BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

Taller membrana celular

UNIVERSIDAD EL BOSQUE
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICA FARMACÉUTICA

Juan Avila - Julián Parra - Nicolle Gregory- Diego Prieto

10-7. A classic paper studied the behavior of lipids in the two monolayers of a membrane by labeling
individual molecules with nitroxide groups, which are stable free radicals (Figure Q10-2). These
spin-labeled lipids can be detected by electron spin-resonance (ESR) spectroscopy, technique that
does not harm living cells. Spin-labeled lipids are introduced into small lipid vesicles which are then
fused with cells, thereby transferring the labeled lipids into the plasma membrane. The two
spinlabeled phospholipids shown in Figure Q10-2 were incorporated into intact human red cell
membranes in this way. To determine whether they were introduced equally into the two monolayers
of the bilayer, ascorbic acid (vitamin C), which is a water-soluble reducing agent that does not cross
membranes, was added to the medium to destroy any nitroxide radicals exposed on the outside of the
cell. The ESR signal was followed as a function of time in the presence and absence of ascorbic acid
as indicated in Figure Q10-3A and B.

A. Ignoring for the moment the difference in extent of loss of ESR signal, offer an explanation for
why phospholipid 1 (Figure Q10-3A) reacts faster with ascorbate than does phospholipid 2 (Figure
Q10-3B). Note that phospholipid 1 reaches a plateau in about 15 minutes, whereas phospholipid 2
takes almost an hour.

RTA.) Lo primero que se debe resaltar en la Figura Q10-2 es la posición que tiene el radical nitróxido
en los fosfolípidos los cuales para el fosfolípido 1 se encuentran en la parte superior circular o cabeza
y para el fosfolípido 2 está unido a su cuerpo o cadena.
Para el fosfolípido 1 que se encuentre en esta posición le permite al radical nitróxido que se encuentre
en contacto directo con el exterior de la membrana celular donde se encuentra el ácido ascórbico
(vitamina C) que es un agente reductor soluble en agua que no atraviesa las membranas lo que implica
que estos reaccionen directamente, es este caso se utiliza este reductor ya que se degrada en un
intervalo de media hora para sí obtener un resultado de degradación cercano a 100%, como se observa
en la Figura Q10-3 se degrada por completo obteniendo un 0% después de media hora, además de esto
la degradación se da de manera mas rapida, caso contrario sucede con el fosfolípido 2 el cual debido a
su posición, este se encuentra más alejado de la membrana celular, es decir más al interior de la
membrana lo que impide que este tenga contacto con el ácido ascórbico lo que genera que el radical
nitróxido se reduzca más lentamente ya que al adicionar este ácido se pierde la señal y hay una
disminución de nitróxido pero esta no es completa debido a que el ácido solo llega hasta la primera
monocapa, como se observa en la Figura Q10-3 B en el intervalo de tres horas solo se degrada la
mitad del radical.

B. To investigate the difference in extent of loss of ESR signal with the two phospholipids, the
experiments were repeated using red cell ghosts that had been resealed to make them impermeable to
ascorbate (Figure Q10-3C and D). Resealed red cell ghosts are missing all of their cytoplasm but have
an intact plasma membrane. In these experiments the loss of ESR signal for both phospholipids were
negligible in the absence of ascorbate and reached a plateau at 50% in the presence of ascorbate. What
do you suppose might account for the difference in extent of loss of ESR signal in experiments with
red cell ghosts (Figure Q10-3C and D) versus those with normal red cells (Figure Q10-3A and B)?

RTA.) Es necesario observar el grado de pérdida de la señal de VSG y este es el mismo en los
glóbulos rojos fantasma resellados en presencia y ausencia de ascorbato, pero es diferente en los
glóbulos rojos. Este análisis indica que el reactivo en el citoplasma de los glóbulos rojos está
infinitamente reducido (no está presente en los fantasmas de glóbulos rojos), al igual que el ascorbato,
este reactivo citoplasmático puede reducir los fosfolípidos más expuestos (1) pero no los menos
expuestos (2), por esta razón es que en los glóbulos rojos, el fosfolípido 2 es estable sin ácido
ascórbico; en presencia de ascorbato, los fosfolípidos marcados con espín en la monocapa externa se
reducen, lo que resulta una pérdida de la mitad de la señal de ESR. Por otro lado, en ausencia de
ascorbato, el fosfolípido 1 es inestable en los glóbulos rojos debido a que los fosfolípidos en la
monocapa citoplasmática están expuestos a agentes reductores citoplasmáticos, que destruyen la mitad
de la señal de ESR, después de agregar ácido ascórbico, los fosfolípidos marcados en la monocapa
externa también se reducen, lo que resulta igual en la pérdida de la señal de ESR que resta.

C. Were the spin-labeled phospholipids introduced equally into the two monolayers of the red cell
membrane?

RTA.) Se indica en la figura 10-3 que los fosfolípidos marcados se introducen igualmente en las dos
monocapas de la membrana plasmática de eritrocitos, en la cual se observa que en un 50% el
fosfolípido 2 es sensible al ascorbato, lo cual nos indica que la mitad de los marcadores están
presentes en la monocapa exterior, y el que es insensible al ascorbato se da también en un 50%, esto
nos indica que la mitad está presente en la monocapa citoplasmática. De esta misma manera, de forma
similar, el fosfolípido 1 tiene una sensibilidad del 50% a los agentes reductores citoplasmáticos y una
sensibilidad del 50% al ascorbato, lo que nos indica una distribución de manera uniforme entre el
citoplasma y la monocapa externa.

REFERENCIAS

- Membranas y transporte | Lecciones de biología | Ciencia | Khan Academy. Khan Academy.

(2019). Retrieved 27 September 2021, from
https://es.khanacademy.org/science/biology/membranes-and-transport.
- Cooper, G. (2020). Cell Membranes. Ncbi.nlm.nih.gov. Retrieved 27 September 2021, from
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK9928/.
- Structure of the plasma membrane (article) | Khan Academy. Khan Academy. (2019).
Retrieved 27 September 2021, from
https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/cell-structure-and-function/plasma-membra
nes/a/structure-of-the-plasma-membrane.
- cell membrane | Definition, Function, & Structure. Encyclopedia Britannica. (2020). Retrieved
27 September 2021, from https://www.britannica.com/science/cell-membrane.