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Materiales hoy: Actas 47 (2021) 4155–4161

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Materiales hoy: Actas

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Desarrollo y validación del método RP-HPLC simplificado para la

cuantificación de darunavir en comprimidos comerciales
C C
Karthika Paula,ÿ , Jaswanth Gowda BH b, c , SJ Shankar , D Narasimha Reddy
aDepartamento de Química Farmacéutica, Facultad de Farmacia Vivekananda, Bengaluru 560 055, India bDepartamento de Farmacia,
Facultad de Farmacia y Centro de Investigación de Yenepoya, Yenepoya (Considerado como Universidad), Mangaluru 575 018, India cDepartamento de Farmacia, Facultad de Farmacia
Vivekananda, Bengaluru 560 055, India

información del artículo resumen

Historial del artículo: Darunavir (DRV) es una clase de medicamento antirretroviral inhibidor de la proteasa peptídica que se incluye regularmente en la terapia
Recibido el 1 de marzo de 2021
antirretroviral con varios otros medicamentos para tratar a los pacientes con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) para evitar que
Recibido en forma revisada el 20 de marzo de 2021
desarrollen el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). En este trabajo de investigación, se desarrolló y validó un método exacto,
Aceptado el 27 de abril de 2021
preciso, reproducible, simple y rápido de cromatografía líquida de alto rendimiento de fase reversa (RP-HPLC) para cuantificar DRV en la
Disponible en línea el 14 de mayo de 2021
forma de dosificación de tabletas (Danavir 600). La cromatografía líquida se realizó en una columna analítica Phenomenex C18 de
dimensiones 250 4,6 mm, 5 mm utilizando como fase móvil una mezcla de acetonitrilo (ACN) y agua en la proporción 30:70 v/v. La muestra
Palabras clave:
Darunavir se inyectó en un volumen de 20 ml y se determinó a 268 nm con un caudal de 1 ml/min (ACN:agua). Se encontró que el tiempo de retención

Cromatografía líquida del fármaco estándar y de la muestra era de 3,16 y 3,12 min respectivamente. La linealidad en la curva de calibración se logró para DRV en
validación del método el rango de concentración de 40–200 mg/ml y se encontró que el coeficiente de regresión (R2 ) era 0,982. El porcentaje de recuperación de
inhibidor de la proteasa DRV se obtuvo en el rango de 98,10 a 103,65 %, lo que indica la gran precisión del método actual. Los estudios de reproducibilidad y
Virus de inmunodeficiencia humana recuperación con % de desviación estándar relativa (% RSD) con precisión intra e interdiaria resultaron ser inferiores al 2 %, lo que demostró
que un método desarrollado era reproducible. Se encontró que el límite de detección (LOD) y el límite de cuantificación (LOQ) eran 0,31 y
0,96 mg/ml, respectivamente. El método fue validado según las pautas de la Conferencia Internacional sobre Armonización (ICH) y puede
adoptarse fuertemente para el análisis de rutina de DRV ya que es el enfoque más confiable y rápido. Aunque se ha realizado mucho trabajo
para estimar DRV en formas de dosificación, se encontró que este estudio estaba bajo química verde con la condición rápida y económica.
Así, la validación estadística de los datos mostró que el método propuesto puede ser aplicado para la estimación de DRV en tabletas
comerciales.

2021 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

Selección y revisión por pares bajo la responsabilidad del comité científico de la Conferencia Internacional sobre Investigación Futurista en
Ingeniería de Materiales Inteligentes.

1. Introducción se utiliza una combinación de tres fármacos antirretrovirales junto con

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se ha cobrado más de
34 millones desde que se descubrió en el año 1981. En 2009, la tasa de
infección se redujo al 17 % durante el año 2001 [1]. El propósito del
tratamiento antirretroviral para pacientes con VIH es lograr la supresión
viral máxima. Estas terapias antirretrovirales altamente activas (ART)
generalmente se usan para pacientes con VIH para evitar el Síndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). En este tratamiento,
ÿ Autor de correspondencia.
Direcciones de correo electrónico: karthikananjundan17@gmail.com (K. Paul), jashgowda20@g mail.com (J.
Gowda BH).
inhibidores nucleósidos de la transcriptasa o inhibidores no nucleósidos
de la transcriptasa [2]. En tal caso, uno de los medicamentos
antirretrovirales es darunavir (DRV). Es un furofurano, un éster de
carbamato y un fármaco que contiene sulfonamida con un nombre químico
de [(3aS,4R,6aR)-2,3,3a,4,5,6a-hexahidrofuro[2,3-b]furan-4 -il] N-
[(2S,3R)-4-[(4-aminofenil)sulfonil-(2-metilpropil)amino]-3-hidroxi-1-
fenilbutan-2 il] carbamato. El grupo bencenosulfonamida N,N-disustituido
que lleva un grupo amino (no sustituido) en la posición 4 exhibe potencia
para el tratamiento de la infección por VIH. DRV pertenece a la clase de
inhibidores de la proteasa, diseñados para formar interacciones con la
enzima proteasa para despertar varias cepas del VIH, incluso para los
pacientes que experimentaron

https://doi.org/10.1016/j.matpr.2021.04.444 2214-7853/ 2021

Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
Selección y revisión por pares bajo la responsabilidad del comité científico de la Conferencia Internacional sobre Investigación Futurista en Ingeniería de Materiales Inteligentes.
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K. Paul, J. Gowda BH, S. Shankar et al.
resistencia múltiple para otros inhibidores de la enzima proteasa del VIH [3].
DRV fue descubierto por un profesor de la Universidad de Illinois
denominó Ghosh y posteriormente fue desarrollado clínicamente por la compañía
farmacéutica Tibotec en el año 1998 [4] (Fig. 1). Los unidos
Los estados autorizaron este fármaco en junio de 2006 y la Unión Europea compuso
la licencia en febrero de 2007 [5]. DRV tiene un efecto de permeabilidad intermedia
a alta en las monocapas Cancer coil-2,
mostrando una adecuada absorción intestinal [6]. También muestra alta
capacidad de unión de proteínas a la albúmina y a-1-glucoproteína ácida
(AAG) que se demostró en diálisis de equilibrio en sanos
voluntarios humanos [7].
DRV se administra por vía oral junto con otros antirretrovirales en
dosis bajas [8]. La monitorización terapéutica de fármacos (TDM) de antirretrovirales
no fue recomendada por el Departamento de Salud y
Human Service (DHHS), Estados Unidos, pero varios estudios clínicos
han demostrado una eficacia optimizada con menos resistencia y toxicidad
[9]. Este fármaco se considera una terapia de rescate en pacientes infectados por
virus con múltiples experiencias [10-13].
Previamente, se han desarrollado muchos métodos para la cuantificación
simultánea o única de darunavir mediante el uso de diversos instrumentos, como
espectrofotómetro UV, HPLC, HPLC-MS, LC/MS [14].
Pero el presente método desarrollado por RP-HPLC para la estimación
de DRV en formas de dosificación resultó ser simple, precisa, rápida
y rentable. Muchos trabajos de la literatura revelaron numerosos procedimientos de
RP-HPLC para estimar el DRV, pero se notaron
ser complicado y consumir mucho tiempo [15-20].
Sin embargo, el trabajo actual tuvo como objetivo desarrollar la RP-HPLC
novedosa, precisa, sensible, económica y con indicadores de estabilidad.
método para la estimación de DRV en forma de dosificación de tabletas (Danavir
600) utilizando productos químicos peligrosos mínimos para fomentar el verde
química [21]. La validación para el DRV RP-HPLC desarrollado
El método se realizó de acuerdo con ICH Q2 (R1) [22]. La exactitud, precisión,
linealidad, especificidad, límite de detección (LOD) y
límite de cuantificación (LOQ) se realizaron mientras se desarrollaba el
método para DRV junto con cuantificación de DRV en tableta marcada
forma de dosificación.
2. Material y métodos
2.1. Químicos y reactivos
DRV se adquirió de Yarrow Chem Products (Mumbai,
India). La tableta DRV (Danavir 600) se compró a Hetero Drugs
Limited (Hyderabad, India). El acetonitrilo (ACN) se adquirió de
Vasa Scientific SA Ltd. (Bengala, India). El agua Milli-Q fue recolectada por el
sistema Millipore (Bedford, EE. UU.). todos los quimicos
utilizados fueron de grado HPLC.
2.2. Estado de los instrumentos y de la cromatografía
RP-HPLC con una configuración isocrática de Shimadzu LC-10AT
VP (Japón), Rhenodyne 7725i con bucle de 20 ml, sistema de datos CLASS VP
Figura 1. Estructura de DRV.
4156
Materiales hoy: Actas 47 (2021) 4155–4161
Se utilizó un equipo con detector UV para optimizar el método. Él
DRV estándar y de muestra se pesaron utilizando Sartorius digital
saldo (R200 y 1702). Se determinó el kmax del fármaco
utilizando un espectrofotómetro UV-1700 (Shimadzu, Japón). La condición para la
cromatografía implicó el uso de una columna analítica Phenomenex C18 (250 4,6
mm, 5 mm de diámetro interno) utilizando un
combinación de ACN y agua (30:70 v/v) como fase móvil.
La muestra se inyectó en un volumen de 20 ml. El caudal fue
ajustado a 1 ml/min a una longitud de onda de 268 nm manteniendo
la temperatura de 25 C con una presión de 80 Pa. Los datos cromatográficos se
obtuvieron utilizando el software Sphinchrom
sistema.
2.3. Selección de lambda máx.
La selección de lambda max por espectrofotómetro UV juega un
papel vital en la sensibilidad del método RP-HPLC. Una precisa
la absorbancia de cualquier fármaco puede detectarse mediante una longitud de onda ideal.
En el presente estudio, concentraciones de 10 a 50 mg/ml de DRV puro
se midieron escaneando en el rango de 200 a 400 nm usando un
Espectrofotómetro UV-1700 (Shimadzu, Japón) [23].
2.4. Preparación de soluciones madre estándar
Se pesaron y transfirieron aproximadamente 10 mg de DRV puro
en un matraz aforado de 10 ml que contenga 5 ml de metanol de grado HPLC
seguido de sonicación durante 5 min para preparar Stock A.
Se extrajeron 2 ml de la solución Stock A anterior y se transfirieron a un matraz
volumétrico de 10 ml de capacidad y se completó el volumen usando
el mismo diluyente para preparar Stock B. Este se diluyó aún más para
preparar diferentes soluciones de trabajo estándar de concentración que van desde
40 mg/ml a 200 mg/ml.
2.5. Preparación de soluciones de muestra
Los comprimidos de DRV (Danavir 600) se pesaron y se molieron finamente para
un polvo fino. De esta tableta en polvo, una cantidad equivalente
de 10 mg DRV se tomó en un matraz volumétrico de 100 ml de capacidad
y diluido con metanol seguido de 15 min de sonicación. UN
La solución de muestra de concentración final de 100 mg/ml se analizó mediante
el método simple de RP-HPLC.
2.6. Método de análisis
La condición cromatográfica se mantuvo como se indicó y
la estabilización de la línea de base se realizó durante 20 min. Después de la
estabilización, la solución de concentración preparada del fármaco estándar
se registró para la reproducibilidad en las áreas máximas respectivas. Él
Se inyectó la solución de la muestra para la cuantificación. Él
el factor de respuesta de la relación de pico estándar y la relación de pico de muestra fue
calculado. El mismo procedimiento se repitió seis veces para conformar la
reproducibilidad del método desarrollado.
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2.7. Validación del método RP-HPLC
2.7.1. Precisión El
grado de concordancia entre el valor medido y el real se denomina precisión.
Las tres soluciones estándar y de muestra de DRV diferentes se tomaron en el
rango de concentración de 50 a 150 mg/ml. Estas soluciones se inyectaron para
determinar la precisión de nuestro método desarrollado. Mientras tanto, se preparó
una solución de muestra para tres concentraciones repetidas y se cuantificó. El
porcentaje de recuperación se determinó usando la siguiente fórmula [24].
La recuperación debe estar en el rango de 98–102% para ser aceptada.
Concentración recuperada
%Recuperación ¼ 100
Concentración inyectada
2.7.2. Precisión
La precisión se denomina como una medida del valor real entre varios resultados
de la misma cantidad. Las variaciones intradía e interdía se observaron analizando
seis soluciones de concentración repetidas de 50 a 150 mg/ml en el mismo día y en
tres días diferentes. La determinación del % de desviación estándar relativa (RSD)
se realizó utilizando la siguiente ecuación. El límite estándar para el % de aceptación
RSD es inferior al 2 % [25].
Desviación Estándar
% Desviación estándar relativa ¼ 100
Significar
2.7.3. Linealidad y rango Se
inyectó la solución de diferente concentración que varía de 40 a 200 mg/ml (40,
80, 120, 160 y 200 mg/ml) para determinar la linealidad de la solución DRV. Cada
solución de concentración se analizó seis veces inyectándola en la columna en las
mismas condiciones. A partir del pico de área obtenido en el cromatograma y cada
concentración de solución de DRV se construyó la curva de calibración de linealidad.
El cálculo del análisis de regresión para el coeficiente de correlación (R2 ) se
identificó con la ayuda de los valores de pendiente e intersección. El límite estándar
del análisis de regresión debe ser >0,999 [26].
2.7.4. Límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ)
El método desarrollado fue analizado por la relación señal a ruido por la
concentración baja y mínima de solución estándar para determinar los valores de
LOD y LOQ. El LOD se puede estimar como la concentración de muestra mínima
que se encuentra, pero no se puede analizar mediante las condiciones afirmativas
del experimento. Se dice que LOD es la solución de menor concentración de
muestra que se puede estimar con parámetros de exactitud y precisión aceptables.
El LOD y
Fig. 2. Espectro UV de DRV.
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El LOQ se calculó de acuerdo con las directrices de la ICH utilizando la siguiente
fórmula [27].
Desviación estándar de la respuesta
LOD ¼ 3:3
Pendiente de la curva de calibración
Desviación estándar de la respuesta
LOQ ¼ 10
Pendiente de la curva de calibración
2.7.5. Idoneidad del systema
La idoneidad del sistema se llevó a cabo de acuerdo con la Farmacopea de los
Estados Unidos (USP). La solución de concentración preparada de DRV se usó
para las seis inyecciones repetidas para determinar parámetros tales como la
eficiencia de la columna, la resolución, el factor de simetría del pico, el coeficiente
porcentual en el área del pico o la altura [28]. El valor medido se usó para calcular
el % RSD, el valor teórico del plato, el factor de cola y la precisión del sistema.
2.7.6. Especificidad y selectividad
Se realizó la especificidad y selectividad del método desarrollado para identificar
la interferencia de los excipientes durante la estimación de DRV. La solución en
blanco se preparó sin DRV y se inyectó. El cromatograma obtenido del blanco se
comparó con el cromatograma estándar y de muestra y se observó para verificar la
interferencia de los excipientes en la cuantificación del fármaco [29].
2.7.7. Robustez y robustez
La solidez y robustez del método DRV RP-HPLC desarrollado se demostraron
mediante variaciones moderadas en las condiciones cromatográficas desarrolladas.
Las variaciones en los parámetros como la temperatura de la columna, el caudal y
el uso de diferentes proporciones porcentuales de fase móvil se realizaron para
observar los efectos causados. En el presente estudio, se deliberaron sobre la
variación en la condición cromatográfica. Los caudales de 0,5 ml y 1,5 ml se
mantuvieron durante la inyección. Se mantuvieron las diferentes temperaturas de la
columna (24,5 C y 27,1 C). Se utilizó la fase móvil de dos relaciones diferentes
(ACN:agua; 65:35 y 80:20).
Se comprobó el efecto de la variación de los parámetros anteriores sobre el % de
recuperación y el tiempo de retención [30].
3. Resultados y discusión
3.1. Desarrollo del método RP-HPLC
La cuantificación de DRV en forma de dosificación en tabletas (Danavir 600) se
realizó mediante el desarrollo de un método RP-HPLC. La fase móvil
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tabla 1
Estudios de recuperación del método desarrollado.

Niveles Concentración de fármaco inyectado (mg/ml) Concentración de fármaco recuperado (mg/ml) % de recuperación (media ± DE)
(media ± DE)

Estándar Muestra Estándar Muestra

Nivel 1 50,0 49,50 ± 0,97 48,96 ± 0,12 97,98 ± 0,41 97,99 ± 0,96
Nivel 2 100,0 98,65 ± 0,37 98,12 ± 0,36 98,28 ± 0,22 98,03 ± 0,69
Nivel 3 150.0 148,96 ± 0,88 149,96 ± 0,79 98,56 ± 0,68 99,12 ± 0,16

Tabla 2
Estudios de precisión del método desarrollado.

Parámetros DRV estándar (%) (media ± DE) Muestra DRV (%) (media ± DE)

Intradía 2 horas % Recuperación 99,26 ± 0,7 98,10 ± 1,4

% RSD 0,99 ± 0,17 0,98 ± 0,06
6 horas % Recuperación 99,36 ± 1,8 98,45 ± 1,9
% RSD 0,99 ± 0,05 0,98 ± 0,17
10 horas % Recuperación 98,99 ± 0,7 99,15 ± 1,4
% RSD 0,98 ± 0,06 0,99 ± 0,03

entre días Día 1 % Recuperación 103,65 ± 0,9 102,56 ± 0,6

% RSD 0,99 ± 0,12 0,98 ± 0,17
Dia 2 % Recuperación 99,65 ± 0,2 0,98 101,36 ± 1,1
% RSD ± 0,06 101,56 ± 0,99 ± 0,08
Día 3 % Recuperación 1,8 99,96 ± 1,3
% RSD 0,99 ± 0,16 0,98 ± 0,2

que contiene ACN como fase orgánica y agua como fase acuosa
se utilizó. Para obtener un pico nítido y simétrico en aceptable
tiempo de retención una condición cromatográfica como el caudal, la temperatura de
la columna y la relación de componentes en el móvil adoptado
fase fueron investigadas. La columna Phenomenex Gemini C18 fue
utilizado para obtener un mejor pico. Los parámetros de la cromatografía.
condiciones tales como el tiempo de retención, el número teórico de platos (N),
El factor de retención y la selectividad se optimizaron con la ayuda de
fase móvil utilizada en el método. Para una sensibilidad adecuada de DRV
por el método RP-HPLC, la determinación de la longitud de onda se realizó utilizando
un espectrofotómetro UV-1700 (Shimadzu, Japón)
[31]. La solución estándar de DRV se usó para encontrar la longitud de onda
máximos escaneando en el rango de 200–400 nm y un mejor pico
se detectó a 268 nm (Fig. 2). Teniendo en cuenta los factores anteriores, la
el estudio actual dio un resultado aceptable con ACN:agua (30:70)
con el caudal de 1 ml/min para la estimación de DRV en la tableta
forma de dosificación.
98,10 ± 1,4 y 103,65 ± 0,9 % con un % RSD inferior al 2,0 %
(Cuadro 2). El presente estudio mostró una mejor, precisa y exacta
método para determinar DRV en la forma de dosificación de tabletas.
3.2.3. Linealidad y rango
Se identificó el valor R2 de las curvas de calibración de linealidad.
ser 0.982. La curva de calibración trazada en la concentración
Se encontró que el rango de 40 a 200 mg/ml era lineal (Tabla 3). Él
Se encontró que la ecuación y el coeficiente de regresión (R2 ) eran Y = 47.8
1x + 2650 y 0.982 respectivamente como se muestra en la Fig. 3. El relativo
el valor de la desviación estándar estuvo dentro del rango de 1.0. La observación
obtenida del valor máximo y la concentración del fármaco
Se encontró que la solución tenía un mejor valor de correlación [34].
Tabla 3
Estudios de linealidad y rango.

3.2. Validación del método RP-HPLC Concentración de DRV (mg/ml) Área bajo la curva (media ± DE)

40 4332.009 ± 89

3.2.1. Exactitud 80 6389.012 ± 61

120 9092.112 ± 137
Se midió el procedimiento del método DRV RP-HPLC desarrollado
160 10068,21 ± 172
para observar el porcentaje de recuperación y precisión mediante el uso de un objetivo 200 12054,37 ± 97
nivel de la concentración que oscila entre 40 mg/ml y 200 mg/ml.
Se encontró que los datos obtenidos eran precisos como se muestra en la Tabla 1. El
Se encontró que el porcentaje de recuperación de DRV estándar y de muestra era
ser 97,98 ± 0,41–98,56 ± 0,68 % y 97,99 ± 0,96–99,12 ± 0,16 %
respectivamente. El resultado obtenido se encuentra en el rango de valores estándar
para la recuperación 98,0%–102,0% [32].

3.2.2. Precisión
La variación de la precisión intradía e interdía se llevó a cabo
para validar el método DRV RP-HPLC desarrollado. El estudio intradía se llevó a
cabo en tres intervalos de tiempo diferentes en el
mismo día para concentraciones que oscilan entre 50 y 150 mg/ml en seis
inyecciones para solución de fármaco estándar y de muestra. entre días
Se determinó la variación para las mismas concentraciones para los tres
días consecutivos como el día 1, día 2 y día 3 [33]. El porcentaje de recuperación de
la edad de los seis valores de prueba individuales osciló entre Fig. 3. Curva de calibración de DRV.

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Tabla 4 ml respectivamente. Los resultados de LOD y LOQ revelaron que el

Estudios de adecuación del sistema. El método DRV RP-HPLC desarrollado fue muy sensible para estimar el DRV [35].
SL. Nº Parámetros Resultados (media ± DE)

1 Placa Teórica (N) 28517 ± 251

2 Tiempo de retención (min) 3,15 ± 0,1 3.2.5. Idoneidad del systema
3 Factor de coleo 1,31 ± 0,2 La solución estándar de DRV que contiene la concentración de
4 LOD (mg/ml) 0,31 ± 0,02
Se evaluó 100 mg/ml para los estudios de idoneidad del sistema. Se encontró que
5 LOQ (mg/ml) 0,96 ± 0,07
6
el tiempo de separación de la condición cromatográfica era de 3,15 ±
Precisión del sistema
Concentración de solución estándar (mg/ml) 100 0,1 minutos Se encontró que los marcos como el factor de cola, el tiempo de
Concentración medida (mg/ml) 99.3 retención, el número de placa teórica (N) y la precisión del sistema estaban en
% RSD 0,65 ± 0,02 el valor aceptable <2% [36]. El resultado obtenido estuvo dentro del
criterios de aceptación como se menciona en la Farmacopea de los Estados Unidos.
Los valores detallados se representaron en la Tabla 4.
3.2.4. Límite de detección y límite de cuantificación
Las soluciones de concentración de fármaco estándar y de muestra preparadas
3.2.6. Especificidad y selectividad
estaban destinados a las curvas de calibración. Con la ayuda de la pendiente
El presente estudio ha demostrado un buen tiempo de retención con fácil
obtenido de la curva de calibración, LOD y LOQ de DRV de
fase móvil disponible mientras se compara con los estudios de investigación
el método desarrollado resultó ser 0,31 mg/ml y 0,96 mg/
realizados anteriormente para el mismo fármaco. El método fue quan

Fig. 4. Gráfico de HPLC de (a) DRV estándar y (b) DRV de muestra.

Tabla 5
Robustez y robustez del método desarrollado para DRV.
Condiciones Tiempo de retención (min) % de recuperación (media ± DE)

DRV estándar DRV de muestra DRV estándar DRV de muestra

0,5 ml/min 3.09 3.11 99,2 ± 0,6 99,4 ± 0,1

1,5 ml/min 3.54 3.65 99,6 ± 0,2 99,8 ± 0,7
Temperatura de la columna (24,5 C) 3,7 3,19 98,3 ± 0,1 99,4 ± 0,3
Temperatura de la columna (27,1 C) 3,65 3,68 99,6 ± 0,9 99,5 ± 0,4
ACN:agua (65:35) 4,1 4,3 98,9 ± 0,7 98,5 ± 0,2
ACN:agua (80:20) 4,5 4,8 98,4 ± 0,2 98,7 ± 0,6

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Tabla 6
Datos de ensayo para DRV marcado.
Droga Declaración de Cantidad encontrada (mg) % Contenido
etiqueta (mg) (media ± DE) (media ± DE)
Darunavir 600 596,26 ± 2,9 99,3 ± 0,12
(Danavir 600)
tificado con buena resolución. La inferencia no se obtuvo con la muestra en
blanco. La proporción de fase móvil de ACN y agua (30:70) utilizada para
este método es económica. Los 3,16 min y 3,12 min fueron el tiempo de
retención observado para las concentraciones de DRV estándar y de
muestra, como se muestra en la Fig. 4. Se encontró que el tiempo de
of
retención obtenido fue menor en comparación con otros métodos desarrollados [37].Pharmacy, Janatha Education Society, Bangalore – 560 055 por
proporcionar las instalaciones necesarias para llevar a cabo esta investigación.
3.2.7. Robustez y robustez
Las variaciones menores en los parámetros cromatográficos, como la
velocidad de flujo de la fase móvil (0,5 ml/min y 1,5 ml/min), las diferentes
relaciones de fase móvil (65:35 y 80:20) y la temperatura de la columna
(24,5 C y 27,1 C) se aplicó para averiguar la solidez y robustez del método
DRV RP-HPLC desarrollado actualmente [38].
El resultado obtenido no ha mostrado ninguna alteración significativa en el
área del pico y el tiempo de retención (Tabla 5). El porcentaje de
recuperación de DRV estuvo cerca del 99,0 % para la solución estándar y
del 99,2 % para la solución de muestra. Se encontró que el % RSD era
inferior al 2,0 % en diferentes condiciones, lo que garantiza que el presente
método es sólido y resistente.
3.3. Análisis de la tableta DRV comercializada
Para averiguar el contenido de DRV en el producto comercializado, las
seis soluciones de muestra repetidas se inyectaron en el cromatograma
para obtener el área del pico. La cantidad presente en cada formulación de
tableta y el porcentaje de contenido de DRV se cuantificó utilizando el área
de pico promedio y la curva de calibración estándar obtenida de la ecuación
de regresión. Se encontró que el contenido del fármaco obtenido a partir de
los valores medios de seis soluciones de muestra estaba en el rango
aceptable de 90 a 110 % según lo indicado en la etiqueta. El informe
demostró que el método DRV RP-HPLC desarrollado era preciso y simple
y se puede utilizar para el análisis de rutina diario [39]. El resultado obtenido
se presentó en la Tabla 6.
4. Conclusión
Se desarrolló un método exacto, preciso, robusto, confiable y reproducible
para la estimación cuantitativa de DRV en forma de dosificación de tabletas
(Danavir 600) utilizando el método RP-HPLC. El solvente utilizado como
fase móvil había mostrado una muy buena tasa de resolución con menor
tiempo de retención. El método siguió las pautas de ICH y FDA y el informe
obtenido estuvo dentro de los criterios aceptables. La exactitud, la precisión
y la linealidad del método se establecieron en el rango para determinar la
calidad del contenido del fármaco. El método RP-HPLC descrito aquí
permite una cuantificación reproducible de DRV. El informe estadístico
indica que el método desarrollado se puede utilizar con éxito para nuestro
método de determinación de rutina. El informe de especificidad demostró
que no hay interferencia del excipiente. Este estudio puede extenderse aún
más al estudio de cinética con plasma y fluidos biológicos. El hecho de este
nuevo método mostró una mejor relación costo-efectividad en comparación
con los trabajos reportados anteriormente.
Declaración de contribución de autoría CRediT
Karthika Paul: Conceptualización, Metodología, Validación, Investigación,
Redacción - borrador original. BH Jaswanth Gowda: conceptualización,
investigación, curación de datos, escritura - original
Materiales hoy: Actas 47 (2021) 4155–4161
borrador, Redacción - revisión y edición. SJ Shankar: Visualización. D.
Narasimha Reddy: Recursos, Supervisión.
Declaración de interés en competencia
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en
competencia ni relaciones personales conocidas que pudieran haber
influido en el trabajo informado en este documento.
Agradecimientos
Los autores agradecen al director y la gerencia, Vivekananda College
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