UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD CIENCIAS
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA EN ACUICULTURA

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DEL

EXTRACTO METANÓLICO

DE HOJAS DE “PÁJARO BOBO” TESSARIA INTEGRIFOLIA Y “CHAMICO” DATURA

STRAMONIUM DE INTERÉS ACUÍCOLA.

TESIS PARA OPTAR EL TITULO DE BIOLOGO ACUICULTOR

TESISTAS:
BACH. CANO ARMACTA, WENDY T.
BACH. SAUCEDO ROJAS, MEIBY D.

ASESOR:
DR. AZAÑERO DIAZ, CARLOS
 NUEVO CHIMBOTE – PERÚ
2020

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD CIENCIAS
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA EN ACUICULTURA

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DEL

EXTRACTO METANÓLICO DE HOJAS DE “PÁJARO BOBO” TESSARIA
INTEGRIFOLIA Y “CHAMICO” DATURA STRAMONIUM DE INTERÉS ACUÍCOLA.

TESIS PARA OPTAR EL TITULO DE BIOLOGO ACUICULTOR

TESISTAS:
BACH. CANO ARMACTA, WENDY T.
BACH. SAUCEDO ROJAS, MEIBY D.

APROBADO POR EL ASESOR:

------------------------------------------
Dr. Azañero Díaz, Carlos
 NUEVO CHIMBOTE – PERÚ
2020

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD CIENCIAS
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA EN ACUICULTURA

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DEL

EXTRACTO METANÓLICO DE HOJAS DE “PÁJARO BOBO” TESSARIA
INTEGRIFOLIA Y “CHAMICO” DATURA STRAMONIUM DE INTERÉS ACUÍCOLA.

TESIS PARA OPTAR EL TITULO DE BIOLOGO ACUICULTOR

TESISTAS:
BACH. CANO ARMACTA, WENDY T.
BACH, SAUCEDO ROJAS, MEIBY D.

APROBADO POR EL JURADO CALIFICADOR INTEGRADO POR LOS

SEÑORES MIENBROS

_________________________________
Dr. Rómulo Loayza Aguilar
Presidente

__________________________________ ________________________________
 Dr. Carlos Alberto Azañero Díaz Blgo. Mblgo. Eterio Muñoz
Integrante del Jurado Integrante del Jurado

DEDICATORIA

Dedico este trabajo principalmente a Dios, por haberme

dado la vida y permitirme haber llegado hasta este
momento tan importante de mi vida profesional.
Saucedo Rojas, Meiby D.
A mis Padres Carlos Saucedo y Sonia Rojas, por ser los
pilares más importantes de mi vida, por sus enseñanzas,
por su apoyo incondicional, por creer en mí, por
demostrarme siempre su amor infinito y dedicación. A
mis hermanas Marilyn y Tayra por su incondicional. A
Edinson Bravo por estar en mis malos y buenos
momentos, por su amor y apoyo incondicional.

A Dios por cuidarme y guiarme, en todo momento de mi

vida.
Cano Armacta, Wendy T.
A mi madre Evangelina Armacta Inca, por su amor y
apoyo siempre y mis hermanos; por alegrar mis días y
ser el motivo de salir adelante.

A mi Tío Eliot Coc Aguilar, por ser el padre que no tuve y

siempre creer en mí, y apoyarme incondicionalmente.

A mi Tía Jesica Toribio Encarnación y abuelita Ayde

Aguilar León; por sus consejos, amor y apoyo en todo
momento.
 AGRADECIMIENTO

El presente informe de Tesis de Pregrado es un esfuerzo en el cual, directa o

indirectamente, participaron varias personas leyendo, opinando, corrigiendo, teniendo
paciencia, dando ánimos, acompañando en los momentos de crisis y en los momentos de
felicidad.

Agradecemos al Dr. Carlos Azañero Díaz, nuestro asesor por haber confiado en
nosotras, por impartirnos los conocimientos, por su infinita paciencia y apoyo
incondicional para la realización de la presente tesis de investigación, así como, por
sus consejos, tiempo y dedicación.

A todos los docentes de la Escuela Académico Profesional de Biología en Acuicultura

por contribuir en nuestra formación académica en nuestra etapa universitaria. A los
miembros del Jurado, por sus apreciaciones, el apoyo y el ánimo que nos brindaron
para la corrección y finalización del presente informe.

A nuestros queridos compañeros, que nos poyaron y nos permitieron entrar en sus
vidas durante todos estos años de convivencia dentro y fuera del salón de clase. Por
último y no menos importante, agradecer a los futuros compañeros que leerán este
informe, esperamos les sea de su agrado.

Los autores.
 INDICE

RESUMEN.........................................................................................................................................10
ABSTRACT.........................................................................................................................................10
I. INTRODUCCION..........................................................................................................................1
II. MATERIALES Y METODOS...........................................................................................................6
2.1. Localización del área de trabajo............................................................................................6
2.2. Muestra y recolección del” pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura
stramonium....................................................................................................................................6
2.3. Lavado, secado, molienda y tamización de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico”
Datura stramonium........................................................................................................................7
2.7. Activación de los cultivos de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. Y Pseudomas sp.. .10
2.8. Determinación de la actividad bacteriana.............................................................................11
2.9. Preparación de los controles positivos y negativos...............................................................12
2.10. Determinación de la concentración Mínima Inhibitoria (CMI)...........................................12
2.11. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB).........................................13
2.12. Evaluación cualitativa de la actividad antibacteriana ........................................................14
III. RESULTADOS............................................................................................................................15
IV. DISCUSIONES............................................................................................................................24
V. CONCLUSIONES........................................................................................................................25
VI. RECOMENDACIONES................................................................................................................25
VII. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS..................................................................................................26
VIII. ANEXOS....................................................................................................................................28
 INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Escala valorativa propuesta por Rios et al.,(2009) para evaluar la actividad
antibacteriana....................................................................................................................14

ANEXOS

Anexo 1. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) de diferentes concentraciones de

extractos metanolitos de hojas de planta “pájaro bobo” Tessaria integrifolia contra bacterias
acuícolas...........................................................................................................................................30
Anexo 2. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) de diferentes concentraciones de
extractos metanolitos de hojas de planta “chamico” Datura stramonium contra bacterias acuícol31
Anexo 3. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) in vitro de controles positivo y negativo
frente a bacterias acuícola................................................................................................................32
Anexo 4. Escala de valores obtenidos según los autores, formando como referencia a Ríos et al.,
2009, en la actividad antibacteriana in vitro mostrada por las diferentes concentraciones de extractos
metanolicos de hojas de planta contra bacterias acuícola.................................................................32
Anexo 5. Preparación de medio A) Frasco de Agar B) Frasco de TSA C) Pesar el contenido
D) Aforar con agua destilada E) Mezclar los agares con el agua destilada F) Colocamos en la
cocina eléctrica G) Distribución de 3.5ml en cada frasco H)Resultado de la distribución I) Los
frascos son llevados al autoclave......................................................................................................33
Anexo 6. Preparacion del polvo seco A) Muestra de las hojas de Tessaria integrifolia y Datura
stramonium B) La muestra es colocada a una estufa a 37 °C C) Con la ayuda de un motero se
procede a moler D) Resultado del proceso anterior......................................................................34
Anexo 7. Materiales de la preparación de CMI A) Mechero B) Pastilla de Tetraciclina C) Patrón
de turbidez 0,5 Marck Farland D) Vortex E) Medio TSA ( Agar Tripticasa soya ) F) Puntas
esterilizadas G) Extracto metanolico de Chamico “Datura stramonium” H) Tetraciclina diluida en
agua destilada. ………………………………………………………………………………...34

Anexo 8. Pasos realizados para CMI. A y B) Extraemos el extracto vegetal C) Agregamos el medio
TSA a los micropocillos más inoculo de la bacteria Vibrio sp.
D)resultados………………………………………………………………………………. 35

INDICE DE FIGURAS

Fig. 1. Recolección de la muestra.....................................................................................................6

Fig. 2. Preparación del extracto metanòlico A) Filtración con gasa estéril B) Resultado del
filtrado................................................................................................................................................7
Fig. 3. Diagrama de flujo para la preparación de los extractos de las hojas de planta.......................8
Fig. 4. Determinación de la concentración de los extractos A) Obtención de cristales B)
Resultado de cristales con metanol en tubos Eppendorf.....................................................................9
Fig. 5. Preparación de discos A) Discos de papel filtro Whatman Nº2 B) Secado a
temperatura ambiente de los discos inoculados con los extractos.....................................................10
Fig. 6. Activación de bacterias........................................................................................................10
Fig. 7. Diagrama de flujo para la determinación de la actividad antibacteriana de los extractos.....11
Fig. 8. Preparación de control positivo............................................................................................12
Fig. 9. Determinación de la concentración Mínima Inhibitoria (CMI) A) Extracto de la hoja
Datura stramoniun en el vortex B) Agregando solución bacteriana (Vibrio sp.)............................13
Fig. 10. UHADFHCIEBCFS...........................................................................................................13
Fig. 11. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “chamico”
Datura stramonium en diferentes concentraciones frente a bacterias acuícolas...............................16
Fig. 12.Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “pájaro bobo”
Tessaria integrifolia en diferentes concentraciones frente a bacterias acuícolas..............................16
Fig. 13. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “chamico”
Datura stramonium y “pájaro bobo” Tessaria integrifolia frente a bacterias acuícolas.................17
Fig. 14. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del control negativo (extracto metanolico)
y control positivo (antibiótico comercial) contra bacterias acuícolas...............................................17
Fig. 15. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas en controles........................................18
Fig. 16. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto
de metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra
Pseudomona sp...............................................................................................................................18
Fig. 17.Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra
Pseudomonas sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia........................................................................................................................................19
Fig. 18. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto
de metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra Vibrio
sp......................................................................................................................................................19
Fig. 19. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra Vibriop
sp. A) Medicion del halo B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia B) En “chamico” Datura
stramonium......................................................................................................................................20
Fig. 20. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto
de metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra
Aeromonas sp...................................................................................................................................20
Fig. 21. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra
Aeromonas sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia
.........................................................................................................................................................21
Fig. 22. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto
de metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra
Edwarsiella sp..................................................................................................................................21
Fig. 23. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra
Edwarsiella sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia.
.........................................................................................................................................................22
 RESUMEN

El objetivo fue evaluar la actividad antibacteriana de diferentes concentraciones del

extracto metanólico de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura
stramonium. Se utilizó cultivo de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y Pseudomonas
sp.

PALABRAS CLAVES: Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. , Pseudomonas sp., Vibrio sp,
Tessaria integrifolia, Datura stramonium,
ABSTRACT
 I. INTRODUCCION

La acuicultura es una actividad humana, cuyo objetivo principal es la producción de especies acuáticas
bajo condiciones controladas o semi-controladas (Barnabé, 1996). La industria de la acuicultura sigue
creciendo a mayor ritmo que otros sectores importantes de la producción de alimentos (FAO, 2018).
Asi mismo, satisface la creciente demanda de alimentos acuáticos, y es el sector productivo de más
rápido crecimiento dentro de la producción pesquera mundial (FAO, 2014). En el Perú es posible
dividir la acuicultura en dos grupos: la que se realiza en aguas marinas (maricultura) y la que se
efectúa en aguas dulces (acuicultura continental) (Belaunde & Reto, 2014).

Coy et al. (1998) concluyen que las pérdidas económicas en la piscicultura son generados por
enfermedades que son ocasionadas por las inapropiadas prácticas de manejo, como: no disponer de
buena cantidad y calidad de aguas; no desinfectar con cal viva al iniciar un nuevo cultivo; incorrecta
dosificacion de insumos y alimetos; no realizar un tratamiento preventivo al momento de la siembra;
no colocar filtros a la entrada y salida del agua del estanque; mala siembran según la densidad o
número de peces por cada metro cuadrado de espejo de agua; la excesiva manipulación de los peces en
jornadas de muestreo, captura y transporte; no lavar y no desinfectar todos los equipos utilizados en
las jornadas de pesca. Así mismo, Ellis (1999) , Osman et al. (2009) sostienen que el sector acuícola es
afectado por enfermedades infecciosas producidas por bacterias, virus y parásitos. Las enfermedades
infecciosas son las principales causas de mortalidad de las especies acuáticas, sobre todo las generadas
por las bacterias como Vibrio, Pseudomonas y Aeromona ( Austin et al.,1987 ; Marquez et al.,1982).

Gómez et al. (2000) mencionan que dentro de la población bacteriana que componen los ecosistemas
acuícolas, la familia Vibrionaceae representa el grupo más importante por su patogenicidad y
abundancia, siendo la vibriosis una de las enfermedades limitantes de la acuicultura marina. En tal
sentido , la crianza de langostinos existe una enfermedad causada por una infección por bacterias del
género Vibrio, más comúnmente por Vibrio parahaemolyticus, Vibrio fischeri, Vibrio vulnificus y
Vibrio harveyi, que pueden encontrarse en la microbiota intestinal de los animales marinos, o como
patógeno primario y oportunista de éstos, provocando en muchas ocasiones una alta mortalidad (Joshi
et al., 2014). Asi mismo, Rodríguez et al. (2001) comentan que existen una gran variedad de especies
bacterianas causantes de enfermedades en los peces; entre las cuales destacan, Aeromonas hydrophila
y Edwardsiella tarda, consideradas entre los agentes etiológicos más importantes. Estas bacterias
oportunistas hacen parte de la microbiota normal de peces y otros animales acuáticos (Reichelt et al.,
1984). Por otro lado, en la producción de concha de abanico Argopecten purpuratus se detectó la

1
presencia de bacterias en las gónadas de los reproductores, observando el predominio de cepas
pertenecientes a los géneros Acinetobacter, Pseudomonas, Vibrio y Moraxella (Riquelme et al. 1994).
Tambien, se han detectado bacterias predominantemente Gram negativas en la hemolinfa de
ejemplares adultos de A. purpuratus, comportándose como microbiota normal (García et al., 2002).

Cabello, (2006) menciona que el uso inadecuado de grandes cantidades de antibióticos como
tratamiento preventivo en la industria acuícola, puede traer consigo efectos potencialmente dañinos
para la salud humana, animal y medio ambiente, concordando con García, (2018) que atribuye que el
uso de antibióticos en la acuicultura produce un impacto negativo en el medio ambiente, además de
generar patógenos resistentes a los antibióticos. Lo que, además, genera residuos químicos que
deterioran la calidad y seguridad de los cultivos por lo que su uso fue severamente restringido, lo que
ha generado la necesidad de desarrollar nuevos procedimientos para el control de patógenos (Gopa et
al.,2005). Muchas investigaciones se han encaminado al desarrollo de técnicas preventivas (Peeters et
al.,1999); como, el potencial uso de plantas medicinales en acuicultura (Osman et al., 2009). En este
sentido, García (2018) menciona que, para minimizar los efectos de estos quimioterápicos sobre los
peces cultivados, el medio ambiente y los consumidores, se han evaluado otras terapias alternativas,
entre las que se encuentra el uso de extractos de plantas con capacidad antimicrobiana.

Riquera et al., (2005) concluyeron mediante métodos in vitro, que los extractos de plantas inhiben el
crecimiento bacteriano en mayor o menor grado; en tal sentido, los estudios de actividad
antimicrobiana de productos naturales, no se han estandarizado como en el caso de estudios clínicos,
por tanto sus resultados son difíciles de comparar, tomando en cuenta que emplean metodologías de
análisis que incluyen diferentes solventes y concentraciones de las cepas microbianas (Nimsha, 2002).

Sivaram et al .(2004 ) concluyen que la aplicación de productos provenientes de plantas en los peces
contribuyen al fortalecimiento del sistema inmunológico, además de mostrar efectos antiestresantes,
antitoxigénicos, antiparasitarios y antimicrobianos. Liscano et al. (2008) mencionan que los extractos
vegetales se han definido como un concentrado obtenido por tratamiento de productos vegetales con
solventes apropiados, tales como el agua, etanol, metanol o éter, de elementos solubles, constituidos
por una mezcla de principios activos y sustancias inertes que se producen de la totalidad o de partes de
una planta fresca o seca. Hoy en día se puede encontrar una amplia gama de productos de origen
vegetal con efecto ya sea bactericida o bacteriostático que sirven para controlar el crecimiento de
diversos microorganismos patógenos, debido a que presentan compuestos o metabolitos que inhiben
su crecimiento ( Syahidah et al., 2015). Si bien es cierto, La flora peruana ofrece grandes posibilidades
para el descubrimiento de nuevos compuestos con actividad antibacteriana (Brack,1999).Asimismo,

2
existe información en el campo acuícola sobre la utilización de plantas medicinales, hierbas, algas
marinas, y otros compuestos naturales ya que ayudan a controlar el problema de enfermedades y a
mejorar el estado inmunitario de los peces y crustáceos (Syahidah et al., 2015).

Marín et al.(2007) trabajaron con el extracto metanólico de las flores de Tessaria integrifolia sobre la
actividad antileishmaniasica, con las concentraciones de 100, 50 y 25 mg/ml, concluyendo su mayor
efectividad con la concentración de 100 mg/ml logrando obtener la inmovilidad y falta de desarrollo
sobre la actividad antilieshmaniasica. Así mismo, Quintana & Ramírez (2018) evaluaron la acción del
extracto hidroalcohólico de hojas de Tessaria integrifolia sobre el crecimiento de Staphylococcus
aureus, con las concentraciones de 50, 25 y 12,5 mg/ml observando halos de inhibición de 17,6; 14,7;
10,6 mm. concluyendo la inhibición de dicha bacteria. Mientras que Rodriguez & Chico (2012),
trabajaron con el extracto metanólico de Datura stramonium para el control del efecto antifungico
sobre Asparagus officinalis “esparrago”, concluyendo que la concentración del 15 %, demostró ser un

efectivo controlador biológico de Fusarium oxysporum y Stemphylium vesicarium hongos patógenos

de Asparagus officinalis “espárrago”, inhibiendo el crecimiento del fitopatógeno mediante su
capacidad antifúngica; también Quintana et al. (2010), trabajaron con el extracto metanólico de
Datura stramonium para el control in vitro e in vivo de Ramularia cercosporelloides encontrando
inhibición del radio de la colonia de 33.70 ±2.36, 46.41±2.11, 56.35±2.28 y 75.69±2.7 para las
concentraciones de extracto 1.25, 2.50, 5.0, y 10% (v/v), respectivamente a las 96 hrs. encontrando
mayor inhibición a mayor concentración .Coronado ( 2011) demostró que la actividad antimicrobiana
del extracto de ajo mostró inhibición de 1 cm en la placa de Staphylococcus aureus, mientras que el
resto de los extractos no tuvieron algún efecto considerable, en cuanto a la toxicidad, los extractos
evaluados se ubican en la categoría de baja toxicidad en concentraciones de 5 mg/ml.

Pérez (2007) evaluó la actividad antimicrobiana de los extractos hexánico, clorofórmico y metanólico
de las hojas de Oedogonium capillare sobre Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis,
Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli, Vibrio cholerae, Salmonella typhi y Klebsiella
pneumoniae, siendo el extracto hexánico más activo a diferencia de los extractos de cloroformo y
metanol. Así mismo, Vásquez (2018) investigo la eficacia inhibitoria del extracto metanólico de
Plantago majot (llantén) y Clindamicina sobre colonias de Staphylcoccus aureus, demostrando que
Clindamicina presenta actividad inhibitoria sobre el cultivo; mientras que Navarro et al. (1996)
evaluaron 12 extractos metanólicos de plantas contra Staphylococcus. aureus, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa y Candida. albicans, resultando que los extractos de Eucalyptus globolus,
Punica granatum, Artemisia mexicana y Bocconia arbórea, poseen fuerte actividad antimicrobiana

3
contra los organismos probados. Thiem et lal.(2004) demostraron la actividad antimicrobiana del
extracto metanólico de Rubus chamaemorus en contra de bacterias Gram positivas y Gram negativa.

Según Pavlidis et al. (2010), las bacterias son causantes de las enfermedades más frecuentes en la
acuicultura marina y continental, donde en los últimos años se ha ido incrementando su incidencia. Por
ello, los organismos acuáticos en condiciones de cultivo pueden verse afectados por agentes
microbianos presentes en el medio acuático y cuando esto ocurre se emplean diversos productos para
controlar o tratarlos Hai (2015); pues, de ahí surge la idea de sustituir los antibióticos por sustancias
naturales como los extractos de plantas, que ayuden a impedir el crecimiento bacteriano Campoverde
(2015); de manera que, los agentes antibacterianos obtenidos de plantas superiores, están siendo usada
para el tratamiento de infecciones presentan una significativa potencia contra bacterias y hongos
patógenos (Yoshiki et al .,2004).

Las plantas medicinales están siendo utilizadas ya que presentan diferentes características, por
ejemplo, con capacidad inmunoestimulante, antimicrobiana, anti-estrés, estimulante del apetito entre
otros y por lo tanto pueden ser efectivos frente a diversas enfermedades (Hai, 2015). Pues, los
extractos vegetales no solo se han utilizado en el cultivo de crustáceos sino también en el cultivo de
peces (Prieto et al., 2005). Mientras que, García (2018) afirma que los extractos de plantas son una
fuente potencialmente útil de compuestos antimicrobianos que pueden inhibir el crecimiento de
determinadas bacterias y patógenos o bloquear la transcripción de los virus.

Debido a que el “pajar bobo” y “chamico” presentan principios antimicrobianos y no hay trabajos
sobre el uso del “pajar bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium en la inhibición
de Vibrio sp., Aeromonas sp., Edwardsiella sp. y Pseudomonas sp. , se pretende realizar este trabajo y
de esta manera contribuir a disminuir las mortalidades de organismos en cultivo.

El Perú es un país que se caracteriza por su gran riqueza en flora y fauna. Sin embargo, no siempre se
ha sabido aprovechar todas las bondades que nos brinda la naturaleza en beneficio de nosotros mismos
y del medio ambiente (Glomero,2005); pues, las plantas son fuente rica de metabolitos secundarios
con importante actividad biológica, demostrando que ejercen un papel protector contra la formación de
radicales libres (antioxidante) y desempeñan un papel beneficioso en el tratamiento de las
enfermedades (Tanaka et al.,2006).

La planta de Tessaria integrifolia es una de las especies de mayor anfitolerancia que crecen en los
bosques fluviales (Silva et al, 2018). Las hojas de Tessaria integrifolia son aprovechadas por sus
propiedades antibacterianas y antiinflamatorio (Sagástegui, A. 1995); pues, muestra un efecto positivo

4
como agente antimicrobiano, competitivo a muchas plantas con aplicaciones similares, Tanaka et al.
(2006). Se trata de una planta ampliamente utilizada con gran valor medicinal y económico Bruneton
(2001). Así mismo, el extracto acuoso de Datura stramonium tiene propiedades antibacterianas, Rubio
(2016); pues, es una planta de la familia de las solanáceas utilizada por sus propiedades antibacterianas
y medicinales (Glomero,2005).

Por los diversos principios y usos del “pajar bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura
stramonium, y demostrando la acción inhibitoria sobre microoganismos de importancia en acuicultura
como causantes de enfermedades bacterianas, este producto se podría probar aplicándolo en el medio
o alimento. Se plantea el siguiente problema de investigación: ¿Evaluar la actividad antibacteriana
de diferentes concentraciones del extracto metanólico de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia
y “chamico” Datura stramonium en Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y Pseudomonas sp. de
interés acuícola?

El objetivo general fue: Evaluar la actividad antibacteriana de diferentes concentraciones del extracto
metanólico de hojas de “pájaro bobo” Tessari. a integrifolia y “chamico” Datura stramonium de interés
acuícola; los objetivos específicos fueron: Determinar la mejor concentración (50, 25 y 12.5 mg/ml) del
extracto metanólico de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y hojas de “chamico” Datura
stramonium que causa la mayor inhibición del crecimiento bacteriano de Vibrio sp., Edwarsiella sp.,
Aeromonas sp. y Pseudomonas sp. ; Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y
Concentración Mínima Bactericida (CMB) del extracto metanolico de hojas de “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia sobre los cultivos de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y Pseudomonas sp. y
Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB) del
extracto metanolico de hojas de “chamico” Datura stramonium sobre los cultivos de Vibrio sp. ,
Edwarsiella sp. , Aeromonas sp. y Pseudomonas sp.

5
 II. MARCO TEORICO

Marco conceptual

2.1 Generalidades

Datura stramonium es una planta de la familia de las solanáceas, que puede encontrarse en
diversas zonas biográficas del mundo y que es utilizada desde la antiguedad por sus propiedades
medicinales. Dentro de la familia Solanaceae, el género Datura comprende 18 especies, la
mayoría de ellas herbáceas, distribuidas principalmente por las regiones tropicales y templadas
de América, desde donde fue introducida a Europa por los españoles en la segunda mitad del
siglo XVII.

2.2 Caracteristicas botanicas de Datura stramonium

La taxonomía de la planta planteada en 1988 por Cronquis y Aucasime, la caracteriza de la

siguiente manera.

División : Magnoliophyta
Clase : Magnoliopsida
Subclase : Asteridae
Orden : Solanales
Familia : Solanaceae
Género : Datura
Nombre científico : Datura stramonium "chamico"

2.3 Propiedades y usos de Datura stramonium

a) Propiedades químicas

Datura stramonium se caracteriza por la presencia de alcaloides del tropano. De estos, la atropina,
escopolamina y hiosciamina se han detectado en casi todos los órganos de la planta. Otros
alcaloides de las hojas incluyen apo y noratropina, hioscina, nor-hiosciamina, n-óxido de
6
 escopolamina, meteloidina y tigliodina; además se han identificado los fenil- propanoides ácidos
cafeíco, clorogénico, para-cumarico y ferúlico; los esteroles campesterol, daturalactona,
estigmasterol, estramonolide y beta-sitosterol y los flavonoides glucosidos, diglucdsidos,
rutinósidos y rutinósido-gluc6sidos de canferol y quercetin. De la semilla se extrae un aceite fijo en
el que se han identificado los triterpenos beta-amirina, 4-alfa-metil-colest-8-enol, citrostadienol,
cicloaternol, 24-metilenecicloartanol, 31-nor-cicloartenol, cicloendecadenol, gramisterol, lanost-8-
en-3- beta-ol, 24-metilene y 31-nor-lanost-8-en-3-beta-ol, lanosterol, lofenol, lupeol y obtusifoliol;
los esteroles campesterol, colest-7-enol, colesterol, 24-metilenecolesterol, 28-iso-fucosterol,
estigmasterol y beta-sitosterol y el flavonoide quercetin. En las partes aéreas se han identificado
además los alcaloides del tropano alfabelladonina, apo-escopolamina, 2-6-dihidroxi-tropano y
tropina; el alcaloide de quinolina skimianina; los sesquiterpenos capsidiol, 2-3-dihidroxi-
germacreno y 4- 9 hidroxi-lubimfn; los esteroides daturalactona I y daturalacturin A y B; las
cumarinas escopoietln y umbeiiferona y el bencenoide ácido trbpiccj.94 Otros alcaloides del
tropano detectados en la raíz incluyen apo-atropina, y N6xido de escopolamina, meteloidina, tro-
pina y 2-6-dihidroxi-tropano. En las flores se encuentran los fenilpropanoides beta-D-gluc6sidos de
1-fejruloilo y paracumaroilo y en el fruto los sesquiterpenos germacrenediol, lubimin y 3-
hidroxiludimin.

2.4 Tetraciclina

Es un antibiótico bacteriostático, derivado semisintético, caracterizado por su hidrosolubilidad.

Inhibe la síntesis proteica bacteriana y es eficaz frente a infecciones ocasionadas por Gram
positivos. Antibiótico de amplio espectro que muestran actividad frente a gran número de
bacterias gramnegativas y positivas, rickettsias, mycoplasmas, chlamidias así como protozoos
(Chopra,2001).

Bacterias de interés acuícola

2.4.1 Vibrio sp.,

De la familia Vibrionaceae, son bacterias Gram negativas, bacilos rectos o curvos de 0.5-0.3µm x
1.4-2.6µm, anaerobios facultativos y oxidasa positiva. Habita naturalmente en los ecosistemas
marinos y fluviales. En este último, poseen la capacidad de mantenerse virulentos y sin
multiplicarse. Es una bacteria dependiente del ion sodio, el cual estimula su crecimiento y
favorece la rapidez de este. No obstante, se ha demostrado que en algunos casos es posible la
sustitución de NaCl por KCl. Se ha registrado 65 especies, de las cuales 12 resultan patógenas

7
 para el ser humano. Entre las principales del género se tienen: V. cholerae, V. parahaemolyticus,
V. alginolyticus y V. vulnificus.

III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Localización del área de trabajo

El trabajo de tesis se realizó en el Laboratorio de Microbiología y Bioquímica del Departamento

Académico de Biología, Microbiología y Biotecnología de la Facultad de Ciencias en la Universidad
Nacional del Santa. Distrito Nuevo Chimbote, Provincia del Santa, Departamento Ancash.

3.2. Muestra y recolección del” pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium
El “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium fueron obtenidos del
humedal de Villa María, ubicado en la zona demarcatoria de los distritos de Chimbote y Nuevo
Chimbote, dentro de las coordenadas 9° 6´ Latitud Norte y 74° 34´ Latitud Este, en el kilómetro 421
de la Panamericana Norte.

La muestra fue de 2 kg respectivamente; con las siguientes características de inclusión: hojas

alternas, enteras, linear-lanceoladas, de color verde lustroso. Las hojas fueron colectadas en
diferentes puntos del humedal, las cuales serán transportadas en bolsas plásticas limpias al
Laboratorio de Microbiología y Bioquímica de la Universidad Nacional del Santa.

8
 Fig. 1. Recolección de la muestra

3.3. Lavado, secado, molienda y tamización de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico”
Datura stramonium

Las hojas fueron lavadas con chorros de agua y se enjuagada con agua destilada, colocándose sobre
papel Kraft en un lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego se llevaron a una estufa a una
temperatura de 40 °C, durante 48 horas (Quintana & Ramírez, 2018). Una vez secado el material
vegetal, se procedió a moler con la ayuda de un mortero, tamizándose el polvo obtenido utilizando
el tamiz N° 0,75 y se almaceno en placas Petri en un lugar sin humedad y luz directa hasta su
posterior utilización.

3.4. Preparación del extracto metanólico de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura
stramonium

Abanto & Castillo, (2011) se mezcló 10 g de polvo seco con 50 ml de solvente metanol, la mezcla se
realizara en un matraz estéril Pírex de 250 ml conteniendo una capsula magnética estéril, dicha
mezcla se homogenizara usando agitador magnético Thermolyne a 7 rpm por 30 minutos,
inmediatamente se filtró con una gasa estéril sobre un matraz estéril Pírex de 50 ml; posteriormente
el volumen del extracto recuperado se centrifugara a 3400 rpm por 30 minutos usando un
centrifugador angular Selecta de 10 000 rpm, y finalmente el sobrenadante será vertido en una placa
estéril Normax previamente pesado, para su secado a temperatura ambiente dentro de una cámara
axénica con el fin de separar el extracto del solvente.

9
 Fig. 2. Preparación del extracto metanòlico A) Filtración con gasa estéril B) Resultado del filtrado

10
Fig. 3. Diagrama de flujo para la preparación de los extractos de las hojas de planta.
3.5. Determinación de la concentración de los extractos metanolicos de “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia y “chamico” Datura stramonium

Un volumen de 10 ml de los filtrados de extracto metanólico de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia

y “chamico” Datura stramonium se vertieron en placas Petri de vidrio respectivamente para
someterlos a evaporación en estufa a 56°C por 24 horas hasta la obtención de cristales, los cuales
fueron pesados y suspendidos con 5 ml de metanol y obtener la concentración en mg.ml -1, los
mismos que fueron transferidos a tubos Eppendorf para su conservación hasta su uso (Rojas et al.,
2004).

Fig. 4. Determinación de la concentración de los extractos A) Obtención de cristales

B) Resultado de cristales con metanol en tubos Eppendorf.

3.6. Preparación de los discos con los extractos

A partir de las soluciones concentradas se tomaron 20µl y se vertieron sobre cada papel o disco de
papel filtro de manera equidistantes sobre una placa Petri estéril, se dejó secar a temperatura
ambiente hasta su uso (Rojas et al., 2004). Se usaron discos estériles de papel filtro Whatman N° 2
con un diámetro de 9 mm, las cuales se cargó con el extracto con una micropipeta de 100 ul Tomos;
posteriormente se colocaron en placas estériles para su secado a temperatura ambiente por 18 horas

11
 Fig. 5. Preparación de discos A) Discos de papel filtro Whatman Nº2 B)
Secado a temperatura ambiente de los discos inoculados con los extractos.

3.7. Activación de los cultivos de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. Y Pseudomas sp.
Los cultivos de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y Pseudomonas sp. , fueron
proporcionados por el Laboratorio de Microbiología y Bioquímica del Departamento Académico de
Biología, Microbiología y Biotecnología de la Universidad Nacional del Santa. (Quintana &
Ramírez 2018) estos cultivos serán activados sembrándolas en tubos con agar TSA y se incubaron
por 24 horas a 37 °C.

Fig. 6. Activación de bacterias.

3.8. Determinación de la actividad bacteriana

12
 La actividad antibacteriana se determinó mediante el Método de Kirby – Bauer o Método de
difusión de placas, en una cámara de flujo laminar Nuaire. Para lo cual se realizo la siembra en
superficie con hisopos de algodón estériles en las placas con agar Mueller Hinton a partir de las
suspensiones bacterianas (bacterias previamente activadas) comparadas con el estándar 0.5 del
Nefelometro. Después de 5 minutos de haber sido sembrados los cultivos en las placas, se colocarán
por triplicados discos cargados con cada concentración del extracto metanólico (Vásquez &
Mendoza 2018).

Fig. 7. Diagrama de flujo para la determinación de la actividad antibacteriana de los extractos.

13
3.9. Preparación de los controles positivos y negativos
Para los grupos controles se utilizó discos con antibiótico comercial, la tetraciclina como control
positivo y discos de papel filtro cargado del solvente como control negativo, los cuales serán
colocados en las placas con agar Mueller Hinton, sembradas con cada cultivo bacteriano,
posteriormente las placas serán incubadas a 37 °C durante 24 horas (Lizcano &Vergara 2008)

Fig. 8. Preparación de control positivo.

3.10. Determinación de la concentración Mínima Inhibitoria (CMI)

La concentración mínima inhibitoria se evaluó a los extractos que evidenciaron inhibición frente a
las bacterias utilizadas. Se realizó por el método de dilución en agar, en donde se incorporó el
extracto de planta inhibida en el medio agar BHI, el extracto fue añadido cuando el medio aún
estando líquido, la técnica fue realizada en microplacas de fondo plano de 96 pozos, en los cuales se
dispusieron diferentes volúmenes de solución de los extractos en cada pozo y se realizaron
diluciones con el medio de cultivo. Las concentraciones probadas fueron 1 mg/ml, 2 mg/ml, 3
mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 11mg/ml, 12 mg/ml y
13 mg/ml. En cada pozo se sembraron 1 µl de solución bacteriana (Vibrio sp.) a una concentración de
1.5X106 UFC/mL, comparado al tubo 0.5 en la escala de Macfarland. Se empleó como control
negativo Metanol y como control positivo tetraciclina en concentración de ….. Después de 24 horas
de incubación a 36 ºC las microplacas, se examinaron visualmente (Corzo,2012).

El punto final (Concentracion Mínima Inhibitoria) se considera la menos concentración de

compuesto frente a la cual el microorganismo ensayado no presenta desarrollo visible.

14
 Fig. 9. Determinación de la concentración Mínima Inhibitoria (CMI) A) Extracto de la hoja Datura stramoniun
en el vortex B) Agregando solución bacteriana (Vibrio sp.)

2.11. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB)

De cada uno de los pozos de la prueba anterior, que nos mostraron crecimiento visible, se tomaron
inóculos de …. µl y de …..µl y se colocaran en placas de agar Mueller Hinton (MH), para ser
diseminadas en toda la superficie de la placa, luego se secaran a temperatura ambiente por 15 a 20
minutos y se incubaran a 37 °C, las placas se leerán a las 24 horas (Rea ,2011). Por este método se
determinará la Concentración Mínima Bactericida (CMB), es decir la mínima concentración de
extracto metanolico que elimina las bacterias, no observando crecimiento en las placas

Fig. 10. UHADFHCIEBCFS

15
2.12. Evaluación cualitativa de la actividad antibacteriana
Después del periodo de incubación, se registró los diámetros de halo de inhibición usando un
vernier calibrador High impact Stainles Stel de 0 – 170 mm. Para la evaluación cualitativa de
la actividad antibacteriana se usó una escala valorativa por Rios et al ., (2009).

Para el tratamiento estadístico de los datos, se empleó el esquema de análisis de varianza

completamente al azar con análisis factorial p < 0.005 y se utilizó la Prueba de Duncan.

Tabla 1. Escala valorativa propuesta por Rios et al.,(2009) para evaluar la actividad antibacteriana

ESCALA DIAMETRO DE HALO DESCRIPCION DE ESCALA

(-) 0 mm Ninguna actividad antibacteriana

(1+) 1 – 5 mm Poca actividad antibacteriana

(2+) 6 – 8 mm Ligera actividad antibacteriana

(3+) 9 – 10 mm Mediana actividad antibacteriana

(4+) 11 – 18 mm Alta actividad antibacteriana

16
 IV. RESULTADOS

- Se recolectaron 2 especímenes de plantas “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura

stramonium, de las cuales solo “chamico” Datura stramonium presentaron actividad antimicrobiana
contra las bacterias empleadas.

- La figura 13, muestra la actividad antimicrobiana de diferentes concentraciones de extractos

metanolico en hojas de plantas “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium,
de las cuales se obtuvieron actividad antibacteriana con Vibrio sp.

- El mayor halo de inhibición registrada fue de 18 mm con el extracto metanolico de “chamico”

Datura stramonium a la concentración de 50 ug.disco -1 a Vibrio sp. ( Fig. 11 y Fig. 18).

- Los especímenes que no presentaron actividad antibacteriana fueron Pseudomona sp. (Fig. 16).

- La bacteria Vibrio sp. , resulto ser la más sensible a la actividad antimicrobiana de los extractos
metanolicos de las hojas de plantas probadas.

- La bacteria Aeromona sp. resulto más actividad bacteriana en “pájaro bobo” Tessaria integrifolia a
diferencia de “chamico” Datura stramonium, de igual manera ocurrió con la bacteria Edwarsiella sp.

- De todos los extractos que presentaron respuesta antibacteriana, el 25% se ubican en la escala (1+)
poca actividad antibacteriana, el 67% en la escala (2+) ligera actividad antibacteriana y 8% de alta
actividad antibacteriana (Tabla 1 y Anexo 4)

De los 72 extractos ensayados, 2 extractos (8%) inhibieron el crecimiento de las bacterias empleadas,
de las cuales presentan actividad antibacteriana a la concentración de 25 ug disco -1 y 25 ug disco -1
(Anexo 4)

La Concentración Mínima Inhibitorio (CMI) presento en 70 mg/ml y la Concentración Mínima

Bactericida (CMB) presento en 75 mg/ml.

17
 Fig. 11. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “chamico” Datura
stramonium en diferentes concentraciones frente a bacterias acuícolas.
18

16

18
16
7 7
14
5
12 6 6
10 5 7
8 6 6
5
6
4
2
0
Pseudomona Vibrio sp. Aeromonas sp. Edwarsiella sp.
sp.
Concentracion 12.5 ug.disco Concentracion 25 ug. Disco Concentracion 50 ug.disco

Fig. 12.Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “pájaro bobo”
Tessaria integrifolia en diferentes concentraciones frente a bacterias acuícolas.

7
6 6
7 7
5
6
7 7
5
7 6
6 5
5
4
3
2
1
7 13
0 6
Pseudomona sp. Vibrio sp. Aeromonas sp. Edwarsiella sp.
6 6
14
12 6 Concentracion 12.5 ug.disco Concentracion 25 ug. Disco
10 Concentracion 50 ug.disco
8 5 5
6
4
Fig. 13.2 Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del extracto metanolico de “chamico” Datura
0
stramonium y “pájaro
Extracto de "pa-bobo”Extracto
Tessaria
de integrifolia frente a bacterias acuícolas.
18 jaro bobo" Tes- "chamico" Datura
saria integrifolia stramonium

Pseudomnas sp. Vibrio sp. Aeromonas sp. Edwarsiella sp.

Fig. 14. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición del control negativo (extracto metanolico) y
control positivo (antibiótico comercial) contra bacterias acuícolas .

15
13
12
16
10
14
12
10
8 5 5 5 5
6
4
2
0
Pseudomonas Vibrio sp. Aeromonas sp. Edwarsiella sp.
sp.

CONTROL ( - ) CONTROL ( + )

Fig. 15. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas en controles

A) En Pseudomona sp. (control positivo) B) En Vibrio sp. (control positivo) C) En Aeromona sp.
(control positivo) D) En Edwarsiella sp. (control positivo) E) Control negativo

19
Actividad antibacteriana contra Pseudomona sp.

En la Figura 16 y Figura 17, muestra la actividad antibacteriana del extracto metanolico de

diferentes concentraciones de “chamico” Datura stramonium y “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia, donde ambos extractos metanolico no generaron sensibilidad al crecimiento de
Pseudomona sp,

Fig. 16. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto de
metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra Pseudomona
sp.
5 5
5 5
5 5
5
4
3
2
Fig. 17.Halos de inhibición en las pruebas 1
antibacterianas
de extractos metanolicos contra
0
Pseudomonas sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia.

Concentracio 12.5 ug. disco Concentracio 25 ug. disco Concentracio 50 ug. Disco

20
Actividad antibacteriana contra Vibrio sp.

En la Figura 18 y Figura 19, muestra la actividad antibacteriana del extracto metanolico de

diferentes concentraciones de “chamico” Datura stramonium y “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia“, donde el extracto metanolico de chamico” Datura stramonium de 12.5 ug. disco -1,
25 ug. disco -1
y 50 ug. disco -1
, genero sensibilidad al crecimiento de Vibrio sp., produciendo
un diámetro de halo promedio de 7 mm, 16 mm y 18 mm.

Fig. 18. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto de
metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra Vibrio sp.

18

16
6

18
16 6
14
12 7
10 6
8 Concentracio 12.5 ug.
6 disco
4
2 Concentracio 25 ug. disco
0
Concentracio 50 ug. Disco

21
Fig. 19. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra Vibriop sp.
A) Medicion del halo B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia B) En “chamico” Datura stramonium

Actividad antibacteriana contra Aeromonas sp.

En la Figura 20 y Figura 21,, muestra la actividad antibacteriana del extracto metanolico de

diferentes concentraciones de “chamico” Datura stramonium y “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia“, donde ambos extracto genero una ligera actividad bacteriana frente a Aeromonas
sp.

22
 Fig. 20. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto de
metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra Aeromonas sp

7 7

7 6
6.8
6.6
6.4 6
6.2 Concentracio 12.5 ug.
6 disco
5.8
5.6 Concentracio 25 ug. disco
5.4
Concentracio 50 ug. Disco

Fig. 21. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra
Aeromonas sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia

Actividad antibacteriana contra Edwarsiella sp.

23
En la Figura 22 y Figura 23,, muestra la actividad antibacteriana del extracto metanolico de
diferentes concentraciones de “chamico” Datura stramonium y “pájaro bobo” Tessaria
integrifolia“, donde ambos extracto genero una ligera actividad bacteriana frente a Edwarsiella
sp.

Fig. 22. Diámetro promedio (mm) de halos de inhibición de diferentes concentraciones de extracto de
metanol de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium contra Edwarsiella sp.

7 7

7
6
6.8
6.6
6.4 6
6.2
6
5.8
5.6
5.4
"pajaro bobo" Tessaria integrifo- "chamico" Datura stramonium
lia

Concentracio 12.5 ug. disco Concentracio 25 ug. disco Concentracio 50 ug. Disco

Fig. 23. Halos de inhibición en las pruebas antibacterianas de extractos metanolicos contra Edwarsiella
sp. A) En “chamico” Datura stramonium B) En “pájaro bobo” Tessaria integrifolia.

24
 V. DISCUSIONES

- El halo de inhibición del extracto metanolico de “chamico” Datura stramonium fue de 18 mm

frente a Vibrio sp., considerando este diámetro de alta actividad bacteriana según la escala valorativa
propuesta por (Rios et al.,2009); mientras que Torres (2014) reporto más actividad bacteriana con el
extracto etanolico de Luma chequen tuvo actividad con un halo de inhibición de 26 mm frente a
Escherichia coli, 24 mm frente a Klebsiella pneumoniae, 25 mm frente a Staphylococcus aureus y 25
mm de halo de inhibición frente a Staphylococcus epidermis,

- En tanto, García (2018), reportó la concentración mínima (CMI) de extractos que inhibieron
el crecimiento bacteriano, frente a Vibrio harveyi, con el extracto de ajo (Allium sativum) 3,13 mg ml;
extracto de calistemo (Callistemom citrinus) 50 mg ml; Mirto (Myrtus communis) 12,5 mg ml;
extracto de aceite de citronella (Cymbopogon citratus) 31,25 ul ml; extracto de aceite de aloysa
(Aloysia citriodora) 31,25 ug ml; extracto de aceite de árbol de té (Melaleuca alternifolia) 31,25 ul ;
extracto de aceite de clavo (Syzygium aromaticum) 7,81 ul ml; la segunda bacteria Aeromona.
hydrophila, con el extracto de ajo 6,25 mg ml; extracto de Calistemo 50 mg ml; extracto de Mirto 12,5

25
mg ml; extracto de aceite de citronella 62,5 ul ml y el extracto de aceite de clavo 31,25 ul ml, siendo la
bacteria A. hydrophila más sensible frente a V. harveyi, ya que el extracto de ajo y aceite de clavo
tienen los más bajos valores de CMI.

- Campoverde (2015) realizo infusiones de hierbaluisa “Aloysia triphilla” y orégano “Origanum

vulgare” para controlar el crecimiento de Vibrio sp en cultivos de camarones, obteniendo buenos
resultados con la disminución de las colonias verdes. Por otro lado, Sorroza et al (2017), realizaron
extractos de hierbaluisa y orégano demostrando efectos antimicrobianos frente a Vibrio sp.

- Del castillo et al (2017), reportaron que el extracto hexánico de Cucurbita moschata tuvo
actividad antibacteriana (CMI) a partir de 19,5 ug ml frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923
MSSA y frente a Escherichia coli a partir de 0,16 ug mL y también tuvo actividad bacteriana con el
extracto etanolico en E. coli a partir de 0,16 ug ml.

- En los últimos años el uso de extractos de plantas también se le vienen utilizando para
combatir enfermedades que aquejan al ser humano, como lo citan diversos autores, tales como; Cortes
(2005) que trabajo con diversas plantas en extractos etanolicos frente a E. coli y Staphylococcus
aureus con actividad antibacteriana obteniendo con ello buenos resultados contra enfermedades del
cáncer e infecciones de la zona de Tepatepec, Hidalgo, otro caso reportado es el de Escobar (2001)
que encontró que el extracto etanolico de Haematoxylon brasiletto que mostro actividad contra cepas
de E. coli, Clostridium perfringens y Vibrio cholerae. Por otro lado, Rodríguez et al (2017), realizaron
extractos de diversas plantas en interés clínico obteniendo mejores resultados con Taraxacum
officinale frente a Enterococcus faecium y Candida albicans.

En este proyecto se determinó la mejor concentración (50, 25 y 12.5 mg/ml) del extracto metanólico
de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y hojas de “chamico” Datura stramonium que causa la
mayor inhibición del crecimiento bacteriano de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y
Pseudomonas sp. ; de lo cual se determinó la mejor concentración con el extracto metanolico de
Chamico” Datura stramonium 50 mg/ml, obteniendo mayor halo de inhibición con 18 mm en Vibrio
sp., aceptando la hipótesis que menciona que la mejor concentración que causa la mayor inhibición
del crecimiento bacteriano es con 50 mg/ml del extracto metanólico de hojas de “pájaro bobo”
Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium en relación a las diferentes concentraciones.
Dicho resultado es respaldado por Quintana & Ramírez (2018) quienes evaluaron la acción del
extracto hidroalcohólico de hojas de Tessaria integrifolia sobre el crecimiento de Staphylococcus
aureus, con las concentraciones de 50, 25 y 12,5 mg/ml obteniendo con la concentración de 50 mg/ml

26
mayor halo de inhibición de 17.6 mm sobre dicha bacteria. En tal sentido, bajo lo referido
anteriormente y analizando estos resultados podemos diferir que mientras más alta sea la
concentración sea la que se trabajo ….

Aguilar et al. refieren que el extracto etanólico de “pirul o molle”, presentó la mayor inhibición sobre
C. gloeosporioides, afectando significativamente (P< 0.05) las variables crecimiento máximo y
velocidad de crecimiento radial (en un 60 % de reducción) del fitopatógeno, comparado con
el resultado obtenido en nuestro trabajo cuyos porcentajes fueron de 8, 25 y 67 % de reducción de la
bacterias. Esto es en función a los compuestos químicos antibacterianas presentes en la planta y
debido a la susceptibilidad de la bacteria (Briceño et al) El efecto inhibitorio del extracto de
“Chamico” sobre el crecimiento puede deberse a la presencia de alguno de los diversos
compuestos o principios activos que posee: el carvacrol; principio activo presente ,posee
actividad antifúngica y antibacteriana (Chirino et al) y los terpenoides y saponinasserían las
sustancias que producen la inhibición (Garcia et al). Cabe señalar, que las diferencias observadas
anexo 4 y porcentaje de inhibición antibacteriana podría verse afectadas también por factores
ambientales, cantidad de inóculo, y la susceptibilidad de la bacteria (Rodriguez et al , 2012)

.Es necesario mencionar que las concentraciones del extracto empleadas en la experimentación: 70 y
75% , presentaron diferencias significativas , lo cual indica que al usar cualquiera de estas
concentraciones se obtendría una inhibición alta y baja respectivamente. Chamico tiene una alta
capacidad de acción (Rodriguez et al . 2010).; al realizar las lecturas de las placas sometidas a las
diferentes concentraciones en nuestra experimentación, se observó: placa testigo y tratamiento ; donde
12.5 ug. disco -1, 25 ug. disco -1
y 50 ug. disco -1
, genero sensibilidad al crecimiento de Vibrio
sp., produciendo un diámetro de halo promedio de 7 mm, 16 mm y 18 mm.

Evaluar la actividad antibacteriana de diferentes concentraciones del extracto metanólico

de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium de interés
acuícola.
2.4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Determinar la mejor concentración (50, 25 y 12.5 mg/ml) del extracto metanólico de hojas
de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y hojas de “chamico” Datura stramonium que causa

27
 la mayor inhibición del crecimiento bacteriano de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas
sp. y Pseudomonas sp.

- Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima

Bactericida (CMB) del extracto metanolico de hojas de “pájaro bobo” Tessaria integrifolia
sobre los cultivos de Vibrio sp., Edwarsiella sp., Aeromonas sp. y Pseudomonas sp.

- Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima

Bactericida (CMB) del extracto metanolico de hojas de “chamico” Datura stramonium
sobre los cultivos de Vibrio sp. , Edwarsiella sp. , Aeromonas sp. y Pseudomonas sp.

Se recolectaron 2 especímenes de plantas “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura

stramonium, de las cuales solo “chamico” Datura stramonium presentaron actividad antimicrobiana
contra las bacterias empleadas.

- La figura 13, muestra la actividad antimicrobiana de diferentes concentraciones de extractos

metanolico en hojas de plantas “pájaro bobo” Tessaria integrifolia y “chamico” Datura stramonium,
de las cuales se obtuvieron actividad antibacteriana con Vibrio sp.

- El mayor halo de inhibición registrada fue de 18 mm con el extracto metanolico de “chamico”

Datura stramonium a la concentración de 50 ug.disco -1 a Vibrio sp. ( Fig. 11 y Fig. 18).

- Los especímenes que no presentaron actividad antibacteriana fueron Pseudomona sp. (Fig. 16).

- La bacteria Vibrio sp. , resulto ser la más sensible a la actividad antimicrobiana de los extractos
metanolicos de las hojas de plantas probadas.

- La bacteria Aeromona sp. resulto más actividad bacteriana en “pájaro bobo” Tessaria integrifolia a
diferencia de “chamico” Datura stramonium, de igual manera ocurrió con la bacteria Edwarsiella sp.

- De todos los extractos que presentaron respuesta antibacteriana, el 25% se ubican en la escala (1+)
poca actividad antibacteriana, el 67% en la escala (2+) ligera actividad antibacteriana y 8% de alta
actividad antibacteriana (Tabla 1 y Anexo 4)

De los 72 extractos ensayados, 2 extractos (8%) inhibieron el crecimiento de las bacterias empleadas,
de las cuales presentan actividad antibacteriana a la concentración de 25 ug disco -1 y 25 ug disco -1
(Anexo 4)

28
La Concentración Mínima Inhibitorio (CMI) presento en 70 mg/ml y la Concentración Mínima
Bactericida (CMB) presento en 75 mg/ml.

VI. CONCLUSIONES

- El extracto metanolico de Chamico” Datura stramonium genero mayor halo de inhibición

con 18 mm en Vibrio sp.

- El extracto metanolico de pájaro bobo” Tessaria integrifolia presentó el mayor espectro

antibacteriano, inhibiendo el crecimiento de Vibrio sp., Aeromonas sp. y Edwarsiella sp.

- Los resultados del presente trabajo confirman la existencia de la producción de sustancias

con efectos antibacterianos en las hojas recolectadas del Humedal de Villa María.

VII. RECOMENDACIONES

- Evaluar la citotoxicidad de Chamico frente a las bacterias que afectan a la acuicultura.

- Es conveniente realizar más muestreos de diferentes partes de la planta: Tallo, raíz, fruto
para poder asi comprobar si la actividad bacteriana esta en dichas partes de la planta.
- Realizar pruebas con diferentes concentraciones del extracto, ampliando los resultados
expuestos.
- Se sugiere una ampliación de la investigación in vivo, y poder corroborar si función la
actividad antibacteriana.

29
 VIII. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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34
 IX. ANEXOS

Anexo 1. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) de diferentes concentraciones de

extractos metanolitos de hojas de planta “pájaro bobo” Tessaria integrifolia contra bacterias
acuícolas.
Extracto de Repeticiones
“pajaro bobo” Concentraciones
Bacterias X
Tessaria (ug. Disco -1)
R1 R2 R3
integrifolia

PB C1 B1 12.5 5.0 5.0 5.0 5.0

Pseudomonas sp. PB C2 B1 25.0 5.0 5.0 5.0 5.0

PB C3 B1 50.0 5.0 5.0 5.0 5.0

PB C1 B2 12.5 7.0 6.0 6.0 6.0

Vibrio sp. PB C2 B2 25.0 6.0 7.0 6.0 6.0

PB C3 B2 50.0 6.0 6.0 7.0 6.0

PB C1 B3 12.5 7.0 7.0 6.0 7.0

Aeromonas sp. PB C2 B3 25.0 7.0 7.0 7.0 7.0

PB C3 B3 50.0 7.0 7.0 7.0 7.0

PB C1 B4 12.5 6.0 8.0 6.0 7.0

Edwarsiella sp. PB C2 B4 25.0 6.0 7.0 7.0 7.0

PB C3 B4 50.0 6.0 7.0 6.0 7.0

35
Anexo 2. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) de diferentes concentraciones de extractos
metanolitos de hojas de planta “chamico” Datura stramonium contra bacterias acuícolas.

Extracto de Repeticiones
“chamico” Concentraciones
Bacterias X
Datura (ug. disco -1)
R1 R2 R3
stramonium

CH C1 B1 12.5 5.0 5.0 5.0 5.0

Pseudomonas sp. CH C2 B1 25.0 5.0 5.0 5.0 5.0

CH C3 B1 50.0 5.0 5.0 5.0 5.0

CH C1 B2 12.5 6.0 7.0 8.0 7.0

Vibrio sp. CH C2 B2 25.0 19 18 12 16

CH C3 B2 50.0 18 19 18 18

CH C1 B3 12.5 6.0 6.0 6.0 6.0

Aeromonas sp. CH C2 B3 25.0 6.0 6.0 7.0 6.0

CH C3 B3 50.0 7.0 6.0 7.0 7.0

CH C1 B4 12.5 6.0 7.0 6.0 6.0

Edwarsiella sp. CH C2 B4 25.0 6.0 7.0 6.0 6.0

CH C3 B4 50.0 7.0 7.0 6.0 7.0

36
 Anexo 3. Halos de inhibición promedio de los discos (mm) in vitro de controles positivo y negativo
frente a bacterias acuícola.

CONTROL(+) CONTROL(-)
REFERENCIAL REFERENCIAL

REPETICIONES REPETICIONES
BACTERIAS
R1 R2 X R1 R2 X

Pseudomona sp. 12 11 12 5.0 5.0 5.0

Vibrio sp. 10 0.9 10 5.0 5.0 5.0

Aeromonas sp. 11 14 13 5.0 5.0 5.0

Edwarsiella sp. 14 16 15 5.0 5.0 5.0

Anexo 4. Escala de valores obtenidos según los autores, formando como referencia a Ríos et al., 2009,
en la actividad antibacteriana in vitro mostrada por las diferentes concentraciones de extractos
metanolicos de hojas de planta contra bacterias acuícola.

Bacterias
Concentraciones
Extractos de hojas
(ug, disco -1)
Pseudomonas sp. Vibrio sp. Aeromonas sp. Edwarsiella sp.

12.5 - 2+ 2+ 2+
“pájaro bobo”
Tessaria 25.0 - 2+ 2+ 2+
integrifolia
50.0 - 2+ 2+ 2+

12.5 - 2+ 2+ 2+
“chamico” Datura
25.0 - 4+ 2+ 2+
stramonuim
37 50.0 - 4+ 2+ 2+
 Anexo 5. Preparación de medio A) Frasco de Agar B) Frasco de TSA C) Pesar el contenido
D) Aforar con agua destilada E) Mezclar los agares con el agua destilada F) Colocamos en la cocina
eléctrica G) Distribución de 3.5ml en cada frasco H)Resultado de la distribución I) Los frascos son
llevados al autoclave

Anexo 6. Preparacion del polvo seco A) Muestra de las hojas de Tessaria integrifolia y
Datura stramonium B) La muestra es colocada a una estufa a 37 °C C) Con la ayuda de
un motero se procede a moler D) Resultado del proceso anterior
38
 Anexo 7. Materiales de la preparación de CMI A) Mechero B) Pastilla de Tetraciclina C) Patrón de
turbidez 0,5 Marck Farland D) Vortex E) Medio TSA ( Agar Tripticasa soya ) F) Puntas
esterilizadas G) Extracto metanolico de Chamico “Datura stramonium” H) Tetraciclina diluida en
agua destilada.

39
Anexo 8. Pasos realizados para CMI. A y B) Extraemos el extracto vegetal C) Agregamos el
medio TSA a los micropocillos más inoculo de la bacteria Vibrio sp. D) resultados.

40
41