VERSIÓN 1 – FECHA DE ENTRADA EN VIGOR: 1 DE ENERO DE 2016

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN
AMORTIGUADORA DE pH 7,2
DIAGNÓSTICO MICROSCÓPICO DEL PALUDISMO PROCEDIMIENTO
OPERATIVO ESTANDAR – DMP-POE-03A

1. OBJETIVO Y ALCANCE
Describir el procedimiento de preparación de la solución amortiguadora de pH 7,2 que se utilizará en la
preparación de una solución de trabajo de colorante de Giemsa para la tinción sistemática de extensiones
de sangre en el diagnóstico microscópico del paludismo.
Este procedimiento solo podrá modificarse con la aprobación del coordinador nacional del
aseguramiento de la calidad del diagnóstico microscópico del paludismo. Todos los procedimientos
especificados en el presente documento son de obligado cumplimiento para todos los microscopistas
responsables del diagnóstico microscópico del paludismo en los laboratorios nacionales de referencia, los
laboratorios hospitalarios y los laboratorios básicos de los establecimientos de salud que llevan a cabo
esta prueba.

2. INFORMACIÓN GENERAL
Los parásitos palúdicos se pueden ver con claridad al microscopio en extensiones de sangre correctamente
teñidas. Se debe preparar una solución amortiguadora para diluir el colorante antes de teñir las
extensiones. El uso de una solución amortiguadora con el pH correcto ayuda a lograr una buena tinción.
Este POE consta de tres componentes:
• la preparación de la solución amortiguadora de pH 7,2;
• la preparación de los líquidos correctores al 2%, y
• la comprobación y el ajuste del pH de la solución amortiguadora.
El pH indica la acidez o alcalinidad de un líquido. Se basa en una escala que va de casi 0 (muy ácido) a
14 (muy alcalino). De los líquidos que no son ni ácidos ni alcalinos se dice que son neutros, de pH 7,0. El pH
de un líquido se puede determinar mediante un medidor de pH o pehachímetro o un indicador cromático
como el comparador de Lovibond®. También se pueden utilizar tiras de papel indicador, pero cuando el
ambiente es muy húmedo se alteran rápidamente y dejan de ser fiables. Los programas nacionales de
lucha antipalúdica pueden recomendar diferentes tipos de pehachímetros o comparadores. El personal
de laboratorio deberá aprender a utilizar el sistema que esté disponible en sus instalaciones.
En el presente Procedimiento Operativo Estandar (POE) se describe el uso del comparador de Lovibond®
para medir el pH de la solución amortiguadora.
El agua se puede acidificar o alcalinizar mediante la adición de unas sales llamadas «sales
amortiguadoras» que se guardan cada una por separado hasta el momento de combinarlas en
las proporciones correctas en un volumen fijo de agua para obtener el pH deseado. Las sales
amortiguadoras se pesan en una balanza. Es importante guardarlas de forma correcta y que no
absorban la humedad del aire, ya que si lo hacen, quedarán inservibles.
Hay en el mercado pastillas de amortiguador (o «tampón») que, mezcladas con una cantidad fija de
agua (por lo general 1 litro), permiten obtener el pH deseado.
No es preciso pesarlas y resultan útiles en los laboratorios con pocos medios. Se ha preparado un POE
específico (DMP-POE-03b) para los laboratorios en los que se utilicen pastillas de amortiguador.
Aun así, es indispensable conservar las pastillas en un lugar seco, y dentro de un tubo hermético; de lo
contrario absorben la humedad rápidamente y hay que desecharlas. A juicio de algunos profesionales, la
tinción da peores resultados cuando se utilizan pastillas de amortiguador, pero no hay pruebas de ello.
DMP-POE-03A: PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE PH 7,2

3. SUMINISTROS, MATERIALES Y EQUIPOS

3.1. Preparación de la solución amortiguadora de pH 7,2
• Una balanza analítica con una precisión de 0,01 g (lo ideal es una balanza de vigas con dos platos;
también sirven diversos tipos de balanzas eléctricas de un solo plato que son fáciles de usar);
• papeles de filtro de 11 cm de diámetro;
• un matraz de Erlenmeyer de vidrio de 1 litro;
• un vaso de precipitados de vidrio de 250 ml;
• espátulas de madera (también sirven los depresores linguales, fáciles de conseguir);
• 1 litro de agua destilada o desionizada;
• fosfato de potasio dihidrogenado (anhidro) (KH2PO4);
• fosfato disódico hidrogenado (anhidro) (Na2HPO4);
• papel para rotular, y
• un frasco de vidrio limpio y seco, con tapón de rosca, de 1 litro o de 500 ml.

3.2. Preparación de los líquidos correctores al 2%

• Una balanza analítica con una precisión de 0,01 g o mayor (lo ideal es una balanza de vigas con
dos platos, o una balanza eléctrica de un plato);
• papeles de filtro de 11 cm de diámetro;
• dos frascos con tapón de vidrio, cada uno de 100 o 150 ml;
• fosfato de potasio dihidrogenado (anhidro) (KH2PO4);
• fosfato disódico hidrogenado (anhidro) (Na2HPO4);
• unos 200 ml de agua destilada o desionizada;
• espátulas de madera;
• dos vasos de precipitados de 250 ml;
• una probeta graduada de 100 ml, y
• etiquetas.

3.3. Comprobación y ajuste del pH de la solución amortiguadora

• Solución amortiguadora en un matraz de Erlenmeyer;
• los dos frascos de los líquidos correctores, y
• un pehachímetro (portátil o de mano) o un indicador cromático del pH y los elementos asociados.

Si va a utilizar el comparador de Lovibond®, necesitará:

• Dos cubetas de vidrio para el indicador cromático del pH;
• un frasco de azul de bromotimol (indicador), y
• una pipeta graduada de 1 ml.

2
DMP-POE-03A: PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE PH 7,2
4. PROCEDIMIENTO
DIAGRAMA DE FLUJO
4.1. Preparación de la solución amortiguadora
de pH 7,2
1. Pese 0,7 g de fosfato de potasio
dihidrogenado (KH2PO4).
2. Transfiera el KH2PO4 pesado a un vaso
de precipitados de vidrio. Añada 150 ml
de agua. Remueva con una espátula
hasta que la sal se disuelva.
3. Pese 1 g de Na2HPO4.
4. Añada el Na2HPO4 a la solución
contenida en el vaso de precipitados y
remueva.
5. Vierta la solución en el matraz de
Erlenmeyer y enrase hasta la marca de
1 litro con agua.
6. Vierta la solución amortiguadora en
un frasco de vidrio. Rotule el frasco y
documéntelo en el libro de registro del
control de la calidad.
7. Guarde la
solución amortiguadora en un
lugar fresco y resguardado de la luz
solar.
DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD
1. Pese 0,7 g de fosfato de potasio
dihidrogenado (KH2PO4) en una balanza de
vigas con dos platos:
Asegúrese de que el fiel de la balanza esté en
el cero ajustando el tornillo correspondiente
del brazo derecho. Coloque un papel de filtro
en cada platillo y ponga el fiel en el cero,
esta vez moviendo la masa de gramos a lo
largo del brazo con la escala de gramos.
Desplace la masa de gramos otros 0,7 g
más y la balanza estará lista para pesar el
KH2PO4. Con una espátula de madera vaya
depositando KH2PO4 sobre el papel de filtro
del plato de la izquierda hasta que llegue a
los 0,7 g.
2. Transfiera el KH2PO4 pesado al vaso de
precipitados de vidrio, añada unos 150 ml
de agua y remueva con una espátula limpia
hasta que la sal se disuelva.
3. Pese 1 g de Na2HPO4.
Coloque un papel de filtro nuevo en el plato
de la izquierda. Vuelva a poner el fiel de la
balanza a cero como antes, pero esta vez
ajuste la masa de gramos en 1 g. Con una
espátula limpia y seca, vaya agregando
Na2HPO4 en el plato de la izquierda y
equilibrando el peso tal como se ha descrito
anteriormente.
4. Añada el Na2HPO4 a la solución contenida en
el vaso de precipitados y remueva como se
ha indicado en el paso 2.
5. Cuando las sales se hayan disuelto, vierta la
solución en el matraz de Erlenmeyer y enrase
hasta la marca de 1 litro con agua.
6. Vierta la solución amortiguadora en un
frasco de vidrio. Rotule el frasco claramente y
documéntelo en el libro de registro del control
de la calidad con la fecha de preparación,
la fecha de caducidad y el nombre de la
persona que ha preparado la solución
amortiguadora.
Solución amortiguadora, pH 7,2
Fecha de preparación: 3 de junio de 2015
Fecha de caducidad: 10 de junio de 2015
Preparada por: Nombre Apellido
7. Guarde la solución amortiguadora durante un
máximo de 7 días con el frasco perfectamente
cerrado y en un lugar fresco y resguardado de
la luz solar. Se recomienda utilizar un frasco
oscuro o ámbar.
3
DMP-POE-03A: PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE PH 7,2

DIAGRAMA DE FLUJO DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

4.2.1. Preparación de la solución de 4.2.1. Preparación de la solución de
Na2HPO4 al 2% Na2HPO4 al 2%
1. Pese 2 g de Na2HPO4.
1. Pese 2 g de Na2HPO4.

2. Añádalos a 100 ml de agua en un vaso 2. Añádalos a 100 ml de agua en un vaso de

de precipitados. Remueva hasta que la precipitados limpio y remueva con la espátula
sal se disuelva. hasta que la sal se disuelva.

3. Vierta la solución en uno de los frascos de

3. Vierta la solución en un frasco de vidrio y rotule este como «Na2HPO4 al 2%».
vidrio y rotule este. Escriba en la etiqueta la fecha de preparación
y el nombre de la persona que preparó el
líquido corrector.

4. Guarde el frasco en
un lugar fresco y resguardado de 4. Guarde el frasco de Na2HPO4 al 2% en un
la luz solar. lugar fresco y resguardado de la luz solar.

4.2.2. Preparación de la solución de 4.2.2. Preparación de la solución de KH2PO4

KH2PO4 al 2% al 2%
1. Pese 2 g de KH2PO4 .
1. Pese 2 g de KH2PO4.

2. Añádalos a 100 ml de agua en un vaso 2. Añádalos a 100 ml de agua en un vaso

de precipitados limpio y remueva hasta de precipitados limpio. Remueva con una
que la sal se disuelva. espátula hasta que la sal se disuelva.

3. Vierta la solución en uno de los frascos de

vidrio y etiquételo como «KH2PO4 al 2%».
3. Vierta la solución en un frasco de Escriba en la etiqueta la fecha de preparación
vidrio y rotule este. y el nombre de la persona que preparó el
líquido corrector.

4. Guarde el frasco en un
lugar fresco y resguardado de la luz 4. Guarde el frasco de KH2PO4 al 2% en un lugar
solar. fresco y resguardado de la luz solar.

4
DMP-POE-03A: PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE PH 7,2
DIAGRAMA DE FLUJO
4.3. Comprobación y ajuste del pH de la
solución amortiguadora
A continuación se describe el método de medición
del pH con el comparador de Lovibond®.
1. Vierta un
poco de la solución
amortiguadora que va a analizar
en cada una de las cubetas de vidrio
del indicador cromático hasta la
marca de los 10 ml.
2. Coloque una cubeta en el
compartimento de la izquierda del
indicador cromático de pH como cubeta
de referencia.
3. Pipetee 0,5 ml del indicador azul de
bromotimol en la otra cubeta, mezcle y
coloque la cubeta en el compartimento
de la derecha.
4. Gire el disco hasta que el color sea
igual que el de la cubeta de la derecha.
5. Ajuste el pH de la solución
amortiguadora en el matraz de
Erlenmeyer mediante la adición de dos
o tres gotas del líquido corrector que
proceda.
6. Repita los pasos 1 a 5 hasta
conseguir un pH de 7,2.
DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD
4.3. Comprobación y ajuste del pH de la solución
amortiguadora
Compruebe siempre el pH de la solución
amortiguadora antes de usarla. Para ajustar el
pH, añada a la solución pequeñas cantidades de
los líquidos correctores: Na2HPO4 al 2% si el pH es
inferior a 7,2 (demasiado ácido) o KH2PO4 al 2%
si el pH es superior a 7,2 (demasiado alcalino).
Se pueden realizar los ajustes como se indica a
continuación.
Método de medición del pH con el comparador de
Lovibond®:
1. Vierta un poco de la solución
amortiguadora que va a analizar en cada
una de las cubetas de vidrio del indicador
cromático hasta la marca de los 10 ml.
2. Coloque una cubeta en el compartimento
de la izquierda del indicador cromático de
pH como cubeta de referencia.
3. Pipetee 0,5 ml del indicador azul de
bromotimol en la otra cubeta, mezcle y
coloque la cubeta en el compartimento de
la derecha.
4. Mientras sostiene el comparador sobre un
fondo blanco y bien iluminado, gire el disco
hasta que el color sea igual que el de la
cubeta de la derecha.
5. Ajuste el pH de la solución amortiguadora
en el matraz de Erlenmeyer mediante la
adición de dos o tres gotas del líquido
corrector que proceda: Na2HPO4 para
alcalinizarla y KH2PO4 para acidificarla.
Remueva con una espátula limpia.
6. Repita los pasos 1 a 5 para volver
a comprobar el pH de la solución
amortiguadora. Continúe hasta alcanzar el
pH correcto de 7,2.
5
DMP-POE-03A: PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA DE PH 7,2

5. NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO

• Existen muchos tipos de medidores de pH. Se recomienda que el personal aprenda a utilizar los
sistemas disponibles en sus laboratorios respectivos.
• Lo ideal es conservar la solución amortiguadora en un lugar fresco y resguardado de la luz solar
directa. Se recomienda utilizar un frasco oscuro o un frasco de vidrio transparente envuelto en
papel de estraza para prevenir la proliferación de bacterias, hongos o algas.
• Compruebe regularmente que la solución no está contaminada.
• No conserve la solución amortiguadora durante más de 7 días para evitar que el pH cambie y que
la solución se contamine.
• Compruebe sistemáticamente el pH de la solución amortiguadora antes de usarla y anote el
resultado en el libro de registro del control de la calidad.

6. CONTROL DE LA CALIDAD Y DOCUMENTACIÓN

Lleve a cabo una verificación de control de la calidad en cada lote de solución amortiguadora recién
preparada y sistemáticamente antes de usarla, y anote el resultado en el libro de registro del control de la
calidad. Véase el DMP-POE-03c: Control de la calidad de la solución madre de colorante de Giemsa y de
la solución amortiguadora.

7. POE RELACIONADO
DMP-POE-03c: Control de la calidad de la solución madre de colorante de Giemsa y de la solución
amortiguadora

8. REFERENCIA
Organización Mundial de la Salud. Bases del diagnóstico microscópico del paludismo. Parte I. Guía del
alumno. Segunda edición. Ginebra; 2014.

9. DOCUMENT HISTORY
Fecha Persona responsable
Versión Observaciones
(mmm/aaaa) (Nombre y apellido)
Examinado y redactado
Glenda Gonzales,
en su versión definitiva
Ene 2016 1 Funcionaria técnica,
por expertos, editado y
WPRO
formateado

6
WHO/HTM/GMP/MM/SOP/2016.03a © Organización Mundial de la Salud 2016. Se reservan todos los derechos.