USP42 SuplementosDietéticos/ Ácido Linoleico 5095

Modo: Cromatografíade Gases Calcularel porcentaje de las cantidades declaradas de

Detector: Ionizacióna la llama cada ácido a-linolenico, linoleicoy oleico individualen
Columna: Capilar de sílicefundida, de 0,53 mm x 30 la porción de Cápsulastomada:
m; recubierta con una películade fase Gl 6 de 1,0 µm
Temperaturas Resultado= Ax AFx (100/L)
Inyector: 220º
Detector: 260º A = contenido del ácido graso pertinente en la
Columna: Ver la Tabla2. porción del contenido de las Cápsulas
tomada (mg/g)
AF = peso de llenado promedio (g)
Tabla 2
L = contenido declarado del ácido graso
Tiempo de pertinente (mg/Cápsula)
Espera (Hold Criteriosde aceptación: 95,0% de las cantidades de-
Time) claradas de los ácidos a-linolénico, linoleicoy oleico
a la Tempe-
Temperatura Rampa de Temperatura ratura PRUEBASDE DESEMPEÑO
Inicial Temperatura Final Final • DESINTEGRACIÓN (2040): Cumplen con los
Y DISOLUCIÓN
(º) lº/min) (º) lmin) requisit9sen Pruebade Rupturapara CápsulasBlandas.
70 o 70 2 • VARIACION
DEPESODESUPLEMENTOS
DIETETICOS
(2091):
Cumplen con los requisitos.
70 5 240 5
PRUEBASESPECÍFICAS
Gas transportador: Helio • GRASAS
Y ACEITES Índicede Peróxido(401): No más
FIJOS,
Velocidadlineal: 50 cm/s de 10,0
Tipo de inyección: No dividida
Volumen de inyección: 1 µL CONTAMINANTES
Aptitud del sistema • PRUEBAS DERECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
Muestras: Soluciónde aptituddel sistemay Solución tal de microorganismosaerobios no excede de 1 x 103
estándar ufc/g; y el recuento total combinado de hongos filamen-
Requisitosde aptitud tosos y levadurasno excede de 3 x 102 ufc/g.
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma • AUSENCIA DEMICROORGANISMOS (2022): Cum-
ESPECIFICOS
de la Soluciónde aptituddel sistemaes similaral cro- plen con los requisitosde las pruebas para determinar la
matograma de referenciaprovisto con el lote de ER ausencia de Escherichiacoli.
Aceite de Semillade Lino USPusado.
Resolución: No menos de 1,5 entre oleato de metilo REQUISITOSADICIONALES
y estearato de metilo, Soluciónde aptituddel sistema Conservaren envases her-
y ALMACENAMIENTO:
• ENVASADO
Desviaciónestándar relativa: No más de 2% para méticamente cerrados y resistentes a la luz.
los cocientes entre las áreas de los picos de los anali- • ETIQUETADO: La etiqueta indica el artículo con el que se
tos y estándar interno, Soluciónestandar preparon las Cápsulasy el contenido de ácidos a-linolé-
Análisis nic9, linoleicoy oleico, en mg/Cápsula.
Muestras: Soluciónmuestray Soluciónestándar • ESTANDARES DEREFERENCIA USP (11)
Identificarlos tiempos de retención de los ésteres metíli- ERAceite de Semillade Lino USP
cos de los ácidos grasos pertinentes, comparando los ERLinoleatode Metilo USP
picos en el cromatograma de la Soluciónde aptituddel ERLinolenatode Metilo USP
sistemacon los del cromatograma de referencia. Iden- EROleato de Metilo USP
tificarel sitio del pico del estándar interno, compa-
rando los cromatogramas de la Soluciónestándary la
Soluciónde aptituddel sistema.
Calcularel contenido, en mg/g, de ácidos a-linolénico,
linoleicoy oleico en la porción del contenido de las Ácidos Linoleicos Conjugados-Ácidos
Cápsulastomada: Grasos Libres
Resultado= (Ru/Rs)x (Au/As)x (ms/W)x (M,,IM,2)
DEF~NICIÓN ,
Ru = cociente entre las áreas de los picos del éster LosAcidosLinoleicosConjugados-AcidosGrasos Libresse
metílicopertinente y estándar interno de la obtienen de aceites de semillasde plantas tales como el
Soluciónmuestra aceite de cártamo. Consisten en ácidos grasos libres de los
Rs = cociente entre las áreas de los picos del éster cuales no menos de 78% son ácidos linoleicosconju9ados
metílicopertinente y estándar interno de la (CLA,por sus siglas en inglés). Contienen una relacion 1:1
Soluciónestándar de isómeros linoleicosconjugados activos (Cl 8:2 cis-9,
Au = peso del Estándarinternoen la Solución trans-11y Cl 8:2 trans-1O, C/s-12).Se puede agregar toco-
muestra(m9) ferol como antioxidante.
As = peso del Estandarinternoen la Solución
estándar(rr¡g) IDENTIFICACIÓN
ms = peso del EREster MetílicoUSPpertinente en la • A. Cumplen con los requisitosde PruebasEspecíficas
~n
Soluciónestándar(mg) Grasasy AceitesFijos,Procedimientos,
Composición
de Aci-
w = peso de la muestra usada para preparar la dos Grasos.
Soluciónmuestra(g) IMPUREZAS
M,1 = peso moleculardel ácido graso pertinente (g/ • LÍMITE
DEBENZO[a]PIRENO
mol) [NOTA-Sepuede reemplazar este método con un mé-
M,2 = peso moleculardel éster metílico del ácido todo equivalente como el descrito en ISO22959.]
graso pertinente (g/mol) [PRECAUCIÓN-El Benzo[a]pirenoes un carcinógeno cono-
cido. Realizartodo el procedimiento bajo una campana
apropiada.]
5096 Ácido Linoleico / SuplementosDietéticos USP42

Fasemóvil: Acetonitriloy agua (88:12) C concentración de benzo[a]pireno obtenida a

=
Soluciónmadre del estándar: 0,5 mg/ml de benzo partir de la curva de calibraciónpara la
[a]pireno en tolueno. Almacenaren la oscuridad a 4º. muestra de aceite (ng/µL)
Desecharladespués de 6 meses. Co = concentración de benzo[a]pireno obtenida a
Solucionesestándar: Preparar cuatro solucionescon partir de la curva de calibraciónpara el
concentracionesde 0,004; 0,02; O,1 y 0,2 µg/mL de blanco (ng/µL)
benzo[a]pireno,diluyendo Soluciónmadre del estándar V = volumen de acetonitriloy tetrahidrofurano
con acetonitrilo. (1: 1) agregado al vial, 300 µL
Solu~iónmuestra: Transferirapro>5imadamente
0,5 g M = masa de la muestra de aceite (g)
de Acidos LinoleicosConjugados-AcidosGrasos Libresa Criterios de aceptación: No más de 2 µg/kg
un tubo de centrifuga de 1Oml. Agregar 3 mL de n-
hexano al tubo y mezclar hasta disolverla muestra. PRUEBASESPECÍFICAS
Transferiresta solución a una columna de extracción en • DETERMINACIÓN DEAGUA(921), Método I, Método la: No
fase sólida recientemente acondicionada.1 [NOTA-La más de 0,1%
columna de extracción en fase sólida se acondiciona • GRASAS Y ACEITESFIJOS(401), Procedimientos,Índicede Aci-
primero lavando la columna con 5 ml de diclorome- dez: 195-204
tano, seguido de 5 mL de n-hexano.] Enjuagarel tubo • GRASAS Y ACEITESFIJOS(401), Procedimientos,Índicede Pe-
de muestra con 2 mL de n-hexano y transferira la co- róxido: No más de 5,0
lumna de extracción en fase sólida. Lavarla columna de • GRA~AS Y ACEITESFIJOS(401), Procedimientos,Composición
extracción con 1O ml de n-hexano. Eluirel benzo[a]pi- de AcidosGrasos
reno con 5 mL de diclorometano y recoger el eluato en Soluciónestándar: Preparar según se indica en Solución
un tubo de centrífuga de 1O ml. Evaporarel eluato en qe prueba, excepto que se deb_!!nusar 100 mg de ER
un baño de agua a 35º bajo una corriente de nitrógeno AcidosLinoleicosConjugados-AcidosGrasos LibresUSP.
suave hasta que el tubo esté completamente seco. Di- Soluciónmuestra: Preparar según se indica er}Solución
solver el residuo con aproximadamente 1 mL de éter de estándar,excepto que, se debe reemplazar ERAcido~Li-
petróleo y transferir la solución cuantitativamente a un noleicosConjugados-Acidos,GrasosLibresUSPcon Aci-
vial, previamente pesado, de 2 ml. Evaporarla solución dos LinoleicosConjugados-AcidosGrasos Libres.
en el vial de 2 mL casi hasta sequedad. Enjuagarel tubo Aptitud del sistema
con 1 mL de éter de petróleo y transferir la solución al Muestra: Soluciónestándar
vial. Continuar evaporando la solución hasta que el vial [NOTA-Lostiempos de retención relativospara los
esté completamente seco. Pesar el vial y determinar el componentes de ácidos grasos se listan en la Tabla 1.]
peso del residuo. El peso debe ser no más de 45 m~; de Requisitosde aptitud
lo contrario se deben repetir los pasos de preparacion Resolución: No menos de 1,5 entre isómero c9, tl 1
de la Soluciónmuestra.Tapar el vial y almacenar a 4°. de ácido linoleicoconjugado e isómero tl O, el 2 de
Antes de usar, disolverel residuo con una mezcla de ácido linoleicoconjugado
300 µL de tetrahidrofurano y acetonitrilo (1:1). Pasar la Similitud de los cromatogramas: Elcromatograma
solucióna través de un filtro con un tamaño de poro de la Soluciónestándares similaral crpmatograma de
de 0,45 µm. referenciaprgvisto con el lote de ERAcidosLinoleicos
Blanco: PJepararsegún se indica en Solyciónmuestra Conjugados-AcidosGrasos LjbresUSPusado.
pero sin AcidosLinoleicosConjugados-AcidosGrasos Criterios de aceptación: LosAcidosLinoleicosConjuga-
Libres. dos-AcidosGrasos Librespresentan el perfil de compo-
Sistemacromato9ráfico sición de ácidos grasos de la Tabla 1.
(:,/erCromatograf,a(621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC Tabla 1
Detector: Fluorescencia
Longitud de onda de excitación: 384 nm Tiempo de
Longitud de onda de emisión: 406 nm Ácido Notación Retención Porc4:ntaje
Columnas Graso Abreviada Relativo de Area
Guarda columna: 4,6 mm x 7,5 cm; relleno L1 de 5 Ácido palmíti-
µm co 16:0 082 <9
Columna analítica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 Ácido esteári-
µm co 18:0 O92 <5
Velocidadde flujo: 1 mL/min Ácido oleico 18:1 O 93 <20
Volumen de inyección: 1OµL. [NOTA-Sise usa un Ácido linoleico 18:2 O 96 <3
muestreador automático, el bucle de muestra debe la- Ácido linoleico
varse con acetonitrilo entre inyecciones.] coniuoado 18:2 - >78
Análisis
Muestras: Solucionesestándar,Soluciónmuestray Isómero c9,
Blanco tl 1 de ácido
Inyectar las Solucionesestándary construir una curva de linoleico con-
calibraciónde cuatro puntos usando el área del pico iunado 18:2 1 00 >37 5
en función de la concentración (ng/µL). Inyectarel Isómero tl O,
Blancoy la Soluciónmuestra,y determinar la concen- c12 de ácido
tración de benzo[a]pireno (ng/µL), a partir de la curva linoleico con-
de calibraciónestándar. iuaado 18:2 1 01 >37 5
Calcularel contfnido de benzo[a]pireno, en µg/kg, en Isómerostrans
la porción de AcidosLinoleicosConjugados-Aciáos transde áci-
Grasos Librestomada: do linoleico
coniuaado 18:2 1 03 <2 O
Resultado= (C - Co)x (VJM)
1 Chromsp_her
PI 120Á PAH,columnapara HPLC,3,0 mm x 8 cm, 5 µm,
Ag1lent,numerode parteCP28159;www.agilent.com.
REQUISITOS
ADICIONALES
• ENVASADO
y ALMACENAMIENTO
Conservar
: en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenaren un lugar
fresco y seco. Proteger de la luz, el calor y el aire.
USP42 SuplementosDietéticos/ Lipoico 5097

• ESTÁl)IDARES
DEREFERENCIA
USP (11} IMPUREZAS
ERAcidos LinoleicosConjugados•AcidosGrasos Libres • RESIDUO (281): Menos de 0,1%
DEINCINERA~IÓN
USP • PUREZACROMATOGRAFICA,
PROCEDIMIENTO1
Solución amortiguadora,Fase móvil, Solución están.
dar, Solución muestra y Sistema cromatográfico:
Proceder se~ún se indica en la Valoración.
Solución estandar diluida: Diluirla Soluciónestándar(1
Ácido Alfa Lipoico en 1000) con Fasemóvil.
Aptitud del sistema
Muestra: Soluciónestándardiluida
Requisitosde aptitud
~OH Relaciónseñal.ruido: No menos de 1O
s-s Desviaciónestándar relativa: No más de 10,0%
Análisis
CsH14O2S2 206,33 Muestra: Soluciónmuestra
Thioctic acid; Calcylar el porcentaje de cada impureza en la porción
1cido l ,2·ditiolano•3-pentanoico; de Acido Alfa Lipoicotomada:
Acido 1,2-ditiolano-3-valérico[1077•28•7].
Resultado = (ru/rr) x 100
DEflNICIÓN
El Acido Alfa Lipoicocontiene no menos de 99,0% y no más ru = respuesta del pico de cada impureza individual
de 101,0% de CsH14Ü2S2, calculado con respecto a la sus• de la Soluciónmuestra
tancia seca. rr = suma de las respuestas de todos los picos de
la Soluciónmuestra
IDENTIFICACIÓN Criteriosde aceptación
• A. Eltiempo de retención del pico del ácido alfa lipoico Impurezasindividuales: No más de O,1%
de la Soluciónmuestracorresponde al de la Soluciónes- Impurezastotale~: No más de 2,0%
tándar, según se obtienen en la Valoración. • PUREZACROMATOGRAFICA,
PROCEDIMIENTO
2
• B. ABSORCION ENEL INFRARROJO (197K) [NOTA-Usarmaterial de vidrio con protecctón actínica.]
Solución estándar A: 40,0 mg/ml de ERAcido Alfa Li-
VALORACIÓN poico USPen dimetilformamida ,
• PROCEDIMIENTO Solución estándar B: 20,0 mg/ml de ERAcido Alfa Li-
Solución amortiguadora: 0,68 g/L de fosfato monobá- poico USPen dimetilformamida, a partir de Soluciónes-
sico de potasio tándar A ,
Fase móvil: Metano!, Soluciónamortiguadoray acetoni- Solución estándar C: 10,0 mg/ml de ERAcido Alfa Li-
trilo (58:46:9). Ajustar con solución de ácido fosfórico poico USPen dimetilformamida, a partir de Soluciónes•
(8,3 en 100) a un pH de 3,0-3, 1. , tándar B ,
Solución estándar: 1,0 mg/ml de ERAcido AlfaLipoico Solución muestra: 40,0 mg/ml de Acido Alfa Lipoico
USPen Fasemóvil , en dimetilformamida
Solución muestra: 1,0 mg/ml de Acido Alfa Lipoicoen Sistema cromato9ráfico
Fasemóvil (yer Cromatograha(621), Cromatografíaen Capa Del-
Sistema cromato9ráfico gada.)
(yer Cromatograf,a(621), Aptitud del Sistema.) Modo: TLC
Modo: HPLC Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
Detector: UV215 nm matografía de 0,25 mm
Columna: 4,6 mm x 250 mm; relleno L1 Volumen de aplicación: 5 µL
Temperaturade la columna: 35º Fase móvil: Alcohol n-propílico, acetato de etilo, agua
Velocidadde flujo: 1,2 ml/min e hidróxido de amonio al 25% (40:40:10:5). Dejar que
Volumen de inyección: 20 µL la cámara se sature durante al menos 1 hora.
Aptitud del sistema Cámarasaturada con vapor de yodo: Transferir4 g
Muestra: Soluciónestándar de cristales de yodo a un vidrio de reloj pequeño y
Requisitosde aptitud colocar en una cámara cromatográfica. Dejar que la
Eficienciade la columna: No menos de 1O000 pla- cámara se sature durante al menos 2 horas.
tos teóricos Análisis
Factorde asimetría: No más de 2,0 para el pico de Muestras: SoluciónestándarA, Soluciónestándar B, So-
ácido alfa lipoico lución estándar C y Soluciónmuestra
Desviaciónestándar relativa: No más de 2,0% para Proceder según se indica en el capítulo, excepto que se
ácido alfa lipoico debe desarrollar hasta que el frente de la fase movil
Análisis haya recorrido 1Ocm. Retirar la _placay dejar que se
Muestras: Soluciónestándary Soluciónmuestra seque al aire hasta que el amoniaco desaparezca por
Calcular el porcent9je de ácido alfa lipoico (CsH14O2S2) completo. Calentar a 50° durante 20 minutos, enfriar
en la porción de Acido Alfa Lipoicotomada: la placa y colocarla en la Cámarasaturada con vapor
de yodo hasta que las manchas se tornen visibles. El
Resultado= (ru/r5) x (Cs/Cu)x 100 valor RFde la mancha del ácido alfa lipoico es
0,25-0,30 y el de la mancha del ácido lipoico polimé-
ru = respuesta del pico de la Soluciónmuestra rico es O.
rs = respuesta del pico de ,la Soluciónestándar Criteriosde aceptación: Ninguna mancha diferente de
Cs = concentración de ERAcido Alfa LipoicoUSPen la mancha de ácido alfa lipoico de la Soluciónmuestra,
la Soluciónestánd,ar(mg/ml) es más intensa que la mancha al valor RF= O de la
Cu = concentración de Acido Alfa Lipoicoen la SoluciónestándarA.
Soluciónmuestra(mg/ml)
Criteriosde aceptación: 99,0%-101,0% con respecto
a la sustancia seca