Facultad de Medicina Humana Universidad Nacional Federico Villarreal 2008

Actividad Antimicrobiana del Aceite Esencial de “Hierba Luisa” Cymbopogon Citratus Frente a Vancomicina Contra Staphylococcus Aureus
CABRERA CHRISTIAN*, CAMINO HENRY*, CAMPOS EVELYN*, CANALES SERGIO*

* Estudiante de Medicina Humana - UNFV

RESUMEN

Se determinó la actividad antimicrobiana del aceite esencial de “Hierba Luisa” Cymbopogon citratus, planta usada en la medicina tradicional para aliviar diferentes infecciones bacterianas tales como las que causan enfermedades cutáneas, mediante la técnica de disco difusión contra una cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923, comparando dicha actividad con la vancomicina, fármaco de primera elección para el tratamiento de infecciones causadas por dicho microorganismo. El aceite esencial se extrajo por el método de destilación por arrastre de vapor de agua. La actividad antimicrobiana se determinó mediante la medida del diámetro de los halos de inhibición tanto del aceite esencial como de la vancomicina, y siguiendo las escalas de Durafford y del NCCLS respectivamente, según las cuales este aceite mostró una sensibilidad límite para la cepa de Staphylococcus aureus en comparación con la vancomicina que mostró una marcada sensibilidad.

Palabras

Claves:

Actividad

Antimicrobiana,

Aceite

Esencial,

Hierba

Luisa,

Vancomicina, Staphylococcus aureus.

ABSTRACT

The antimicrobial activity of the essential oil of “Luisa grass” Cymbopogon citratus, a plant used in the Peruvian traditional medicine in order to alleviate microbial infections how skin diseases, was determinated by the aggar-well difussion assay against Staphylococcus aureus ATCC 25923, comparing this activity with the vancomycin, drug

habiéndose llegado a obtener resultados satisfactorios en muchos de ellos. Cymbopogon citratus. pero fue con el paso de los años que se empezó a descubrir que estas plantas. Key words: Antimicrobial activity. aromáticas en su En el Perú. quedan aún muchas plantas que no han sido ampliamente Es recién en los últimos años. investigadas. Las plantas medicinales. according to which. Luisa grass. que serían las que les darían las propiedades curativas tan apreciadas que tienen. siendo utilizado como calmante. INTRODUCCIÓN desarrollar diferentes grados de resistencia a los quimioterápicos. poseían principios activos. sin que todas éstas mayoría. al igual que en otros países del mundo. y se descubrió también que son los aceites esenciales una forma de concentrar estos investigación con el fin de determinar sus propiedades tanto farmacológicas como los principios activos. The antimicrobial activity was determined by the measurement of the diameter of the of inhibition of the essential oil and the vancomycin. Sin embargo. this oil showed a limit sensivity for Staphylococcus aureus in comparison with the vancomycin that showed a noticeable sensitivity. antiinflamatorio. que es usada por la población rural con la creencia de que posee grandes propiedades medicinales para aliviar diferentes afecciones. Staphylococcus aureus. contra el dolor de estómago y afecciones orientados especialmente a sus efectos antimicrobianos. tengan un estudio científico de sus propiedades. Essential Oil. The essential oil was extracted by the method of distillation by drag water steam. Vancomycin. por la necesidad creciente de encontrar armas de lucha más eficaces contra que muchos a microorganismos empiezan .of first election. de ahí que se vengan generando variados trabajos de compuestos por una gran variedad de sustancias químicas con diferentes acciones biológicas. principios activos en su forma más pura. se en sigue las usando ampliamente comunidades rurales una enorme cantidad de plantas medicinales. usadas para el tratamiento de diversas afecciones son conocidas desde épocas muy antiguas. following the scales of Durafford and NCCLS respectively. como es el caso de la Hierba Lusia. que más se están desarrollando investigaciones sobre estos aceites esenciales.

Taxonómica de la Hierba Luisa Las muestras utilizadas de hierba luisa “Cymbopogon citratus” fueron Con el trabajo se busca poder adquiridas en un puesto de plantas medicinales del Mercado de Central de Lima. en la medicina a una dosis terapéutica. La identificación taxonómica fue realizada según el Sistema de Clasificación de . mientras que en otros trabajos se menciona que el aceite esencial actividad muchos positivos de esta planta presenta frente a antimicrobiana MATERIALES Y MÉTODOS microorganismos como el gram Recolección e Identificación Staphylococcus aureus y mas aún resulta un halo de inhibición considerable. efectividad contra este microorganismo. ya que gran parte de la población no usa por los los fármacos elevados recomendados. Esto debido a que se tienen distintas posiciones.0%) como principal componente y principio activo de esta planta elección recomendados para el tratamiento de patologías causadas por esta bacteria. Por lo tanto es importante determinar el efecto antibacteriano del Cymbopogon citratus (Hierba Luisa) en comparación con la vancomicina una para poder racional. costos que estos representan o por la desconfianza generalizada de la El presente trabajo de investigación demostrará la capacidad población a los efectos adversos que presenta la farmacoterapia antimicrobiana del aceite esencial de Hierba luisa (Cymbopogon citratus) a una determinada concentración óptima. y se compara su acción frente a la vancomicina. ya que por ejemplo para algunos el Staphylococcus aureus establecer utilización segura y eficaz de este fitofármaco y dar inicio a futuras investigaciones con el propósito de que en el futuro se trate de introducir. además de la creciente farmacorresistencia a vancomicina. Dichas muestras fueron proponerse y difundir el uso de esta planta como una alternativa natural al tratamiento de este agente microbiano causante de un alto porcentaje de enfermedades cutáneas en nuestro país. bajo alguna forma. Cabe mencionar que dentro de la composición química de su aceite esencial se encuentra el Citral (70. ya que todavía existe duda en la comunidad científica de su convencional.84 y 77. frente Staphylococcus aureus ATCC 25923.cutáneas en general. resultó presenta sensibilidad nula a la Hierba Luisa. uno de los fármacos de conservadas envueltas en papel Kraft a temperatura ambiente hasta el día de elaboración del aceite esencial.

en los cuales se aplicó un disco de vancomicina (en el caso del grupo control) o un disco impregnado de aceite esencial de Cepa de Staphylococcus Aureus La cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25329 fue proporcionada por el Naval Medical Research Center hierba luisa (en el caso del grupo intervención) en cada uno de los dos compartimientos de placa tabicada con agar Mueller – Hinton. pertenecientes a una marca comercial (Biolabtest. cerrado y a temperatura aleatorización. El microorganismo fue mantenido viable en el Laboratorio de Microbiología de la facultad de Medicina Humana de la UNFV hasta la realización de la Para la aplicación de los discos impregnados de aceite esencial de hierba luisa se utilizaron discos de papel Whatman Nº 1 de 6 mm de diámetro. las placas Farmacognosia de la UNMSM por el método de destilación por arrastre de vapor de agua a partir de muestras frescas de salvia. luisa Evaluación de la Actividad aplicados sobre los medios de cultivo inoculados. los cultivos de condiciones y siguiendo los mismos . Dicho aceite fue conservado en un frasco de vidrio oscuro. Perú). fueron divididas en dos grupos de 18 placas tabicadas. el cual estuvo contenido en 36 placas Petri tabicadas estériles.Cronquist (1988) en los laboratorios del Herbario San Marcos del Museo de Historia Natural Javier Prado de la UNMSM. La aplicación de los discos de vancomicina de 1 g. de esta manera se garantizó que dicha cepa pertenecía a la especie y género a investigarse.Lima. incubándose a 37º C por 24 Antimicrobiana Para determinar la actividad horas. ambiente. El cultivo fue inoculado sobre la superficie del medio haciendo uso de hisopos mediante estériles. (NAMRID) . en un volumen de aproximadamente 20 ml por placa. fue realizada en las mismas antimicrobiana tanto del aceite esencial de hierba luisa como de la vancomicina se hizo uso del método de disco difusión. Posteriormente. El medio de cultivo fue agar Mueller- Extracción del Aceite Esencial de Hierba Luisa El aceite esencial de hierba luisa fue extraído en el Laboratorio de Hinton. los cuales fueron impregnados el mismo día de la experimentación. Staphylococcus aureus fueron estandarizados por turbidimetría con el tubo Nº 1 de la escala de Mc Farland (3 x 108 microorganismos por mL). y investigación. Para ello. con 5 esencial de hierba L de aceite puro.

límite de 11 a 12 mm y sensible si La actividad antimicrobiana se fue igual o superior a 13 mm.8 p-valor Media de la diferencia 95% IC** 32. si fue inferior o igual a 10 mm.0001 10. = +++) si fue igual o superior a 20 mm. permitió la confección de tablas y gráficos. Para el aceite esencial de hierba luisa se siguió la escala de Durafford para los aceites esenciales: nula (-) si fue inferior o igual a 8 mm.0.S.4 ± 1.5 mm con una desviación estándar de 0.pasos que los discos impregnados con aceite esencial de hierba luisa.9 mm. vancomicina de 1ug fue de 20. Mientras que para la vancomicina se siguieron las Recolección y Análisis de Datos La recolección de datos fue realizada mediante el uso de una hoja maestra. sensibilidad límite (sensible = +) de 9 a 14 mm. Tabla 1. el cual a su vez.34 [10.8 **IC= Intervalo de confianza de la diferencia RESULTADOS El diámetro promedio de los halos de El aceite esencial de hierba luisa y la vancomicina mostraron efecto inhibición en las 18 placas Petri tabicadas tratadas con aceite esencial de hierba luisa al 100 % fue 9. La creación de la base de datos fue realizada haciendo uso del software Microsoft Excel XP.69 (70) p<0. medidas propuestas por el NCCLS: resistente. consideró en función del diámetro del halo de inhibición.6] Hierba Luisa *gl= Grado de libertad 36 9.4 mm con una desviación estándar de 1. sensibilidad media (muy sensible = ++) de 15 a 19 mm y sumamente sensible (S. Diferencias estadísticas según T-student “t” n Mean student ( gl )* Vancomicina 36 20. Este efecto se evidenció mediante la formación del halo de inhibición alrededor del disco de sensibilidad en el agar cultivado con Staphylococcus aureus.2 – 11.8 .5 ± 0. Mientras que el promedio en las 18 placas tabicadas tratadas con antimicrobiano al destruir y/o inhibir el desarrollo bacteriano. El análisis estadístico realizado fue la prueba T de Student haciendo uso del software SPSS 15.

Vancomicina RESISTENTE NCCLS LÍMITE SENSIBLE Total 0 0 36 36 . mostraron halos de inhibición sensible. Tabulación de Durafford para el aceite esencial de Hierba luisa. Tabulación de NCCLS para la Vancomicina.05 y con 70 grados de libertad. Count Tto. según la escala de inhibición de Durafford para los aceites esenciales. (Tabla 3) Tabla 2. según la escala de inhibición de NCCLS para la vancomicina. se obtuvo un valor-t de 32. (Tabla 2) inhibición. aureus y tratadas con aceite esencial de hierba luisa se observó que todas presentaron halos de sensibilidad límite a la hierba luisa.mm.69 y un valor-p menor a 0. Las placas Petri tratadas con aceite esencial de hierba luisa mostraron un diámetro promedio de los halos de inhibición menor que las placas Y de las 18 placas tabicadas cultivadas con S. Count Tto Hierba Luisa SENSIBILIDAD NULA Durafford 0 36 0 0 36 SENSIBILIDAD LÍMITE SENSIBILIDAD MEDIA SUMAMENTE SENSIBLE Total Tabla 3.0001.0001) (Tabla 1). con un nivel de 0. Al aplicar la prueba “t”-student a los promedios de los halos de De las 18 placas tabicadas cultivadas con S. aureus y tratadas con vancomicina se evidenció que todas tratadas con vancomicina (p<0.

así como los periodos de florecimiento y cosecha en el proceso de la (Concentración Mínima Inhibitoria) de hierba luisa de 0.DISCUSIÓN Respecto a las concentraciones del aceite. Es sabido que el proceso de Hammer. denominado recolección de la muestra vegetal es muy importante para asegurar la Antimicrobial Activity of Essential Oils and Other Plant Extracts. sin recolección. entendiéndose que a una reducida concentración de aceite posee ya actividad antimicrobiana. un estudio realizado por K. aureus se Cymbopogon citratus (DC) Staff. aureus resaltando que este CMI fue el menor de los demás CMIs hallados para las demás considera como sumamente sensible con un halo de inhibición de 20 mm. En el estudio de Morales et al se indica la importancia del hábitat natural de la planta. notoriamente en el resultado final.06 %. resultando ser menor a las MICs de las demás plantas estudiadas. de donde se extraerá la sustancia deseada. la actividad antimicrobiana del aceite esencial de hierba luisa sobre S. et all. aureus además de otras bacterias. Por su parte. en donde se empleó una batería de microorganismos controles integrada por 8 bacteria determinándose un CMI (Concentración Mínima Inhibitoria) de 0. A. Cabe resaltar que el modo y medio por el cual se conservará y transportará la planta y las cepas desde su recolección hasta el lugar de procesamiento. influye embargo en el presente trabajo se empleó aceite esencial al 100% lográndose también un esperado efecto antibacteriano.3 mg/dml para E. determinó una MIC viabilidad de los efectos benéficos. . talvez por las diferencias de los aceites que se obtuvieron en diferentes laboratorios. indicó una gran actividad antimicrobiana sobre E. et all. se concluye que Cymbopogon citratus posee una buena actividad antimicrobiana contra S. publicó en la Revista Cubana de Plantas Medicinales el artículo Actividad Antimicrobiana del Aceite Esencial y Crema de Algunas Plantas Aromáticas de L. en Study Antimicrobial Activities On Medicinal Herbs Of Thai Food Ingredients. y de acuerdo a ello se debe elegir el método por el cual se obtendrá dicha sustancia para su posterior estudio. Guerra Ordoñez. este resultado fue similar al que se obtuvo En Medicina Tradicional en el Perú: Actividad Antimicrobiana in vitro de los Aceites Esenciales Extraídos de en nuestro estudio. en especial el efecto antimicrobiano que posee la planta. Alzamora. M. este resultado es mucho mayor al obtenido en este estudio. aureus. Es importante conocer la estructura de la planta. et all. Preliminary Así Of también.

aureus resultando ser no muy efectivo contra esta cepa. Bioactivity in plants: the link between phytochemistry and medicine. se habla del aceite esencial de hierba luisa que a una concentración 0.5 mm que según la escala de Durafford para los aceites esenciales representa una sensibilidad límite.4 mm que según la escala del NCCLS para la vancomicina representa sensibilidad. Continuando con el papel que juega la concentración en la intensidad de la actividad antimicrobiana. resultado vancomicina es 20. determinó un CMI para el extracto fluido de hierba luisa de 15. tal resultado contrasta con los datos que se obtuvieron en esta BIBLIOGRAFIA Y REFERENCIAS 1. K. M. Hamburger. Además. obtener Finalmente una un entre algunas cepas de Cymbopogon ejercen una gran influencia en la actividad antibacteriana del aceite estudio titulado Efeito Inibitório de Óleos Esenciáis Sobre O Crescimento de Bactérias E Fungos se muestra que el aceite esencial de hierba luisa a una concentración de 50 % mostró un halo de inhibición de 1. Además.23 mg/ml sobre E.bacterias.. sin embargo. Esta acción se atribuye al citral. obtenidos en nuestro estudio. . Hostettmann. particularmente al geraniol (alfa citral) y al nerol (beta citral). 3864–3874. se determinó que el diámetro promedio de los halos de inhibición del aceite de Hierba Luisa es 9. en este estudio se comenta que diferencias genéticas investigación sensibilidad al límite. ya que se obtuvo un CMI de elevado valor en comparación este con las demás fue Mientras que el diámetro promedio de los halos de inhibición de la bacterias. La participación del citral ya ha sido comentado en diversos estudios en donde concluyen y afirman la bondad antimicrobiana de este compuesto. considerado como sensibilidad nula. aureus. en Medical Plants of de World.1 cm. 1991.. resultando ser mayor cuantitativa y cualitativamente en comparación a los resultados esencial. Antimicrobiana de Plantas que Crecen en Cuba. Phytochemistry 30. En Actividad CONCLUSIONES Los resultados de este estudio nos permitieron demostrar que el aceite esencial de Hierba Luisa posee una actividad antimicrobiana menor a la vancomicina contra Staphylococcus aureus. Bacillus subtilis y Escheriachiae coli.05 % posee actividad contra E.

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