Práctica 6.

Determinación de ¿Deseas hacer una

fosfatasa alcalina
SALGADO BALANDRAN ALEJANDRO determinación de
No hagas
GRUPO: 422-2 fosfatasa alcalina en No
nada
Fecha: 23 de septiembre de 2022 suero usando la técnica
espectrofotométrica?
Si

¿Tienes
los materiales Continúa con el ¿Conoces
Consíguelos No Sí No Informate
necesarios? procedimiento el tema?

Muestra biológica: suero,

Espectrofotómetro, Kit
para la determinación de
fosfatasa alcalina,
Material necesario para la
toma de muestra
sanguínea, Tubos de
tapón rojo, Gradilla para
tubos de ensayo, Micro
tubos, Gradilla para tubos
microtubos, Pipetas y
micropipetas, Puntillas y
Plumón indeleble
Las fosfatasas son enzimas que catalizan
Sí
la hidrólisis de los ésteres del ácido
fosfórico. En funciónde los valores pH a
que logran su actividad óptima, se
distinguen dos tipos de fosfatasas:
¿Conoces la
Conócelo fosfatasaácida y fosfatasa alcalina.
reacción química y No
toxicidad?
Las elevaciones moderadas de fosfatasa
alcalina pueden ocurrir en diferentes
Forma/estado : Líquido
condiciones que no involucran al hígado o
Sí Color : Amarillento.
los huesos, como:
Olor : Inodoro.
la enfermedad de Hodgkin
pH : ? 10,1
Falla congestiva del corazón
Empieza Inflamabilidad (sólido, gas) :
Colitis ulcerosa
No inflamable
Enteritis regional
No se dispone de suficiente
Infecciones bacterianas intraabdominales
información

Las ventajas de este método incluyen

PRINCIPIO DEL MÉTODO: La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza excelente linealidad, alta sensibilidad y
la tranferencia del grupo fosfato desde el p-nitrofenilfosfato cortotiempo de incubación.
(pNPP) al 2-amino-2-methyl-1-propanol liberando p-nitrofenol y
fosfato, la velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado
fotométricamente,es proporcional a la concentración catalítica
de fosfatasa alcalina en lamuestra ensayada

REACTIVOS: R
1Tampón2-Amino-2-metil-1-propanolZinc
sulfatoMagnesio
acetatoN-ácidohidroxietiletilenediaminotriacetico(EDTA)
R 2Substrato p-Nitrofenilfosfato (pNPP) 10 mmol/L

PREPARACIÓN: Reactivo de trabajo Terminar

(RT):Mezclar: 1 vol. de (R2) Substrato + 4
vol. (R1) Tampón. Estabilidad: 21 días a
2-8ºC o 5 días a temperatura ambiente

INTERFERENCIAS: El fluoruro, oxalato, citrato y EDTA

inhiben la actividad de la fosfatasa alcalina, porlo que no
MATERIAL ADICIONAL: Espectrofotómetro deben ser utilizados como anticoagulantes. La hemólisis
o analizador para lecturas a 405 nm.- Baño interfiere debido a la elevada concentración de fosfatasa
termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC ( alcalina enlos hematies 1,2. Se han descrito varias drogas y
0,1ºC)- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.- otras substancias que interfierenen la determinación de la
Equipamiento habitual de laboratorio fosfatasa alcalina

PROCEDIMIENTO: 1. Condiciones del ensayo:Longitud de onda:
405 nm, Cubeta: 1 cm paso de luz, Temperatura constante: 25ºC /
30ºC / 37ºC. 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua
destilada o aire. 3. Pipetear en una cubeta:RT (mL) 1,0 Muestra (L)
20. 4. Mezclar, incubar 1 minuto. 5. Leer la absorbancia (A) inicial de
la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia
cada minuto durante 3 minutos. 6. Calcular el promedio de la
diferencia de absorbancia por minuto (A/min)
CONTROL DE CALIDAD: Es conveniente analizar junto con las
muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y
Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se
encuentran fuera del rango de tolerancia, se deberevisar el
instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe
disponer su propio Control de Calidad y establecercorrecciones en
el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias