INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
“Efecto de la concentración de Enzima y del pH sobre la velocidad de reacción” Colin Oseguera Jorge Rafael y Mata Cruz Pablo
Israel. Grupo: 3FM1. Sección: 1
INTRODUCCIÓN:
RESULTADOS:
Las enzimas, son proteínas que catalizan a diversas
reacciones biológicas, acelerando el tiempo de estas; esto lo Tubo (No.) Absorbencia AR Vo [E]
(µmoles) (UI) (µg/2 mL)
hacen posible, ya que las enzimas proporcionan una vía/ruta
1 0.188 2.069 0.2069 0.5
con menor energía libre de activación para la transformación
de sustrato a producto.
2 0.480 6.187 0.6187 1
En el caso de la concentración de la Enzima (factor que afecta
a la velocidad de reacción enzimática), estas actúan de
manera independiente en solución (de modo que una enzima 3 0.783 10.461 1.0461 1.5
se une con un sustrato y otra con otro en el medio), de modo
que la velocidad de reacción es directamente proporcional a
4 0.787 10.517 1.0517 2
la concentración de enzima (a mayor presencia de enzima,
mayor será la velocidad de reacción, y, por ende, mayor
formación de productos). 5 0.993 13.423 1.3423 2.5
El pH es otro de los factores que más influyen sobre la
actividad de la enzima, esto debido a que las enzimas Tabla No. 1: Resultados obtenidos en los tubos problema,
(proteínas) presentan varios grupos ionizables (básicos y correspondientes a la práctica de concentración de Enzima.
ácidos), de tal manera que la actividad de la enzima y la
velocidad de reacción se verán afectadas; el pH “óptimo” es EJEMPLO DE CÁLCULOS:
el valor de pH en el cual una enzima presenta su mayor
actividad sobre el sustrato y que conforme al aumentar (o -. Azúcares Reductores:
disminuir) el pH del óptimo, la actividad de esta se verá
Para obtener los valores de los Azúcares reductores de cada tubo
disminuida, además de que cuando se encuentre a valores de problema, se hizo uso de la ecuación de la gráfica (ver anexo) de
pH extremos, estas tienden a desnaturalizarse. curva tipo que corresponde a una línea recta, cuya ecuación es:
OBJETIVOS:
“𝑦 = 0.0709𝑥 + 0.0413”
• Demostrar de manera experimental, que la velocidad
de reacción enzimática es directamente proporcional
a la concentración de enzima.
• Analizar la importancia del pH del medio sobre la
velocidad de reacción enzimática.
• Determinar gráficamente el pH “óptimo” de la
Invertasa.
De dicha ecuación de línea recta, se despejó la variable “x”, la cual
corresponde a la concentración de azúcares reductores “[AR]” y
dónde la variable “y” corresponde a los valores de absorbancia de
cada tubo, quedando los valores de azúcar reductor para el tubo 1
de la siguiente manera:
𝟎.𝟏𝟖𝟖−𝟎.𝟎𝟒𝟏𝟑
Tubo No. 1: 𝒙 = = 𝟐. 𝟎𝟔𝟗 µ𝒎𝒐𝒍𝒆𝒔
𝟎.𝟎𝟕𝟎𝟗
Dicho procedimiento se hizo con cada 1 de los 5 tubos, resumiendo
los valores de “azúcares reductores en la tabla de resultados.
-. Velocidad o Actividad Enzimática:
Para poder calcular la velocidad/actividad en cada tubo, se usó la
siguiente fórmula:
[𝐴𝑅]
𝑉𝑜 =
2 ∗ 5 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑜𝑠
En dicha fórmula la velocidad/actividad, se define como el cociente
de la concentración de “Azúcares Reductores” entre la formación de
productos (corresponde al número “2”) multiplicado por el tiempo
que se estuvieron los tubos en baño maría (corresponde al número
5); en el caso del tubo 1, dicha velocidad quedó de la siguiente
manera:
𝟐.𝟎𝟔𝟗
Tubo No. 1: 𝑽𝒐 =
𝟐∗𝟓
= 𝟎. 𝟐𝟎𝟔𝟗 𝑼𝑰
Los demás valores de la velocidad de cada tubo se calcularon de la
misma manera y se encuentran resumidos en la tabla de resultados
(Tabla No. 1).
-. Concentración de Enzima:
Para los cálculos de la concentración de Enzima (Invertasa)
presentes en cada tubo, se hizo uso de la siguiente relación:
[𝐸] = 10µ𝑔 ↔ 2 𝑚𝐿
[𝐸] = 𝑥µ𝑔 ↔ 𝑦 𝑚𝐿
En la parte superior de dicha relación, nos dice que hay 10µg
presentes en los 2 mL de volumen total del tubo y en la parte de
abajo, corresponde a “x” µg de enzima presentes en “y” mL
adicionados al tubo, en los cálculos de concentración de enzima
presentes en el tubo 1, quedó de la siguiente manera:
Los demás valores de concentración de enzima presente en cada
tubo quedan resumidos en la tabla de resultados (Tabla No .1).
Con los datos obtenidos tanto de la concentración de Enzima
presente en cada uno de los tubos problema y de la Velocidad Inicial
(actividad), se construyó un gráfico en donde el eje de las
ordenadas corresponde a la velocidad inicial (actividad) presentes
en cada tubo y en el eje de las abscisas se colocó los valores de la
concentración de enzima presentes en cada tubo y posteriormente
se hizo un análisis del gráfico (dicho gráfico se encuentra en la parte
de “anexo”).
DISCUSIONES:
En el gráfico que se construyó (ver anexo, “Grafico No. 1”),
se observa que la concentración de enzima sigue
mayoritariamente un patrón directamente proporcional (o
lineal ascendente), esto se cumple, dado a que mientras
exista sustrato en la solución y exista una concentración
mayor de enzima en el medio, estas formarán más complejos
“ES” (Enzima-Sustrato) que en el caso de que solo haya una
enzima en el medio, lo cual desencadenan a que durante un
lapso de tiempo (5 minutos en este caso) exista la formación
de una mayor cantidad de productos, como se observó en el
tubo problema “6” (pues en este se adicionó la mayor
concentración de enzima que en los demás tubos), la cual al
momento de desarrollar color agregando el “3,5-DNS”, se
observó un color muy anaranjado casi a rojizo, que en cambio
al tubo problema “1”, se observó un anaranjado muy tenue,
pues en este se adicionó la menor concentración de enzima
y esto implica a que no se formaron muchos complejos “ES”
en el tubo y por ende, menor formación de productos.
Conforme a los puntos de la gráfica que más se separan de
la línea recta, se puede deber a que no se adicionó
correctamente las cantidades tanto de sustrato, como de
concentración de enzima o que no se haya adicionado la
cantidad exacta de “3,5-DNS” en el momento exacto, dicho
DNS tenía la función de detener la reacción enzimática.

[𝐸] = 10µ𝑔 ↔ 2 𝑚𝐿

(10 µ𝑔/𝑚𝐿)(0.1 𝑚𝐿)

[𝐸] = ∴ [𝐸] = 0.5 µ𝑔/2 𝑚𝐿
2 𝑚𝐿
CONCLUSIONES:
o Se demostró de manera experimental, que la
velocidad de reacción enzimática es directamente
proporcional a la concentración de enzima (o en
nuestro caso, tiende a ser directamente proporcional)
o Lo anterior se debe a que, a mayor concentración de
enzima presente en una concentración constante de
sustrato, da lugar a la formación de más complejos
enzima-sustrato (ES), la cual se ve reflejada por medio
de mayor obtención de productos y a una coloración
fuertemente anaranjada (tirando a rojo) en el tubo con
la mayor concentración de enzima.
ANEXO:

Gráfico No. 1: Curva tipo de Azúcares Reductores.

Gráfico No. 2: Gráfica de la Velocidad Inicial (Vo) vs Concentración de Enzima [E].
ANÁLISIS DE LA TÉCNICA:
Paso realizado
En 6 tubos (1 como testigo
y los demás como
problemas), se les añadió
sacarosa, regulador de
acetatos a pH de 4.7 y agua.
Se pre incubaron los 6
tubos durante 5 minutos a
temperatura del ambiente.
Se le añadió la Enzima
(invertasa) a los tubos
problema en diferentes
volúmenes y durante
diferentes intervalos de
tiempo.
En el caso del tubo testigo,
no se le añadió enzima.
Se incubaron los tubos
durante 5 minutos a
temperatura ambiente.
Se añadió en los tubos
problema 3,5-DNS y para el
testigo, se añadió el mismo
3,5-DNS + Enzima.
Se calentó a baño maría los 6 Esto se hizo con el fin de
tubos a una temperatura de desarrollar color en los tubos
Interpretación 92°C y durante 5 minutos. (pues el DNS reacciona con
la glucosa, uno de los
Esto se hizo para llevar a cabo productos de la reacción
el medio necesario para enzimática) y así poder
realizarse la reacción cuantificar la cantidad de
enzimática. productos obtenidos de la
reacción.
Se hizo esto, dado a que los Se sacaron los tubos de baño Esto se hizo con el fin de evitar
reactivos que se usaron se maría para pasarlos a un que todos los tubos obtuviesen
sacaron del cuarto frío en el baño con Hielo y se diluyeron el mismo color y se diluyeron
cual se conservan. con agua destilada. para poder leerlos en el
Dicho paso se hizo para iniciar espectrofotómetro.
la reacción enzimática entre la Se leyeron los tubos en un Se hizo esto para poder
invertasa (enzima) y la espectrofotómetro a 540 nm. obtener los valores de
sacarosa (sustrato), en donde absorbencia en cada tubo y ver
el pH del regulador (pH de cual tuvo la mayor actividad
4.7), es adecuado para que se enzimática.
lleve a cabo la reacción, los
diferentes intervalos de
tiempo se hicieron, para que
en cada tubo se lleve a cabo
la reacción de la enzima el
mismo tiempo.
Se hizo esto, con el fin de que
en cada tubo ocurriese la
reacción de la enzima en las
mismas condiciones.
Se llevó a cabo este paso, con
el fin de detener la reacción
enzimática (se paso de un pH
algo “ácido”, a otro más ácido,
de tal manera que se
disminuyera la actividad de la
enzima sobre el sustrato.
En el caso de testigo, se
añadió primero el DNS para
evitar que exista actividad de
la Enzima.