• Historia,

• Estructura de los microorganismos,

• Taxonomía y Clasificación.
• Principios de Esterilización

Paola Andrea Caro Hernández,

Microbóloga, PhD.
Origen de la vida
 Origen de los organelos celulares

Origen de la mitocondria
Bacteria aeróbica heterótrofa Bacteria aeróbica Mitocondria
Bacteria anaerobia (α-Proteobacteria) heterótrofa

Origen del cloroplasto

Bacteria aerobia heterótrofa Bacteria autótrofa Cloroplasto
(Cianobacteria) Bacteria autótrofa
 Historia de la Microbiología
Microscopia

Leeuwenhoek
1632-1723 Ferdinand Cohn
Rober Hooke (1828–1898)
1635-1703

1684

Beggiatoa
 Historia de la Microbiología
Padres de la Microbiología

Louis Pasteur
1822-1895
Rober Koch
Estudios en Fermentación 1882-1910
Pasteurización 1864
Primera vacuna Postulados de Koch
Desactivada 1881 Bacilos
Vacuna frete a la rabia 1885 tuberculosis 1882
Carbunco, Cólera aviar. Cólera 1883

https://www.youtube.com/watch?v=smAf5HlEfoA
 Historia de la Microbiología
Theodor Escherich
Primer
1885 Manual Bergy´s
Escherichia coli 1923

Christian Gram Beijerink

1851-1931
Tinción Fleming
de Gram 1884 Fundador de la Virología 1928
Fijación simbióica de Nitrógeno Descubre la
Penicilina
 Historia de la Microbiología
Gallo y
Watson y Crick Montagnier
1984 2007
1953
Estructura de doble
Sanger Secuenciación
hélice del ADN
Genoma

2009
Años 40s Caracterización
Comienzan a Virus H1N1
estudiar el
ADN 1975
Secuenciación
de ADN
Aislamiento
e identificación VIH
ESTRUCTURA
CELULAR
 CARACTERISTCA PROCARIOTAS EUCARIOTAS
Tamaño de la célula Diámetro típico: 0,5 a 10 micras. De 10 a 100 micras.
Nucleo No hay membrana nuclear ni Núcleo verdadero con membrana y
nucléolos. nucléolos.
Orgánelos rodeados Ausentes Presentes: lisosomas, C. Golgi,
por membranas Retículo endoplasmatico L y R,
mitocondrias, cloroplastos.
Flagelos Formados por dos tipos de Complejos, formados por múltiples
componentes proteicos. micro túbulos.
Pared celular Es químicamente compleja: Cuando existe es de composición
peptidoglucano. sencilla.
Membrana No hay hidratos de carbono y Hay esteroles e hidratos de carbon
citoplasmática suelen faltar esteroles. que sirven de receptores.
Citoplasma No hay citoesqueleto, ni corrientes Hay citoesqueleto y corrientes
citoplásmicas. citoplásmicas.
Ribosomas Pequeños 70s Grandes 80s y de 70s en los
Orgánelos.
ADN Un solo cromosoma circular. Doble hélice con histonas.
División celular Fisión binaria Mitosis
Reproducción No hay meiosis, solo intercambio Implica meiosis.
Clase de células
 Especie
El concepto de especie biológica
no es significativa para Bacteria y
Archaea, ya que son organismos
haploides que no se reproducen

Se emplea el concepto de
especies filogenética: grupo de
cepas que están relacionadas
estrechamente unas a otras y son
distintas de otros grupos de
cepas, sobre la base del análisis
cadístico de genes

La secuenciación DNA-DNA del gen 16s RNAr se emplea para

diferenciación de familia y genero pero además de este otros genes
funcionales se empelan para la clasificación de especie
Clasificación bacteriana
 Eukarya

• La filogenética de eucariotas ancestrales es difícil de determinar

• De acuerdo a datos evolutivos aparecen hace alrededor de 600
millones de años, con el surgimiento del oxigeno y la capa de ozono
DESINFECCIÓN Y
ESTERILIZACIÓN
Paola A. Caro Hernández
Microbióloga, PhD.
Conceptos claves
• LIMPIEZA: Remoción física o química de residuos, puede
implicar la disminución del número de microorganismos
pero no su completa eliminación

• DESINFECCIÓN : en este proceso se eliminan los agentes

patógenos reconocidos, pero no necesariamente todas
las formas de vida microbianas, se emplean sustancias
químicas.

• ANTISEPSIA: es el proceso que por su baja toxicidad, se

utiliza para la destrucción de microorganismos presentes
sobre la superficie cutáneo-mucosa. Este término
tampoco implica la destrucción de todas las formas de
vida.
Conceptos claves
• ESTERILIZACION: es el proceso mediante el cual se alcanza
la muerte de todas las formas de vida microbianas,
incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente
resistentes, hongos y sus esporos, y virus. Se entiende por
muerte, la pérdida irreversible de la capacidad reproductiva
del microorganismo.

• Química: Agentes desinfectantes de alto nivel como

Oxido de etileno, formaldehído, glutaraldehído.
• Físicos: Los procedimientos físicos se dividen en
energéticos (calor y radiación) y mecánicos (filtración)
Esterilización por gas
• OXIDO DE ETILENO
(ETO GAS):
Se utiliza ampliamente para la
esterilización de instrumentos
termolábiles como ser:
Tubuladuras de polietileno
(catéteres, sondas), equipos
electrónicos medico-quirúrgicos,
materiales biológicos,
medicamentos…
• Principales Desventajas:
Es altamente tóxico, mutagénico y
carcinogénico para los tejidos;
irrita los ojos y las mucosas.
Esterilización por Calor
húmedo
Características
• La esterilización térmica destruye a los microorganismos en
forma gradual. A temperaturas mayores a 100°C se da

• Autoclave utiliza vapor de agua a 121ºC durante 15'o 20'.

Esta temperatura se logra si se obtiene una presión de una
atmósfera relativa (15 lbs).

• Mediante el autoclave se pueden esterilizar una gran

variedad de objetos (guantes, telas, algodón, papel,
líquidos, filtros, algunos plásticos y gomas)
Esterilización por Calor
húmedo
AUTOCLAVE VERTICAL DE
MANEJO MANUAL:

Instrumental limpio
Lapso de 20 a 30 minutos
a temperatura de 121°C.

Telas, huatas y algodones

Lapso de 30 minutos a
temperatura de 121°C.

Artículos de vidrio
Lapso de 20 minutos a
temperatura de 121°C.
Esterilización por Calor
húmedo
AUTOCLAVES QUE OPERAN POR
EQUIPOS DE ESTERILIZACION
GRAVEDAD RAPIDA

En este autoclave, se puede reducir el

tiempo de esterilización a 3 min ya que
se puede llevar la presión a 3 Atm.
absolutas (134ºC).
Esterilización por Calor
húmedo
Tenga en cuenta
• Los líquidos a esterilizar deben estar fraccionados en frascos
cerrados pero con la tapa de rosca floja, de modo que pueda salir el
aire y entrar el vapor.
• Aquellos materiales que no se encuentren dentro de algún
recipiente que los proteja de la recontaminación al sacarlos del
autoclave, deberán ser envueltos con doble capa de papel, de
manera de formar pequeños paquetes; entre estos objetos se
encuentran: guantes, ropa, placas de Petri, pipetas, tubos de ensayo
y similares.
• No se deben esterilizar por este método equipos que resulten
corroídos por el agua como instrumentos metálicos, o instrumentos
de plástico o pasta no resistentes al calor. Tampoco polvos o aceites
ya que son impermeables al vapor.
• No se pueden esterilizar por este método antibióticos,
azúcares que se caramelicen
Esterilización por Calor seco
• El calor seco (o desecación en general) provoca desnaturalización de
proteínas, lesiones por oxidación y efectos tóxicos por niveles
elevados de electrolitos.
• La acción letal es el resultado del calor trasmitido desde el material
con el cual los microorganismos están en contacto, y no desde el aire
caliente que los rodea.
• Se requiere mantener una temperatura mínima de 160ºC durante
2hs.
• Por calor seco se pueden esterilizar: materiales de inyectables,
vidrios, instrumentos quirúrgicos y objetos metálicos, así como
aceites, vaselinas y polvos.

Clase de esterilización por Calor Seco

• flambeado
• incineración
• Horno Pasteur.
Esterilización por Calor seco

Horno Pasteur.
Los ciclos pueden ser:

Una hora a temperatura de

171°C.
Dos horas a temperatura
160°C.
Tres horas a temperatura
140°C.
Esterilización por Calor seco
Precauciones:

• Colocar paquetes
Horno Pasteur. pequeños y espaciados,
para no interferir con la
difusión del calor.
• La recarga del horno debe
hacerse cuando este se
encuentre frío, de lo
contrario su interior
alcanzará la temperatura
antes que el material a
esterilizar, por lo que se
medirá mal el tiempo.
Controles de esterilización
Controles físicos: están relacionados al operario que
realiza el procedimiento y la vigilancia de ciertos parámetros
como: presión, tiempo, temperatura, etc.

Controles químicos: consiste en tiras de papel con una sustancia

que cambia de color al ser expuesto a la temperatura
correspondiente. La gran desventaja es que dice poco sobre el
tiempo de exposición, por lo que no asegura un procedimiento
correcto.
• Estos controles deben utilizarse en todos los ciclos de
esterilización
Controles de esterilización
Controles biológicos: consisten en exponer bacterias
esporuladas
• Se utilizan esporos de Bacillus estearothermophilus en el
autoclave y de B. subtilis
Esterilización por radiación
• Radiaciones ionizantes: son las que pueden extraer electrones de
sus orbitales.
• Los rayos infrarrojos: sólo pueden provocar energía vibratoria, por lo
que sólo generan calor.
• Radiación UV: afectan a los electrones de los átomos periféricos de
las moléculas, produciéndose solo estados de excitación.

• Produce daños sobre las células al inhibir la síntesis de ADN

APLICACIONES: estas radiaciones pueden producirse artificialmente con

lámparas de vapor de mercurio.
Son igualmente efectivas para Gram (+) y Gram(-).
Su principal uso es para esterilizar el aire y superficies, ya que no penetran
en sólidos y lo hacen pobremente en líquidos.
METODOS MECANICOS:
FILTRACION
Es el método usado en el laboratorio
para esterilizar líquidos termolábiles.

Tipos de filtros:
De asbesto-celulosa, de vidrio,
de cerámica y de ésteres de
celulosa o membranas.

Tamaño de poro:
Los poros varían desde 0.025μm
a 25μm de diámetro, siendo los
de 0.22μm los más utilizados ya
que son lo suficientemente
pequeños para detener a todas
las bacterias e incluso virus.
Procesos para la preparación
del instrumental
• Que el artículo esté bien limpio.
• Cubrir todo el artículo.
• Que la envoltura tenga su referencia para manejarla
asépticamente.
• No elaborar paquetes demasiado grandes.
• Mantener la integridad del paquete en los diferentes niveles
de presión y humedad.
• Los materiales que vienen esterilizados de origen y que son de
un único uso NUNCA DEBERAN SER REESTERILIZADOS NI
REUSADOS
Precauciones con los paquetes
estériles
• Las bolsas de los empaques deben estar herméticamente selladas en
sus dos extremos.
• Los paquetes deberán llevar un control
• Todo el material que se esterilice debe llevar fecha de esterilización,
• Una vez recolectado en material estéril de los esterilizadores, se revisará
paquete por paquete, comprobando sin continúa sin sufrir cambios el
empaque (ruptura, humedad, entre otros), si está herméticamente
sellada, el cambio de viraje de los indicadores de esterilización.
• Si sufrió algún cambio volver a empacar y a esterilizar.
• El material punzocortante se debe proteger para evitar la ruptura de
bolsas. Todo paquete con una punción o ruptura se considera no estéril.
• Todo paquete estéril debe manejarse siempre utilizando la técnica
aséptica, desde el momento de sacarlos del esterilizador.
• Si un paquete se moja accidentalmente se considera contaminado
(excepto si su empaque es de plástico) por lo que es necesario evitar:

• a) Manejarlos con las manos mojadas

• b) Colocarlos en superficies mojadas.
MEDIOS DE CULTIVO
Sustrato líquido o sólido en el que se desarrolla un
microorganismo

Clases: Enriquecidos, selectivos, diferenciales, cromogénicos,

fluorogénicos, concervación

• Fuente de carbono y nitrógeno: extracto de levadura, de

carne, azúcares, peptonas, proteínas…
• Factores de crecimiento: Vitaminas, sangre, minerales
• Inhibidores: sales biliares, colorantes, antibióticos…
• Agente solidificante: agar-agar, gelatina
• Indicadores: Verde de malaquita, rojo fenol, rojo neutro
Que se debe tener en cuenta
• Seguir las instrucciones del fabricante o casa comercial
• No confundir los caldos con los agares o medios sólidos
• Colocar la fecha en que se abre por primera vez
• Verificar las fechas de vencimiento regularmente
• Almacenar en un ambiente con baja humedad y en oscuridad
• No dejar destapado por más de 5 minutos
• Después de pesar y si hay sobrantes procurar no retornar al envase
• Tener cuidado de que no se presente contaminación cruzada
• Los suplementos como antibióticos, azúcares adicionales, yema de
huevo, sangre, se incorporan al medio después de haber sido
esterilizados y a una temperatura no mayor de 50-55°C
• Los medios sólidos o semisólidos, una vez preparados, deben
mantenerse a una temperatura de 50-55°C
Literatura
JAWETZ, MELNICK Y. ADALBERG. Microbiología Médica. Ultima Edición. Mc Graw-Hill. 2011

SHERRIS, Microbiología Médica. 5ed. México. McGraw-Hill. Ultima edición

PARK. K. CHESS. B. Foundations in Microbiology. Ultima edición. Editorial Mc Graw –Hill Education

GONZALES J.M. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 3ª edición, Editorial Elsevier Masson,
España, 2010.
TORI. S. Virus. Estudio molecular con orientación clínica. Editorial Médica Panamericana, Última
edición

BAILEY – SCOTT. Diagnóstico Microbiológico, 12ª edición.última edición. Editorial Médica

Panamericana, 2009.

KONEMAN. Diagnóstico Microbiológico. Última edición. Editorial Médica Panamericana, 2008.

COLLIER L. y OXFORD J. Virología humana. última edición, McGraw-Hill. Interamericana Editores,

México, 2006.

CIBERGRAFIA www.mesdcape.com www.geocites.com/edug2406/virus.htm

www.ugr.es/elanez/microbiologia.html