UNIVESIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO

INFORME DE PRÁCTICAS DE ANÁLISIS DE LABORATORIO CLÍNICO I:

ESTUDIANTE: ANDRADE QUITO NICOLE ESTHEFANÍA
GRUPO No. 1
PRÁCTICA NO. 6
TEMA: Determinación de pruebas de función hepática: bilirrubinas, TGO, TGP, GGT y
fosfatasa alcalina.
FASE PREANALÍTICA
Criterios de aceptación Determinación de pruebas de función hepática:
bilirrubinas, TGO, TGP, GGT y fosfatasa alcalina.
y rechazo de muestras:
Criterios de aceptación de la muestra:
 Muestra etiquetada correctamente.
 Muestra con un correcto volumen.
 La muestra se transportó con seguridad.
 Muestra enviada en un envase estéril.
 Muestra sin hemolisis.
Criterios de rechazo de la muestra:
 Volumen adecuado de la muestra.
 Muestra identificada correctamente.
 Muestra ubicada en un envase estéril.
 Muestra transportada incorrectamente.
 Datos no coinciden con la solicitud del examen.
Condiciones en las que Determinación de pruebas de función hepática:
bilirrubinas, TGO, TGP, GGT y fosfatasa alcalina.
debe estar el paciente
 Algunos laboratorios requieren que se mantenga
para la toma de muestra
en estado nada por la boca a excepción de agua
según el tema
después de la media noche del día en que se
realiza la prueba.
 Ayuno de 8 horas.
Reactivos, materiales, Determinación de pruebas de función hepática:
bilirrubinas, TGO, TGP, GGT y fosfatasa alcalina.
insumos necesarios
 Kit de reactivo de Bilirrubina, TGO, TGP, GGT.
según el tema.
 Pipetas de 10u, 100u, 500u y 1000u.
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 Puntas de amarillas y azules.

 Tubos.
 Centrifuga.
 Baño María.
 Espectrofotómetro.
 Temporizador.
FASE ANALÍTICA
Fundamentos o Bilirrubina
principios de la técnica La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el
en la ejecución de las ácido sulfanílico diazotado. De las dos fracciones
pruebas. presentes en suero, bilirrubina glucurónido y bilirrubina
libre ligada a la albúmina, sólo la primera reacciona en
medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda
la solubilización con cafeína para que reaccione
(bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina
indirecta se determina también la directa,
correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La
intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de bilirrubina presente en la muestra
ensayada.
TGO (Aspartato aminotransferasa)
La AST cataliza la transferencia de un grupo amino del
aspartato al α-cetoglutarato con formación de glutamato y
oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a
malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y
NADH. La velocidad de disminución de la oxidación del
NADH a NAD+, es proporcional a la concentración de
AST en la muestra.
TGP (Alanina aminotransferasa)
La ALT cataliza la transferencia del grupo amino de la
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alanina al cetoglutarato con la formación de glutamato y

piruvato. Es reducido a piruvato por el LDH en presencia
de NADH. La velocidad de disminución de la oxidación
del NADH a NAD+, es proporcional a la concentración de
ALT en la muestra
GGT
La g-glutamil transferasa cataliza la transferencia de un
grupo g-glutamilo de la g-glutamil-p-nitroanillida al
dipéptido aceptor glicilglicina, según la siguiente reacción:
L- g-Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida + Glicilglicina  g-
GT L-g-Glutamilglicilglicina + Ácido 5-amino-2-
nitrobenzoico-
La velocidad de formación del ácido 5-amino-2-
nitrobenzoico, determinado fotométricamente, es
proporcional a la concentración catalítica de g-
glutamiltransferasa en la muestra ensayada.
Fosfatasa Alcalina
La prueba de lactato deshidrogenasa cataliza la reducción
de piruvato a lactato en presencia de NADH a pH 7,5. La
reacción se controla cinéticamente a 340 nm a través de
la oxidación del NADH a NAD+que es proporcional a la
actividad LDH en la muestra.
Técnica y proceso para Bilirrubina total
la obtención del Pipetear en tubos rotulados:
resultado B B
Tubos Muestra Calibrador
reactivo muestra
A.D 100ul - - -
Muestra - 100ul 100ul -
Calibrado - - - 100ul
r
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RT - 1ml - -
RT de 1ml - 1ml 1ml
trabajo.
1. Mezclar por completo y dejar reposar los tubos a
temperatura ambiente durante 2 minutos.
2. Leer la absorbancia (A) de los blancos de muestra
a 540 nm frente a agua destilada.
3. Leer la absorbancia (A) de las muestras a 540 nm
frente al blanco de reactivo.
Bilirrubina directa
Pipetear en tubos rotulados:
B B
Tubos Muestra Calibrador
reactivo muestra
A.D 100ul - - -
Muestra - 100ul 100ul -
Calibrado - - - 100ul
r
RD - 1ml - -
RT de 1ml - 1ml 1ml
trabajo.

1. Mezclar por completo y dejar reposar los tubos

durante exactamente 5 minutos a 37ºC.
2. Leer la absorbancia (A) de los blancos de muestra
a 540 nm frente a agua destilada.
3. Leer la absorbancia (A) de las muestras a 540 nm
frente al blanco de reactivo.
TGO-TGP
1. Se debe mezclar el 1 ml del R2 (substrato) más 4 ml
del R1 (Tampón)
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2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua

destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
RT: 1,0 ml Muestra: 100 ul
4. Homogenizar, incubar a 37°C durante 1 minuto.
5. Leer la absorbancia inicial a 340 nm, colocar en
marcha el cronómetro y proceder a leer la absorbancia
cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia
por minuto.
GGT

1. Reactivos a TA.

2. Encerar el espectrofotómetro con agua destilada.

3. En una cubeta colocamos 1 ml del reactivo de trabajo y

100ul de la muestra.

4. Incubar durante 1 minuto a baño maría a 37ºC y leer la

absorbancia a 405nm.

5. Repetir lo mismo a los 1, 2 y 3 minutos

6. Calculamos el promedio de los resultados

7. Se puede leer directamente en el espectrofotómetro

enzimático.

Fosfatasa Alcalina

1. Pre incubar el reactivo de trabajo, muestras y controles

a la temperatura de reacción.

2. Ajustar a 0 el fotómetro con agua destilada.

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3. Pipetear en una cubeta:

Reactivo de trabajo: 1,0 mL

Muestra o control: 20 μL

4. Mezclar suavemente por inversión. Insertar la cubeta

en el compartimiento termostatado del instrumento y
poner el cronómetro en marcha.

5. Incubar durante 1 minuto y anotar la absorbancia

inicial.

6. Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos.

7. Calcular la diferencia entre absorbancias.

8. Calcular el promedio de los resultados para obtener el

cambio promedio en absorbancia por minuto (ΔA/min).

Reporte en unidades de Bilirrubina total:

medida correctas e Resultado: 0,39mg/dl
indica valores de Valores referenciales:
referencia  Adultos: 0,0 – 2,0 mg/dl
 Recién nacidos: <12 mg/dl

Bilirrubina directa:
Resultado: 0,15mg/dl
Valores referenciales: 0,1 - 03 mg/dL
TGO:
Resultado: 8,67 Ul/L
Valores referenciales a 37°C:
Hombres: hasta 37 Ul/L
Mujeres: hasta 31 Ul/
TGP:
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Resultado: 15,84 Ul/L

Valores referenciales a 37°C:
Hombres: hasta 41 Ul/L
Mujeres: hasta 31 Ul/L
GGT:
Resultado: 11,99 Ul/L
Valores referenciales: a 37°C
Hombres: 11 - 50 Ul/L
Mujeres: 7 – 32 Ul/L
Fosfatasa Alcalina:
Resultado: 72,22 U/L
Valores referenciales:
 Adultos: 68 – 240 Ul/L
 Niños: 100 – 400 Ul/L

Validación del resultado Para validar un resultado se debe relacionar con la clínica
del paciente, validar realizando y siguiendo los controles
de calidad de los reactivos utilizados (control normal y
control patológico alto), control de calidad interlaboratorio
y de tercera opinión. Verificar que los reactivos y kits
estén vigentes, que los valores obtenidos estén dentro de
los intervalos de referencia y utilizando las unidades de
concentración adecuadas.
Evidencia fotográfica de Determinación analítica de función hepática: Bilirrubinas,
la práctica TGO, TGP y GGT
Preparación el reactivo de trabajo.
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1. Rotulacion de los tubos:

2. Colocacion de muestra y reactivos.

1. Medir en el espectofotometro y calcular los resultados.

FASE POSANALÍTICA
Correlaciona los Bilirrubina total
resultados obtenidos de Un resultado de 0,39mg/dl en el examen de bilirrubina
acuerdo a: análisis total indica un resultado dentro del rango normal, por lo
epidemiológico y clínico. que esta nos brinda una información para tener en cuenta
que el hígado se encuentra funcionando en buen estado.
Bilirrubina directa:
Un resultado de 0,15mg/dl en el examen de bilirrubina
directa indica un resultado dentro del rango normal, es la
bilirrubina unida con el ácido glucurónico. Es hidrosoluble.
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Se elimina por la orina. Por lo que esta nos brinda una

información para tener en cuenta que el hígado se
encuentra funcionando correctamente.
TGO:
Un resultado de 8,67 Ul/L en el examen de TGO indica un
resultado dentro del rango normal, la TGO es una enzima
bilocular, se encuentra distribuida en el citoplasma y en
las mitocondrias de las células, junto a la TGP cumple un
rol diagnóstico y de monitoreo de enfermedades con daño
hepatocelulares y muscular.
TGP:
Un resultado de 15,84 Ul/L en el examen de TGP indica
un resultado dentro del rango normal, la TGP al igual que
la TGO son conocidas como transaminasas. Son
producidas por varios tejidos como el corazón, músculos
e hígado, y se localiza en el interior de las células
hepáticas. Este resultado indica que su producción no
sufre alteración alguna por lo que se deduce una función
hepática normal.
GGT:
Un resultado de 11,99 Ul/L en el examen de GGT indica
un resultado dentro del rango normal, la GGT se realiza
para evaluar una posible enfermedad hepática o de las
vías biliares, o para diferenciar entre la enfermedad
hepática y ósea cuando la fosfatasa alcalina (ALP) está
elevada; a veces, para la detección o seguimiento del
alcoholismo.
Fosfatasa Alcalina:
Un resultado de 72,22 U/L en el examen de Fosfatasa
Alcalina indica un resultado dentro del rango normal. Es
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una hidrolasa con muy poca especificidad de sustrato. Se

encuentra presente en casi todos los tejidos del cuerpo,
especialmente, en epitelio intestinal, túbulos renales,
hueso, hígado y placenta. La actividad sérica de fosfatasa
alcalina ósea en condiciones normales, alcanza su mayor
actividad en los niños en edad de crecimiento (llegando a
triplicar los niveles del adulto) debido a que esta
isoenzima se localiza en los osteoblastos.
Correlaciona los Puede resultar útil en todos aquellos cuadros clínicos sin
resultados obtenidos de diagnóstico de certeza y que se sospecha afectación
acuerdo a: análisis hepática:
laboratorio y Dx. Dolor abdominal o en hipocondrio derecho, toxicidad
Diferencial. secundaria a fármacos, hepatomegalia, ictericia (excepto
sospecha de hepatitis aguda), enfermedades sistémicas
con posible repercusión hepática, insuficiencia cardíaca,
neoplasias y enfermedades reumáticas, prurito
generalizado sin lesión cutánea. Como por ejemplo:
La cirrosis es una condición en la cual el hígado se
deteriora lentamente y funciona mal debido a una lesión
crónica. El tejido cicatricial reemplaza el tejido hepático
sano, bloqueando parcialmente el flujo de sangre a través
del hígado. La cicatrización también afecta la capacidad
del hígado para controlar infecciones y eliminar bacterias
y toxinas de la sangre. La hepatitis A es la inflamación
(irritación e hinchazón) del hígado causada por el virus de
la hepatitis A. La hepatitis B es una infección hepática que
causa inflamación, lo que puede provocar cirrosis.
Los tumores de hígado son masas que se producen en el
hígado y que pueden ser benignas o malignas
(cancerosas). La enfermedad de Wilson es un trastorno
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genético que impide que el cuerpo elimine el cobre extra.

La enfermedad de Wilson hace que el cobre se acumule
en el cuerpo, causando daño a los órganos. La colangitis
esclerosante primaria, o PSC, es una enfermedad que
daña y bloquea los conductos biliares dentro y fuera del
hígado. Como resultado, la bilis se acumula en el hígado
y daña las células del hígado. Finalmente, el tejido
cicatricial puede extenderse por todo el hígado, causando
cirrosis e insuficiencia hepática.
Indica exámenes de Exámenes de confirmación y de apoyo al diagnóstico:
confirmación y de apoyo  Fosfatasa alcalina.
al diagnóstico.  Panel metabólico completo (PMC)
 Prueba de albúmina en la sangre.
 Prueba de lactato deshidrogenasa (LDH)
 Pruebas de bilirrubina en la orina.
 Pruebas para hepatitis B o C.
 Imágenes de resonancia magnética (MRI)
 Ultrasonido (ecografía)
 Rayos x, tomografía computarizada (TC)
 Elastografía transitoria
 Biopsia del hígado
Explica el control El control calidad empieza desde el momento en el que
calidad: fase pre- se toma la muestra, por lo que se debe tener en cuenta
analítica, analítica y hasta el tiempo de uso del torniquete ya que este podría
pos-analítica alterar el resultado, también tener en cuenta el tipo de
tubo a utilizar. En la fase analítica, se debe tener en
cuenta la validez de los reactivos, el pipeteo, también la
temperatura adecuada para que se realice la reacción,
tener en cuenta que las mediciones deben ser
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exactamente medidas para evitar falsos resultados. En

cuanto a la fase post analítica, se debe reportar en
unidades correcta y relacionarlo con la clínica, también se
podría utilizar controles de verificación con muestras ya
conocidas.

Firma del estudiante: Nicole Andrade