Microbiología Grupo 2 Año 2022-1, No 4 , Mayo 23 de Año 2022.
Universidad Tecnológica de Pereira
Actividad antifúngica y antimicrobiana del extracto de
las hojas de Guadua angustifolia evaluado con el hongo
del pan tajado y un inóculo de Escherichia coli
Antifungal and antimicrobial activity of Guadua angustifolia leaf extract evaluated with sliced
bread fungus and Escherichia coli inoculum
Manuela García Arango, José Alejandro Grisales Lopez
manuela.garcia2@utp.edu.co - a.grisales@utp.edu.co
Abstract— Given the need to find solutions for the control of
pests and diseases in crops, the search for alternatives is opened,
such as the use of plant extracts, essential oils and secondary
metabolites present in plants, which constitute an alternative to
combat the negative effect of some phytopathogenic
microorganisms [1].
Briefly, in this practice the antifungal and antimicrobial activity
of Guadua angustifolia leaves was evaluated, an extract that was
obtained by macerating with distilled water, which was
subsequently heated in a water bath for 5 min. This was done in
order to evaluate how much inhibitory power this natural extract
has against the fungus that was obtained from sliced ​bread and
sown in Potato Dextrose Agar (PDA) medium and the
Escherichia coli inoculum present in Mueller Hinton Agar.
Therefore, the bamboo leaf extract that was prepared lacks
antioxidant compounds with antifungal and antimicrobial
activity.
Index Terms—inhibitory activity, agar, bamboo leaves, extract.
Resumen—Ante la necesidad de encontrar soluciones para el
control de plagas y enfermedades en cultivos, se abre la búsqueda
de alternativas como el uso de extractos vegetales, aceites
esenciales y metabolitos secundarios presentes en las plantas, los
cuales constituyen una alternativa para combatir el efecto
negativo de algunos microorganismos fitopatógenos [1].
En pocas palabras, en esta práctica se evaluó la actividad
antifúngica y antimicrobiana de las hojas Guadua angustifolia,
extracto que se obtuvo por medio de un macerado con agua
destilada, que posteriormente se calentó a baño a maría por 5
min. Esto se realizó con el fin de evaluar qué tanto poder
inhibitorio tiene este extracto natural frente al hongo que se
obtuvo del pan tajado y sembrado en un medio Agar Papa
Dextrosa (PDA) y al inóculo de Escherichia coli presente en Agar
Mueller Hinton. Por lo tanto el extracto de las hojas de bambú
que se preparó carece de compuestos antioxidantes con actividad
antifúngica y antimicrobiana.
Palabras claves—actividad inhibitoria, agar, hojas bambú,
extracto.
I. INTRODUCCION
El proceso coevolutivo planta-hongo ha permitido el
desarrollo de un sistema de defensa complejo y variado que
abarca compuestos estructurales y compuestos inducidos por
factores adversos, sin que haya una separación estricta entre
ambos grupos en cuanto a su estructura química. Los diversos
vegetales estudiados han mostrado que las propiedades
antifúngicas están extendidas y que existen factores ecológicos
1
que influyen cualitativa y cuantitativamente en su producción.
Hasta ahora se conocen muy pocos de los mecanismos de
acción de los compuestos antimicrobianos. No se descarta la
posibilidad de que a mediano o largo plazo se puedan
desarrollar fungicidas comerciales basados en productos
naturales y con estabilidad en el mercado tanto para uso en
Medicina, Medicina Veterinaria y Fitopatología [2].
La Guadua angustifolia es una gramínea gigante
perteneciente al género bambú, el cual es endémico de
América, esta comprende cerca de 30 especies. Es considerado
el 3 bambú más grande del mundo llegando a medir hasta 30
metros, con diámetro de culmo entre 1 y 22 cm. En Colombia
es la especie endémica más importante por sus amplios usos
industriales [3].
En los países orientales se han encontrado múltiples usos
para el bambú, entre ellos está el hecho de que a partir de las
hojas de este se han aislado y caracterizado compuestos con
actividad antioxidante denominados AOB (antioxidant of
bamboo).Los principales componentes funcionales en los
AOB son los flavonoides, las lactonas y los ácidos fenólicos
[4].
Por lo tanto el objetivo principal es comprobar la actividad
antifúngica del extracto de las hojas de Guadua angustifolia a
través de la inhibición del crecimiento radial de los hongos
fitopatógenos presentes en el pan tajado de uso comercial. Por
otro lado, también está en determinar la actividad
antimicrobiana evaluando el efecto inhibitorio en un medio de
cultivo con un inóculo de Escherichia coli.
II. METODOS
A. Actividad antifúngica
Inicialmente se preparó en un matraz de Erlenmeyer una
solución entre la mezcla de 10 g de pan tajado comercial y 90
mL de agua peptonada (10-1). Hecho que se realizó durante la
práctica de laboratorio de microbiología en el bloque 16C de
la Universidad Tecnológica de Pereira el día 25 de abril de
2022. Seguidamente, se realizó la técnica de diluciones
seriadas donde se extrajo 1 mL del Erlenmeyer (10-1) y se
virtio en 9 mL de agua peptonada contenida en un primer
tubo de ensayo y se agitó hasta conseguir una suspensión
homogénea (10-2). Luego, se extrajo 1 mL de la primera
dilución y se agregó a un segundo tubo de ensayo con 9 mL de
agua peptonada (10-3). Se repitió el mismo procedimiento
hasta obtener en un tercer tubo de ensayo una dilución de 10-4.
Además, se tomó una muestra por duplicado de 0.1 mL de los
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tubos 10-3 y 10-4, de los cuales se sembró en 20 mL de un crecimiento y el porcentaje de inhibición micelial con la
medio de cultivo contenido en la caja de Petri. siguiente ecuación:
Inmediatamente se agitó la mezcla en forma de ocho y se dejó
solidificar para luego ser incubados a 35 ºC durante 24 horas. % 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 =
⊘ 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑚𝑖𝑐𝑒𝑙𝑖𝑎𝑙 * 100
(1)
⊘ 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜
El día 2 de mayo de 2022 luego del proceso de incubación,
se observó a nivel macroscópico un crecimiento notable de la
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑐𝑖ó𝑛 = 100% 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜
cepa en las cuatro cajas de Petri que se habían sembrado por
duplicado con las diluciones iniciales de 10-3 y 10-4 (fig. 1).
Como también se extrajo con una cinta adhesiva una
pequeña muestra del control negativo la cual se le añadió unas
gotas de azul de metileno para luego ser observado a nivel
microscópico.

B. Actividad antimicrobiana por difusión en placa

La caja Petri con 20 mL de Agar Mueller Hinton contiene
un inóculo de Escherichia coli ya solidificado. Luego se
perforó cinco pozos a los que se le adiciono 2 mL de agua (1),
vinagre (2), 1:1 agua:extracto de bambú (3), extracto de hojas
de bambú (4) y el pozo (5) como control positivo para la
actividad microbiana (fig. 3).
Seguidamente se llevó a la incubadora de marca Mermmet
durante 24 horas a una temperatura 37 ºC. Transcurridos 7
días, se evaluó el diámetro del halo de inhibición en mm.
pasando por el centro del pozo de cada muestra.

Fig. 1. Diluciones por duplicado. Caja de Petri de la cual se extrajo las tres
muestras a10-4 .

A continuación se eligió la caja de Petri con cepa de la

dilución a10-4 y se le extrajo tres muestras de 6x6 mm. La
primera cepa se sembró en 20 mL de Agar Papa Dextrosa
(PDA) como control negativo (A). La segunda cepa se sembró
en 15 mL de PDA disuelto con 5 mL antifúngico como control
positivo (B). La tercera cepa se sembró en 15 mL de PDA
disuelto en 5 mL de extracto de las hojas de bambú como
ensayo (C). Además, la muestra se sembró con el micelio
estando en contacto directo con la superficie del medio de
cultivo preparado anteriormente (fig. 2).
Es necesario recalcar que dicho extracto se preparó
previamente con 50 g de hojas de bambú maceradas en 60 mL
de agua destilada y se le aplicó calor por 5 minutos en baño
maría.
Fig. 3. Distribución de las sustancias a evaluar. (1) agua. (2) vinagre. (3) 1:1
agua:extracto de las hojas de bambú. (4) extracto hojas de bambú. (5) control
positivo.

Fig. 2. Micelio sembrado en el centro de las cajas de Petri. (A) control
negativo. (B) control positivo. (C) ensayo.
Pasados 7 días de inocular la cepa de los hongos
fitopatógenos, se midió el diámetro del hongo en cada una de
las placas y posterior a ello se determinó el porcentaje de
III. RESULTADOS
A. Actividad antifúngica
El hongo contenido en la caja de Petri como control negativo
(A) se le midió un diámetro aproximado de 65 mm y con este
valor de referencia se obtuvo para el control positivo un 92.3
% de crecimiento y un 7.7% de inhibición. Por otro lado, la
caja de Petri con el extracto de las hojas de bambú (C),
presentó un crecimiento micelial de 55 mm de diámetro,
dando como resultado un 84.6 % de crecimiento y un 15.4 %
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de inhibición respecto al control negativo (fig. 4).
Fig. 4. Crecimiento micelial al evaluar la actividad antifúngica. Control negativo (A). Control positivo (B). Ensayo (C).
En la figura 6 se observo a nivel microscópico la formación
de hifas y esporas teñidas de color azul de la muestra obtenida
del hongo contenido en la caja de Petri como control negativo
(A).
Fig. 5. Tinción de hifas y esporas obtenidos del control negativo (A) bajo
observación microscópica.
B. Actividad antimicrobiana
La única sustancia con actividad inhibitoria es el vinagre (2),
presentando un halo de 11 mm de diámetro, mientras que los
pozos 2 y 3 que contienen el extracto de la hoja de bambú, no
presentó actividad inhibitoria sobre el inóculo de la
Escherichia coli en el Agar Mueller Hinton (fig. 6).
3
Fig. 6. Distribución de las sustancias a evaluar. (1) agua. (2) vinagre. (3) 1:1
agua:extracto de las hojas de bambú. (4) extracto hojas de bambú. (5) control
positivo.
IV. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Las plantas tienen la capacidad de sintetizar una gran
diversidad de metabolitos secundarios relacionados con
diferentes mecanismos de defensa, entre los que se encuentran
compuestos químicos como terpenos, fenoles, compuestos
nitrogenados como alcaloides y compuestos azufrados,
muchos de estos con propiedades antimicrobianas. Estos
metabolitos tienen una función importante en la protección
ante depredadores, microorganismos patógenos y herbívoros,
así como diversos tipos de estrés abiótico como la exposición
a los rayos UV) [5][6].
Con lo anterior se analiza que los metabolitos secundarios
de las hojas de bambú no contienen los compuestos químicos
necesarios para que actúen como antifúngico, por el contrario,
el hongo se propagó con facilidad por la superficie del medio
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con un 84.6% de crecimiento y un 15.4% de inhibición,
valores que permitió determinar la inactividad del extracto de
las hojas de bambú [7].
Otra razón por la cual el extracto no presentó actividad
inhibitoria, fue el método de extracción que se realizó en dicha
práctica, ya que esto es un factor de gran importancia que
influye directamente en la obtención de los metabolitos
secundarios de las plantas. De manera que no se logró
comprobar la presencia de dichos compuestos, ya que se
realizó solo una extracción y por un método simple.
Dicho lo anterior, no quiere decir que los extractos de las
hojas de bambú no tengan actividad antifúngica y
antimicrobiana, ya que hay estudios que demuestran que hay
métodos más complejos para la extracción de los compuestos
antioxidantes de las hojas de bambú y en especial del género
nativo más importante de Colombia y América tropical la
Guadua angustifolia [8]. Como también Amanda G. demostró
que el vinagre de la Guadua angustifolia tiene gran potencial
para el desarrollo de formulaciones con actividad
antimicrobiana [9].
reversed-phase high performance liquid chromatography with ultraviolet
diode array detection. J Chromatogr A. 2005;1065(2):177-85.
[5] Cowan, M.M. 1999. Plant products as antimicrobial agents. Clinical
microbiology reviews, 12(4): 564-582.
[6] Ávalos-Garcia, A.; Carril, E.P.U. 2009. Metabolismo secundario de
plantas. Reduca (Biología). 2(3): 119-145.
[7] Marquez, R de la Rosa, C. Mercado, A. 2007. Actividad antifúngica del
extracto total en etanol de las hojas frescas de pedilanthus tithymaloides.
Scientia et Technica. Mayo. Nº 33.
[8] Valencia M, Durango S, Pinilos J. F. Extracción de fracciones con
actividad antioxidante en hojas de Guadua angustifolia Kunth. Revista
Cubana de plantas medicinales. 2011; 16(4)364-373
[9] Mejía Gallón, Amanda Inés, Cadavid Torres, Elizabeth, & Gallardo
Cabrera, Cecilia. (2011). Actividad antiséptica de vinagre de Guadua
angustifolia Kunth. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 16(3),
244-252. Recuperado en 23 de mayo de 2022, de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1028-4796201100
0300004&lng=es&tlng=es.
[10] Mesa, V., Marin, P., Ocampo, O., Calle, J., & Monsalve, Z. (2019).
Fungicidas a partir de extractos vegetales: una alternativa en el manejo
integrado de hongos fitopatógenos. redalyc.
https://www.redalyc.org/journal/864/86458941001/html/

V. CONCLUSIONES
Para evaluar la actividad inhibitoria de los extractos
vegetales es necesario realizar diferentes técnicas más
complejas y utilizar diferentes microorganismos para la
evaluar la actividad inhibidora, como también determinar si el
extracto tiene propiedades antifúngicas o microbianas.
También se concluye que debido a la falta de experimentos
con el mismo extracto, no se logró determinar exactamente
qué tanto poder antioxidante tienen las hojas de bambú.
Por otro lado, el desarrollo de fungicidas a partir de
extractos vegetales y evaluados contra hongos fitopatógenos
son un paso inicial al desarrollo de las alternativas
tecnológicas para el uso de bioproductos disponibles a partir
de plantas. Estos potenciales productos pueden retardar la
reproducción de microorganismos indeseables, y sería un
método realista y ecológicamente sólido para la protección de
los cultivos transitorios o temporales, lo que permitiría
sustituir con éxito a los agroquímicos de síntesis, sin las
restricciones de uso que distingue a los productos sintéticos
[10].

REFERENCIAS
[1] Villa M, A., Pérez-Leal, R., Morales-Morales, H. A., Basurto-Sotelo, M.,
Soto-Parra, J. M., & Martínez-Escudero, E. (2014). Situación actual en el
control de Fusarium spp. y evaluación de la actividad antifúngica de
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https://doi.org/10.15446/acag.v64n2.43358
[2] Montes B. R. 2009. Diversidad de compuestos químicos producidos por
las plantas contra hongos fitopatógenos. Revista Mexicana de Micología,
29, 73-82.
[3] Moreno M., Luís Edgar, Osorio, Lina Rocio, Trujillo, Efraín E. Estudio
de las características físicas de haces de fibra de Guadua Angustifolia.
Scientia Et Technica [en linea]. 2007, XIII(34), 613-618[fecha de
Consulta 21 de Mayo de 2022]. ISSN: 0122-1701. Disponible en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=84934104
[4] Zhang Y, Bao BL, Lu BY, Ren YP, Tie XW. Determination of flavone
C-glucosides in antioxidant of bamboo leaves (AOB) fortified foods by