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EXTRACCIÓN DEL ADN DE LA CEBOLLA


Karen Lorena Hernández Serrano
karen.hernandez.serrano@unillanos.edu.co
Leidy Alexandra León Castañeda
laleon.castaneda@unillanos.edu.co
Ruth Karina Herrera Coy
rkherrera@unillanos.edu.co
Laura Nathaly Pérez Sarmiento
laura.perez.sarmiento@unillanos.edu.co

Universidad De Los Llanos


Facultad de Ciencias de la Salud
Programa de Fisioterapia

esta información genética, este es el proceso que se


RESUMEN: En esta práctica de laboratorio se llevó a conoce también como traducción entre el ADN y la
cabo la extracción e identificación del ADN de la cebolla, proteína.
lo que nos permitió a su vez observar la composición de
este ácido nucleico, identificando la presencia de sus En el presente informe se encuentran los resultados a
bases nitrogenadas, pentosas y grupos fosfatos. Esto se varias pruebas con el fin de extraer específicamente el
realizó mediante una serie de pruebas específicas para ADN e identificar sus componentes (bases nitrogenadas,
cada grupo (bases nitrogenadas, pentosas y grupos pentosas y grupos fosfatos) mediante varias reacciones
fosfatos). Para desarrollar lo anterior, fue necesario con reactivos especiales para ello como la difenilamina,
primero conocer mediante una consulta previa los reactivo de bial, ácido aspártico y molíbdico, asimismo
conceptos de ácidos nucleicos, estructura y función más se estudió la influencia de la temperatura en la
a fondo.Algunos de los reactivos y materiales usados viscosidad del ADN.
fueron: embudo, probeta de 100 ml, pipetas,
difenilamina, ácido ascórbico, ácido molíbdico y reactivo
de Bial. 2. OBJETIVOS

Palabras claves: ADN, cebolla, ácidos nucleicos, ● Extraer y purificar el ADN de células vegetales.
pruebas, bases nitrogenadas, pentosas, grupos fosfato, ● Observar la estructura fibrilar del ADN.
● Identificar la presencia de pentosas (ribosa.
ABSTRACT: In this laboratory practice, the extraction Desoxirribosa) mediante el reactivo de Bial.
and identification of onion DNA was carried out, which ● Identificar la presencia de grupo fosfato
allowed us to observe the composition of this nucleic mediante prueba específica para este grupo.
acid, identifying the presence of its nitrogenous bases,
pentoses and phosphate groups. This was done through
a series of specific tests for each group (nitrogenous 3. CONSULTA PREVIA
bases, pentoses and phosphate groups). Some of the
reagents and materials used were: funnel, a 100 ml
cylinder, pipettes, diphenylamine, ascorbic acid, Los Ácidos Nucleicos son las biomoléculas portadoras
molybdic acid and Bial reagent. de la información genética. Son biopolímeros, de
elevado peso molecular, formados por otras
Keywords: DNA, onion, nucleic acids, tests, subunidades estructurales o monómeros, denominados
nucleótidos.
nitrogenous bases, pentoses, phosphate groups,
Desde el punto de vista químico, los ácidos nucleicos
1. INTRODUCCIÓN son macromoléculas formadas por polímeros lineales de
nucleótidos, unidos por enlaces éster de fosfato, sin
periodicidad aparente.
Los ácidos nucleicos son esenciales para la vida porque son
las biomoléculas portadoras del material genético, su estructura
es polimérica, lineal y sus monómeros son los nucleótidos. Los De acuerdo a la composición química, los ácidos
nucleótidos están formados por la unión de un grupo fosfato al nucleicos se clasifican en Ácidos desoxirribonucleicos
carbono 5 de una pentosa. Hay dos ácidos nucleicos que son el (ADN) que se encuentran residiendo en el núcleo celular
ADN y el ARN. El ADN se encarga de transmitir la información y algunos organelos, y en Ácidos ribonucleicos (ARN)
genética (características morfológicas, bioquímicas y que actúan en el citoplasma.
fisiológicas de las células). El ARN por su parte se encarga de
la síntesis de proteínas para que la proteína pueda entender

1
.

Los ácidos nucleicos están formados por largas cadenas


de nucleótidos, enlazados entre sí por el grupo fosfato.
El grado de polimerización puede llegar a ser altísimo,
siendo las moléculas más grandes que se conocen, con
moléculas constituidas por centenares de millones de
nucleótidos en una sola estructura covalente. De la
misma manera que las proteínas son polímeros lineales
aperiódicos de aminoácidos, los ácidos nucleicos lo son
de nucleótidos. La apericidad de la secuencia de
nucleótidos implica la existencia de información. De
hecho, sabemos que los ácidos nucleicos constituyen el
depósito de información de todas las secuencias de
aminoácidos de todas las proteínas de la célula. Existe
una correlación entre ambas secuencias , lo que se
expresa diciendo que ácidos nucleicos y proteínas son
colineales; la descripción de esta correlación es lo que
llamamos código genético, establecido de forma que a
Figura Nª3. Bases nitrogenadas [4]
una secuencia de tres nucleótidos en un ácido nucleico
corresponde un aminoácido en una proteína [1]
● Un grupo fosfato: Deriva del ácido fosfato

Figura Nª1. Ácidos nucleicos (ADN) Y (ARN) [2]


Figura Nª4 Estructura del grupo fosfato [6]
Cada molécula de ácido nucleico se compone de la
repetición de un tipo de nucleótidos, compuestos cada Los ácidos nucleicos, a su manera respectiva y
uno por [2]: específica, sirven para el almacenamiento, lectura y
transcripción del material genético contenido en la
● Una pentosa (azúcar): Es un monosacárido de célula[2]
cinco carbonos, que puede ser desoxirribosa o
ribosa
Por otro lado, los ácidos nucleicos también participan en
la replicación celular, o sea, la generación de nuevas
células en el cuerpo, y en la reproducción del individuo
completo, ya que las células sexuales poseen la mitad
del genoma (ADN) completo de cada progenitor[2]

Figura Nª2. Pentosas (azúcares) [3]

● Una base nitrogenada: Deriva de ciertos


compuestos heterocíclicos aromáticos (purina y
pirimidina. Puede ser adenina (A), guanina (G),
timina (T), citosina (c) y uracilo (U).

2
.

la comprensión de los fundamentos químicos de la


vida[2]

4. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los nucleótidos desempeñan una amplia variedad de


funciones en el metabolismo celular. Constituyen la
moneda energética en las transacciones metabólicas,
son los nexos químicos en los sistemas celulares, en
respuesta a hormonas y otros estímulos extracelulares,
y son también componentes estructurales de una serie
de cofactores enzimáticos e intermedios metabólicos.
Son los constituyentes de los ácidos nucleicos: ácido
desoxirribonucleico (DNA) y ácido ribonucleico (RNA),
los depositarios moleculares de la información genética.
La estructura de todas las proteínas y en última instancia
de todas las biomoléculas y de cada uno de los
Figura Nª5. Estructura del ADN [7] componentes celulares, es producto de la información
programada en la secuencia de nucleótidos de los
El ADN codifica la totalidad de la información genética ácidos nucleicos de la célula.
del organismo a través de su secuencia de nucleótidos. Los ácidos nucleicos son polinucleótidos, o polímeros de
nucleótidos. Los nucleótidos tienen tres componentes:
En ese sentido, podemos decir que el ADN opera como
un azúcar con cinco carbonos, uno o más grupos de
un molde de nucleótidos[2] fosfatos y un compuesto nitrogenado débilmente básico
llamado base, las bases que se encuentran en los
nucleótidos son pirimidinas y purinas sustituidas. La
En cambio, el ARN sirve como operador a partir de dicho
pentosa suele ser ribosa (D-ribofuranosa) o
código, porque lo copia (lo transcribe) y lo lleva a los 2-desoxirribosa (2-desoxi-D-ribofuranosa). Los
ribosomas celulares, donde se procede al ensamblaje de N-glicósidos pirimidina o purina de estos azúcares se
las proteínas. Es un proceso complejo que no podría llaman nucleótidos. Los nucleótidos son los ésteres de
darse sin estos compuestos fundamentales para la fosfato de los nucleótidos; los nucleótidos comunes
vida[2] contienen desoxirribosa se llaman
desoxirribonucleótidos.
El DNA, como se conoce actualmente, es el portador de
la información genética de todas las formas de vida
celular, así como en muchos virus. El papel principal de
la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo
de información. Muchas veces, el ADN es comparado
con un plano o una receta, o un código, ya que contiene
las instrucciones necesarias para construir otros
componentes de las células, como las proteínas y las
moléculas de ARN. Los segmentos de ADN que llevan
esta información genética son llamados genes, pero las
otras secuencias de ADN tienen propósitos estructurales
o toman en la regulación del uso de esta información
genética.
Desde el punto de vista químico, el ADN es un polímero
de nucleótidos, es decir, un polinucleótido. Un polímero
es un compuesto formado por muchas unidades simples
conectadas entre sí, como si fuera un largo tren
formado por vagones. En el ADN, cada vagón es un
Figura Nª6. Estructura del ARN [5] nucleótido, y cada nucleótido, a su vez, está formado por
un azúcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que
Los ácidos nucleicos son fundamentales para la vida tal puede ser adenina→ A, timina→ T, citosina→ C o
como la conocemos, ya que son imprescindibles para la guanina→ G) y grupo de fosfato que actúa como
enganche de cada vago con el siguiente. Lo que
síntesis de proteínas y para la transmisión de la
distingue a un vagón (nucleótido) de otro es, entonces,
información genética de una generación a otra la base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se
(herencia). La comprensión de estos compuestos especifica nombrando sólo la secuencia de sus bases.
representó en su momento un enorme salto adelante en La disposición secuencial de estas cuatro bases a lo
largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos

3
.

de vagones a lo largo de todo tren) es la que codifica la


información genética: por ejemplo, una secuencia de
ADN puede ser ATGCTAGATCGC. En los organismos
vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de
nucleótidos, en la que las dos hebras están unidas entre
sí por unas conexiones denominadas puentes de
hidrógeno.

Figura Nª7 Estructura química del ADN

4. METODOLOGÍA

5. MATERIALES

Tabla N°1 Materiales y reactivos.

Equipos y/o Materiales Reactivos


montajes

Baño de maría Tubos de Cebolla grande


ensayo (10) y fresca (traer)

Cronómetro Vasos de Agua


(traer) precipitado de desionizada
50 mL(1), de
250 mL (1)

Pipetas de 5 ml EDTA
(2), 1 ml (2), 2
ml (1), 10 ml (1)

4
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Varilla de vidrio SDS al 0.1%


(1) (dodecilsulfato
de
sodio)

Gasa (1) Difenilamina

Probeta de 100 Etanol al 95%


mL (1) frío

Embudo (1) Ácido molíbdico


Figura N°9. Filtración de la muestra
Cuchillo (1) Ácido ascórbico

Licuadora (1) Reactivo de Bial

6. PROCEDIMIENTOS.

6.1. Extracción e identificación del ADN

Para este procedimiento se inició cortando la cebolla en


cuadros pequeños y luego se pesó con una balanza
electrónica 50mg de la misma. Posteriormente, los 50
mg de cebolla se licuaron con 100 ml de solución de lisis
agregada. Después, en un embudo con gasa se filtró y
Figura N°10. Transferencia de 4 ml del licuado a un
se recogió en una probeta el líquido, al cual se le midió
tubo de ensayo
el volumen. Luego de esto, se transfirieron 4 ml del
filtrado y se colocaron en un tubo de ensayo al cual se le
añadieron 8 ml de etanol frío al 95% hasta que se
observó un precipitado blanco y se extrajo enrollándose
con una varilla de vidrio.

Figura N°11. Adición de los 8 ml de etanol en el filtrado

Figura N°8. Muestra de los 50 mg de cebolla

5
.

Figura N°12. Precipitado blanco resultante de la mezcla Figura N°14. Tubos A y B al baño maría
entre el filtrado y etanol
6.3. Identificación de fosfatos

Después de realizar todo lo que se mencionó Para esta prueba se vuelve a filtrar 4 ml de filtrado y se
anteriormente se procedió a tomar dos tubos de ensayo. le añade 8 ml de etanol al 95% para usar el precipitado
En el tubo A se añadió 1 ml de agua destilada y 2 ml de resultante. Primero, se tomaron 2 tubos de ensayo. Al
Difenilamina. En el tubo B se añadió 1 ml del precipitado tubo A se le adiciono 0,1 ml de agua destilada, 0,5 de
y 2 ml de Difenilamina. Luego, ambos tubos de ensayo ácido molíbdico y 0,5 de ácido ascórbico. Al tubo B se le
se llevaron al baño maría por 10 minutos para después agregó 0,1 ml del precipitado, 0,5 ml de ácido molíbdico
comparar y analizar el resultado obtenido y 0,5 de ácido ascórbico, se mezclaron
correspondientemente por 15 minutos hasta que
apareció una coloración azul-verdosa

Después, se procedió a transferir 10 ml del filtrado y se


puso en un beaker al que luego se le aplicó 20 ml de
etanol al 95% frío gota a gota hasta obtener el
precipitado blanco, el cual se enrollo con ayuda de una
varilla de vidrio y se puso en un tubo de ensayo limpio
Luego, se le añadió al tubo 5 ml de agua disolviendo el
precipitado y se agitó. Por último, el contenido obtenido
se dividió en dos tubos de ensayo.

Figura N°13. Tubo A y B al baño maría

6.2. Identificación de pentosas

Para este procedimiento se repitió el proceso de añadir


a los 4 ml del filtrado 8 ml de la muestra etanol frío al
95% con el fin de obtener el precipitado para las pruebas
de pentosas. Se inició, tomando 2 tubos de ensayo, en
el A se colocó 1 ml de agua destilada y 2 ml del reactivo
de Bial. En el tubo B se agregó 1 ml del precipitado y 2 Figura N°15. Tubo A y B con la disolución del
ml del reactivo de Bial. Posteriormente, los dos tubos se precipitado + agua
llevaron al baño maría durante 10 minutos para después
observar la aparición de color verdosa en ambos, Después, se transfirieron 10 ml del filtrado y se colocó
compararlos y analizarlos. en un beaker, adicionándole 20 ml de etanol 95% frio
(gota a gota), se extrajo el precipitado y le agrego 5 ml
de agua para posteriormente dividir el contenido en dos
tubos de ensayo.

6
.

Uno de los tubos se llevó al baño maría por 10 minutos y


el otro a enfriar por 15 minutos, esto para identificar la
viscosidad en diferentes condiciones.

Posteriormente se pipetearon 0.2 ml de cada uno de los


tubos y se dejó caer 0,15 ml de cada uno cronometrando
en tiempo de salida.

7. RESULTADOS

7.1 Extracción e identificación del ADN

Resultado expectante:

Resultado expectante :
Figura N°17. Coloración verde por la presencia de
pentosas

7.3 Identificación de fosfatos

Figura N°16. Coloración azul clara ante la presencia de


ADN

7.2 Identificación de pentosas

Resultado expectante :

7
.

Figura N°19. Fases de la precipitación del ADN con


Figura N°18. Coloración azul-verdosa ante la presencia alcohol
de grupos fosfato

Viscosidad en diferentes condiciones 8.1 Extracción e identificación del ADN

Se usó difenilamina que es un reactivo que forma un


compuesto azul en condiciones ácidas. Esta solución
reacciona a nitratos, cloratos y otros agentes oxidantes,
incluyendo el ADN en condiciones ácidas debido a que
hidroliza el ADN.

8. ANÁLISIS

Para las 3 pruebas realizadas se necesitó primero


obtener el precipitado de las fibras del ADN mediante un
método químico que consistió en licuar la cebolla con la
solución de lisis que es un reactivo que genera el
rompimiento de la membrana celular de las células y
permite que su material biológico salga, entre ellos el
ADN. Sin embargo, el ADN no es lo único que sale,
también lo hacen componentes como plásmidos y otras Figura N°20. Estructura de la difenilamina
proteínas, por lo que es importante llevar a cabo una
purificación del ADN lo que se hace a través de la Una hidrólisis ácida remueve todas las bases púricas
separación de las fibras de ADN del resto de (hidrólisis de uniones N-glicosídicas entre pentosa y las
componentes celulares, la eliminación de estas se hace bases púricas) sin afectar las uniones fosfodiester del
agregando solventes orgánicos como el alcohol que es esqueleto nucleotídico, por lo tanto obtenemos como
el que se usó en este caso, específicamente etanol frío producto ácidos nucleicos sin bases púricas.
al 95% . El alcohol es útil para que el ADN se precipite y
se separe de los otros otros componentes celulares Las desoxipentosas debido a la hidrólisis ácida sufren
porque el ADN no es soluble en altas concentraciones deshidratación dando aldehídos δhidroxi-levulínicos.
de alcohol y sales. La precipitación se da en 3 fases que Estos reaccionan con difenilamina dando un producto de
son: color azul. Así, la reacción de difenilamina servirá para
● Fase acuosa: Contiene agua principalmente de caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA en
la disolución células de cebolla.
● Interfase: Se forman las hebras de ADN
● Fase orgánica: Contiene los componentes En la prueba que realizamos se debía obtener una
celulares degradados por el alcohol coloración azul clara al tener presencia de ADN; no
obstante, observamos que en el tubo A se obtuvo una
Realizar este procedimiento con alcohol es fundamental coloración azul clara, debido a los 2 ml de difenilamina
para tener resultados más exactos y confiables, ya que que añadimos, ya que este es el color del reactivo,
permite la purificación de la muestra del ADN. mientra que en el tubo B que contenía el precipitado
(ADN) y 2 ml de Difenilamina no se consiguió ninguna
coloración, lo que nos lleva a concluir que se presentó
un error que interfirió en la hidrólisis. El error puede

8
.

haber ocurrido porque faltaron fibras de ADN o porque al celulares que degradan la molécula del ADN como las
momento de su purificación se mezclaron partículas de nucleasas o porque entraron a los tubos de ensayo
otros componentes celulares como enzimas que partículas externas que estropearon la reacción.
degradan las moléculas del ácido desoxirribonucleico
(nucleasa, proteinasa K y otras) Diferencia de viscosidades de los tubos con
precipitado+agua
8.2 Identificación de pentosas
● ¿Cuál es la función de los componentes de la
La identificación de pentosas se llevó a cabo usando el solución de lisis?
reactivo de bial que está compuesto por orcinol, ácido
clorhídrico y cloruro férrico. Las pentosas del ADN y En el proceso de lisis celular las interacciones que
ARN se pueden ver gracias al orcinol. El ácido sulfúrico conforman la pared, la membrana celular y nuclear se
hidroliza las uniones fosfodiéster y N-glicosídicas, modifican o destruyen lo que permite la liberación de los
liberando ribosa, bases púricas, pirimidínicas y ácido ácidos nucleicos. Los componentes de la solución de
fosfórico. lisis son usualmente soluciones básicas, detergentes o
agentes caotrópicos que permiten la disolución de la
membrana celular y sus inhibidores para desactivar las
La pentosa en medio ácido se deshidrata originando
enzimas que degradan las moléculas del ADN. Además,
furfural que reacciona con el orcinol dando un producto
muchas otras soluciones de lisis pueden contener EDTA
verde que demuestra la presencia de DNA y RNA.
(ácido etilendiaminotetraacético), agente quelante que
atrapa los iones de Mg2+ de las enzimas DNAasas
usados para la degradación del ADN con el fin de evitar
que ocurra.

Figura N°21. Deshidratación de pentosa en medios


ácidos

Las pruebas realizadas dieron como resultado un color


amarillo para el tubo A que es el color del reactivo de
bial y uno amarillo anaranjado para el tubo B, lo que
significa que no se pudo determinar la presencia de
pentosas, ya que no viró el color verde. Esto puede ser Figura N°21. Solución de lisis
porque las cantidades de células del tejido vegetal no
fueron suficientes, el estado de la cebolla no era la
óptima (fresca y jugosa) o porque al momento de sacar ● ¿A qué se debe la diferencia de viscosidades
el precipitado de ADN se mezclaron componentes del DNA observada en los experimentos?
celulares que afectaron el estado puro del ADN.
Es por la temperatura, ya que es un factor
8.3 Identificación de fosfatos influyente en la viscosidad de una sustancia. Si
la temperatura es ambiente, la molécula se
Para identificar los grupos fosfatos en el ADN de la mantiene estable, mientras que si la
cebolla se usaron dos ácidos: ácido ascórbico y ácido temperatura aumenta, es decir, es más
molíbdico, ya que ambos son reactivos oxido-reductores caliente, se genera una desnaturalización de la
en las oxidaciones biológicas. La reacción del fósforo molécula porque se rompen los puentes de
inorgánico en un medio ácido es lo que permite la hidrógeno que forma una separación de la
identificación de grupos fosfato, primero el ácido doble hélice del ADN. Cuando la temperatura
molíbdico genera fosfomolibdato que da un color desciende vuelve a estabilizarse la molécula.
amarillo y luego es reducido por el ácido ascórbico a
azul de molibdeno, color azul verdoso. En nuestro caso, la prueba fue exitosa porque
el tubo de temperatura ambiente se mantuvo
Nuestras pruebas no dieron coloración azul verdosa, con la misma viscosidad, el que se puso al
sino que ambas fueron incoloras, lo que quiere decir que baño maría aumento su viscosidad porque las
hubo un error. El error puede haber sido por el estado de hebras de ADN tienden a re asociarse por
la cebolla, la poca cantidad de ADN que se logró fuerzas intramoleculares y el tubo que estuvo
precipitar y permitió ingresar otros componentes enfriandose aumento su viscosidad pero se

9
.

detuvo su renaturalización. [2] Ácidos nucleicos. Concepto. Retrieved Agosto 15,


2022, from https://concepto.de/acidos-nucleicos/

9. CONCLUSIONES Cita

[3] Nucleótidos y ácidos nucleicos: La estructura de los


● Se extrajo el ADN del tejido vegetal de la
cebolla por medio de la solución de lisis que ácidos nucleicos. (n.d.). PRINCIPIOS DE GENÉTICA.
permite romper la pared celular, de membrana
y nuclear para liberar el material biológico Retrieved Agosto 15, 2022, from
dentro de las células de la cebolla.
● El alcohol es imprescindible para las pruebas http://www.juntadeandalucia.es/averroes/centros-tic/140
de ADN porque nos permite ver sus fibras y
además realiza la purificación del mismo, 02996/helvia/aula/archivos/repositorio/250/282/html/gen
evitando que en él queden otros componentes
etica/contenidos/curso03/curso03_01.htm
celulares como las enzimas que generan su
degradación
● El reactivo de Bial hidroliza ante condiciones
[4]Carrera, V. (2021). Mecanismos genéticos básicos.
ácidas y vira a verde si hay presencia de
pentosas. filadd. Retrieved Agosto 15, 2022, from
● Las pruebas realizadas para la identificación https://filadd.com/doc/tema-4-mecanismos-geneticos-ba
del ADN, pentosas y grupos fosfatos no fueron
sicos-pdf-biologia
exitosas porque se presentó un error
posiblemente por la falta de fibras de ADN o
porque se mezclaron componentes celulares
como enzimas al momento de precipitarse con [5]Estructura del ARN. (n.d.). Cursos Online Web.
alcohol
Retrieved Agosto 15, 2022, from
● Para identificar grupos fosfato se usaron ácidos
como el ascórbico y molíbdico porque son https://cursosonlineweb.com/estructura-del-arn.html
reactivos oxidorreductores que permiten la
reacción con fósforo inorgánico en condiciones Cita
ácidas
● La temperatura es un factor influyente en la
viscosidad de una sustancia
[6]Fosfato. (n.d.). Wikiwand. Retrieved Agosto 15, 2022,
from https://www.wikiwand.com/es/Fosfato
10. RECOMENDACIONES
Cita
● Recordar adicionar el etanol frío al filtrado gota [7]Estructura del ADN. (2021, Septiembre 22).
a gota procurando no mezclar para que la
separación de las fibras del ADN del resto de LABSTERTHEORY. Retrieved Agosto 15, 2022, from
componentes celulares sea efectiva https://theory.labster.com/dna-structure-es/
● Use una cebolla fresca y jugosa para la práctica
de laboratorio con el fin de que se pueda Cita
obtener buena cantidad y calidad del ADN y
que las pruebas sean exitosas
● Cuando esté recogiendo el precipitado del ADN
hágalo cuidadosamente con una varilla de
vidrio para que no se mezcle con otros
componentes celulares liberados por la
solución de lisis
● Lavar muy bien cada tubo de ensayo usado
para que no queden residuos que afecten en
negativamente las reacciones

11. REFERENCIAS

[1]Burriel Coll, Veronica. QUÍMICA APLICADA A LA

INGENIERÍA BIOMÉDICA. Accessed 15 Agosto 2022.

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