esta, atraviesa el epitelio invadiendo los tejidos y de tal manera
causando inflamación y diarreas frecuentes. Centrándonos específicamente en
la especie S.Typhimurium, comúnmente se encuentra alojada en carnes mal
conservadas por lo que se convierte en una enfermedad de tipo mortal parecida
al parvovirus para los cachorros.

2. Planteamiento del problema

En el distrito de Ventanilla, se encontró una importante cantidad de familias

que poseen caninos y felinos como mascota principal. Rendón, Quintana, Door,
Vicuña, León y Falcón (2018) concluyeron que : “el 62 y 40% de viviendas del
distrito de Ventanilla tenía canes y gatos como mascotas, con un promedio por
vivienda de 1.8 para ambas especies”(p.223).

Uno de los problemas más comunes por los que estos animales suelen llegar a
la clínica veterinaria es por los casos de Salmonelosis, presentando como
principal signo clìnico las diarreas que pueden ser acuosas y con olor fétido,
esto afecta a la salud del animal como la de la comunidad del dueño y lo
convierte en un problema de salud pública.

3. Objetivos

3.1. Objetivo general

 ● Determinar la prevalencia de diarreas por Salmonella typhimurium en
animales de compañía en el distrito de Ventanilla.

3.2. Objetivos específicos

● Determinar la causa de diarreas por Salmonella typhimurium en

animales de compañía en el distrito de Ventanilla.
● Determinar la sensibilidad de Salmonella typhimurium frente a
diferentes antimicrobianos.

4. Antecedentes

I. Estudio de detección de Salmonella en muestras de heces de gatos

domésticos realizado por Christian Rodrigo y Andrés Burboa Herrera en
el 2018.

Se realizó un hisopado rectal a 342 gatos domésticos aparentemente

sanos, excluyendo a aquellos que estaban en algún tratamiento
antibiótico. Algunos, fueron sedados para obtener la muestras y otros
fueron sujetados por los mismos dueños. La muestra fue transportada en
el medio Cary Blair y posteriormente colocadas en el medio de
enriquecimiento agua Peptonada Fosfatada, incubados durante 24 horas
a 37°C. El crecimiento bacteriano pudo observarse a causa de la turbidez
que se generó dentro del tubo de ensayo. Luego se realizó la siembra en
agar modificado semisólido Rappaport Vassiliadis (MSRV) incubado
por 24 a 48 horas a 41,5°C. Debido al crecimiento sospechoso, se
cultivó esa muestra nuevamente en agar Xylose lysine deoxycholate
(XLD) y se incubó por 24 horas a 37°C. Sin embargo, de los 342 gatos
muestreados, ninguno resultó positivo a los cultivos lo que quiere decir
que hubo un 0% de incidencia en Salmonella spp.

II. Estudio de Prevalencia de Salmonella spp. en perros del centro de

bienestar animal “La Perla”, en Medellín, Colombia realizado por Lia
Paola Fonnegra Peña, Lina Maria Londoño Gomez y Carlos Hernandez
en el 2019.

Se escogieron 44 perros de 376 que se encontraban en el centro de

bienestar animal “La Perla”. Los animales seleccionados se encontraban
en buen estado de salud y se excluyeron a aquellos que estaban en algún
tratamiento con antibióticos, animales agresivos, hembras gestantes y
menores de 6 meses. A cada perro se le tomó 3 muestras de materia
fecal en forma digital en 3 días consecutivos. Las muestras fueron
llevadas al laboratorio para ser analizadas mediante pruebas de PCR y
 coprocultivo. Para la técnica de PCR, se extrajo ADN de las muestras de
materia fecal y se utilizó el protocolo de buffer de lisis modificado para
el estudio del gen HILA. Por otro lado, para el coprocultivo, se depositó
la materia fecal en el medio de enriquecimiento caldo de selenito
incubado a 35°C durante 28 horas, Luego se realizó la siembra en los
agares Macconkey y SS incubados de igual manera a 35°C durante 18
horas. De las 44 muestras analizadas en ninguna se detectó Salmonella
spp., llegando a la conclusión que las medidas de bioseguridad tomadas
en el centro fueron efectivas para evitar la proliferación de
microorganismos patógenos.

III. Estudio de Prevalencia de Salmonella spp. en heces caninas y de paloma

doméstica en el Parque “La Carolina” realizado por Sandra Pamela
Cangui Panchi Karol y Mishel Delgado Juca en el 2019.

Se recolectó 100 muestras de 1gr. de materia fecal fresca de perros en el

parque “La Carolina” y fueron colocados en frascos estériles. Luego las
muestras fueron colocadas en medio de enriquecimiento agua peptonada
tamponada, incubados a 37°C durante 24 horas. Después, se tomó 1 ml
del caldo y se trasladó a un medio de enriquecimiento selectivo llamado
Rappaport Vassiliadis y se incubó a 41,5°C durante 24 horas.
Posteriormente, se realizó la siembra en los agares Xilosa Lisina
Desoxicolato (XLD) y Tripticasa Soya Agar (TSA) respectivamente a
37°C durante 24 - 48 horas. Para la identificación bacteriana se
utilizaron diversas pruebas bioquímicas como LIA, TSI, Citrato de
Simmons, MIO, Urea y Tripticasa Soya Agar (TSA). Finalmente, se
obtuvo una prevalencia del 3% para Salmonella spp.

5. Materiales y métodos

5.1. Toma de muestra

➢ Selección.- es importante hacer uso de los sentidos, lo primero será

observar el comportamiento del paciente y realizar un estudio del
comportamiento. Posterior a ello, seleccionar la muestra fecal. Es
imprescindible contar con los materiales necesarios y un vestuario e
instrumentos adecuados siguiendo todos los protocolos de bioseguridad.
➢ Colección.- Hará referencia a la muestra que deseemos llevar a cabo
para su estudio,en este caso; heces,a través de un hisopado rectal.
 ➢ Envío.- Será importante contar con un envase de boca ancha para
facilitar la entrada y salida de nuestra muestra. El envío se realizará en
un cooler acondicionado a una temperatura de 15°C - 27°C.

5.2. Cultivo y método de siembra

A.Etapa de Enriquecimiento selectivo

Esta etapa estimula y favorece el crecimiento de Salmonella spp.

inhibiendo el crecimiento de la flora acompañante; los medios de cultivo
utilizados serán: Caldo Tetrationato-Bilis-Verde Brillante y caldo
Selenito Cistina.

En el medio selectivo caldo tetrationato-Bilis-Verde Brillante: el

tetrationato inhibe el crecimiento de coliformes y otras bacterias
intestinales, la bilis estimula el crecimiento de Salmonella e inhibe la
flora competitiva, el verde brillante impide el desarrollo de la flora gram
positiva y el carbonato cálcico actúa como tampón para mantener el pH.
La temperatura de incubación del Tetrationato varía dependiendo de la
carga microbiana, si es muy alta se recomienda utilizar una temperatura
de 43ºC y si la carga microbiana es muy baja, emplear una temperatura
de 35ºC durante 12 a 24 horas.

En el caldo SC, la selenita inhibe el crecimiento de gran parte de la flora

intestinal competitiva (E. coli, Enterococos), sin afectar a Salmonella,
Shiguella, Pseudomonas y Proteus, mientras que la Cistina actúa
favoreciendo el crecimiento de Salmonella. Se coloca a una temperatura
de 35°C - 37°C durante 16 a 24 horas.

B. Etapa de aislamiento en medios selectivos

Esta etapa permite la diferenciación de colonias de Salmonella de otras

bacterias. Para aislar y diferenciar las colonias de Salmonella, los medios
más empleados son: agar Entérico Hektoen (EH), y agar Bismuto sulfito
(BS). El método de siembra utilizado será estriado ya que se desea
obtener colonias aisladas y que puedan diferenciarse una de otras para su
posterior identificación.

En Agar entérico Hektoen (HE): se cultiva a una temperatura de 35°C -

37°C durante 48 horas para una mejor diferenciación entre salmonella y
shigella. Se observan colonias azules o verde azuladas con centro negro.
Muchos cultivos de Salmonella sp pueden producir colonias con un
centro negro grande brillante o colonias casi completamente negras.
 En Agar Bismuto Sulfito (BS): se cultiva a una temperatura de 35°C
durante 48 horas. Se observan colonias marrones, gris o negras, a veces
con brillo metálico. El medio es usualmente marrón al principio se torna
negro conforme se incrementa el tiempo de incubación, produciéndose el
llamado efecto “halo”.

5.3. Identificación bacteriana

Las enterobacterias (Salmonella) fermentan glucosa, maltosa y manitol. En el

caso de cuando se usa el Agar Salmonella Shiguella(SS) se puede observar
colonias incoloras con el centro negro. Luego se procedió a utilizar la técnica
de coloración, la tinción GRAM. Posteriormente utilizaremos pruebas
bioquímicas para bacterias gram negativas ; estas son Agar TSI, Agar LIA,
Agar Citrato de Simmons,Caldo Urea.

Resultados

Tinciones

Tinción diferencial, Gram; primero se coloca cristal violeta, lugol, alcohol-

acetona y por último safranina. Salmonella typhimurium es gram negativa, por
lo tanto las bacterias deben observarse de un tono rosado y de forma alargada.

Pruebas Bioquímicas para Salmonella typhimurium

Se observó fermentación de glucosa, producción de gas y hubo presencia de

H2S. Urea negativo, mantuvo su color normal. Citrato positivo de verde se
tornó azul. Indol negativo, no se formó el anillo, motilidad positiva. Hubo
descarboxilación de Lisina.

Pruebas serológicas - Antígeno O y Antígeno H

● Positivo.- aglutinación.
● Negativo.- bacterias y anticuerpos que no se unen.

5.4. Antibiograma

Para poder instaurar un tratamiento antibiótico, es necesario hacer el

diagnóstico, aislar e identificar la cepa y realizar un antibiograma para
determinar si la bacteria es sensible o resistente a algún grupo de antibióticos
 La prueba de sensibilidad antimicrobiana se analizará mediante la técnica
cualitativa de Kirby-Bauer o difusión en disco, para determinar patrones de
sensibilidad. En base a los resultados obtenidos se identificó que la bacteria es
sensible a los antibióticos como Ampicilina, amoxicilina, ciprofloxacina,
enrofloxacina, norfloxacina, cloranfenicol, gentamicina y resistente a
doxicilina, tetraciclina.

6. Conclusiones

Debido al importante porcentaje de tenencia de mascotas, entre perros y gatos, por

parte de familias en el distrito de Ventanilla, se puede asumir que la carga bacteriana
en esa población también será elevada. Perros y gatos por lo general realizan sus
necesidades en parques, pistas y veredas, y teniendo en cuenta su comportamiento
olfativo, existe una mayor probabilidad de que muchos de estos ingieran casualmente
bacterias como Salmonella spp. Por esta razón, es importante la prevención y control
para evitar la propagación de este tipo de bacterias y aún más importante preservar la
salud de las mascotas. Para lograr este objetivo se requiere principalmente el apoyo de
los dueños, ya que estos deben tener la responsabilidad de recoger los desechos de sus
animales, especialmente de perros, de esta manera la carga bacteriana en el ambiente
va a disminuir y por ende una menor cantidad de animales enfermos. También es
esencial informar a la población acerca de la importancia de una buena coccion de
alimentos carnicos y de la higiene diaria, no solo por sus mascotas sino por ellos
mismos, ya que la salmonella al ser una enfermedad zoonótica puede afectarles en la
igual o mayor intensidad.

Referencias bibliográficas

● Crespo, R (2015) Enfermedad inflamatoria crónica intestinal canina: hallazgos

endoscópicos, bioquímicos y anatomopatológicos del tracto
gastrointestinal.Rev Med Vet 47, 355-364. Recuperado de
https://scielo.conicyt.cl/pdf/amv/v47n3/art13.pdf

● Fierro, M (2011).Resistencia Antibiótica en Salmonella enterica serovar

Typhimurium aisladas de granjas porcícolas en el departamento del
Tolima.Orinoquia 15(1):71-78, Recuperado de
http://www.scielo.org.co/pdf/rori/v15n1/v15n1a08.pdf

● Gómez, I (2005). Sensibilidad y resistencia de las salmonellas a los

antimicrobianos en la ciudad de Cochabamba. Gaceta Médica Boliviana, 28(1),
 3-7. Recuperado de http://www.scielo.org.bo/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1012-29662005000100002&lng=es&tlng=es.

● Junod T, et al(2013). Estudio de susceptibilidad antimicrobiana de Salmonella

enterica en muestras de origen animal y alimentario. Rev Med Chile 2013; 141:
298-304. Recuperado de https://scielo.conicyt.cl/pdf/rmc/v141n3/art03.pdf

● Rivera L, et al (2012). Resistencia de la Salmonela a los antimicrobianos

convencionales para su tratamiento. Rev CES Med Vet Zootec; Vol 7(1):115-
127. Recuperado de http://www.scielo.org.co/pdf/cmvz/v7n1/v7n1a10.pdf

● Pérez, Carlos, & Rivera, Sergio, & Pirela de Vera, Angela, & Rincón, Hirwin,
& Mavárez, Yaneth, & Román, Rafael (2004). Aislamiento de Salmonella en
canales de aves y evaluación de la efectividad de diferentes medios de
enriquecimiento y selectivos. Revista Científica, XIV(2),0. Recuperado de
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=959/95914212

● Gonzalez Pedraza, Jose, & Pereira Sanandres, Nicole, & Soto Varela, Zamira,
& Hernández Aguirre, Enio, & Villarreal Camacho, José (2014). Aislamiento
microbiológico de Salmonella spp. y herramientas moleculares para su
detección. Salud Uninorte, 30(1),73-94. Recuperado de
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=817/81730850009

● Burboa,C (2018). Detección de Salmonella en muestras de heces de gatos

domésticos(Pregrado). Universidad de Chile, Santiago de Chile,Chile.
Recuperado de
http://repositorio.uchile.cl/bitstream/handle/2250/159257/Deteccion-de-
Salmonella-en-muestras-de-heces-de-gatos-domesticos.pdf?
sequence=1&isAllowed=

● Fonnegra Peña, Lia Paola, & Londoño Gomez, Lina Maria, & Hernandez,
Carlos (2009). PREVALENCIA DE Salmonella spp. EN PERROS DEL
CENTRO DE BIENESTAR ANIMAL “LA PERLA”, EN MEDELLÍN,
COLOMBIA. Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 4(2),66-71.
Recuperado de https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=3214/321428102007

● Cangui, S & Delgado, K (2019) .Prevalencia de Salmonella spp. en heces

caninas y de paloma doméstica en el Parque “La Carolina”(tesis de pregrado).
Universidad Central del Ecuador, Quito,Ecuador. Recuperado de
 http://www.dspace.uce.edu.ec/bitstream/25000/20367/1/T-UCE-0008-CQU-
205.pdf

● Gonzalez Pedraza, J., Pereira Sanandres, N., Soto Varela, Z., Hernández
Aguirre, E., & Villarreal Camacho, J. (2014). Microbiological Isolation of
Salmonella spp. And Molecular tools for detection. Salud Uninorte, 30(1), 73-
94. https://doi.org/10.14482/sun.30.1.4316

● Rendón H., D., Quintana M., E., Door M., I., Vicuña A., F., León C., D., &
Falcón P., N. (2018). Parámetros demográficos en la población de canes y
gatos domésticos en asentamientos humanos del distrito de Ventanilla, Callao-
Perú. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú, 29(1), 217-225.
https://doi.org/10.15381/rivep.v29i1.14191