1.

4 Estequiometria de las reacciones microbianas diseño de medios de cultivo

Al conjunto de procesos mediante los cuales los microorganismos obtienen la energía y los
nutrientes necesarios para vivir y reproducirse se denomina metabolismo microbiano. Los
microorganismos utilizan diversas estrategias metabólicas acorde a los nichos ecológicos en los que se
encuentran, los cuales tienen un impacto en los ciclos biogeoquímicos, y también pueden ser utilizados
en un gran número de procesos industriales. Los tres principales macro elementos indispensables para
el metabolismo microbiano son el carbono (C), nitrógeno (N) y fósforo (P) los cuales están
involucrados tanto en la construcción de la estructura celular como en la obtención y generación de
energía mediante el metabolismo microbiano. Los microorganismos acorde las formas como asimilan
el carbono y obtienen la energía para su metabolismo se clasifican en:

Quimio-lito-autótrofos. Obtienen el carbono para su estructura celular mediante la fijación del

dióxido de carbón, mientras que la energía la obtienen de la oxidación de compuestos
inorgánicos. Ejemplos de este tipo de microorganismos son las bacterias nitrificantes,
bacterias oxidantes del azufre, bacterias oxidantes de hierro y bacterias oxidantes del
hidrógeno.

Foto-lito-autótrofos. Obtienen el carbono para su estructura celular mediante la fijación del

dióxido de carbono, mientras que la energía de la luz solar por el proceso de fotosíntesis
utilizando compuestos inorgánicos como agentes reductores en las reacciones de biosíntesis.
Ejemplos de estos microorganismos son las Cyanobacterias (agua como agente reductor),
Chlorobiaceae, Chromaticaceae (sulfuro de hidrógeno como agente reductor) y
Chloroflexus (hidrógeno como agente reductor).

Quimio-lito-heterótrofos. Obtienen el carbono para su estructura celular únicamente de

compuestos orgánicos (ejemplo la glucosa), mientras que la energía la obtienen de la
oxidación de compuestos inorgánicos. Ejemplos de estos microorganismos son las bacterias
de los géneros Nitrobacter, Wolinella (con hidrógeno como equivalente reductor), y algunas
bacterias oxidantes del hidrógeno.

Foto-órgano-heterótrofos. Obtienen el carbono para su estructura celular únicamente de

compuestos orgánicos, mientras que la energía la obtienen de la luz solar por fotosíntesis.
Ejemplos de este tipo de microorganismos son las bacterias de los géneros Rhodobacter,
Rhodopseudomonas, Rhodospirillum, Rhodomicrobium, Rhodocyclus, Heliobacterium.

Quimio-órgano-heterótrofos. Obtienen tanto el carbono para su estructura celular como la

energía a partir de compuestos orgánicos como agentes reductores para las reacciones de
 biosintésis. La mayoría de las bacterias poseen este tipo de metabolismo siendo dos de las
más representativas Escherichia coli, y los géneros Bacillus y Actinobacter.

En el presente documento se abordará la estequiometria asociada al metabolismo de los

microorganismos quimio-órgano-heterótrofos, enfocados principalmente al diseño de medios de
cultivo. Un esquema general de la estequiometria de las reacciones asociadas a los metabolismos de
microorganismos quimio-órgano-heterótrofos con fuentes de carbono y nitrógeno independientes es:

FCE FN → ∆

FCE FN → ∆

Figura 1.4.1. Representación general de la estequiometria de una reacción microbiana para un

microorganismo quimio-órgano-heterótrofo con fuentes de carbono y nitrógeno independientes.

En las reacciones microbianas las fórmulas moleculares de la fuente de carbono y energía, la

biomasa y el producto suelen escribirse con base a un 1mol-C. La base 1mol-C equivale expresar un
compuesto en su fórmula mínima con base al carbono. Por ejemplo, la glucosa posee una fórmula de
C6H12O6, la cuál al dividir cada elemento que compone la glucosa entre los 6 mol-C permite expresarla
en su fórmula mínima es decir CH2O.

Como se muestra en la Figura 1.4.1, las dos condiciones respiratorias bajo las cuales puede
operar el metabolismo de los microorganismos quimio-órgano-heterótrofos son anaeróbica y aeróbica.
En condiciones anaerobias el metabolismo funciona sin la presencia de oxígeno y el substrato orgánico
es utilizado tanto para la asimilación del carbono en la construcción de estructura celular, como agente
reductor, donde su potencial reductivo esta acoplada directamente a reacciones para la obtención de
energía mediante la síntesis de adenosina trifosfato (ATP). Para una FCE orgánica (como la glucosa)
y fuentes nitrogenadas inorgánicas como sales de amonio o nitrato, las reacciones estequiométricas
escritas en función del 1mol-C vendrán dadas por:
! & & &
∙ → "#/% ∙ ' ( ) + "*/% ∙ + , + "-./ /%
∙ +0∙ +∆

2 & & &

+ ∙ 1 → "#/% ∙ ' ( ) + "*/% ∙ + , + "-./ /%
∙ +0∙ +∆

Las ecuaciones estequiométricas anteriores funcionan siempre y cuando el nitrógeno de la FN

únicamente sea utilizado para la generación de biomasa. CHqOr, CHvOwNy y CHsOt son las fórmulas
mínimas en base a 1mol-C de substrato (FCE), biomasa (X) y producto (P) respectivamente, donde la
& & &
composición en su fórmula mínima de la biomasa microbiana es en base seca. "#/% , "*/% y "-./ /%
son
los rendimientos molares biomasa-substrato, producto-substrato y CO2-substrato, σ, γ, los
correspondiente coeficientes estequiométricos y∆Hr es el calor metabólico.

En condiciones aerobias el metabolismo funciona con oxígeno y el substrato orgánico es

utilizado para la asimilación del carbono en la construcción de estructura celular. Sin embargo a
diferencia de las condiciones anaerobias el potencial reductivo del substrato esta acoplada directamente
a reacciones para la reducción de moléculas de nicotamida adenina dinuclético (NAD+ a NADH) y
flavín adenín dinucleótido (FAD+ a FADH), las que a su vez se acoplan a citocromos de cadena
respiratoria en mitocondria para la obtención de energía mediante la síntesis de adenosina trifosfato
(ATP). Para una FCE orgánica (como la glucosa) y fuentes nitrogenadas inorgánicas como sales de
amonio o nitrato, las reacciones estequiométricas escritas en función del 1mol-C vendrán dadas por:
! & & &
+3∙ + ∙ → "#/% ∙ ' ( ) + "*/% ∙ + , + "-./ /%
∙ +0∙ +∆

2 & & &

+3∙ + ∙ 1 → "#/% ∙ ' ( ) + "*/% ∙ + , + "-./ /%
∙ +0∙ +∆

Las ecuaciones estequiométricas anteriores funcionan siempre y cuando el nitrógeno de la FN

únicamente sea utilizado para la generación de biomasa. Al igual que en las reacciones anaerobias
CHqOr, CHvOwNy y CHsOt son las fórmulas mínimas en base a 1mol-C de substrato (FCE), biomasa
& & &
(X) y producto (P) respectivamente y "#/% , "*/% y "-./ /%
son los rendimientos molares biomasa-
substrato, producto-substrato, CO2-substrato, β, σ, γ los coeficientes estequiométricos
correspondientes y ∆Hr es el calor metabólico. Los rendimientos de biomasa y producto pueden
determinarse a partir de los datos experimentales de biomasa y producto y vendrán dados por:
 ∆ − 7
"#/% = =
∆5 57 − 5

"*/% = =
∆5 57 − 5

X, X0 son las concentraciones final e inicial de biomasa, P es la concentración final de producto

y S, S0 las concentraciones final e inicial de substrato, todas determinadas experimentalmente y en
unidades de g/L. Recordemos que los rendimientos másicos se convierten fácilmente en rendimientos
molares mediante el uso de los pesos moleculares.

&
9%
"#/% = "#/% 8 :
9#

&
9%
"*/% = "*/% 8 :
9*

Diferencias importantes entre las reacciones microbianas anaerobias y aerobias, radican en la

cantidad de energía que se puede obtener en cada una de ellas por mol de substrato, las que a su vez
están asociadas con los rendimientos biomasa-substrato y el calor metabólico. Cuando el substrato es
glucosa (C6H12O6) por cada mol se obtienen 2 moles de ATP en condiciones anaerobias y 36 moles de
ATP en condiciones aerobias. Esta diferencia en la cantidad de energía obtenida se ve reflejada en un
mayor rendimiento biomasa-substrato (YX/S) para microorganismos aerobios que anaerobios. En
términos globales puede establecerse que:
g
"#/;<= ≈ 0.5 para microorganismos aerobios
g
g
"#/;<= ≈ 0.1 para microorganismos anaerobios
g

Esta diferencia de rendimientos se ve reflejada en una mayor cantidad de biomasa generada por
gramo de substrato de los microorganismos aerobios que los anaerobios, lo que a su vez también se ve
reflejada en una mayor cantidad generada de calor metabólico (∆Hr aerobio >>> ∆Hr anaerobio). El
calor metabólico en las reacciones aerobias esta relacionado con el potencial reductor del substrato, el
cuál depende directamente de la cantidad estequiométrica de oxígeno consumida en la reacción
microbiana, de tal manera que:

43
∆ ≈ 115 OP ∙ 8 :
mol

Con base a la estequiometria de cada una de las reacciones microbianas podemos escribir los
balances elementales, los cuales se muestran en la Tabla 1.4.1.
 Tabla 1.4.1 Balances elementales con base estequiometria microbiana
Reacciones anaeróbicas Reacciones aeróbicas
Con NH4+ como FN Con NH4+ como FN
Balance de C Balance de C
& & & & & &
1 = "#/% "*/% "-./ /%
1 = "#/% "*/% "-./ /%

Balance de N Balance de N
& &
= S ∙ "#/% = S ∙ "#/%
Balance de O Balance de O
& & & & & &
= T ∙ "#/% U ∙ "*/% 2"-./ /%
0 23 = T ∙ "#/% U ∙ "*/% 2"-./ /%
0
Balance de H Balance de H
& & & &
W 4 = X ∙ "#/% ∙ "*/% 20 W 4 = X ∙ "#/% ∙ "*/% 20

Con NO3- como FN Con NO3- como FN

Balance de C Balance de C
& & & & & &
1 = "#/% "*/% "-./ /%
1 = "#/% "*/% "-./ /%

Balance de N Balance de N
& &
= S ∙ "#/% = S ∙ "#/%
Balance de O Balance de O
& & & & & &
3 = T ∙ "#/% U ∙ "*/% 2"-./ /%
0 23 3 = T ∙ "#/% U ∙ "*/% 2"-./ /%
0
Balance de H Balance de H
& & & &
W = X ∙ "#/% ∙ "*/% 20 W = X ∙ "#/% ∙ "*/% 20

Observemos que en todas las reacciones microbianas con base al balance de carbono:

& & &

1 = "#/% "*/% "-./ /%

Establece que por cada 1mol-C el substrato será distribuido para cubrir la generación de biomasa
& & &
("#/% ), la formación de producto ("*/% ) y la generación de energía a partir de la respiración ("-./ /%
).

Dos relaciones estequiométricas que tienen un efecto directo en el metabolismo microbiano en

los medios de cultivo durante las biorreacciones son la relación carbono nitrógeno (C/N) y la relación
carbono fosforo (C/P). La relación C/N entre la FCE y la FN utilizadas en el medio de cultivo, orienta
que vía tiene una mayor preponderancia en el metabolismo. Si la relación C/N en el medio de cultivo
se encuentra en valores cercanos a la relación C/N de la biomasa las reacciones anabólicas son
predominantes. Por el contrario si la relación C/N en el medio de cultivo esta muy por encima de la
relación C/N de la biomasa, entonces las reacciones catabólicas son predominantes. De esta manera
podemos escribir:
 C C C
8 : ⇒ valores cercanos 8 : ∴ predomina anabolismo ≈ 5 ≤ 8 : ≤ 8
N Z=<,['\ N _[\`a+a N Z=<,['\

C C C
8 : ⇒ valores mayores 8 : ∴ predomina catabolismo ≈ 8 : > 8
N Z=<,['\ N _[\`a+a N Z=<,['\

La Tabla 1.4.2 muestra la composición elemental de biomasa para diferentes especies de

microorganismos.

Tabla 1.4.1 Composición elemental diferentes microorganismos

Microorganismo Composición elemental C
8 :
N _[\`a+a
Klebsiella aerogenes CH1.83O0.46N0.19 5.26
Candida utilis CH1.75O0.43N0.22 4.54
Saccharomyces cerevisiae CH1.82O0.58N0.16 6.25
Escherichia coli CH1.94O0.52N0.25P0.025 4.00
Pseudomonas fluorescens CH1.93O0.55N0.25P0.021 4.00
Aerobacter aerogenes CH1.83O0.55N0.26P0.024 3.84
Penicillium chrysogemun CH1.64O0.52N0.16 6.25
Aspergillus niger CH1.72O0.55N0.17 5.88

Las principales FN utilizadas en el diseño de medios de cultivo simples son las sales nitrogenadas
como el cloruro de amonio (NH4Cl) y el nitrato de sodio (NaNO3).

En lo referente a la relación (C/P) esta tiene un impacto tanto en la estructura celular a nivel de
membrana asociado a los fosfolípidos, pero aún más importante en la obtención de energía a través de
la formación de moléculas de adenosina trifosfato o ATP. Con base al promedio en la composición de
fósforo en la biomasa de diversos microorganismos, como en el contenido en el ATP, un valor
adecuado de la relación (C/P) estará entre 3 y 4. Las principales fuentes de fósforo (FP) utilizadas para
el diseño de medios de cultivo son las sales de los fosfato de potasio (fosfato monobásico de potasio
KH2PO4, fosfato dibásico de potasio K2HPO4, fosfato tribásico de potasio K3PO4) las cuales al
presentar tres constantes de disociación (pKa1= ; pKa2= ; pKa3= ) pueden utilizarse para amortiguar el
pH del medio de cultivo en su diseño mediante la ecuación de Henderson-Hasselbach.

mn2 o
i = iOa + j kl7
m no

Donde los tres equilibrios de disociación del ácido fosfórico son:

 ! 2
p 1 ⇄ +
m 2o
donde i = iOal + j kl7
m 1 o

2 ! 2
pp ⇄ +
m 2 o
donde i = iOa + j kl7
m 2o

2 ! 21
ppp ⇄ +
m 21 o
donde i = iOa1 + j kl7
m 2 o