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micología,101(1), 2009, págs. 84–94. DOI: 10.3852/08-100
# 2009 por la Sociedad Micológica de América, Lawrence, KS 66044-8897
Rosellinia compacta,una nueva especie similar al hongo de la pudrición blanca de la raíz
Rosellinia necatrix
Shuhei Takemoto1
Hitoshi Nakamura
Atsuko Sasaki
Takanori Shimane
Instituto Nacional de Ciencias de los Árboles Frutales,
Organización Nacional de Investigación Agrícola y
Alimentaria, 2-1 Fujimoto, Tsukuba, Ibaraki 305-8605, Japón
Resumen:Rosellinia compactase describe como una
nueva especie que se descubrió durante un estudio de
variación enRosellinia necatrixen Japón utilizando
caracteres morfológicos y moleculares.Rosellinia
necatrixestromas y ascosporas fueron 0.92–2.4331,16–
1,98 mm (media 1,7531,57 mm) y 30,5–55,935,0– 10,3
metrom (media 41,836.9metrom) respectivamente.
Rosellinia compactatenían estromas más pequeños
(1.13–1.7130,99– 1,36 mm; media 1,4331,16 mm) y
ascosporas más largas ([34,0–]44,2–62,535,0–10,9metro
metro; media 52,2 37.5metrom) queR. necatrixy también
difiere de otras especies descritas deRosellinia.
Palabras clave:filogenia molecular, nuevas especies,
taxonomía, Xylariaceae
INTRODUCCIÓN
Rosellinia necatrixPrill. causa la pudrición blanca de la raíz
en muchas plantas leñosas y herbáceas, incluidos cultivos
comercialmente importantes (p. ej., Khan 1959, Pérez-
Jiménez 2006), y se distribuye ampliamente en todo el
mundo (Anónimo 1976). Los caracteres del teleomorfo no
están claramente delimitados porque rara vez se
encuentra y algunos investigadores sugieren queR.
necatrixpodría ser un complejo de especies (Francis 1985,
Petrini 1992). Nakamura et al (2000) encontraron estromas
en los bosques de todo Japón y los identificaron comoR.
necatrix, indicando que este hongo era común. Sin
embargo, no ha habido un estudio morfológico detallado
del teleomorfo combinado con datos filogenéticos
moleculares.
La presencia de hinchazones en forma de pera en los
tabiques de las hifas ha sido tradicionalmente el carácter
utilizado para identificarR. necatrix (ej., Sivanesan y Holliday
1972, Pérez-Jiménez 2006). Más recientemente, un conjunto de
imprimaciones específico paraR. necatrixse desarrolló como
una adición o alternativa a la morfología (por ejemplo, Schena
et al 2002, Schena e Ippolito 2003). Sin embargo variación en
Aceptado para su publicación el 10 de octubre de 2008.
1Autor correspondiente. Correo electrónico: ts1@affrc.go.jp
84
la morfología del teleomorfo no ha sido evaluada en
relación con los caracteres morfológicos o moleculares
mencionados anteriormente.
En el presente estudio, se recolectaron estromas de
varios hábitats en Japón, incluidos huertos y bosques.
Estas muestras se examinaron morfológicamente para
determinar la variación en las dimensiones de las
ascosporas y el estroma. Los aislamientos se obtuvieron
de los estromas o de los sustratos sobre los que se
produjeron y se sometieron al análisis molecular basado
en PCR específico paraR. necatrix (Schena et al 2002), así
como un análisis filogenético molecular. Con base en esos
resultados, determinamos que también estaba presente
una especie no descrita, que en este documento se
describe como Rosellinia compacta.
MATERIALES Y MÉTODOS
Coleccion de muestra.-Catorce muestras de estroma
tentativamente identificadas comoRosellinia necatrixse
recogieron en Japón junto con los sustratos sobre los que se
produjeron. Una colección de solo micelio en raíces enfermas
se incubó en condiciones oscuras y húmedas al aire libre para
promover el desarrollo del estroma (Nakamura et al 2000).
Estas colecciones fueron depositadas en el Centro de
Inventario de Recursos Naturales del Instituto Nacional de
Ciencias Agroambientales, Tsukuba, Japón. Se establecieron
aislados monomiceliales o aislados de ascospora única o
ambos tipos a partir de las colecciones y depositados en el
banco de genes NIAS (Instituto Nacional de Ciencias
Agrobiológicas), Tsukuba. Se proporcionan detalles de las
colecciones y aislamientos correspondientes (TPODERYO).
Observación de la morfología de las hifas.—Los aislados se cultivaron en
agar con extracto de malta al 0,5 % a 23 °C durante 2 semanas en la
oscuridad. Las hifas se observaron con un microscopio compuesto para
determinar la presencia de hinchazones en forma de pera en los tabiques.
Identificación basada en PCR.—Las plantillas de ADN para la PCR se
prepararon mediante el método descrito por Nakamura et al (2004) de
la siguiente manera: se extrajeron las hifas de las colonias, se colocaron
entre portaobjetos esterilizados y se trituraron presionando. Alrededor
de 1metroL del material triturado se suspendió en 10metroL de tampón
de extracción (Tris-HCl 10 mM, pH 8,3, MgCl 1,5 mM2, KCl 50 mM,
proteinasa-K al 0,01 % [p/v] y dodecilsulfato de sodio al 0,01 % [p/v]),
transferidos a tubos de microcentrífuga de 0,6 ml, incubados a 37 C
durante 60 min y calentados a 95 C durante 10 min . Las suspensiones
crudas se diluyeron 20 veces con agua destilada y se usaron
directamente como moldes para PCR. Las muestras de ADN crudo se
conservaron
a220 C hasta su uso. La amplificación del ADN siguió el método de
Schena et al (2002) con el juego de cebadores R3 (59-CGA
 TAKEMOTO Y AL.:ROSELLINIA COMPACTASP.NOV. 85

TPODERI. Colecciones y aislamientos identificados tentativamente comoRosellinia necatrixexaminado en el presente estudio

Recopilacióna
(NIAES No.) Localidad Año de colección Anfitrión Aislamientosb(Nº MAFF)

1 (NIAES20567) Tsukuba, Ibaraki 2007 Aucuba japónica,muerto IbTs3 (MAFF625089)

2 (NIAES20568) Imari, saga 2003 Pyrus pirifoliavariedadculta RnHaien1 (MAFF625090)
3 (NIAES20569) Inzai, Chiba 1999 Pyrus pyrifoliavariedadcultura W233 (MAFF625091)
W610 (MAFF328150)
4 (NIAES20570) Kamikoani, Akita 2000 Desconocido, muerto W536C(MAFF328181)
W537C(MAFF625092)
5 (NIAES20571) Kimitsu, Chiba 2000 Desconocido, muerto W567 (MAFF625093)
W568 (MAFF625094)
6 (NIAES20572) Sendai, Miyagi 2000 Aucuba japonica W645 (MAFF328159)
W647 (MAFF625095)
7 (NIAES20573) Maebashi, Gunma 2000 Desconocido, muerto W661 (MAFF328163)
8 (NIAES20574) Shinshiro, Aichi 2000 Desconocido, muerto W674 (MAFF625096)
9 (NIAES20575) Koka, Shiga 2000 Desconocido, muerto W677 (MAFF328169)
10 (NIAES20576) Toyooka, Hyōgo 2000 Desconocido, enfermo W451 (MAFF625097)
11 (NIAES20577) Tsukuba, Ibaraki 2006 Pyrus pirifoliavariedad A33-26 (MAFF625098)
cultura,enfermo

12 (NIAES20578) Tsukuba, Ibaraki 2000 Spiraea thunbergii, W574 (MAFF625099)

muerto W575 (MAFF328147)
13 (NIAES20565) Sakuragawa, Ibaraki 2002 Desconocido, muerto W905C(MAFF625100)
14 (NIAES20566) Sakuragawa, Ibaraki 1999 Desconocido, muerto W584C(MAFF328148)
W533C(MAFF625101)
W535C(MAFF625102)

aLas colecciones se depositaron en el Centro de Inventario de Recursos Naturales del Instituto Nacional de Ciencias

Agroambientales, Tsukuba.
bAislamientos fúngicos establecidos a partir de cada colección. Los aislamientos indicados en cursiva se establecieron a partir de ascosporas individuales. Todos
los aislamientos fueron depositados en el Banco de Genes del Instituto Nacional de Ciencias Agrobiológicas, Tsukuba.
C Los aislamientos que no lograron ser identificados comoR. necatrixpor el método basado en PCR.

AGT GCC CTA CCC TGT TA-39)y R8 (59-CCG AGG TCA ACC TTT GGT
ATA G-39).Los fragmentos de ADN amplificados se separaron en
agar al 0,7 % a 100 V durante 15 min, se tiñeron con bromuro de
etidio y se observaron con luz ultravioleta. Los aislados que
produjeron fragmentos de ADN del tamaño esperado (aprox. 440
pb) se consideraron comoR. necatrix.
Observaciones morfológicas de teleomorfos y análisis
estadísticos.—Después de separar suavemente los estromas
de los sustratos con fórceps, se midió su altura y diámetro con
calibradores. El diámetro promedio se calculó a partir de
mediciones a lo largo de dos ejes que se cruzan en ángulo
recto para cada estroma. Se examinaron de diez a 20
estromas para cada colección. Se obtuvieron de veinticinco a
30 ascosporas por estroma por separado de tres estromas por
colección. Las ascosporas se montaron en portaobjetos de
vidrio en solución de montaje de lactofenol (20 % (p/p) de
fenol, 40 % (p/p) de glicerol, 20 % (p/p) de ácido láctico, 20 %
(p/p) de agua), y la longitud y el ancho de las esporas se
midieron con un microscopio compuesto (10003aumento).
Se aplicó el método de agrupamiento aglomerativo no ponderado
de grupos de pares usando promedios aritméticos (UPGMA)
al conjunto de datos morfológicos (es decir, altura y diámetro del
estroma, longitud y anchura de las ascosporas). El análisis se
ejecutó con el paquete de software R versión 2.5.1 (R Development
Core Team 2007) después de estandarizar los datos. Se aplicaron
ANOVA y ANOVA anidado (Sokal y Rohlf 1995) a los valores
morfométricos para estimar los componentes de varianza para
tres niveles (es decir, entre esporas individuales dentro de
estromas individuales, entre estromas dentro de colecciones
individuales y entre colecciones).
Análisis de secuencia.—La región del espaciador transcrito
interno (ITS) del ADN ribosómico (ADNr), incluida la subunidad
5.8S, se secuenció con los cebadores ITS1 (59-TCC GTA GGT
GAA CCT GCG G-39)y ITS4 (59-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3
9) (White et al 1990) con un analizador genético ABI Prism 310
(Applied Biosystems, Foster City, California). Las secuencias se
alinearon junto con las deR. necatrixy especies relacionadas
registradas en la base de datos (Centro Nacional de
Información Biotecnológica [NCBI] Instituto Nacional de Salud
de EE. UU. Bethesda [http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/]) además de
dosR. necatrixsecuencias proporcionadas por el Dr. S.
Kanematsu, Instituto Nacional de Frutas
86
FYO G. 1. Estromas deRosellinia necatrix (A–C) yRosellinia compacta (D, E). Barras51 mm. A, colección nº 3; B, nº 6; C, núm.
12; D, núm. 13; E, nº 14.
Ciencia del árbol. Las secuencias recién obtenidas se depositaron
en DDBJ, DNA Databank of Japan. Relaciones filogenéticas entre
nuestros aislados, otrosR. necatrixaislados y especies
relacionadas, se infirieron con el árbol de unión de vecinos (NJ) de
arranque en Clustal W versión 1.83 a través del servicio de análisis
en línea proporcionado por DDBJ (http://clustalw.ddbj.nig.ac.jp/
top-e.html) . El conjunto predeterminado de parámetros se utilizó
para los análisis.
Pruebas de patogenicidad.—La patogenicidad de W584 se determinó
enLupinus lúteoplántulas y portainjertos de manzano (Malus prunifolia)
creciendo en un invernadero a 25 C. Un patógenoR. necatrixaislado
(W567) con un nivel de virulencia conocido enL. lúteo (Uetake et al
2001) se utilizó para la comparación. En el caso deL. lúteoSeguimos el
método de inoculación de Uetake et al (2001), excepto que las semillas
se sembraron en tierra para macetas comercial, Kanumatsuchi, 2
semanas antes de la inoculación y se desarrolló el micelio para el
inóculo cultivando los aislamientos durante 5 semanas en ramitas de
pera japonesa esterilizadas en autoclave (1 año de edad). , 1 cm de
diámetro, 3– 4 cm de largo). Se comprobaron las plantas en busca de
síntomas 2 semanas después de la inoculación.
Se usó suelo Kuro-tsuchi para cultivar los portainjertos de manzana. El inóculo
se produjo como anteriormente pero se cosechó después de 10 semanas. Se
comprobaron las plantas en busca de síntomas 1 mes después de la inoculación.
METROYCOLOGÍA
RESULTADOS
Morfología de las hifas.—Los 21 aislados, incluidos siete aislados de
ascosporas individuales, tenían hinchazones en forma de pera en los
tabiques de las hifas.
Análisis de cebadores específicos de Rosellinia necatrix.—Análisis
basado en PCR conR. necatrix-cebadores específicos dieron como
resultado fragmentos de ADN del tamaño esperado (aprox. 440
pb) en 15 de los 21 aislamientos analizados y, por lo tanto, se
identificaron comoR. necatrix.Los otros seis aislamientos (W536,
W537, W905, W584, W533 y W535) no generaron dicho patrón de
bandas. Confirmamos el resultado negativo mediante PCR anidada
después de una primera PCR exitosa con cebadores externos
universales, ITS1 e ITS4 (datos no mostrados). Los seis
aislamientos se clasificaron tentativamente como especies no
identificadas y se utilizó al menos un aislamiento por colección
para la secuenciación ITS.
Morfología de ascosporas y estromas.-Estromas de todas
las colecciones (FYO G. 1) eran superficiales y gregarios en
los sustratos, de color marrón oscuro a negro, carbonosos,
casi globosos y contenían un solo peritecio. Ascosporas (F
YO G. 2) eran uniformemente oscuros
 TAKEMOTO Y AL.:ROSELLINIA COMPACTASP.NOV.
FYO G. 2. Ascosporas deRosellinia necatrix (A–C) y
Rosellinia compacta (D, E). Barras510metrometro. A, colección
nº 2; B, nº 6; C, núm. 7; D, núm. 13; E, nº 14.
marrón a negro pálido, cymbiforme a fusiforme y
ligeramente asimétrico. Estas características estaban
de acuerdo con las descripciones morfológicas de
R. necatrix (Petrini 1992). Sin embargo, UPGMA dividió las
colecciones en dos grupos en función de los datos
morfológicos (FYO G. 3) con las colecciones 13 y 14 ubicadas
más alejadas de las demás. Las dos últimas colecciones se
caracterizaron por ascosporas más largas y estromas más
pequeños (TPODERII). De ahora en adelante denotaremos
estas dos colecciones comoR. compactay el resto comoR.
necatrixpor conveniencia.
Las ascosporas fueron 30.5–55.935,0–10,3metrom
(media6 95%, IC: 41,862.236.960.5metrom) enR. necatrix, y
R. compactatenía ascosporas (34,0–)44,2–61,03
5,0–10,9metrom (media695%, IC: 52,261.337.56
1.2metrometro; TPODERII). La dimensión del estroma fue de
0,92 a 2,43 31,16–1,98 mm (media695%, IC: 1,7560.313
1.5760,22 mm) enR. necatrixy 1.13–1.7130,99–
1,36 mm (media695%, IC: 1,4360.4031.166 0,25 mm) enR.
compacta (TPODERII), donde los rangos son rangos generales,
las medias son medias generales y el IC del 95 % son los
límites dentro de los cuales se espera que el 95 % de las
colecciones tengan valores medios.
Un ANOVA anidado de dos niveles para la longitud de las
ascosporas (THABILITARIIIA, IVA) reveló que la varianza (es decir, la
diversidad) existía principalmente entre ascosporas individuales
dentro de un solo estroma (70,2% de la varianza total). Aunque los
componentes de la varianza aún eran significativos entre los
estromas contenidos en colecciones individuales y entre
colecciones, la longitud de las ascosporas fue menos diversa en
87
FYO G. 3. Análisis de conglomerados basado en las dimensiones del
estroma y la ascospora de las colecciones identificadas tentativamente
comoRosellinia necatrixpor el método aglomerativo de agrupación de
grupos de pares no ponderados usando promedios aritméticos. El
conjunto de datos se estandarizó antes del análisis.
estos dos niveles (19,3% y 10,5% respectivamente). ParaR.
compactala variación de tamaño fue significativa entre los
estromas y dentro de un estroma, pero no entre las colecciones de
muestras (TPODERIIIB), y el 67,3% de la diversidad existió entre
ascosporas dentro de un solo estroma (TPODERIVB).
Análisis de secuencia.—Tres aislamientos deR.
compacta (W533, W584 y W905) formaron un clado que
colindaba con unR. pepoaislar y se separó de laR.
necatrixclado (FYO G. 4). Ambas cosasR. compactayR.
necatrixlos clados fueron apoyados con altos valores de
arranque, 1000 y 754. La distancia genética entre los
dos fue 0.065. TodosR. necatrixaislados constituían un
solo clado, excepto un aislado de Panamá (medio de F
YO G. 4). La alineación se depositó en una base de datos
pública, TreeBASE (http://www.treebase.org/treebase/
index.html), con el número de ID SN3900. Aislar W537
agrupado cercaR. necatrixa pesar del resultado
negativo en la prueba PCR.
Pruebas de patogenicidad.—Ambos aislados W584 y W567 fueron
patogénicos enL. lúteoplántulas y portainjertos de manzano. La
pudrición negra del tallo alrededor del punto de inoculación y el
síntoma de marchitez se observaron en la mayoría de los
L. lúteoplántulas inoculadas con W584 o W567. La mitad fueron
asesinados. En algunos portainjertos de manzano inoculados con
el aislado W584, se observaron signos similares a los de la
pudrición blanca de la raíz causada porR. necatrix(p. ej., abanico de
micelio debajo de los tejidos de la corteza podrida y hebras
blancas de micelio en raíces enfermas y bases de tallos). Todos los
portainjertos inoculados con W584 o W567 mostraron
marchitamiento y la mitad murió.
88 METROYCOLOGÍA

TPODERII. Dimensiones de estromas y ascosporas de las colecciones deRosellinia necatrixyR. compacta

Estroma [mm] Ascospora [metrometro]

Recopilación Rango Promedio695% ICa Rango Promedio695% IC

rosellinia
necatrix
1 1.40–2.4131,35–1,98 1.9460.4731.6960.35 (35,1–)36,1–51,235,2–8,4 42.664.436.861.2
2 1.52–2.0531,47–1,75 1.7760.2731.6060.16 30,5–44,43 (5.2–)5.7–8.4 38.762.936.761.0
3 1,49–1,7931,33–1,76 1.6460.1831.5960.25 36,0–47,4(–51,9)36,0–9,0 42.560.8b37.360.4
4 1.44–2.4231,29–1,88 2.0060.5231.5660.38 33,4–52,035.2–9.1 41.461.837.261.1
5 1.19–1.6931,25–1,48 1.4860.3531.3560.14 33,3–47,036,0–9,4 41.261.0b37.460.6
6 0,92–2,0831,20–1,66 1.5860.5931.4260.23 35,5–55,935,0–8,8 45.668.136.661.4
7 1.32–2.0131.16–1.52 1.5960.4031.3360.22 33,6–48,6(–55,1)35.9–9.9 40.762.237.661.1
8 1.69–2.2431,45–1,90 1.9360.3531.6860.32 35,4–49,2(–52,4)35,0–8,9 43.261.637.060.7
9 1.29–2.1631,30–1,86 1.7360.4431.6160.27 (32,7–)33,1–47,935.1–10.3 40.860.9b37.161.6
10 1,45–2,4331,46–1,72 1,9560,4631.5960.15 34,2–47,8 40.760.736.460.3
3 (5.2–)5.5–8.1(–8.9)
11 1,84–1,9631.28–1.83 1.7160.7031.6060.34 32,1–49,635,0–6,8(–7,9) 41,961.236.060.4
12 1,25–1,9631,33–1,65 1.6560.3931.4860.18 36,0–50,03 (5.1–)5.3–8.3 42.561.636.560.7
Promedio 1.7531.57 41.836.9
rosellinia
compacta
13 1.13–1.5931.06–1.30 1.4060.2931.1460.16 (34,0–)44,9–61,035,0–9,0 52.665.637.061.5
14 1.26–1.7130,99–1,36 1.4660.2431.1760.20 44,2–62,536,0–10,9 51.762.737.961.4
Promedio 1.4331.16 52.237.5

a Límites confidenciales dentro de los cuales se espera que el 95 % de los estromas tengan altura, diámetro o un valor medio del tamaño de las
ascosporas. El cálculo se basó en el ANOVA anidado.
b El IC del 95 % se calculó simplemente a partir de los valores medios de los estromas individuales porque el componente de la varianza al nivel del
estroma no se pudo separar de la varianza entre las ascosporas individuales.

TPODERtercero ANOVA anidado de dos niveles para la longitud de las ascosporas de las colecciones deRosellinia necatrix (A) yRosellinia
compacta (B)

(A)
Fuente de variación d.f. SS EM Fs pagsa

Entre colecciones 11 2868.2 260.75 3.35 6.4631023

entre estromas 24 1870.1 77.92 9.13 7.32310230
dentro de los estromas 1028 8769.6 8.53
Total 1063 13507.9

(B)
Fuente de variación d.f. SS EM Fs pags

Entre colecciones 1 31.1 31.08 0.19 6.8231021

entre estromas 4 637.9 159.48 15.06 1.53310210
dentro de los estromas 168 1178.6 10.59
Total 173 2447.6

gl: grados de libertad. SS: suma de cuadrados. MS: cuadrado medio (es decir, estimación no sesgada de la varianza). Fs: relación del cuadrado medio sobre el
de los niveles inferiores.
Cuandopags ,0,05, la varianza es significativa en comparación con la de los niveles inferiores.
a
 TAKEMOTO Y AL.:ROSELLINIA COMPACTASP.NOV.
TPODERIV. Componentes de la varianza de la longitud de las ascosporas en las colecciones deRosellinia necatrix (A) yRosellinia compacta (B)
(A)
Componentes de la varianza
s2C(entre colecciones)
s2STC(estromas dentro de las colecciones)
s2(esporas dentro de los estromas)
(B)
Componentes de la varianza
s2C(entre colecciones)
s2STC(estromas dentro de las colecciones)
s2(esporas dentro de los estromas)
NS: No significativo.
TAXONOMÍA
Rosellinia compactaS. Takemoto sp. nov. FYO G. 5A–H
Stromata nigra vel brunneo-nigra, superficialia, globosa,
1.13–1.7130,99–1,36 mm (1,4331,16 mm), en el centro
papillata ostiolataque, parte inferiore submersa in subiculo
atrobrunneo perdurante sed evanescente materiis veteribus.
Asci clavati, octospori, 315–42439,0–12,5metrometro (3793
10.5metrometro). Paraphyses numerosae, filiformes, ad apicem
paulatim angustatae. Annuli apical asci rotundote doliiformes vel
angulose ovoidei, iodo manifeste coerulescentes, 5.4–9.036.9–4.4
metrometros (6,935.4metrometro). Ascosporae cymbiformes vel
asimetrice fusiformes, atrobrunneae, vagina mucosa circumdatae,
fissura germinativa recta medio longitudinaliter praeditae,
(34.0–)44.2–62.535,0–10,9metrometros (52,237.5metrometro).
Hyphae yuxta septa gibbis pyriformibus praeditae. Estado
anamorfosis Dematófora. Synnemata atrobrunnea vel brunnea,
perdurantia sed evanescentia materiis veteribus, 0,61–1,38(–1,74)
mm alta. Cellulae conidiogenae hyalinae vel alutaceae, conspicue
cicatricosae et geniculatae. Conidios 3.6–5.832.1–3.1metrometros
(4,63
2.5metrom), hyalina vel alutacea, basi truncata, sympodice a
cellulis conidiogenis genita.
HOLOTYPUS (hic designatus): JAPÓN. IBARAKI: Sakuragawa,
un Templo Amabiki-Kannonis, marzo de 2002,
H. Nakamura 20565 (Centro de Inventario de Recursos
Naturales del Instituto Nacional de Ciencias
Agroambientales). PARATYPUS: octubre de 1999,H.
Nakamura 20566 (Centro de Inventario de Recursos
Naturales del Instituto Nacional de Ciencias
Agroambientales).
Etimología. compacta (Lat.) se refiere a los estromas
relativamente pequeños en comparación con las ascosporas; es un
conjunto de caracteres distintivo de las especies relacionadas.
Estromas 1.13–1.7130,99–1,36 mm (1,433
1,16 mm), negro a negro parduzco, superficial, globoso,
ostiolo central, papilado, parte inferior sumergida en
subículo pardo a pardo oscuro, que carece de material
antiguo. Ascos 315–42439,0–12,5metrometro (379310.5
metrom), claviformes, octosporosos. Numerosas parafisis,
filiformes, que se estrechan gradualmente hacia el ápice.
Anillos apicales de Ascus 5.4–9.036.9–4.4metrometros (6,93
89
Estimacion Magnitud relativa
1.28 10,5%
2.35 19,3%
8.53 70,2%
Estimacion Magnitud relativa
NS NS
5.14 32,7%
10.59 67,3%
5.4metrom), rotundamente doliforme a angularmente ovoide,
amiloide. Ascosporas (34,0–)44,2–62,535,0–10,9metrometros
(52,237.5metrom), cymbiforme a asimétricamente fusiforme,
de color marrón oscuro, rodeado de una vaina viscosa, con
una hendidura germinal recta longitudinal en el centro.
Hinchazones en forma de pera presentes en los tabiques de
las hifas. Synnemata tipo Dematófora de 0,61–1,38(–1,74) mm
de altura, de color marrón oscuro a marrón, persistente pero
ausente en el material antiguo. Células conidiógenas hialinas a
marrón claro, visiblemente cicatrizadas y geniculadas.
Conidios 3.6– 5.832.1–3.1metrometros (4,632.5metrom), hialino
a marrón claro, truncado en la base, producido
simpodialmente en células conidiógenas.
Hábitat.Saprobio en ramitas en descomposición de árboles de
hoja ancha desconocidos. También patógeno enLupinus lúteo y
portainjertos de manzano.
Especímenes examinados.JAPÓN. IBARAKI: Sakuragawa
(anteriormente Yamato), Templo Amabiki-Kannon, 36tu199540N,
205 m alt., sobre ramas en descomposición de un árbol de hoja
ancha desconocido, marzo de 2002,H. Nakamura 20565 (
HOLOTIPO; Centro de Inventario de Recursos Naturales del
Instituto Nacional de Ciencias Agroambientales); 36tu199540N,
180 m alt., octubre de 1999,H. Nakamura 20566 (PARATIPO; Centro
de Inventario de Recursos Naturales del Instituto Nacional de
Ciencias Agroambientales).
DISCUSIÓN
Khan (1959) señaló que el teleomorfo deR. necatrixrara vez
se encontraba en la naturaleza. Teixeira de Sousa y
Whalley (1991) lograron inducir estromas que se
desarrollaron casi 2 años después de la inoculación en
plántulas de manzano. Solo se ha examinado un número
limitado de colecciones con el estado teleomórfico y la
mayoría eran de plantas cultivadas (ca. 20 colecciones en
total; Hansen et al 1937, Khan 1959, Watanabe 1963, Ezuka
et al 1973, Francis 1985, Teixeira de Sousa y Whalley 1991,
Petrini 1992, González y Rogers 1995, Nakamura et al
2000, Pérez-Jiménez et al 2003).
90 METROYCOLOGÍA
FYO G. 4. Filograma de aislamientos deRosellinia necatrix, R.
compactay especies relacionadas basadas en regiones ITS de
rDNA. Sólo los aislados que no lograron producir elR. necatrix-
banda específica por el método basado en PCR (es decir, W533,
W537, W584 y W905) se utilizaron para la comparación
filogenética. Se utilizó el método de unión de vecinos. El filograma
está enraizado conIntermedio de Hypoxyloncomo grupo externo
(punta de flecha). Los números indican valores de arranque
generados a partir de 1000 repeticiones de análisis. La barra
representa la distancia genética. El nombre de la especie (y el
número aislado, si lo hay) y el número de accesión se indicaron en
este orden. Se añadió el origen geográfico en el caso deR. necatrix.
Placa proporcionada por cortesía del Dr. S. Kanematsu, Instituto
Nacional de Ciencias de los Árboles Frutales.
Nakamura et al (2000) atribuyeron la rareza del teleomorfo
al hecho de que los agricultores eliminarían fácilmente las
raíces enfermas, por lo que era poco probable que el
teleomorfo se desarrollara en las plantas cultivadas. En el
presente estudio buscamos tanto en bosques como en
huertos y recién recolectados 12R. necatrixmuestras de
estroma cuya identificación fue confirmada también por la
evidencia molecular.
Las mediciones de estromas y ascosporas en estas
colecciones son de gran valor para refinar el concepto
taxonómico deR. necatrix. Rosellinia necatrix
Las colecciones en el presente estudio tenían estromas de 1,16
a 1,98 mm de diámetro (promedio de 1,57 mm, TPODERII). El
rango casi se superpuso con los de estudios previos (TPODERV).
Ascospore longitud de nuestroR. necatrix las colecciones
fueron 30.5–55.9metrom con una longitud media de 41,8metro
m, cubriendo el rango informado anteriormente. La longitud
media de ascosporas en colecciones individuales varió poco (T
PODERIVA), lo que sugiere que la longitud de las ascosporas es
un rasgo taxonómico fiable de la especie. Nakamura et al
(2000) informaron que la longitud de las ascosporas era de
37,5 a 60,0 con una longitud media de 47,7metrometro. Es
probable que algunas de esas muestras fueranR. compacta
debido al tamaño de ascospora informado más largo y
algunas de sus colecciones se obtuvieron en la misma área (H.
Nakamura sin publicar).
Rosellinia necatrixparece genéticamente
homogéneo. Todos los aislamientos recolectados de
varias regiones, incluidas Asia, Europa y América del
Sur, fueron casi idénticos en las secuencias ITS (FYO G. 4)
y formó un clado apoyado con un alto valor de
arranque, excepto un aislado de Panamá (medio de FYO
G. 4), que podría haber sido mal identificado. losR.
necatrixclado se dividió en dos subclades. Un aislado
(W537) que mostró un resultado negativo en la
identificación basada en PCR formó un subclado
interno junto con otro aislado de Taiwán. Sun et al
(2008) consideraron que el aislado taiwanés era un
roselliniasp. Sin embargo, la distancia genética entre
este pequeño subclade y el otroR. necatrix clado era
solo 0,0045 y el subclade pequeño se admitía solo con
un valor de arranque bajo (451). Además, las
dimensiones de ascosporas y estromas de la colección
No. 4 (correspondientes a W537) estaban en el mismo
rango que las de otrosR. necatrixcolecciones en el
presente y estudios previos (THABILITARII, V). Por lo tanto,
el aislado W537 y el aislado taiwanés deben
considerarse comoR. necatrixActualmente.
Petrini y Petrini (2005) propusieron combinaciones de
caracteres morfológicos para clasificarroselliniaespecies.
La combinación de caracteres 5 en su estudio incluyó
especies con ascosporas con una relación largo: ancho. 4,
rodeado por una vaina viscosa y teniendo un germen corta
hendidura en el centro de la espora, el ascus anillo apical
con borde angular, y unDematóforaestado anamórfico.
Rosellinia necatrixfue considerado como un representante
de la combinación de caracteres 5.Rosellinia compacta
tiene la misma combinación de caracteres pero tiene
ascosporas más largas y estromas más pequeños que los
deR. necatrix (FYO G. 3, TPODERII), y sus dimensiones diferían
también de las deR. necatrixen estudios previos (TPODERV).
Basado en secuencias ITSR. compactaestaba en un clado
distinto deR. necatrix (FYO G. 4).
Rosellinia pepoagrupados cerca de laR. compactaclado en
el filograma.R. pepoa menudo tiene ascosporas más largas y
estromas verrugosos y areolados que son más grandes quer
 TAKEMOTO Y AL.:ROSELLINIA COMPACTASP.NOV. 91

FYO G. 5.Rosellinia compacta.A, estroma en el sustrato; B, ascas y paráfisis; C, anillo apical de ascus en reactivo de Melzer; D,
ascospora con vaina viscosa en tinta china; E, remanente de synnema; F, hinchazón en forma de pera en el tabique; G, células
conidiogenous y conidios; H, synnema con conidios. Tipo, Centro de Inventario de Recursos Naturales (NRIC) del Instituto Nacional
de Ciencias Agroambientales (NIAES), Tsukuba, Japón, NIAES20565: A–E; NRIC-NIAES, Tsukuba, Japón, NIAES20566: F–H. Barras: A5
0,5 mm; B550metrometro; C, D, F, G510metrometro; E, H5200metrometro. F–H producido en cultivo, según Nakamura et al (2002).
 92

TPODERV. Comparación de datos de medición entre el presente y estudios previos en las dimensiones de estromas y ascosporas deRosellinia necatrixy especies
relacionadas

Estroma [mm] Ascospora [metrometro]

Autores Especies Rango Promedio Rango Promedio

Nowell (1919) R. pepo 2.5–3a DAKOTA DEL NORTE 62–6738–9 DAKOTA DEL NORTE

Hansen et al. (1937) R. necatrix DAKOTA DEL NORTE 2.0a, b 31,1–47,635.1–7.1 37.136.3
Khan (1959) R. necatrix DAKOTA DEL NORTE California. 1.5a 31–4735,0–7,0 DAKOTA DEL NORTE

Watanabe (1963) R. necatrix 1.22–2.6031.10–2.20 DAKOTA DEL NORTE 30–4635,0–7,0 39.836.27

Sivanesan y Holliday (1972) R. necatrix DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 30–5035,0–8,0 DAKOTA DEL NORTE

Booth y Holliday (1972) Ezuka R. pepo 1.5–3a DAKOTA DEL NORTE 50–6937–9 DAKOTA DEL NORTE

et al. (1973) R. necatrix 0,8–2,0a 1.6a 36–4835,0–7,5 42.336.1

roselliniasp. 0,8–2,0a 1.3a 40–7335,0–7,5 57.635.9
METROYCOLOGÍA

Francisco (1985) R. necatrix 1,0–1,5a DAKOTA DEL NORTE 36–4635.5–6.3 DAKOTA DEL NORTE

Teixeira de Sousa y Whalley (1991) R. necatrix 1.3–1.8a, b DAKOTA DEL NORTE 35–4435.4–7.2 DAKOTA DEL NORTE

Petrini (1992) R. necatrix 1.125–1.32531.000–1.500 DAKOTA DEL NORTE 30–4735,5–8,0 3836.5

González y Rogers (1995) R. necatrix ND DAKOTA DEL NORTE (35–)38–463 (6,5–)7,0–7,5(–8,0) DAKOTA DEL NORTE

Nakamura et al (2000) Pérez- R. necatrix DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 37,5–60,035,0–8,8 47.736.3
Jiménez et al (2003) Petrini y R. necatrix 2.08–2.3831,48–1,88 2.1931.64 31,0–49,535.4–10.1 36,937.4
Petrini (2005) Este estudio R. pepo DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 63–7937–9 DAKOTA DEL NORTE

R. necatrix 0,92–2,4331.16–1.98 1.7531.57 30,5–55,935,0–9,9 41.836.9

R. compacta 1.13–1.7130,99–1,36 1.4331.16 (34,0–)44,2–62,535,0–10,9 52.237.5

ND: Sin datos.

a Solo diámetro.
b Estimado a partir de fotografías y escalas.
 TAKEMOTO Y AL.:ROSELLINIA COMPACTASP.NOV.
compacto (Nowell y Freeman 1919, Booth y Holliday 1972,
Petrini y Petrini 2005; ver TPODERV). Las células conidiógenas y
los conidios deR. pepo por lo general se producen desde la
parte media hacia la parte superior de los sinemas (Booth y
Holliday 1972, Oliveira et al 2008), pero las ramas de los
conidióforos se restringen principalmente a la parte superior
de los sinemas en el caso de
R. compacta (FYO G. 5H), aunque los estados anamórficos de
ambas especies sonDematófora-escribe.Rosellinia compacta
también se puede distinguir de todas las demás especies con
la combinación de caracteres 5. Por lo tanto, consideramosR.
compactaser una nueva especie deRosellinia.
Ezuka et al (1973) reportaron un no identificado
roselliniaSimilar aR. necatrixpero caracterizado por
ascosporas más largas (TPODERV). Ascospora longitud de
R. compactafue comparable a la de Ezuka et al (1973),
pero sus materiales ya no están disponibles.
Los aislados deR. compacta,tanto comoR. necatrix aislados,
tenían hinchazones en forma de pera en los tabiques de las
hifas. Por esta razón, las hinchazones no deben ser
consideradas como un carácter taxonómico determinante
para la identificación deR. necatrix.
estromas deR. necatrixa menudo tienen restos de
sinemas deDematophora necatrix,el anamorfo de
R. necatrix (Petrini 1992).Dematófora-type synnemata
estaban presentes en una de las dos colecciones deR.
compacta,y los aislamientos correspondientes
produjeron laDematóforaestado en la cultura por el
método de Nakamura et al (2002). Similitudes en los
estados anamórficos deR. compactayR. necatrixpodría
haber llevado a la confusión entre los dos. Se necesitan
más estudios biológicos y taxonómicos para dilucidar
más diferencias entreR. compactayR. necatrix.PorqueR.
compactaincluye cepas patógenas como el aislado
W584, la distribución geográfica también debe ser
estudiada para evaluar la importancia práctica de esta
especie como patógeno de plantas.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Agradecemos la ayuda del Dr. S. Kanematsu, del Instituto Nacional
de Ciencias de los Árboles Frutales, quien proporcionó valiosos
comentarios y secuencias de datos. Agradecemos al Dr. N.
Matsumoto, Centro Nacional de Investigación Agrícola de la
Región de Hokkaido, por la lectura crítica del manuscrito y la
corrección lingüística.
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