UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DINÁMICAS

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE OSBTETRICIA

“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

ASIGNATURA BIOQUÍMICA

TEMA : DETERMINACIÓN DE AMILASA EN SUERO

SANGUÍNEO (AMILASEMIA)

DOCENTE : M.CS. Q.F. MARLENY ELIZABETH VILCA GAVIDIA

ALUMNA : SALDAÑA SOLÓN, GRACE KATHERINE

Cajamarca,03 de julio del 2022

 I. INTRODUCCIÓN:

El páncreas puede ser la “glándula maestra” del cuerpo si se consideran los graves
trastornos digestivos y metabólicos que aparecen cuando se pierden sus funciones
exocrinas y endocrinas. El principal trastorno al que conduce la pérdida de la función
endocrina es la diabetes mellitus, que cuenta con mayor morbilidad y mortalidad que
todas las otras enfermedades pancreáticas juntas. Las pruebas de laboratorio importantes
a este respecto, son la determinación de glucosa en sangre, fructosa mina y hemoglobina
A1c con objeto de conocer el control glucémico a corto y largo plazo. La pérdida de la
función exocrina es común en la fibrosis quística y en algunos sujetos con ataques
repetidos de pancreatitis generalmente causados por el abuso crónico del alcohol. El
páncreas tiene una gran reserva y la pérdida de la función produce síntomas sólo después
de que 85% de las células acinares se ha perdido. Existen algunas pruebas de función
pancreática que junto con la de grasa en materia fecal son las más importantes. Las
pruebas en suero, como la tripsina inmunorreactiva, son las menos sensibles y menos
específicas a pesar de ser las más fáciles de realizar. La pancreatitis aguda es una de las
principales emergencias médicas; el alcoholismo y las enfermedades del tracto biliar son
las causas predominantes, aunque sólo tenemos algunas evidencias conjeturales de cómo
se inicia una pancreatitis. Los cambios observados en las enzimas pancreáticas como
amilasa y lipasa pueden ser de moderados a intensos, desafortunadamente sólo es posible
obtener una estimación gruesa de la gravedad del padecimiento con los estudios de
laboratorio. La pancreatitis crónica generalmente es la secuela de múltiples brotes de la
enfermedad aguda y los resultados de laboratorio normalmente no son muy útiles para el
diagnóstico. El adenocarcinoma de páncreas, la forma común de la enfermedad maligna,
es funesta para casi todos los pacientes debido a la naturaleza invasiva del cáncer y su
progresión rápida y silenciosa. No existen pruebas adecuadas de escrutinio para el cáncer
pancreático y la muerte se presenta típicamente de seis meses a un año del diagnóstico.
Las neoplasias de los islotes de Langerhans son un reto bioquímico para su diagnóstico.
Excepto los gastrinomas que producen el síndrome de Zollinger-Ellison, la mayoría de
estos tumores no son malignos pero pueden poner en peligro la vida debido a la liberación
no controlada de factores endocrinos y la estimulación a sus órganos blancos. Para
establecer el diagnóstico se requiere realizar pruebas que determinen las hormonas
normalmente producidas en las células del islote de Langerhans y otros factores. La
amilasa alfa (AMS) es una metaloenzima que requiere calcio y pertenece a la clase de
hidrolasas. La reacción enzimática que cataliza la amilasa alfa es la hidrolisis aleatoria de
enlaces glicosídicos alfa-1,4 internos del almidón, glucógeno y otros polímeros de la
glucosa. Los productos de digestión de la amilasa, que es una molécula de almidón lineal
que contiene sólo enlaces alfa 1,4, son maltosa, maltotrinosa y otras dextrinas. Las
principales fuentes tisulares de esta enzima son las glándulas salivales y las células
acinares del páncreas. La actividad de amilasa alfa no es específica para estos tejidos, ya
que también se encuentra en el epitelio intestinal, trompas de Falopio, mucosa del cuello
uterino, endometrio y tejido del seno durante la lactancia. La principal función de la
amilasa alfa se debe a la fracción pancreática, que ayuda a la digestión del almidón,
glucógeno y sus productos de descomposición en el intestino delgado. La AMS de la
saliva inicia la digestión de almidón en la cavidad oral, pero su acción termina con rapidez
a consecuencia del pH ácido del jugo gástrico durante la deglución. Durante años los
niveles de α-amilasa en suero nos han evidenciado la necesidad de su determinación para
el diagnóstico de pancreatitis aguda. Las primeras técnicas estaban basadas en los
cambios de la absorción máxima del complejo entre el almidón y el yodo, ya que la α-
amilasa degrada al almidón. Otros métodos están basados enla producción de p-nitrofenol
a partir de sustratos oligosacáridos específicos con grupos bloqueantes en el azúcar
terminal. Estos métodos utilizan una variedad de enzimas para hidrolizar la corta cadena
de oligosacáridos para producir p-nitrofenol. Estas enzimas contienen una actividad
residual de α-amilasa que reducen significativamente la estabilidad del reactivo. El
método que presentamos no utiliza enzimas, evitando así este problema de estabilidad.
Se han desarrollado ensayos de apareamiento enzimático que permiten condiciones de
hidrólisis más controladas y congruentes, y que también pueden adaptarse a instrumentos
automatizados.

II. OBJETIVO:

− Cuantificar por el método de Caraway los niveles de amilasa en una

muestra problema de suero sanguíneo.
III. MATERIALES Y EQUIPOS:
Materiales:
− Gradillas
− Tubos de ensayo
− Tubos de centrífuga
− Matraces Erlenmeyer de 100 mL
− Vaso de precipitación
− Pipetas graduadas de 1mL, 5 mL
− Pipeta plástica con ampolla
− Probeta 100 mL
− Marcador de vidrio
Equipos
− Balanza
− Centrifuga
− Equipo de baño maría y termómetro
− Espectrofotómetro
IV. REACTIVOS Y SUSTANCIAS:
I. Reactivos
− Sustrato de almidón bufferado pH 7,0 (Preparación: almidón +
sodio fosfato dibásico +agua. Se controla pH=7,0 con pH-
metro).
− Solución stock de yodo (KI+KIO3+H2O+HCl)
− Solución yodada de trabajo (Preparación: 1 parte de solución
stock de yodo + 5 partes deagua destilada).
Sustancias
− Agua destilada (H2O)
V. MUESTRA BIOLÓGICA:

Suero sanguíneo: Recolectar una muestra de sangre por punción venosa, en un tubo de
centrifuga SIN ANTICOAGULANTE, a partir de un paciente en condición de ayuno (6
horas). Dejar coagular la sangre y extraer el suero sanguíneo por centrifugación.
VI. PROCEDIMIENTO
a. Armar el siguiente esquema de trabajo (utilizar Matraces Erlenmeyer de 50 mL)

COMPONENTES mL/ Matraz I II

(PROBLEMA) (BLANCO)
Sustrato de almidón bufferado pH7,0 5,0 5,0
Pre- incubar a 37º C durante 5 minutos ambos matraces
Agregar suero sanguíneo. 0,1 ---------
Mezclar e incubar a 37ºC (equipo de baño maría) durante 7,5 minutos exactamente
Retirar los matraces del baño maría y llevarlos a su mesa de trabajo.
Añadir agua destilada 35,0 35,0
Solución yodada de trabajo 5,0 5,0
Mezclar por simple agitación ambos matraces
Dejar en reposo 5 minutos.
Leer en espectrofotómetro a una longitud de onda de 660 nm

CÁLCULOS:

PACIENTE: en condición de ayuno.

V/N = [60-180] unidades de amilasa/100 mL

Absorbancia sistema problema () = 0,970

Absorbancia sistema Blanco () = 1,602

1,602 − 0,970
𝑈𝑁𝐼𝐷𝐴𝐷𝐸𝑆 𝐷𝐸𝐴𝑀𝐼𝐿𝐴𝑆𝐴/100𝑚𝐿 = × 800 = 315 𝑚𝐿
1,602
VII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS :

SISTEMA PROBLEMA (I):

No tiene reacción ya que no se encuentra la muestra.

SISTEMA BLANCO (II):

La α-amilasa salival humana (AASH) es la proteína de la saliva que se encuentra

en mayor concentración y posee actividad enzimática, ya que cataliza los enlaces
α-1,4-glucosídicos de los almi- dones y los carbohidratos.

VIII. CUESTIONARIO

1. Responda que clase de control de la actividad enzimática involucrada, se ha

llevado a cabo en la presente práctica. Justifique su respuesta.

Temperatura: la alfa amilasa es temperatura dependiente, por lo que los

ensayos realizados a <37ºC o >37ºC pueden variar los resultados.

2. Señale cuáles son las enzimas formadas y liberadas por el páncreas y cuáles
son sus sustratos sobre los cuales actúan. Señale cuatro (04) ejemplos.

ENZIMAS LIBERADAS:

Lipasa:

Es una proteína (enzima) secretada por el páncreas dentro del intestino delgado. Ayuda a
que el cuerpo absorba la grasa descomponiéndola en ácidos grasos. Este artículo aborda
el examen usado para medir la cantidad de lipasa en la sangre.

Efectos: La lipasa, junto con la bilis, descompone las moléculas de grasa para que estas
puedan ser absorbidas y usadas por el organismo.

Insuficiencia puede causar:

• Malabsorción de las grasas y de las vitaminas liposoluble

• Diarrea y/o heces grasosas.
Proteasa:

Tipo de enzima que descompone las proteínas en proteínas más pequeñas o unidades
proteínicas más pequeñas, como péptidos o aminoácidos. La proteasa del VIH divide las
proteínas precursoras de gran tamaño en proteínas más pequeñas.

Efectos: La proteasa descompone las proteínas También, ayuda a que el intestino se

mantenga sin parásitos, tales como: bacterias, levaduras y protozoos.

Insuficiencia puede causar:

• Digestión incompleta de las proteínas que puede producir alergias o la formación de

sustancias tóxicas.
• Aumenta el riesgo de infección intestinal.

Amilasa:

Es una enzima que ayuda a digerir los carbohidratos. Se produce en el páncreas y en las
glándulas salivales. Cuando el páncreas está enfermo o inflamado, libera grandes
cantidades de amilasa en la sangre. Se puede hacer un examen para medir el nivel de esta
enzima en la sangre.

Efectos: La amilasa descompone a los carbohidratos (almidón) en azúcares simples, las

cuales son más fáciles de absorber. Esta enzima también se encuentra presente en la
saliva.

Insuficiencia puede causar:

• Diarrea debido a los efectos que causa el almidón no digerido en el colon.

Tripsina:

Es una enzima peptidasa, que rompe los enlaces de las proteínas mediante hidrólisis para
formar péptidos o aminoácidos de menor tamaño. La tripsina es producida en el páncreas
y secretada en el duodeno (parte del intestino), donde es esencial para la digestión. Actúa
en el duodeno hidrolizando péptidos en sus componentes estructurales básicos,
conocidos como aminoácidos. Estos péptidos a su vez son el resultado de la actividad
de la enzima pepsina, que degrada proteínas en el estómago. Niveles más altos de
tripsina pueden significar que usted tiene pancreatitis aguda.
 Efectos: La tripsina se secreta en el páncreas, actúa en el duodeno hidrolizando péptidos
en sus componentes estructurales básicos, conocidos como aminoácidos. Estos péptidos
a su vez son el resultado de la actividad de la enzima pepsina, que degrada proteínas en
el estómago.

Insuficiencia puede causar:

 Esta afección puede llevar a que se presente EPOC y enfermedad hepática

(cirrosis).

ENZIMAS FORMADAS:

Tripsinógeno: El tripsinógeno es un proenzima pancreático, precursor inactivo de la

tripsina que es un enzima proteolítico. Esta prueba mide la cantidad de tripsinógeno en la
sangre.

En condiciones normales, el tripsinógeno se sintetiza en el páncreas y se transporta hasta

el intestino delgado. Allí se activa por la acción de un enzima situado en la mucosa
intestinal, convirtiéndose en tripsina. La tripsina es la responsable de la degradación
(ruptura) de las proteínas de la dieta en pequeños fragmentos, conocidos como péptidos.
Si la cantidad de tripsinógeno y de tripsina es insuficiente, no se puede digerir
correctamente las proteínas, ni por tanto beneficiarse de sus propiedades. Cualquier
trastorno que impida que el tripsinógeno alcance la luz del intestino delgado puede
ocasionar aumento de los niveles de tripsinógeno en sangre.

Las personas con fibrosis quística (FQ) pueden producir tapones mucosos que obstruyen
los conductos pancreáticos que conducen al intestino delgado, impidiendo que el
tripsinógeno llegue al intestino, imposibilitando así la degradación de las proteínas de los
alimentos.

En otras enfermedades, como la pancreatitis crónica y el cáncer de páncreas, la lesión del

tejido pancreático puede causar un bloqueo impidiendo que el tripsinógeno alcance el
intestino delgado. Las células que sintetizan tripsinógeno también pueden dañarse o
destruirse, disminuyendo por lo tanto la producción y aporte de tripsinógeno al
organismo. Tanto el bloqueo como el daño celular pueden ser la causa de una
insuficiencia pancreática.
En los bebés, se realiza un cribado neonatal de la FQ con una prueba conocida como
tripsinógeno inmunoreactivo (IRT). Los recién nacidos con FQ pueden presentar
concentraciones elevadas de IRT en sangre durante varios meses.

Quimotripsinógeno: Se sintetiza en el páncreas para liberarse en el intestino delgado.

Una vez en el intestino delgado, la tripsina activa el quimotripsinógeno y lo transforma
en quimotripsina. Es uno de los enzimas responsables de degradar (romper) las proteínas
de la dieta en pequeños fragmentos, llamados péptidos. Si el páncreas funciona
correctamente, se podrá detectar quimotripsina en el intestino delgado y en las heces.

La insuficiencia pancreática puede deberse tanto a un bloqueo de los conductos

pancreáticos como a un daño o destrucción de las células que sintetizan el
quimotripsinógeno. De esta forma, la cantidad de enzimas que llega al intestino delgado
es insuficiente para digerir los alimentos adecuadamente. Esto se observa con frecuencia
en situaciones como la pancreatitis crónica y el cáncer de páncreas.

Procarboxiaminopeptidasa: Se denomina Procarboxiaminopeptidasa a toda enzima del

grupo de las peptidasas o proteasas capaces de hidrolizar un enlace peptídico situado en
el extremo carboxi-terminal de una proteína o polipéptido, liberando de esta forma el
aminoácido situado al final de la cadena.Se activan como consecuencia de un corte
tríptico que libera el segmento de activación; sin embargo, los procesos de activación de
PCPA1, PCPB y PCPA2 presentan algunas diferencias remarcables.

3. En el caso de un paciente adulto que padece de pancreatitis aguda, señale

que sucede con la síntesis y función de las hormonas pancreáticas.
LA PANCREATITIS AGUDA:

Es una inflamación brusca del páncreas provocada por la activación dentro de él de las
enzimas que produce para la digestión. en casos graves, parte del páncreas se destruye en
un proceso que se llama necrosis, que produce una reacción inflamatoria generalizada que
puede afectar a otros órganos vitales.

Las dos causas más frecuentes (80%), son los cálculos en la vesícula biliar (colelitiasis)
y el consumo excesivo de alcohol. los cálculos de la vesícula producen pancreatitis al
moverse hacia el conducto biliar y atascar la salida del páncreas hacia el intestino. El
alcohol tiene un efecto tóxico directo y también puede producir pancreatitis crónica. otras
causas más raras son ciertos medicamentos, aumento importante de los niveles de grasa
en sangre (hipertrigliceridemia), aumento mantenido de calcio en sangre (hipercalcemia),
obstrucciones de la salida del conducto del páncreas, golpes en el abdomen, algunas
intervenciones quirúrgicas y la realización de una prueba llamada
colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (cpre). en aproximadamente un 20% de
los pacientes no se descubre la causa (pancreatitis aguda idiopática), de los cuales sólo
sufren nuevos episodios de pancreatitis un pequeño porcentaje (5%).

Se manifiesta casi siempre como un dolor de abdomen continuo e intenso, localizado

principalmente en su parte superior, aunque puede ocupar todo el vientre, con frecuencia
irradiado a la espalda "en cinturón" y acompañado en la mayor parte de los casos de
náuseas y vómitos.

Se diagnostica, principalmente mediante el análisis de las enzimas pancreáticas en sangre

(amilasa o lipasa), que casi siempre están elevadas en la pancreatitis aguda. otros procesos
pueden producir dolor abdominal y aumento de enzimas pancreáticas, y hay pancreatitis
agudas que cursan con niveles normales de enzimas pancreáticas, por lo que en algunos
casos puede ser necesario realizar una tomografía axial computarizada (tac o tc) del
abdomen, si existe duda. esta prueba es además la más adecuada para valorar
posteriormente el grado de necrosis del páncreas y otras complicaciones a nivel del
abdomen. la ecografía del abdomen permite ver si hay cálculos en la vesícula, pero puede
no verse bien el páncreas. la resonancia magnética puede ser útil si existe alergia al
contraste intravenoso, si hay insuficiencia renal o si se quiere descartar la presencia de un
cálculo en el colédoco. la ecografía endoscópica es muy útil para valorar mejor el
páncreas y detectar cálculos biliares no vistos con otras pruebas de imagen.

funciones de las hormonas pancreáticas:

Las hormonas principales secretadas por la glándula endocrina en el páncreas son la

insulina y el glucagón. estas hormonas regulan la concentración de glucosa en la sangre,
y la somatostina, que impide la secreción de insulina y glucagón.

La insulina permite que la glucosa penetre en las células para ser utilizada como fuente
de energía. si la insulina no hace bien esta función, la glucosa se acumula en sangre
produciendo hiperglucemia.
El glucagón es una hormona que secreta el páncreas que, a diferencia de la insulina,
contribuye a aumentar los niveles de glucosa en la sangre. el glucagón se ocupa de contra
regular la insulina cuando el organismo sufre una bajada de los niveles de azúcar en el
torrente sanguíneo.

Cuando el cuerpo necesita más azúcar, el páncreas produce glucagón y lo libera para que
llegue a las células. este se crea en los islotes pancreáticos de Langerhans, más
concretamente en las células alfa, a diferencia de la insulina que se crea en las células
beta.

IX. CONCLUSIÓN:
La amilasa es una enzima que ayuda a digerir los carbohidratos. Se produce
en el páncreas y en las glándulas salivales. Cuando el páncreas está enfermo o
inflamado, libera grandes cantidades de amilasa en la sangre. Se puede
hacer un examen para medir el nivel de esta enzima en la sangre

X. BIBLIGRAFIA:

1 canalSALUD. ¿Para qué sirve el test de Amilasa? [Internet]. canalSALUD. 2020

. [citado el 3 de julio de 2022]. Disponible en: https://www.salud.mapfre.es/pruebas-
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2 Pancreatic Cancer Action Network. Neoplasia [Internet]. 2001 [citado el 3 de julio de

. 2022];3(5):457–8. Disponible en:
https://www.pancan.org/section_en_espanol/learn_about_pan_cancer/diet_and_nutriti
on/Pancreatic_enzymes.php

3 Sanz de Villalobos E, Larrubia Marfil JM. Pancreatitis aguda. Rev Esp Enferm Dig
. [Internet]. 2010 [citado el 3 de julio de 2022];102(9):560–560. Disponible en:
https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1130-01082010000900010