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Gen vegetal 30 (2022) 100359

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página de inicio de la revista: www.elsevier.com/locate/plantgene

Un gen de maíz que codifica una superlectina quimérica reduce el crecimiento de

patógenos fúngicos del maíz y plagas de insectos cuando se expresa transgénicamente
en callos de maíz

Patrick F. Dowd a,*, Todd A. Naumann b , eric t johnson un

un
USDA, Servicio de Investigación Agrícola, Centro Nacional para la Investigación de Utilización Agrícola, Unidad de Investigación de Bioprotección de Cultivos, 1815 N. University St., Peoria, IL 61614,
EE. UU.
b
USDA, Servicio de Investigación Agrícola, Centro Nacional para la Investigación de Utilización Agrícola, Unidad de Investigación de Microbiología Aplicada y Prevención de Micotoxinas, 1815 N.
University St., Peoria, IL 61614, EE. UU.

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Editor: A Rooney El mejoramiento de plantas para resistencia a plagas es un proceso largo, y la tasa de desarrollo de variedades resistentes se aceleraría si se
pudieran identificar genes de resistencia a múltiples plagas. Se clonó un gen ubicado en un locus de resistencia a partir de un endogamia de
Palabras clave: maíz con resistencia a Fusarium spp. patógenos Este gen codifica una lectina inusual con regiones de alta frecuencia de histidina y prolina y
fusarium
dos restos aparentes de unión al azúcar. Los estudios de unión con versiones producidas por levadura indicaron que los residuos de N-acetil
Helicoverpa
glucosamina son un objetivo probable. Cuando el gen se expresó transgénicamente en callos de maíz, se observó una reducción del crecimiento
lectina
Resistencia de las plantas
de especies patógenas de Fusarium (hasta un 71 %) y plagas de orugas (hasta un 65 %) en comparación con los transformantes de control, y

espodópteros
el grado de inhibición del crecimiento se asoció con los niveles de la proteína detectada. La secuencia disponible del gen de otros cultivos
endogámicos de maíz indicó que a menudo estaba interrumpido y probablemente codificaba proteínas con función reducida. Es probable que la
incorporación de versiones funcionales del gen en los cultivos ayude con la producción sostenible de cultivos al promover una mayor resistencia
a las plagas.

1. Introducción
Los daños a los cultivos causados por insectos y enfermedades representan enormes
pérdidas económicas en todo el mundo cada año (Oerke, 2006). El maíz es uno de los cultivos
de granos más importantes del mundo y es atacado por varias especies diferentes de insectos
y patógenos en todo el mundo (Savary et al., 2009). Dependiendo de los patógenos y el daño
de los insectos asociados, también puede ocurrir una producción no deseada de toxinas
dañinas para los animales y las personas, lo que resulta en pérdidas adicionales de millones
de dólares (Tola y Kebede, 2016). Debido a los diferentes complejos de plagas de un año a
otro, las medidas de control pueden ser particularmente complicadas de implementar,
especialmente si plagas de diferentes clases ocurren al mismo tiempo y se emplean medidas
químicas.
La protección incorporada a las plantas puede ser una medida de control eficaz y
económicamente aceptable para las plagas de los cultivos (Fritsche-Neto y Borem, 2012). La
reciente incorporación de genes que codifican formas de proteína cristalina de Bacillus
thuringiensis (Bt) ha sido particularmente eficaz contra algunas especies de insectos, pero en
otros casos, la resistencia se ha desarrollado relativamente.
rápidamente (Kurtz y Reisig, 2018). El “apilamiento” de genes Bt, que a menudo se combina
con la introducción de transgenes que codifican proteínas que promueven la resistencia a
herbicidas, ha ayudado en algunos casos, pero el desarrollo de resistencia aún puede ser un
problema (Que et al., 2010).
Los genes de resistencia a plagas autoderivados ofrecen una estrategia de resistencia a
plagas incorporada en plantas potencialmente más deseable y estable, pero el despliegue
utilizando estrategias de reproducción o transgénicas ha sido limitado o indeseablemente lento
hasta ahora. La tecnología de edición de genes más nueva puede "reparar" genes que producen
proteínas de resistencia que no son funcionales o tienen una funcionalidad menor, una
condición que se ha descrito para genes de resistencia a plagas de maíz en varios casos (Dowd
y Johnson, 2016; Dowd et al., 2018). , 2019, 2020). Las reparaciones o las introducciones
completas de genes de resistencia a plagas completamente funcionales se pueden enfocar con
mayor precisión mediante la edición de genes que otras técnicas de introducción de genes,
como la biolística o Agrobacterium tumifaciens (Kuzma, 2018). Es posible que se introduzcan
múltiples genes de resistencia, lo que da como resultado una resistencia efectiva a través de
una combinación de genes individualmente menos efectivos, lo que conduce a una resistencia
multigénica cuantitativa mediada biotecnológicamente. Plantas con rasgos deseables.

* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: patrick.dowd@usda.gov (PF Abajo).

https://doi.org/10.1016/j.plgene.2022.100359 Recibido el
17 de septiembre de 2021; Recibido en forma revisada el 28 de marzo de 2022; Aceptado el 1 de abril de 2022
Disponible en línea el 6 de abril de 2022
2352-4073/Publicado por Elsevier BV
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PF Dowd et al.
introducidos mediante la edición de genes de genes "propios" también están exentos de regulación,
o están regulados de manera menos estricta en algunos países (Kuzma, 2018).
Ya sea mediante mejoramiento convencional, introducción transgénica, edición de genes o
alguna combinación de los mismos, reducir la cantidad de genes que deben incorporarse para el
control de plagas es particularmente valioso ya que se reducen los costos de desarrollo y se pueden
aumentar las tasas de desarrollo. Por lo tanto, es especialmente deseable la identificación de genes
de resistencia eficaces que produzcan productos activos contra múltiples especies de plagas,
especialmente plagas de diferentes clases. Un grupo de proteínas de resistencia con esta potencial
ventaja son las lectinas vegetales que pueden ser tanto antimicrobianas (Coelho et al., 2018) como
insecticidas (Reyes-Montano ˜ y Vega-Castro, 2018). Nuestra investigación de genes ubicados en
metaQTL informados anteriormente para la resistencia a la pudrición de la mazorca de maízet(Xiang
al.,
2010) identificó un gen que tenía una porción con homología con la cadena B de la lectina de ricino
(Ricinus communiis) . Para investigar más a fondo el potencial de este gen para promover tanto la
resistencia a los patógenos del maíz como a las plagas de insectos, se clonó el gen a partir de un
consanguíneo con resistencia a Fusarium spp. patógenos del maíz, introducidos transgénicamente
en el callo, y el callo transformado evaluado para aumentos en la resistencia relativa
para controlar transformantes.
2. Materiales y métodos
2.1. Insectos
Se criaron gusanos cogolleros (Helicoverpa zea) y gusanos cogolleros (Spodoptera frugiperda)
con una dieta que consistía principalmente en frijoles pintos, germen de trigo y levadura de cerveza,
como se describió anteriormente (Dowd, 1988).
Se usaron larvas de primer estadio en bioensayos.
2.2. hongos
Fusarium graminearum, Fusarium proliferatum y Fusarium verti cillioides, originalmente aislados
del maíz, se cultivaron y prepararon como suspensiones de esporas como se describió anteriormente
(Dowd et al., 2019). Beauveria bassiana, una endoftia de maíz y otras plantas (Vega, 2018) se
obtuvo de Seven Springs Organic Gardening (Check, Virginia) como un producto formulado de la
cepa Ant03. Las suspensiones de esporas se prepararon como se describió anteriormente (Dowd et
al., 2020).
2.3. Plantas
La semilla de GE440 endogámica se obtuvo del USDA, Servicio de Investigación Agrícola,
Estación de Introducción de Plantas Regionales del Centro Norte (Ames, Iowa). La semilla se cultivó
en el campo en Peoria como se describió anteriormente (Dowd y White, 2002). Los granos en etapa
de leche se usaron para aislar el ARN para la clonación de genes.
2.4. Clonación de genes y transformación de callos
El ARN se aisló de granos en etapa de leche y el ADNc se generó como se describió
anteriormente (Dowd y Johnson, 2016). El gen de la lectina de maíz se clonó por PCR utilizando el
cebador directo CCC-CCC-GGG-ACA-TGT TCG-GGC-ACC-ACCA y el cebador inverso GCC-GCC-
GGA-GCT-CTA CCC-AGG-GCA-GGA-TCT -TCCA utilizando condiciones de ciclado como se ha
descrito anteriormente (Dowd and Johnson, 2016; Dowd et al., 2020) con una temperatura de
recocido de 73,5 ÿC. El producto de la PCR se digirió con enzimas de restricción y se ligó al vector
de transformación biolística pAHC25 (Christiansen and Quail, 1996) después de eliminar el gen GUS
como se describió anteriormente (Dowd and Johnson, 2016). Las células BMS de maíz se
transformaron biolísticamente y se seleccionaron en medios de bialafos como se describió
anteriormente (Dowd y Johnson, 2016). Una vez que estuvieron disponibles las cantidades
adecuadas de callo, se realizaron la detección de transgenes, la detección de proteínas y los
bioensayos. La construcción de transformación inalterada pAHC25 se utilizó como transformación
de control para la evaluación comparativa.
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2.5. Detección de transgenes
El ADN se aisló de material de callo transgénico como se describió anteriormente (Dowd y
Johnson, 2016). Un cebador directo que contiene parte de la región promotora (Dowd et al., 2020) y
un cebador inverso que contiene parte de la secuencia de lectina de maíz (CTG-CAG-CTG-GTG-
GAG-GAG-GGT ATC) a una temperatura de hibridación de 55,1 ÿ C, o un cebador directo alargado
que contiene parte de las regiones promotoras CCC-CCC-CCC-CTG CAG-GTC-GAC-TCT-AGA-GGA-
TTC-CCC y el cebador de clonación inversa se utilizaron a la misma temperatura de hibridación
utilizada para el gen la clonación se evaluó con PCR para detectar el gen como se describió
anteriormente (Dowd y Johnson, 2016). La identidad se confirmó mediante secuenciación.
2.6. Detección de productos genéticos
El callo transgénico liofilizado se homogeneizó en tampón de fosfato de pH 7,4, se centrifugó y
los sobrenadantes se usaron para la separación mediante electroforesis en gel como se describió
anteriormente (Dowd y Johnson, 2016; Dowd et al., 2019). Debido a que una región natural de alta
frecuencia de histidina, incluidas 5 histidinas consecutivas, ocurrió en la región N-terminal (ver
Resultados) y se sabe que la unión de iones metálicos ocurre en regiones de alta histidina
independientemente de la ubicación en la proteína (Cheung et al., 2012), la detección de etiquetas
His fue un método apropiado para detectar y cuantificar la proteína. Se usó una tinción de detección
de etiqueta His en gel (novexR, InVis ionTM His-tag In-Gel Stain, Life Technologies, Carlsbad, CA)
de acuerdo con las instrucciones del fabricante; excepto tres enjuagues de 10 min en lugar de dos
enjuagues de 15 min donde se especifica. Se tomaron imágenes de las bandas de gel y se
cuantificaron como se describió anteriormente (Dowd et al., 2018, 2019, 2020). Se usó una proteína
marcada con His pTAN236_fusion (peso molecular 41.829, carga 0,5, pI 6,56) como patrón de
tinción positivo para la detección de gel.
2.7. Comparaciones de estructuras de proteínas
Las similitudes con otras proteínas se determinaron con consultas BLAST en Genbank para
similitudes de secuencias (Johnson et al., 2008), comparaciones de secuencias genómicas de
MaizeGDB (https://maizegdb.org), y consultas en Swiss Model para estructura tridimensional
(Waterhouse et al., 2018). Las alineaciones se determinaron usando DNAstar Megalign (DNAstar,
Madison, Wisconsin). La escisión potencial de la secuencia señal N-terminal se determinó con Signal
P (Armenteros et al., 2019).
2.8. Construcción, expresión y purificación de cepas heterólogas de la lectina de maíz producida
en levadura
Los métodos utilizados para la producción de levadura de la lectina de maíz fueron similares a
los descritos anteriormente (Dowd et al., 2018, 2020). La lectina de maíz se produjo en la levadura
Pichia pastoris. Se diseñó y sintetizó una secuencia de ADN optimizada por codones (IDTDNA,
Coralville IA). A continuación, el ADN sintetizado se clonó en un plásmido comercial diseñado para
dirigir la expresión citoplásmica de proteínas bajo el control de un promotor constitutivo, pGAPZ B
(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA). Se aisló una cepa de E. coli que contenía el plásmido
correcto, pTAN254, y se verificó mediante secuenciación de ADN. El plásmido se produjo en cultivo
de E. coli , se purificó con un kit plasmid plus midi (Qiagen, Germantown MD), se linealizó con
endonucleasa de restricción BspHI , se transformó en P. pastoris X-33 electrocompetente y se
seleccionó en medios con el agente selectivo zeocina (1% extracto de levadura, 2% peptona, 2%
dextrosa, 2% agar, 1 mg/ml de zeocina). Se retuvo un clon resistente a la zeocina como TAN611.
Se utilizó para producir lectina de maíz recombinante.
La lectina de maíz se purificó a partir de cultivos TAN611. Inicialmente, se inoculó un cultivo
iniciador de 5 ml de YPD + Z (1% extracto de levadura, 2% peptona, 2% dextrosa, 0,1 mg/ml de
zeocina) de una placa de agar y se cultivó hasta la saturación, 24 ha 30 ÿC. Luego, con 0,4 ml de
cultivo saturado se inoculó un YPD de 400 ml (1% extracto de levadura, 2% peptona, 2% dextrosa)
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PF Dowd et al.
cultivo de expresión en un matraz con deflectores de 2 l. Este cultivo de expresión se hizo
crecer durante 2 días a 25 ÿC. A continuación, las células se recogieron mediante
centrifugación y se suspendieron en tampón de lisis (HEPES 20 mM, pH 7,5). Las células se
lisaron usando un Bead-beater (BioSpec Products, Bartlesville, OK) usando una pequeña
cámara de 15 ml con perlas de vidrio de 0,5 mm de diámetro. Después de la lisis, la muestra
se centrifugó y se retuvo el sobrenadante. Para purificar la lectina de maíz, el lisado se vertió
sobre una columna de flujo por gravedad que contenía 0,5 ml de resina HisPur Ni-NTA
(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), equilibrada con tampón (HEPES 20 mM, pH 7,5). A
continuación, la columna se lavó con 20 ml de tampón de lavado (HEPES 20 mM, pH 7,5,
NaCl 0,5 M, imidazol 0,02 M). A continuación, la superlectina unida se eluyó mediante la
adición de tampón de elución (HEPES 20 mM, pH 7,5, imidazol 0,3 M). Se recogieron
fracciones de 0,5 ml y las dos fracciones con la mayor cantidad de superlectina se combinaron
y concentraron por ultrafiltración utilizando un filtro centrífugo Amicon Ultra de 0,5 ml con un
límite de peso molecular nominal de 10.000 (Millipore Sigma, Burlington MA). La concentración
de proteína se determinó midiendo la absorción a 280 nM utilizando un coeficiente de
extinción de 82.765 calculado a partir de la secuencia primaria.
2.9. Ensayos de unión de azúcar
Los azúcares previamente identificados como objetivos de lectina en insectos y hongos
se examinaron utilizando el lisado inicial de la lectina de maíz producida por levadura. Se
usaron agarosa manosa (Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri), galactosa y galactosamina (G-
Biosciences, St. Louis, Missouri) para ensayos de unión por afinidad según las instrucciones
del fabricante. La agarosa se cargó en columnas de 1 ml y se usaron 20 volúmenes de
columna de tampón durante el paso de lavado. Se usó un tampón que contenía 0,1 M del
azúcar apropiado para eluir las proteínas potencialmente unidas. Los resultados se obtuvieron
comparando el contenido de proteínas del material de partida, el flujo continuo y las proteínas
eluidas mediante SDS-PAGE. Se utilizaron concanavalina A y manosa (Sigma-Aldrich, St.
Louis, Missouri) para validar la metodología de unión. Como no se pudo obtener agarosa de
N-acetil glucosamina, se usaron ensayos competitivos usando N-acetil glucosamina (Sigma
Aldrich, St. Louis, Missouri) a 0,01 M en ensayos de medios de germinación de esporas (ver
más abajo) para intentar prevenir la aglutinación de esporas como se describe anteriormente
para ensayos comparables con aglutinina de germen de trigo (Poschenrieder y Huber, 1982),
que también se une a la N-acetil glucosamina.
2.10. Bioensayos
Se realizaron bioensayos con material de callos, insectos y hongos como se describió
anteriormente (Dowd and Johnson, 2016; Dowd et al., 2019, 2020). Brevemente, los ensayos
se prepararon utilizando placas de Petri con tapas herméticas que contenían agar al 3%. Se
colocó un grupo de callos en un disco de Teflon™ en placas duplicadas para cada
transformante que se usó en los ensayos con insectos, y se usaron 6 grupos de callos por
placa para los ensayos con hongos. Los ensayos se establecieron en múltiples ocasiones.
Los ensayos de aglutinación de esporas se realizaron utilizando métodos idénticos o
similares a los descritos anteriormente (Dowd et al., 2020). Los ensayos de esporas no
germinadas se realizaron por triplicado como se describió previamente. Para los ensayos de
esporas germinadas, 10 ÿl de caldo de extracto de levadura, 5 ÿl de una suspensión de
esporas de Fusarium graminearum que contenga aproximadamente 5 × 104 unidades
formadoras de colonias y 5 ÿl de un control de vector vacío o una preparación de lectina de
maíz (que contenga aproximadamente 0,4 ÿg/ul de la lectina) se añadieron a un tubo tapado
de 200 ÿl y se incubaron a 27 ÿC durante la noche. Cada tratamiento se realizó por triplicado.
Luego, los tubos se agitaron suavemente, se colocaron 10 ÿl en un portaobjetos de
microscopio, se agregó un cubreobjetos y los portaobjetos se examinaron utilizando un
sistema de imágenes de células microscópicas EVOS (Life Technologies, Carlsbad, CA) con
un aumento de 10x y 40x; Se examinaron 10 campos por portaobjetos con un aumento de
10x.
2.11. análisis estadístico
Diferencias significativas en el peso de los insectos y las tasas de crecimiento de hongos
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se determinaron mediante análisis de varianza, utilizando SAS Proc GLM Versión 8 (SAS
Instituted Cary, NC) como se describió anteriormente (Dowd et al., 2019, 2020). Las
correlaciones entre los niveles de proteína de lectina de maíz cuantificados y los parámetros
del bioensayo se realizaron utilizando SAS Proc Reg Version 8 como se describió
anteriormente (Dowd et al., 2019, 2020).
3. Resultados
3.1. Ubicación del gen
El gen de la lectina de maíz que clonamos se designa en Gramene como
GRMZM2G003409. Se colocó en el cromosoma 2 en 218 011 745-218 014 457 cuando se
inició nuestro estudio, y actualmente (desde el 9-7-21) en 224 094 275-224 096 987 para el
B73 consanguíneo.
3.2. Comparaciones de secuencias de proteínas
La secuencia de proteína traducida tiene 449 aminoácidos, un peso molecular previsto
de 49.408,4, una carga de -1,78 y un pI de 6,83. Hay dos sitios de glicosilación potenciales
en 165–167 (NQS) y 316–318 (NGT). La secuencia traducida tiene algunas similitudes con
otras secuencias informadas de los endogámicos B73 (que varían) y Mo17 (Fig. 1
complementaria). La secuencia más similar del B73 consanguíneo se depositó en 2012
(NP_001140850), y solo difería en un aminoácido (D por Y en la posición 426) de la secuencia
clonada (Figura 1 complementaria). Una secuencia genómica B73 de 2015 (ONM26250)
tenía 19 aminoácidos ausentes de la región de unión de azúcar N-terminal que comienza en
la posición 39, incluida la Q crítica del sitio potencial de unión de azúcar QXW (ver más
abajo), así como la diferencia Y por D . Una secuencia de B73 de 2009 derivada de ADNc
elaborado a partir de ARNm (ACL52677) tenía múltiples diferencias, incluida una gran región
insertada que comenzaba en la posición 100, aunque la región que faltaba en la secuencia
de B73 de 2015 estaba presente. A una secuencia de 2019 de Mo17 (PWZ41175) identificada
por tener homología con la cadena B de la ricina, también le faltaba la misma secuencia
descrita para ONM26250.
Aunque las secuencias homólogas del mijo cola de zorra (Setalia italica, XP_004958722) y
el sorgo (Sorghum bicolor, XP_002461229.2) eran menos similares, ambas contenían la
región de 18 aminoácidos que faltaba en las secuencias B73 y Mo17. También se encontraron
varias secuencias interrumpidas en MaizeGDB (consultado el 30-21 de mayo), sin ninguna
secuencia en el cromosoma 2 y solo una pequeña porción de 171 pb en el cromosoma 7
para PH207. Otras secuencias estaban en el cromosoma 2, pero la secuencia no tenía codón
de inicio para EP1, la secuencia no tenía codón de terminación para W22 y solo una
secuencia corta de 122 pb estaba en el cromosoma 2 para CML247. A los endógamos B104
y F7 les faltaban porciones importantes de la región N-terminal pero tenían una alta homología
en la región C-terminal.
Había poca similitud entre los primeros 177 aminoácidos del producto génico clonado y
la lectina 72 de la cadena B de ricino; luego se produjo una similitud notable de manera
intermitente, y se produjo una gran similitud comenzando con el aminoácido 155 de la
secuencia de ricino, que continuó hasta el final de la secuencia para ambos (Figura 2
complementaria).
Sin embargo, había una secuencia de lectina de ricino con mayor homología con la lectina
de maíz (Figura 2 complementaria).
Grandes porciones de las regiones N-terminal (aminoácidos 21-173) y C-terminal
(aminoácidos 297-448) codificadas por el gen de la lectina de maíz clonado eran muy
similares entre sí, pero contenían algunas diferencias en los aminoácidos. potencialmente
involucrados en la unión del azúcar (por ejemplo, D, E, F, H, I, K, N, Q, R, S, V, W, Y) en
comparación con los informados para la lectina B de ricino (Houston y Dooley, 1982; Sphyris
et al., 1995) o la lectina MTX de mosquitos (Treiber et al., 2008) (Fig. 3 complementaria), lo
que sugiere que se pueden unir diferentes azúcares.
Había múltiples histidinas cerca de la porción N-terminal en las posiciones 4 a 8, 10, 13,
14 y 20. En la región de secuencia central había 40 de 123 aminoácidos que eran prolinas,
incluidas 6 porciones de las regiones de secuencia donde había eran 4 o 5 prolinas
consecutivas.
El examen de la secuencia para la homología 3D en Swiss Model indicó homología con
una toxina mosquitocida (2vse.1.A), sin embargo, el
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la homología no incluía los primeros 270 aminoácidos o la porción central con la región P alta
(Fig. 1).

3.3. Detección de transgenes y proteínas.

El transgén se detectó en el callo de tres transformantes diferentes (Fig. 2). Se detectó la

proteína de los tres transformantes a niveles superiores a los del control de fondo, aunque las
cantidades relativas detectadas de cada transformante variaron según la fecha del material
(Fig. 3).

3.4. Actividad biológica del callo transformado

Los bioensayos con material de callo transformado generalmente indicaron que el callo
transformado con el gen de la lectina de maíz a menudo tenía mayor resistencia a los insectos
y hongos probados que el callo transformado con el gen GUS (material de control). El callo
transformado con el gen de la lectina del maíz inhibió el crecimiento tanto del gusano cogollero
como del gusano cogollero en relación con el callo de control GUS hasta en un 59 % para el
gusano cogollero y en un 65 % para el gusano cogollero en algunos casos (Tabla 1). La mayoría
de los materiales transformantes de lectina de maíz inhibieron el crecimiento de las tres
especies de patógenos de Fusarium en la mayoría de las fechas de ensayo (Tabla 2). La
inhibición máxima del crecimiento por el callo transformado que contenía el gen de la lectina de
maíz clonado fue superior al 70% para F. graminearum, 40% para F. proliferatum y superior al
Fig. 2. Detección de transgén de lectina de maíz en callos de maíz por PCR. Carril 1, estándar de
35% para F. verticillioides. Dos de los transformantes también inhibieron significativamente el
ácido nucleico, flecha superior en 1500 pb, flecha inferior en 1000 pb; carril 2, transformante
crecimiento de B. bassiana en relación con el callo de control GUS (Tabla 3) en ensayos que
representativo 1, pares de cebadores de productos más cortos; carril 3, transformante representativo
se realizaron más tarde que los de Fusarium; el transformante menos activo tenía niveles 2, pares de cebadores de productos de longitud completa; carril 4 transformante representativo 3,
relativamente bajos en comparación con los otros dos cuando se cuantificó la lectina de maíz pares de cebadores de productos más cortos.
(datos no mostrados).

Mayores cantidades de reducción en el crecimiento de insectos y hongos alimentados con

el callo transformado con el gen de la lectina de maíz se asociaron con niveles más altos de
lectina detectados en geles de los ensayos del mismo día.
Las comparaciones de ensayos de días cruzados se ajustaron en relación con la calificación
del control GUS para permitir las comparaciones. Las correlaciones más altas fueron

Fig. 3. Detección de proteína lectina de maíz en callo de maíz transgénico. Carril 1, proteína his-tag
positiva como estándar de tinción; carriles 3,5,6,7 transformante 2 callo de diferentes fechas; carriles
2 y 4 transformante 3 callo de diferentes fechas; carril 8, transformante representativo 1 callo; carril
9, transformante de control GUS.

tabla 1
Efectos de la lectina de maíz en callos transformados en insectos.

Transformante Gusano de maíz Gusano cogollero

Peso (mg) % Reducción Peso (mg) % Reducción

Ensayo
1 GUS-1 control 0,45 ± 0,04 Lectina 0,57 ± 0,10
1 0,23 ± 0,03 * 48,9 0,29 ± 0,49 ± 0,06 14.0
lectina 2 0,02 * 35.6 0,40 ± 0,04 29.8
Ensayo
2 GUS-2 control 0,49 ± 0,07 Lectin 0,37 ± 0,05
1 0,26 ± 0,02 * 46,9 0,26 ± 0,02 * 29,7
lectina 2 0,20 ± 0,04 * 59,1 0,13 ± 0,03 * 64,9

Los valores son medias ± errores estándar. Valores en ensayos similares para insectos similares
“*”
seguidos de un son significativamente diferentes a P < 0.05 por análisis de varianza.

asociado con F. graminearum (R = 0,80, F = 10,55, P = 0,0175) y F. proliferatum (R = 0,86 F =

11,69, P = 0,0268).

3.5. Ensayos de aglutinación de esporas

Fig. 1. Comparación de estructuras tridimensionales de holotoxina mosquitocida (arriba) y lectina
de maíz (abajo).
No se observó aglutinación de esporas por la lectina de maíz producida por levadura para
las esporas no germinadas. Sin embargo, en los ensayos de germinación de esporas, se notó
comúnmente la formación de grumos de esporas para los tratamientos con lectina de maíz (Fig.
4), lo que no se observó para los controles de tampón o los controles de proteína de vector
vacío.

4
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Tabla 2

Inhibición del crecimiento de patógenos de Fusarium del maíz por callos de maíz transformados con un gen de lectina de maíz.

Transformante fusarium graminearum fusarium proliferatum fusarium verticillioides

Clasificación % Reducción Clasificación %Reducción Clasificación %Reducción

Ensayo 1
control GUS 7,8 ± 0,4 6,5 ± 0,3 7,0 ± 0,3
lectina 1 6,2 ± 0,4 * 20.5 5,7 ± 0,2 12.3 5,0 ± 0,3 * 28.6
lectina 2 5,8 ± 0,5 * 25.6 5,5 ± 0,6 15.3 4,3 ± 0,4* 38.6
Ensayo 2
control GUS 7,6 ± 0,4
lectina 1 2,2 ± 0,5 * 71.1
lectina 2 6,0 ± 0,4 * 21.0
Ensayo 3
control GUS 8,5 ± 0,3 7,0 ± 0,3 7,3 ± 0,2
lectina 1 8,2 ± 0,3 3.9 4,3 ± 0,2 * 38.2 7,2 ± 0,2 1.4
lectina 2 5,8 ± 0,2 * 31.4 5,3 ± 0,5 * 24.3 7,2 ± 0,2 1.4
lectina 3 4,3 ± 0,2 * 49.0 4,2 ± 0,3 * 40,0 6,8 ± 0,4 6.8
Ensayo 4
control GUS 9,7 ± 0,2 7,3 ± 0,2 8,2 ± 0,2
lectina 1 7,2 ± 0,4 * 25,0 6,0 ± 0,3 * 17.8 6,7 ± 0,2 * 18.3
lectina 2 7,6 ± 0,5 * 20.8 6,3 ± 0,3 * 13.7 7,2 ± 0,3 * 12.2
lectina 3 6,8 ± 0,4 * 29.3 6,5 ± 0,3 11.0 7,4 ± 0,6 9.8

Los valores informados son medias ± errores estándar para al menos 4 repeticiones por tratamiento. El crecimiento se calificó en una escala de números enteros, siendo 0 ningún crecimiento visible, 5 una cobertura
“*”
del 50 % y 10 una cobertura total. Los valores seguidos de a son estadísticamente ND
diferentes
= no determinado.
de los valores
Algunos
de control
resultados
en el mismo
de ensayos
ensayo
son
para
de las
fechas
mismas
diferentes
especies
parafúngicas
F. graminearum
determinadas
en comparación
por análisis con
de varianza.
F.
proliferatum y F. verticilloides.
Los valores de FP y FV son de las mismas últimas 2 fechas que los ensayos de FG.

Cuadro 3

Inhibición del crecimiento de Beauveria bassiana por callos de maíz transformados con un gen de lectina de maíz.

Transformante Ensayo 1 Ensayo 2 Ensayo 3

Clasificación %Reducción Clasificación % Reducción Clasificación % Reducción

control GUS 4,5 ± 0,3 6,2 ± 0,5 8,5 ± 0,3

lectina 1 2,2 ± 0,2 * 51.1 4,2 ± 0,2 * 32.2 5,8 ± 0,5 * 31.8
lectina 2 3,7 ± 0,2 17.8 7,7 ± 0,5 0.0 8,5 ± 0,5 0.0
lectina 3 2,8 ± 0,5 * 37.8 5,2 ± 0,7 * 16.1 7,0 ± 0,4 * 17.6
“*”
Los valores informados son medias ± errores estándar para 4 repeticiones por tratamiento. Valores seguidos de un son estadísticamente diferentes de los valores de control en el mismo ensayo que
determinado por análisis de varianza.

controles de búfer.

4. Discusión

4.1. Clasificación de las lectinas de maíz

La proteína tiene algunas características poco comunes que pueden estar relacionadas con
su modo de acción. Estos incluyen una región de dos lóbulos en las porciones N-terminal y C-
terminal, cada una potencialmente involucrada en la unión de diferentes azúcares, pero
posiblemente también enzimáticamente activa. La lectina de maíz también contiene una región N-
terminal alta en histidina y una región central alta en prolina. Debido a esta composición, puede
denominarse superlectina quimérica, según la clasificación estructural anterior de las lectinas
(Reyes Montano ˜ y Vega-Castro, 2018).

4.2. Homología de lectinas de maíz con lectinas insecticidas homólogas

La coincidencia más cercana a la secuencia de proteína de lectina de maíz en Swiss Model

Fig. 4. Aglomeración de esporas en germinación de Fusarium graminearum causada por la lectina de
fue una holotoxina mosquitocida (MTX) derivada de Bacillus sphaericus. Aunque no hubo similitud
maíz producida por la levadura.
en la holotoxina con la región central del maíz (multi P), grandes segmentos de las porciones N-
terminal y C-terminal de la lectina de maíz tenían homología con la holotoxina. La holotoxina
3.6. Ensayos de unión de azúcar
mosquitocida actúa como una ribosil transferasa que causa citotoxicidad (Schirmer et al., 2002).
Se sabe que la modificación de actina se produce para la toxina C2 ribosilante de ADP de
Ninguna lectina producida por levadura se unió a manosa, galactosa o galactosamina
Clostridium botulinum, que modifica la actina. Una forma análoga de la mariposa de la col (Pieris
agarosa. Se usó concanavalina A con la columna de manosa para verificar que las condiciones
rapae) es la piersin-1, una enzima ribosilante de ADP específica de guanina (Matsushima Hibiya
fueran relevantes, y se unió a la columna y se liberó con la adición de manosa. Sin embargo, la
et al., 2003). También se cree que el MTX mosquitocida se une a los glicolípidos (Treiber et al.,
adición de N-acetil glucosamina evitó la aglutinación de esporas por la lectina de maíz, y las hifas
2008). Como era de esperar de algunos de los
germinaron y parecieron normales en comparación con

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PF Dowd et al.
En las anotaciones antes mencionadas en Genbank, también hubo homología con la cadena
B de ricina que se une al azúcar para la porción N-terminal con el modelo suizo. Se cree que
esta molécula actúa al unirse a la galactosa, pero la región C terminal también puede unirse
tanto a los galactopiranósidos como a las N-acetilgalactosaminas; uniéndose a las membranas
celulares para que el ribosoma tóxico que inactiva la cadena A de la ricina pueda ingresar a la
célula (Sphyris et al., 1995; Hatakeyama et al., 1986). La similitud de la región N-terminal de la
lectina de maíz con la de la holotoxina mosquitocida no incluía la parte responsable de la
ribosilación del ADP de las proteínas en la holotoxina mosquitocida. La porción de ribosilación
se escinde del resto de la porción de la secuencia de 870 aminoácidos en 264/265, y la porción
de ribosilación es tóxica para los mosquitos, al igual que la proteína completa no hidrolizada
(después de la escisión de la secuencia señal) (Treiber et al., 2008). Sin embargo, la porción
C-terminal más grande es citotóxica para las células de insectos y ambas porciones se asocian
estrechamente (Thanabalu et al., 1993), lo que sugiere que las regiones correspondientes de
la lectina de maíz también serían tóxicas para las células de insectos.
4.3. Homología de la lectina de maíz con la lectina de cadena B de ricino
Aunque hay homología con la cadena B de la lectina de ricino, varios aminoácidos en la
lectina de ricino involucrados en la actividad de unión de azúcar son diferentes de los de la
lectina de maíz (ver más abajo). Hay una homología mucho mejor con una lectina B de ricino
como (XP_015578690), pero nuevamente esta lectina no tiene una homología tan cercana con
la lectina de maíz como otras formas de monocotiledóneas. Sin embargo, la región 147-190 de
lectina similar a la cadena B de ricino (región de lectina de maíz comparable 284-334) tiene
homología con una hidrolasa nucleófila N-terminal (ciclohidrolasa IMP, que puede catalizar la
ciclación de 5-formil amidoimidazol-4 -carboxamida ribonucleótido a inosina mono
fosfato involucrado en la biosíntesis de purina), lo que sugiere que la forma de maíz puede
tener actividad hidrolítica. La biosíntesis de IMP es importante para la infección, el crecimiento,
la reproducción y el crecimiento vegetativo de F. graminearum (Sun et al., 2021).
Dos regiones de la lectina de la cadena B del ricino se unen a la galactosa que se
encuentra en las membranas celulares (Sphyris et al., 1995). Los aminoácidos involucrados en
la unión del azúcar incluyen DVR (22–24) que forma el bolsillo de unión, junto con W37 e Y248
como plataforma de unión; la sustitución de una H en 248 interfiere con la unión de N-acetil
galactosamina (Sphyris et al., 1995). Los grupos OH de la galactosa se unen con N46 y N255,
y también se unen con D22 y D234 (que también interactúan con la galactosa)
(Sphyris et al., 1995). Si bien hay aminoácidos homólogos en la lectina de maíz (ver más
abajo), no todos están presentes, lo que sugiere una unión de azúcar diferente a la galactosa.
La lectina similar a una cadena B del ricino tiene regiones de múltiples H y P que son similares
a las de la lectina de maíz (aunque la versión de maíz tiene más H que P); y aunque la región
entre la región H y P no es muy homóloga para la lectina de maíz y la lectina similar a la
cadena B de ricino, existe una alta homología entre ambas lectinas para la región post P de la
secuencia de lectina, especialmente en las regiones correspondientes del maíz. aminoácidos
de lectina 298–448.
Hay algunos aminoácidos de unión comunes que se encuentran tanto en la lectina de
cadena B de ricino como en la lectina de maíz. QIW ocurre en la lectina B de ricina de ricino
en las posiciones 256–258, mientras que en la lectina de maíz los aminoácidos correspondientes
son QRM 441–443. QQW ocurre en la lectina de cadena B de ricino 171–173 y la lectina de
maíz como QHW en las posiciones 331–333; la lectina de maíz no tiene los otros sitios QXW
de la lectina de cadena B de ricino (35–37, 91–93, 129–131, 214–216), que aparentemente no
están involucrados en la unión del azúcar (Sphyris et al., 1995). ). El bolsillo de unión a
galactosa en la lectina de cadena B de ricino es DVR (pero QXV en otro lugar), pero en la
lectina de maíz se representa como DEA. El D H se une con el N46 (Sphyris et al., 1995), pero
debido a las diferencias de secuencia en la lectina de maíz en esa región correspondiente, es
difícil determinar la homología, aunque hay un N presente en lo que parece ser un
correspondiente. región. El DVR correspondiente en la región 234–236 de la lectina de cadena
B de ricino tiene una secuencia DAF desplazada por dos aminoácidos en la lectina de maíz.
La plataforma de unión de azúcar de baja afinidad (Sphyris et al., 1995) W37 en la lectina de
cadena B de ricino es un Q74 en
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Gen vegetal 30 (2022) 100359
la lectina de maíz. La plataforma de unión de azúcar de alta afinidad (Sphyris et al., 1995),
Y248 en la lectina de cadena B de ricino es un W433 en la lectina de maíz, pero tanto W como
Y pueden actuar como plataformas de azúcar (Sphyris et al., 1995) .
La región de enlace H correspondiente con N255 en D234 en la lectina de cadena B de ricino
tiene una K presente en la secuencia de lectina de maíz. El N255 correspondiente en la lectina
de cadena B de ricino (que es responsable del enlace H con la galactosa, Sphyris et al., 1995),
tiene un N440 homólogo en la lectina de maíz. Los aminoácidos en la aglutinina de germen de
trigo que se ha informado que se unen a la N-acetil glucosamina son D (86), S (105) y F (109)
en la cadena uno, y A (71) y E (72) en la cadena dos (Schwefel et al. ., 2010), pero los
alineamientos de la aglutinina de germen de trigo y la lectina de maíz eran demasiado
diferentes para identificar qué diferencias de aminoácidos entre la lectina de cadena B de ricino
correspondiente y la lectina de maíz contribuyeron a la unión de N acetil glucosamina. También
se informa que dos lectinas homólogas de diferentes fuentes de plantas monocotiledóneas se
unen a diferentes azúcares (Fou quaert et al., 2009).
4.4. Posible unión diferencial de azúcar por los dos dominios de lectina de maíz
Según la similitud de carga y polaridad, y el impacto informado de las sustituciones de
aminoácidos en la funcionalidad de la proteína de las tablas SNAP y SIFT (Hecht et al., 2013),
las regiones de unión N-terminal y C-terminal de la lectina de maíz pueden unirse azúcares
diferentes. Al comparar las regiones del terminal N con el terminal C (numeración como en la
Fig. 3 complementaria), se producen diferencias funcionales en las posiciones 12 (D/G), 22 (D/
G), 39 (Y/V), 54 (Q/ Y), 66 (L/E), 114 (H/Y), 131 (D/Y) y 144 (P/D). Las diferencias adicionales
en la clase del grupo R ocurren en 47 (K/S), 51 (A/E), 141 (C/A) y 147 (S/R). Sin embargo,
otros aminoácidos pueden participar en la unión del azúcar en regiones homólogas de otras
lectinas, como la lectina hemolítica del hongo Laetiporus sulfureus, que tiene diferentes
aminoácidos involucrados en la unión del azúcar que la lectina de la cadena B de la ricina,
pero también se une a la galactosa (Mancheno ˜ et al., 2005; Treiber et al., 2008). Los dos
sitios de unión en la lectina C. botulinum HA33/C, que también tiene forma bilobica y cierta
similitud con la lectina
que el de maíz
lóbulo en el modelo
C-terminal suizo
se une (3ah1.1A)azúcares
a diferentes se unen de manera
(sitio diferente,
I – ácido N- ya
acetilneurámico, sitio II - galactosa, N-acetilgalactosamina y ácido N-acetilneurámico) y tienen
diferentes aminoácidos involucrados para cada sitio de unión al azúcar (Sitio 1 FLRNW, Sitio II
H, 2 N, 2D, Q) (Nakamura et al., 2011). Por lo tanto, la lectina de maíz puede unirse a diferentes
azúcares, pero todavía es necesario determinar cuáles además de la N -acetilglucosamina.
4.5. Estructura de lectina de maíz que potencialmente permite la entrada celular
Como se indicó anteriormente, las regiones de unión a azúcar de la cadena B de la ricina
tienen una secuencia común de QXW que son importantes en la estabilización durante la unión
a galactosa para la cadena B de la ricina (Sphyris et al., 1995); estas regiones también se
encuentran en las piericinas y las holotoxinas mosquitocidas, MTX (Treiber et al., 2008). Se
cree que las porciones de unión de azúcar de las piericinas y MTX son importantes para
permitir que el dominio catalítico ingrese a las células, que es responsable de inhibir la
ribosilación de ADP al competir con NAD+ (Treiber et al., 2008). Se cree que la toxicidad se
debe a la actividad de la ADP ribosil transferasa, que provoca la inhibición de varias enzimas
o proteínas transportadoras, según la proteína unida (Schirmer et al., 2002). La secuencia
QXW también ocurre en la región N terminal y C-terminal en dos ubicaciones de cada región
en la lectina de maíz como se describió anteriormente. Por analogía con las piericinas y las
MTX, las regiones de unión a azúcar de la lectina de maíz pueden facilitar la entrada en la
célula y el movimiento posterior a un sitio objetivo, posiblemente involucrando la actividad
enzimática de la porción homóloga de ciclohidrolasa IMP de la secuencia.
Sin embargo, la porción C-terminal del MTX sin actividad ribosilante es citotóxica (Thanabalu
et al., 1993) como se indicó anteriormente.
4.6. Dominio alto de histidina de la lectina de maíz
La porción N-terminal de la lectina de maíz tiene 5 H consecutivas, seguidas de 4 H más
en los primeros 20 aminoácidos. Uso de la Señal P
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PF Dowd et al.
indicó que era poco probable que esta región se escindiera. Los estudios han indicado que las
regiones con múltiples H a menudo se dirigen al compartimento de motas nucleares en las
personas, y estas proteínas pueden estar involucradas en la prevención de la unión de los
factores de transcripción, controlando así la expresión génica (Salichs et al., 2009). Las lectinas
que contienen secuencias multiK también se dirigen al núcleo e interactúan con las proteínas
histonas (Shouppe et al., 2011). Estas lectinas pueden participar en la señalización de las
respuestas al estrés al alterar la conformación de la cromatina y, por lo tanto, influir en la expresión
de genes relevantes (Delporte et al., 2014). También se conocen lectinas dirigidas al
nucleocitoplasma. Por ejemplo, algunas lectinas del maíz y el trigo tienen un dominio de
amarantina acoplado a un dominio citotóxico similar a la aerolisina, que es inducible por daño de
insectos en el trigo (Lannoo y Van Damme, 2014). La región alta en histidina de la lectina de maíz
también puede afectar la distribución celular y las interacciones del sitio objetivo.
4.7. El dominio alto de prolina de la lectina de maíz
La parte central de la lectina de maíz tiene una alta frecuencia de prolinas, con 6 localidades
de 4 a 5 P consecutivas y un total de 40 P en esa región.
Las regiones ricas en P son comunes en algunas proteínas de almacenamiento de cereales (Wil
liamson, 1994). Las repeticiones P de 3 o más pueden formar una hélice de prolina (Adzhubei y
Sternberg, 2013). Si bien se cree que las regiones ricas en prolina actúan como "llaves" entre las
porciones funcionales en los extremos opuestos de una proteína (Williamson, 1994), las hélices
de prolina pueden participar en la función específica de la proteína y ayudar a mantener la
estructura tridimensional (Adzhubei y Sternberg, 2013). La naturaleza y la flexibilidad de esta
región de unión pueden determinar los tipos de unión y entrecruzamiento con azúcares fúngicos
como se describe para las interacciones lectina-azúcar en otras situaciones (Guo et al., 2017).
4.8. Actividad de lectinas vegetales contra hongos
Los informes sobre la actividad de las lectinas contra los hongos son limitados (Coelho et al.,
2018) y la actividad antifúngica de las lectinas generalmente no es tan potente como la actividad
contra los insectos (Vandenborre et al., 2011). La actividad antifúngica se debe principalmente a
la unión a los residuos de N-acetil glucosamina de la quitina, que pueden afectar la germinación
de esporas, el crecimiento de hifas y el depósito de quitina, y la absorción de nutrientes; También
puede ocurrir lisis celular debido a la formación de poros por agregados de monómeros (Coelho
et al. 2017). El RIP del maíz se considera una lectina e inhibe el crecimiento del patógeno del
maíz Aspergillus flavus (Nielsen et al., 2001). La lectina de germen de trigo inhibe el crecimiento
de F. graminearum (Ciopraga et al., 1999). Sin embargo, los representantes de 5 lectinas diferentes
que se unen al azúcar se unen a esporas o tubos germinales de diferentes especies de hongos a
velocidades variables, con representantes de manosa-glucosa y N-acetil glucosamina unidos de
fuerte a muy fuerte, N-acetil galactosamina y representante de galactosa unidos de bajo a
moderado. , y los representantes de fucosa se vinculan de moderados a nulos, dependiendo de
la especie de hongo (Brambl y Gade, 1985).
Las esporas de muchas especies de hongos Fusarium , incluida F. graminearum,
aparentemente están cubiertas con una capa mucilaginosa que inhibe la unión de la lectina
(Cristinzio et al., 1988), lo que explicaría por qué no observamos aglutinación de la lectina de
maíz con F. esporas de graminearum . Sin embargo, cuando las esporas de la especie
representativa de Fusarium F. culmorum germinan, la espora se rompe enzimáticamente y se
forma una nueva pared celular en el tubo germinativo (Marchant, 1966) exponiendo el contenido
interno de la espora. La aglutinina de germen de trigo (lectina) se une a las paredes celulares
recién formadas de F. graminearum en germinación (Ciopraga et al., 1999). Así, la lectina de maíz
parece actuar de manera análoga a la aglutinina de germen de trigo para producir actividad
antifúngica.
4.9. Actividad de las lectinas vegetales contra los insectos
Muchas lectinas de plantas tienen una alta actividad contra los insectos e incluyen lectinas
con diferentes preferencias de unión de azúcar, como antinas de amar, lectinas de heavin,
jacalinas, lectinas de leguminosas, lectinas de nictaba, ricino B
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lectinas y lectinas de gotas de nieve (Vandenborre et al., 2011). Los azúcares específicos unidos
por lectinas que afectan a los insectos incluyen manosa (lectina de gota de nieve, concanavalina
A) o residuos de quitina (lectinas relacionadas con la heveína, como la aglutinina de germen de
trigo) (Vandenborre et al., 2011). La actividad antiinsectos de la RIP del maíz contra H. zea se
informó anteriormente (Dowd et al., 1998, 2003), mientras que ejemplos de actividad de la gota
de nieve y la lectina de nictaba contra Spodoptera sp. También se han informado otras especies
además de S. frugiperda (Van denborre et al., 2011). Los objetivos afectados por la lectina en los
insectos incluyen enzimas digestivas como la ÿ-amilasa y la aminopeptidasa, así como la proteína
transportadora de hierro ferritina (Vandenborre et al., 2011). Aunque los grupos terminales de
glicosilación de manosa o N-acetil glucosamina son más comunes en proteínas glicosiladas de
insectos, también se conocen versiones accesibles de galactosa, N-acetil galactosamina, fucosa,
glucurónido y glucosa, con indicios de que existen diferencias en los azúcares de glicosilación
para insectos entre órdenes. pero mucho menos conocido para insectos distintos de Drosophila
(Walski et al., 2017). Los diferentes azúcares presentes en los insectos pueden unirse a las
lectinas vegetales, como la manosa (GNA, concanavalina A) o residuos de quitina (por lectinas
relacionadas con la heveína, como la aglutinina de germen de trigo)
(Vandenborre et al., 2011). La inhibición de los efectos de la lectina de maíz sobre las esporas de
F. graminearum en germinación por parte de la N-acetil glucosamina sugiere que actúa contra los
insectos de manera análoga a la aglutinina de germen de trigo.
4.10. Alergenicidad potencial de la superlectina quimérica de maíz
Muchos alimentos contienen lectinas que se reconocen como alérgenos o alérgenos
potenciales en base a epítopos específicos, que se encuentran principalmente en semillas (p. ej.,
frijoles, guisantes, trigo), frutas (p. ej., aguacate, plátano, melones, papaya) y bulbos (p. ej., ajo,
cebolla , nabo) (Barre et al., 2020).
Los epítopos alergénicos incluyen dominios de heveína y regiones de unión a IgE. Se utilizó una
versión en línea actualmente disponible de un programa para predecir la alergenicidad de
proteínas, AllerCatPro 2.0 (https://allercatpro.bii.a-star.edu.sg/; Maurer-Stroh et al., 2019) para
predecir la alergenicidad del maíz . superlectina No hubo evidencia de alergenicidad de la
superlectina quimérica de maíz indicada por el programa. Sin embargo, si aún existen
preocupaciones sobre la posibilidad de que ocurra alergenicidad en el maíz con niveles elevados
de superlectina quimérica del maíz, se pueden seguir protocolos como los que se usan para
evaluar las proteínas introducidas por la biotecnología, que incluyen determinar si los niveles de
proteína expresada se encuentran dentro del rango del maíz. utilizados para el consumo humano
natural (p. ej.
Parrott et al., 2010).
5. Conclusiones
El gen de la lectina de maíz clonado a partir del maíz consanguíneo resistente a Fusarium
codifica una superlectina quimérica con supuestas regiones de unión al azúcar, así como regiones
ricas en histidina y prolina; todos los cuales probablemente influyen en las interacciones del sitio
objetivo (que actualmente se desconocen), aunque la unión a los residuos de N-acetil glucosamina
indicados en el presente estudio es al menos un modo de acción probable. Cuando el gen de la
lectina de maíz se expresó transgénicamente en callos de maíz, el crecimiento de Fusarium spp.
Los hongos y las plagas de orugas del maíz a menudo se inhibieron y se asociaron con niveles
de proteína codificada, una propiedad útil de una proteína de resistencia para controlar múltiples
plagas de maíz. La información de secuencia disponible indica que hay múltiples secuencias de
maíz del producto génico a las que les faltan regiones presentes en el producto génico clonado
que probablemente sean importantes en plena actividad. Estas regiones pueden ser críticas para
el funcionamiento adecuado y su ausencia puede explicar la susceptibilidad a diferentes patógenos
del maíz y plagas de insectos. Varias variedades de trigo susceptibles a F. graminearum también
tenían una secuencia interrumpida de una lectina defensiva estructuralmente no relacionada que
se asoció con una mayor susceptibilidad (Rawat et al., 2016). La incorporación/edición de la
secuencia apropiada para la lectina de maíz debería ayudar a reducir el daño causado por plagas
de insectos y hongos del maíz, lo que resultaría en una producción más económica y un producto
de mayor calidad para los usuarios finales y consumidores.
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PF Dowd et al.
6. Descargo de responsabilidad
La mención de nombres de empresas o productos comerciales en el manuscrito no implica que
el USDA los respalde o recomiende sobre otras empresas en productos similares no mencionados.
USDA es un proveedor y empleador que ofrece igualdad de oportunidades.
Los datos complementarios de este artículo se pueden encontrar en línea en https://doi. org/
10.1016/j.plgene.2022.100359.
Fuentes de financiamiento
Este trabajo fue apoyado por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, Servicio
de Investigación Agrícola. Esta investigación no recibió ninguna subvención específica de agencias
de financiación públicas, comerciales o sin fines de lucro.
sectores
Declaración de contribución de autoría CRediT
Patrick F. Dowd: conceptualización, análisis formal, investigación, metodología, validación,
visualización, redacción: borrador original, redacción: revisión y edición. Todd A. Naumann:
Investigación, Metodología, Redacción: revisión y edición. Eric T. Johnson: Metodología, Redacción:
revisión y edición.
Declaración de interés en competencia
Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.
Agradecimientos
Agradecemos al Departamento de Agricultura de los EE. UU., Planta del Servicio de Investigación
Agrícola, Estación de Introducción de Plantas de la Región Centro Norte por proporcionar semillas
de maíz GE440 consanguíneas, a E. Grotewald por suministrar cultivos celulares BMS iniciales, a M.
Doehring, D. Lee y K Sollenberger por la asistencia técnica, JL
Ramírez por el uso del microscopio EVOS y RW Behle, MM
Vaughan y TJ Ward por sus comentarios sobre versiones anteriores del manuscrito.
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